目的 利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响.方法 分离BALB/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF、IL-4、Flt3L以及不同浓度细胞因子组合的培养液,培养7 d后荧光抗体标记行流式细胞术,检测DC表面CD11c、MHCⅡ、CD86分子的表达水平.平行组加入脂多糖(LPS)刺激后行流式细胞术检测.结果 Flt3L/GM-CSF/IL-4组可诱导90％骨髓细胞高表达CD11c,此时各细胞因子浓度分别为20 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml;100 ng/ml Flt3L诱导骨髓细胞表达CD11c达88％.Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组诱导髓源树突状细胞表达MHCⅡ分别为35.4％和36.1％,其中各组Flt3L与GM-CSF浓度均为20 ng/ml.LPS刺激后Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组表达MHCⅡ分子水平分别为58.1％和59.6％,增幅为22.7％和23.5％.GM-CSF/Flt3L/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组树突状细胞CD86表达为7.1％与5.5％.LPS刺激后20 ng/ml Flt3L组与GM-CSF/IL-4组CD86表达增幅达7.1％与6.2％.结论 Flt3L和GM-CSF对髓源树突状细胞的分化与成熟发挥主导作用,故20 ng/ml Flt3L联合20 ng/ml GM-CSF可成为DC基础研究的优选方案.
作者：夏飞；乔静；曹慧；向明；廖亚玲；陈敏；许鑫；胡光煦；张明伟；杜鸣 刊期： 2019年第01期
目的 研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节.方法 MBL基因敲除型(MBL-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×107 CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3 d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7 d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγt mRNA的表达;取小鼠脾脏CD4+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平.结果 成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL-/-感染组小鼠体内转录因子RORγt mRNA表达升高,转录因子Foxp3 mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少.结论 在C.albi-cans感染中,MBL促进了CD4+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡.
作者：王艳；张卫斌；杨泳慧；陈晨；杨婧文；雷一鸣；张伟；王凡平；王明永 刊期： 2019年第01期
目的 构建鼻疽诺卡菌IFM10152哺乳动物侵袭基因4A(mammalian cell entry 4A,mce4A)缺失株,并分析该基因在鼻疽诺卡菌感染宿主细胞中发挥的作用.方法 采用无抗生素标记的框内缺失法构建鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,通过PCR及测序的方法进行验证.进行体外生长实验、用THP-1(人白血病单核细胞系)作为体外模型进行巨噬细胞杀菌试验以及用HeLa(宫颈癌上皮细胞系)细胞进行体外黏附侵袭试验来分析mce4A基因在鼻疽诺卡菌与宿主细胞相互作用中发挥的功能.结果 成功构建无抗生素标记的mce4A基因框内缺失株,命名为△mce4A;缺失株与野生株生长速度无明显差异.通过实验证明,mce4A基因敲除后,鼻疽诺卡菌抵抗巨噬细胞杀伤能力明显减弱,且鼻疽诺卡菌的黏附侵袭能力也明显减低.结论 成功构建了鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,mce4A基因在鼻疽诺卡菌黏附侵袭宿主细胞及巨噬细胞内存活过程中可能发挥了重要作用.
作者：李和桥；李振军；肖琪；宋韩；孙丽娜；吉兴照；楼永良 刊期： 2019年第01期
目的 探讨天津市猩红热患儿A组链球菌(GAS)对抗菌药物的耐药特征,以便指导临床用药.方法 连续6年采集猩红热患儿咽拭子标本进行GAS菌株分离,对276株GAS进行药物敏感性试验,并用PCR方法进行emm分型.结果 276株GAS对青霉素、头孢唑啉和万古霉素敏感率均为100％,对氯霉素和左氧氟沙星敏感率均为98.2％,对阿奇霉素耐药率高达97.8％,其次为红霉素(97.1％)、克拉霉素和克林霉素(均为94.2％)、四环素(79.3％).耐药模式中GAS对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、克林霉素和四环素联合耐药占73.2％.来源于不同年份的的GAS菌株对四环素、克林霉素、克拉霉素、红霉素和阿奇霉素的耐药率差异均有统计学意义.emm12型GAS对四环素的耐药率为84.0％,高于emm1型GAS对四环素的耐药率(59.5％),差异有统计学意义(χ2=13.820,P=0.000).结论 天津市猩红热患儿分离的GAS以耐大环内酯类抗生素、克林霉素和四环素为主,提示临床谨慎选择该类药物.GAS感染仍首选青霉素,对青霉素过敏者可选头孢菌素类抗生素替代.
作者：阴杰莹；张维；杨东靖；董晓春；李琳 刊期： 2019年第01期
目的 获得球形孢子丝菌液泡分选蛋白34(vacuolar protein sorting 34,Vps34)编码基因全长序列,并探讨vps34基因在球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)由菌丝相向酵母相转换中的作用.方法 利用快速扩增cDNA末端技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法分别扩增球形孢子丝菌vps34基因3′端和5′端序列,序列拼接后进行生物信息分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析vps34基因在菌丝相和酵母相的表达差异.结果 球形孢子丝菌vps34基因全长共3228 bp,其中CDS区长度为3000 bp,编码999个氨基酸,相对分子质量(Mr)为111.49×103,等电点为6.38,包含C2 PI3K classⅢ、PI3KaⅢ、PI3KcⅢ共3个结构域;qRT-PCR检测结果显示,24 h时,球形孢子丝菌酵母相的vps34表达量高于菌丝相(P<0.05),48 h时差异大(P<0.01).结论 vps34基因参与了球形孢子丝菌双相型转换的过程,而球形孢子丝菌vps34基因全长的获得为进一步研究Vps34p的功能提供实验资料.
作者：崔岩；曲芯瑶；宋洋；李珊山 刊期： 2019年第01期
目的 构建和拯救重组嵌合表达人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)表位的流感病毒株.方法 将通过生物信息学软件预测的hMPV B细胞表位、CTL表位和Th表位串联为不同表位组合,将其表位蛋白基因分别插入A/PR/8/34(PR8)流感病毒非结构蛋白NS1基因,利用8质粒系统共转染293T/MDCK细胞,拯救重组流感病毒毒株,全基因组测序鉴定重组流感病毒.同时测定重组病毒的血凝素(HA)活性和半数细胞感染量(TCID50)及生长曲线.结果 在hMPV不同表位间引入间隔序列GPGPG和KK,构建串联多表位抗原,将该抗原基因插入PR8流感病毒非结构蛋白NS基因,经反向遗传学成功拯救出3株重组流感病毒毒株.经MDCK细胞传代3次,鸡胚传代1次,3株重组流感病毒毒株增殖稳定.流感病毒全基因组测序证实,重组的3株流感病毒毒株分别嵌入了hMPV的B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位,命名为rFLU/hMPV/B、rFLU/hMPV/CTL-Th、rFLU/hMPV/B-Th.HA滴度分别为128、128、256,TCID50分别为107.0/ml、106.8/ml和107.0/ml.生长曲线试验结果表明重组流感病毒毒株可在MDCK细胞中有效复制.结论 成功拯救出3株嵌合有hMPV B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位的重组流感病毒株,为后续评价该重组病毒株的免疫效果及是否有潜在疫苗应用价值提供实验资料.
作者：李晓燕；Lin Yipu；孔梅；郭丽茹；邹明；苏旭 刊期： 2019年第01期
目的 了解2012—2017年杭州地区甲型H3N2流感病毒的流行情况以及血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化特征.方法 收集2012年1月至2017年12月间杭州地区流感样病例12185例,实时RT-PCR检测甲型H3N2流感病毒,同时选取部分甲型H3N2流感病毒阳性样本,用特异性引物扩增HA和NA基因,进行基因测序并分析其遗传进化特征.结果 自2012年以来,杭州地区每年都有甲型H3N2流感病毒的流行.不同年龄段人群发病率存在统计学差异,趋势性卡方检验发现,随着年龄增长,发病率显著提高(Z=81.039,P<0.05).2012年以来,杭州地区流行的甲型H3N2流感病毒主要属于3C.3a和3C.2a两个进化簇.HA和NA基因的序列一致性均为96.7％ ～100％,但在多个抗原位点发生了突变.结论 甲型H3N2流感病毒在杭州地区流感流行中具有重要地位.2012—2017年,杭州地区甲型H3N2流感病毒抗原变异明显,但目前并未发现耐药株的出现和流行.
作者：钱昕；于新芬；李钧；寇宇；周银燕；文艳苹；王旭初 刊期： 2019年第01期
目的 筛选与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶TP区(HBP-TP)相互结合的特异性多肽并研究其对HBV复制水平的影响.方法 以大肠杆菌原核表达的HBP-TP重组蛋白为底物,对噬菌体多肽展示文库进行筛选获得特异性噬菌体并测序其多肽区.统计重复率大于10％的多肽序列进行商品化合成.将合成多肽作为药物处理HBV表达细胞后检测HBV复制水平的变化.结果 从噬菌体多肽展示文库中筛选出8条靶向HBP-TP重组蛋白的多肽,在细胞水平的检测中发现其中有1条多肽对HBV的复制有明显的抑制作用.结论 获得1条对HBV复制水平具有抑制作用的靶向HBP-TP蛋白特异性多肽.
作者：代娟；平芳；杨洵；蔡雪飞 刊期： 2019年第01期
目的 了解2012-2015年深圳市手足口病重症患儿柯萨奇A6型肠道病毒(CVA6)VP1～VP4基因特征.方法 对2012-2015年深圳市重症手足口病样本中所有CVA6阳性样本进行VP1～VP4全长序列扩增和测序,运用DNASTAR6.0和MEGA6.02软件进行系统进化分析.结果 深圳市2012—2015年共有4例重症手足口病是由CVA6病毒感染引起的,临床表现均为发热、疱疹和无菌性脑炎等中枢神经系统症状.其中2013年深圳市CVA6重症株与2012年深圳重症株核苷酸的同源性为98.8％ ～98.9％,氨基酸同源性为99.3％ ～99.8％,共有2个氨基酸突变(VP2区的G73E和VP1区的S13G).2015年深圳市CVA6重症株与2013年重症株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.0％和99.3％,共发现6个氨基酸突变(分别为VP2区的E73G和VP1区的T5A、S27N、A30V、N137S和V242I).进化分析表明,2012-2015年深圳市引起无菌性脑炎的CVA6重症株均属于D3亚型,其中深圳市2012年CVA6重症株与2012年长沙市分离株(KJ156349)进化关系近,深圳市2013年CVA6重症株与上海市2013年CVA6分离株(KJ612513)进化关系近,而深圳市2015年CVA6重症株与山东省2014年潍坊株(KX752785)属于同一进化分支.结论 2012-2015年引起深圳市重症手足口病的CVA6重症株均属于D3亚型,其中2015年CVA6重症株VP1区S27N、A30V的氨基酸突变位点均位于线性B细胞抗原表位区域,V242I氨基酸突变位点位于细胞受体PSGL-1结合区域,这可能会影响CVA6重症株与细胞受体的结合力及其对人群的感染力.
作者：姚相杰；陈龙；王伟琪；杨洪；孟君；张海龙；何雅青；张仁利；许少坚 刊期： 2019年第01期
血管内皮生长因子(VEGF)是特异性作用于内皮细胞糖基化的细胞有丝分裂素,增强血管的渗透性、诱导血管新生,促进肝癌细胞生长和侵袭转移,且VEGF高表达患者预后差.负性调节VEGF可明显抑制肝癌细胞恶性增生,改善患者预后.本文系统综述VEGF表达及其对与肝癌细胞侵袭转移促进作用和基于VEGF靶向药物治疗拮抗肝癌患者病灶的血管新生的新研究进展,为延缓患者病情进展提供新思路.
作者：王健；李存娣；曹伟娅 刊期： 2019年第01期
细胞因子是具有重要生理病理功能的小分子分泌蛋白,在新药开发领域,细胞因子药物取得了巨大的成功,2017年全球前十位畅销药物中有5个是细胞因子或其受体抑制剂.细胞因子研究中具原创性和挑战性的工作是发现新的具有重要功能和药物开发前景的新细胞因子.在后基因组时代,利用反向生物学技术,国际上已经发现了一批新细胞因子,数个新细胞因子药物被批准上市.本综述重点介绍笔者实验室从人类基因组发现的10个新细胞因子,包括CTRP4、CCDC134、PSMP、VSTM1-v2、FAM3D、TMEM98、CSBF/C10orf99、FAM19A4、FAM19A5、FAM19A1.其中一些新细胞因子已经显示具有重要的生理病理功能,鉴定了功能性受体,或开展了临床标本分析及动物体内实验,为进一步临床应用研究奠定了基础.
作者：马大龙 刊期： 2019年第01期
目的 初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制.方法 鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血液中IFN-γ和IL-2的表达水平.结果 与野生型小鼠相比,IL-10-/-小鼠的肠道和生殖道均具有较强的衣原体清除能力,同时细胞因子IFN-γ和IL-2的表达显著性增加.此外,野生型小鼠表现出更严重的输卵管病理损伤.结论 IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2的表达使宿主清除衣原体能力下降,从而促进衣原体在小鼠体内生长,加重输卵管积水的发病率.
作者：贺庆芝；贺梦婷；王昕；罗晓清；吴移谋；钟光明 刊期： 2019年第02期
目的 探讨调节性浆细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)合并妊娠患者中的表达及作用.方法 选取2013年4月至2018年4月来我院就诊的SLE合并妊娠的患者,分为对照妊娠组、SLE稳定组和SLE恶化组.流式细胞术检测CD3-LAG-3+CD138 high调节性浆细胞的比例;ELISA检测可溶性人白细胞抗原-G(sHLA-G)和抗核抗体Ig的浓度;分离SLE恶化组外周血中淋巴细胞,置于含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养,并给予HLA-G蛋白刺激.结果流式细胞术结果显示SLE稳定组调节性浆细胞的比例为(2.483±0.1318)％,SLE恶化组的比例为(1.662±0.1304)％,两组间差异有统计学意义(t=4.431,P=0.0013);SLE稳定组的sHLA-G浓度为(36.50±3.510)ng/ml,SLE恶化组浓度为(16.50±2.405)ng/ml,两组间差异有统计学意义(t=4.701,P=0.0008);相关性分析的结果显示sHLA-G的浓度与调节性浆细胞的比例呈正相关(r=0.7471,P=0.0009);体外试验结果显示SLE恶化组B细胞和调节性浆细胞的比例分别为(7.573±0.6539)％ 和(1.593±0.1879)％,HLA-G组的比例分别为(3.732±0.7178)％ 和(2.503±0.2921)％,差异均有统计学意义(t=3.957,P=0.0027;t=2.620,P=0.0256).结论 SLE合并妊娠患者体内调节性浆细胞比例和sHLA-G浓度均显著降低,且与病情严重程度紧密相关,HLA-G具有促进调节性浆细胞比例升高的重要作用.
作者：刘侃；王秋明；宋婉玉；武海英 刊期： 2019年第02期
目的 对两种结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)蛋白Dnak(Rv0350)和MPT83(Rv2873)进行抗原性评价,为结核病免疫诊断和疫苗研究提供实验依据.方法 通过基因重组和蛋白质纯化技术,克隆表达和纯化结核分枝杆菌蛋白Dnak(Rv0350)和MPT83(Rv2873).收集人群包括结核病患者、非结核病其他肺部疾病患者和健康志愿者的血液标本,以基因重组Dnak(Rv0350)和MPT83(Rv2873)蛋白作抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和效应T细胞酶联免疫斑点试验(ELISPOT)分别进行人群体液和细胞免疫学检测,分析其免疫学性能.结果 成功获得基因重组表达和纯化的结核分枝杆菌蛋白Dnak(Rv0350)和MPT83(Rv2873),以这两种蛋白质作抗原进行人群体液和细胞免疫学检测.体液免疫检测,用ELISA检测135名结核病患者、56名非结核病其他肺部疾病患者和94名健康人的血清特异性IgG抗体,结果显示,Dnak(Rv0350)检测的灵敏度、特异度和准确率分别为77.80％(105/135)、56.70％(85/150)和66.67％(190/285);MPT83(Rv2873)检测的灵敏度、特异度和准确率分别为76.30％(103/135)、43.30％(65/150)和58.95％(168/285).细胞免疫检测,用ELISPOT检测59名结核病患者、65名非结核病其他肺部疾病患者和64名健康志愿者的外周血单核细胞被抗原刺激后效应T淋巴细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平,结果显示,Dnak(Rv0350)检测的灵敏度、特异度和准确率分别为66.10％(39/59)、62.79％(81/129)和63.83％(120/188);MPT83(Rv2873)检测的灵敏度、特异度和准确率分别为47.46％(28/59)、79.84％(103/129)和69.68％(131/188).结论 结核分枝杆菌Dnak(Rv0350)和MPT83(Rv2873)蛋白均具有较好的抗原性,并且刺激T细胞产生免疫应答的能力较强,两者联合可能对于结核病免疫诊断和新型抗结核疫苗研究有更好的应用价值.
作者：李晓琴；肖彤洋；李马超；刘海灿；李霜君；罗巧；楼永良；万康林 刊期： 2019年第02期
铜绿假单胞菌是一种条件性人畜共患病原菌,不仅可引起人的烧伤感染、脓胸等疾病,还可引发禽类等动物的菌血症、败血症等. 近年来,由于抗生素的大量应用,导致该菌的耐药性迅速上升,亟需一种更加有效的方式控制该病. 本文以铜绿假单胞菌主要外膜蛋白编码基因oprL和oprF为基础构建了单价、二价融合和联合DNA疫苗,并对其免疫小鼠和鸡后诱导的体液、细胞免疫应答水平及攻毒保护效果进行了检测,旨在为研制新型高效的铜绿假单胞菌疫苗提供实验资料.
作者：宫强；阮梦蝶；彭永刚；牛明福；郭洁真 刊期： 2019年第02期
目的 对中国东部温州地区淋病奈瑟菌流行菌株进行分型,并对四环素耐药的相关机制进行研究.方法 从淋病患者中分离出77株淋病奈瑟菌,采用E-test法进行青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松和阿奇霉素的小抑菌浓度(MIC)测定.PCR和DNA测序用于检测四环素抗性相关基因,包括Tet-M基因、mtrR启动子区和mtrR编码区.多抗原序列分型(NG-MAST)和多位点序列分型(MLST)分别用于确定所有临床分离株和四环素耐药分离株的分子特征.结果 在77株淋病奈瑟菌中,74株(96.10％)、27株(35.06％)、70株(90.91％)和15株(19.48％)分别对青霉素、四环素、环丙沙星和阿奇霉素耐药.所有测试的分离株对大观霉素和头孢曲松敏感.19株耐四环素菌株均存在Tet-M基因,其中17株mtrR启动区域发生1个碱基A的缺失突变,3株mtrR编码区域发生G45D突变.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测得11个不同的NG-MAST基因型,其中ST14781、ST1766和ST1866各占15.79％(均为3株),2个ST型(10.52％,2/19)未在NG-MAST数据库中报道过.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测序得到12个不同的MLST基因型别,其中ST10899占26.32％(5株),ST1600占15.79％(3株).结论 淋病奈瑟菌对四环素的耐药可能与mtrR启动区域和Tet-M基因的突变相关.NG-MAST基因分型结果显示温州地区淋球菌临床分离物表现出分子分型多样化.应采取措施监测温州地区具有高抗药性的NG-MAST ST1766和MLST ST1600淋病菌克隆.
作者：郑周；陈韩；邓通洋；吴惠洁；夏虹；余方友 刊期： 2019年第02期
目的 了解单核-巨噬细胞和中性粒细胞抗问号钩端螺旋体(简称钩体)感染能力及吞噬溶酶体形成是否存在差异.方法 人THP-1单核细胞和HL-60细胞分别用佛波酯(PMA)和全反式维甲酸(ATRA)预处理,使其分化为单核-巨噬细胞和中性粒细胞.采用激光共聚焦显微镜法检测THP-1-PMA单核-巨噬细胞和HL-60-ATRA中性粒细胞吞噬问号钩体能力.采用透射电镜法检测胞内钩体形态.采用激光共聚焦显微镜法和荧光分光光度法检测胞内问号钩体活力和死亡率.采用激光共聚焦显微镜法检测不同吞噬细胞内吞噬溶酶体形成率.结果 THP-1-PMA单核-巨噬细胞和HL-60-ATRA中性粒细胞均能吞噬问号钩体,但前者吞噬问号钩体能力显著强于后者(P<0.05).胞内问号钩体都以吞噬泡的形式存在于上述两种吞噬细胞内.THP-1-PMA单核-巨噬细胞杀灭胞内问号钩体能力显著强于HL-60-ATRA中性粒细胞(P<0.05).THP-1-PMA单核-巨噬细胞内问号钩体与溶酶体共定位率显著高于相应的HL-60-ATRA中性粒细胞(P<0.05).结论 单核-巨噬细胞而非中性粒细胞作为主要的吞噬细胞在吞噬、杀灭入侵问号钩体过程中起着重要作用.中性粒细胞内较低的吞噬溶酶体形成率可能是导致其杀灭问号钩体能力较低的原因.
作者：陈旭；刘英；王铭；严杰；李世军 刊期： 2019年第02期
目的 探讨欧洲放线菌的鉴定方法、生物学特性,为放线菌病的诊断提供依据.方法取患者的脓液标本,进行细菌培养及革兰染色检查,用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪进行鉴定,E-test法作药敏试验.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行分离株的鉴定.提取菌株的DNA,选用16S rRNA的通用引物进行扩增,回收、纯化后对PCR的产物进行测序,与GenBank数据库中的序列进行同源性比较.结果药敏试验结果为对青霉素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松敏感,对环丙沙星耐药.MALDI-TOF MS鉴定为欧洲放线菌.16S rRNA基因检测鉴定为欧洲放线菌.结论MALDI-TOF MS和16S rRNA可对欧洲放线菌进行鉴定,对放线菌病的诊断具有重要的意义.
作者：孙铭艳；吴倩倩；王保强；王楠；刘言霞；陶元勇 刊期： 2019年第02期
目的 研究轮状病毒(rotavirus,RV)感染对Caco-2细胞表面钠-氢(Na+-H+)交换蛋白3(NHE3)水平和生物活性的影响及其调控机制.方法 构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、细胞内Ca2+络合剂BAPTA-AM组和BAPTA-AM+RV组,用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na+-H+交换蛋白活性和细胞表面NHE3蛋白水平,Western blot测定细胞Cdc42蛋白水平.结果 与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na+-H+交换蛋白活性以及细胞表面NHE3蛋白水平明显降低,此抑制作用可被BAPTA-AM拮抗,此外RV感染可引起Cdc42蛋白水平升高,这一作用也可被BATPA-AM拮抗.结论 RV感染对NHE3蛋白水平及生物活性的调控可能与细胞内Ca2+介导的Cdc42依赖性内吞途径有关.
作者：王鹏；牛美兰；陈长英；李玲；范媛媛；王世广；孙艺文 刊期： 2019年第02期
目的 筛选对H5N1流感病毒高度敏感、低致瘤性的MDCK细胞亚株,并对该细胞株进行全面的检定及分析.方法 通过极限稀释法获得细胞亚株,再对各细胞亚株进行血凝滴度、受体丰度和致瘤性检测,筛选出安全性好、敏感性高的细胞亚株,然后对所筛选细胞亚株进行全面的检定.结果 通过细胞克隆试验,共得到108株单细胞亚克隆株,经两轮血凝滴度初筛后得到3株细胞,再经致瘤性及受体丰度比较后选定一株亚克隆株G1作为备选细胞株.核型分析显示该亚细胞株染色体数目众数为78,未发现细菌、真菌、支原体及外源因子污染.裸鼠细胞致瘤性试验显示在观察期末接种部位病理解剖与阴性对照组无显著性差异,细胞未显示明显致瘤性.以细胞裂解物和细胞DNA接种裸鼠,均未致裸鼠产生结节,病理解剖显示与对照组无显著性差异,细胞未显示致癌性.结论筛选出的MDCK-G1亚细胞株符合安全性和敏感性的要求,具有用于大流行流感疫苗生产的潜在可能性.
作者：黄晓媛；张家友；刘洋；赵巍；施金荣；乐欣如；喻刚；韩锡鑫；杨晓明 刊期： 2019年第02期
目的 探讨2016年12月至2018年2月北京地区呼吸道病原体在急性呼吸道感染儿童中的流行特征.方法 回顾分析2016年12月到2018年2月在北京儿童医院因急性呼吸道感染就诊的34665例儿童病例,采用间接免疫荧光法定性检测人血清中抗8种常见呼吸道病原体的IgM抗体.8种常见呼吸道病原体包括呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、甲型流感病毒(in-fluenza virus A,IFA)、乙型流感病毒(influenza virus B,IFB)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)、腺病毒(adenovirus,ADV),以及肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,MP)、衣原体(Chlamydia pneumonia,CP)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP).采用SPSS19.0软件对数据进行统计分析.结果 在34665例患儿中,50.45％的儿童至少感染1种病原体,门诊轻症患儿感染率为56.11％,住院重症患儿感染率为44.06％.IFB阳性率高,为36.56％,合并感染检出率为9.78％,以IFB与MP合并感染多见.RSV在28 d<～≤1岁的患儿中检出率高,IFA、IFB、PIV病原体检出率在3<～≤5岁儿童中高.ADV、MP、CP及LP病原体随年龄增加检出阳性率升高.IFB、MP、IFA及RSV在冬春季节高发,其余病毒呈全年散发状态.在住院重症患者及门诊轻症患者中,8种呼吸道病原体IgM抗体的检出率差异有统计学意义(P=0.00).结论 本研究对北京地区2016至2018年15个月份的急性呼吸道感染的儿童呼吸道病原体IgM抗体检测情况进行回顾性分析,了解这期间北京地区呼吸道病原体在儿童中的流性特征,对防止滥用抗菌药物对儿童造成影响及减轻家长经济负担可起到积极作用.
作者：姚瑶；李爱华；宋文琪 刊期： 2019年第02期
CD8+T细胞是抵抗感染和肿瘤的重要免疫细胞.免疫应答中形成的长效记忆CD8+T细胞可在机体再次遇到相同抗原时快速应答.T细胞的活化、扩增和应答需要各种代谢途径供应能量,而不同发育阶段的T细胞对代谢途径的需求亦不尽相同.在急性感染中,调控代谢途径将影响记忆T细胞的分化.本文就糖代谢在调控记忆CD8+T细胞发育分化中的分子机制做一综述,以期为优化疫苗设计和肿瘤治疗方法提供理论基础和新的策略.
作者：闫静静；刘明斌；徐建青；张晓燕 刊期： 2019年第02期
