目的 探讨趋化因子受体CXCR3与其配体(CXCL9/Mig,CXCL10/IP-10)在小鼠暴发性肝炎淋巴细胞迁移和急性肝衰竭中的作用.方法 6～8周龄雌性BALB/cJ小鼠腹腔注射100 PFU 3型鼠肝炎病毒(MHV-3),采用流式细胞术检测感染MHV-3后的BALB/cJ小鼠肝脏、脾脏和外周血T细胞和NK细胞的比例、数量以及其表面趋化因子受体CXCR3的表达频率.实时定量PCR技术检测感染MHV-3后的BALB/cJ小鼠肝内趋化因子CXCL9和CXCL10 mRNA的表达水平.Transwell细胞迁移试验评估病毒感染的肝细胞及CXCL10对脾脏淋巴细胞的趋化作用.结果 BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,肝脏T细胞和NK细胞的数量及CXCR3的表达频率均显著增加,然而在脾脏和外周血均显著减少.实时定量PCR检测证实,感染MHV-3 48 h后,肝内趋化因子CXCL9和CXCL10 mRNA的表达比感染前分别上升了15.6和98.8倍.体外Transwell试验表明,病毒感染的肝细胞及重组CXCL10/IP-10蛋白对脾脏T细胞和NK细胞具有明显的趋化作用,并且这种趋化作用能被抗-CXCL10抗体显著阻断.结论 趋化因子受体CXCR3与其配体(CXCL9和CXCL10),尤其是CXCL10的相互作用在小鼠暴发性肝炎肝内淋巴细胞的募集及随后的坏死性炎症和急性肝衰竭中可能发挥着重要作用.
作者：邹勇；鲍俊杰；宋戈 刊期： 2011年第06期
目的 探讨IL-6/STAT3信号在川崎病(KD)Th17/Tr细胞失衡中的作用.方法 急性期KD患儿48例,正常同年龄对照组18例,KD患儿于静脉注射丙种球蛋白前直接取血备检.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-6蛋白浓度; 荧光定量PCR检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、RORγt、Foxp3、SOCS1、SOCS3等基因mRNA表达;流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tr)的比例和CD4+ T细胞磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度(MFI);甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测CD4+ T细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区(5'-UTR)3个可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平.结果 (1)急性期KD患儿血浆IL-6浓度、CD4+ T细胞pSTAT3 MFI水平显著上调[IL-6:(54.02±20.58) pg/ml vs (8.72±2.06) pg/ml,P<0.05;pSTAT3 MFI:(55.41±15.08) vs (9.35±3.76),P<0.05].其中KD合并冠脉损伤组(KD-CAL+)上述二项指标均明显高于无冠脉损伤组(KD-CAL-)[IL-6:(84.76±29.35) pg/ml vs (38.65±13.76) pg/ml,P<0.05;pSTAT3 MFI:(72.36±16.81) vs (46.93±13.57),P<0.05].(2)急性期KD患儿CD4+ T细胞IL-17A/F、RORγt mRNA表达水平显著上调(P<0.05),CD4+CD25+ Foxp3+ Tr细胞比例及Foxp3 mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.05),其中KD-CAL+组IL-17A/F、RORγt mRNA表达水平明显高于KD-CAL-组(P<0.05),Foxp3 mRNA表达明显低于KD-CAL-组(P<0.05).(3)急性期KD患儿CD4+ T细胞SOCS1和SOCS3 mRNA水平显著高于同年龄对照组(P<0.05),其中KD-CAL+组SOCS1和SOCS3 mRNA表达低于KD-CAL-组(P<0.05);正常对照组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR 区第3个STAT3结合位点的CpG岛完全去甲基化,急性期KD患儿呈低甲基化状态(P<0.05),其中KD-CAL+组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR 区第3个STAT3结合位点的CpG岛去甲基化水平明显低于KD-CAL-组(P<0.05);各组SOCS3基因5'-UTR区第1、2个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P>0.05).结论 SOCS1和SOCS3基因低甲基化所致IL-6/STAT3信号异常活化可能是KD Th17/Tr细胞失衡的因素之一.
作者：王国兵；李成荣；杨军；温鹏强；贾实磊 刊期： 2011年第06期
目的 观察HIV感染者和AIDS患者血IL-17、CD3+CD4+IL-17+细胞(Th17细胞)和CD4+CD25+Foxp3+T细胞(Tr细胞)的平衡状态及其在1年高效抗反转录病毒治疗(HAART)中的变化.方法 选取经HAART治疗的HIV/AIDS患者33例,同时选取33例健康志愿者为对照,分别于治疗0、6、12个月采集静脉血,检测血清IL-17水平、Th17细胞及Tr细胞百分比,并对比分析其相互关系.结果 HIV/AIDS在HAART治疗前、治疗6个月、12个月及健康对照外周血的Th17细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(1.20±0.37)%、(2.50±1.03)%、(3.70±1.56)%和(4.70±1.43)%;Tr细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(9.16±3.33)%、(7.19±2.91)%、(5.53±1.88)%和(4.43±0.97)%;血清IL-17水平分别为(5.3±2.5) pg/ml、(7.7±2.4) pg/ml、(10.4±3.1) pg/ml和(17.7±6.6) pg/ml.Th17细胞水平与CD4+T细胞计数正相关,与病毒载量负相关;Tr细胞水平与CD4+T细胞计数负相关,与病毒载量正相关.结论 HIV感染导致IL-17、Th17细胞和Tr细胞的失平衡,而HAART治疗可能逐渐恢复二者的免疫平衡状态.提示三者可能在艾滋病发病机制中起作用,并有可能成为观察艾滋病进展和HAART治疗效果的有效指标.
作者：李靖；何艳；郑煜煌；周华英；谌资；陈霞；罗艳；姚运海；贺梅 刊期： 2011年第06期
目的 分析自身免疫性肝炎(AIH)患者中可溶性肝抗原(SLA) B细胞抗原表位分布特征.方法 以21例AIH患者为研究对象,以15例原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者、20例慢性病毒性肝炎患者、20例健康体检者为对照组.采用人工合成肽段与ELISA方法,检测SLA抗原的B细胞抗原表位,并与T细胞识别片段及SLA进化过程中的序列布进行对比.结果 21例AIH患者中,10例患者血清与SLA抗原肽库呈现阳性反应,阳性率为 47.62%,10例阳性反应血清与SLA连续一维肽库反应的A值以肽库7(aa385～441)反应强,均值为0.400±0.109,明显高于其他各组肽库A值(P<0.001),其是高度保守蛋白的不保守区域.T细胞识别的区域与B细胞识别的区域有所不同,主要位于肽库1及肽库2,反应频率分别为30%、40%,对肽库7 的反应频率为10%.结论 SLA B细胞线性抗原表位位于aa385～441,具有高度的一致性,并与T细胞识别的部位有交叉重叠现象,提示在AIH发病机制中存在细胞免疫与体液免疫的多重、相互关联的机制作用.
作者：赵艳；王爽；闫惠平；马冬梅；张海萍；冯霞；张永宏 刊期： 2011年第06期
抗核抗体(ANA)的间接免疫荧光法致密斑点型(dense fine speckled, DFS)核型是近年来国际上对HEp-2细胞质呈斑点状,分裂期染色体阳性的荧光核型提出的一种新命名.抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)是类风湿性关节炎(RA)非常重要的血清标志物,ANA荧光DFS核型与anti-CCP具有一定的相关性.现将我院2008年9月至2009年11月,疑似RA患者检测ANA及anti-CCP结果报道如下.
作者：张道强；隋秀梅；张春江；刘英杰；李红 刊期： 2011年第06期
目的 筛选中国汉族人群Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TIRAP)基因编码区多态性位点,并分析其与结核病易感性的相关性.方法 在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点,再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性(SNP)分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性.结果 共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点.G394A位点在结核病病人中的突变频率高于健康人,但是该位点等位基因频率在两组人群中的差异没有统计学意义(P>0.05).G164A位点跟结核病病情有关,复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义(P<0.05),同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低.结论 TIRAP 基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素.
作者：李松；车南颖；丁志鑫；张旭霞；程君；张林波；时广利；张洁；王雪玉；李传友 刊期： 2011年第06期
肝脏是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的主要靶器官,也是清除病毒的主要器官,在感染HCV后,大约20%的感染者能自发清除病毒,说明机体的免疫功能发挥了重要作用.当机体自身应答无法清除病毒时,使用外源性的干扰素,通过药物持续的免疫诱导,增强机体抗病毒的应答能力,使许多丙型肝炎患者终清除体内的病毒.
作者：陶剑；贲昆龙 刊期： 2011年第06期
载脂蛋白E(ApoE)是一种重要的血浆脂蛋白,除调节脂质代谢,在体外能够抑制T淋巴细胞的增殖.近来研究发现ApoE还参与核因子-κB(NF-κB)和促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)等细胞内多种信号转导,通过对细胞因子表达的调节发挥抗炎和免疫调节作用.本文从ApoE对白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、趋化因子等细胞因子的调节作用方面做一概述.
作者：殷丽军；王传清 刊期： 2011年第06期
目的 检测尖锐湿疣皮损中Toll样受体(TLRs)的mRNA表达水平,探讨TLRs在人乳头瘤病毒(HPV)感染免疫中的可能作用.方法 提取40例尖锐湿疣患者皮损和35例HPV阴性的慢性宫颈炎患者宫颈刮落细胞的总RNA,逆转录为cDNA后用实时荧光定量PCR法检测TLR1～10的mRNA表达水平,并检测40例尖锐湿疣的HPV分型.结果 40例尖锐湿疣患者以低危型HPV6和11型为主(77.5%和55%).55%尖锐湿疣患者感染两种以上HPV亚型,其中35%合并高危型HPV感染.尖锐湿疣组TLR3、7、8的mRNA表达水平高于其他TLRs,TLR9的mRNA表达水平低于其他TLRs(P均<0.05).尖锐湿疣皮损TLR1～10的mRNA表达水平在HPV6型和HPV11型感染间以及在低危型与合并高危型HPV感染间差异无统计学意义(P均>0.05).尖锐湿疣组TLR1～3、TLR5～8和TLR10的mRNA表达水平均高于HPV阴性的慢性宫颈炎组(P均<0.05),其中TLR2、7、8的mRNA表达水平升高更显著(P均<0.01).而TLR4、TLR9的mRNA表达水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 尖锐湿疣皮损中部分TLRs(3、7、8)表达水平较高,但TLR9表达水平较低.相对于HPV阴性的慢性宫颈炎,尖锐湿疣皮损中TLR1~3、TLR5～8和TLR10的mRNA表达上调.不同HPV型别感染的尖锐湿疣皮损中TLRs表达谱差异无统计学意义.推测尖锐湿疣TLRs表达谱的改变可能与HPV感染有一定关系,是否与HPV感染的免疫逃逸机制及持续感染有关尚有待进一步明确.
作者：朱小霞；程浩；张行；朱可建；周强；陈大方；王琦 刊期： 2011年第06期
东部马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus, EEEV,以下简称为东马病毒)是引起东部马脑脊髓炎的病原体.东马病毒主要是通过黑尾脉毛蚊(Culisetamelanura)和环跗库蚊(Culex tarsalis)传播,而且可以经含有病毒的气溶胶通过呼吸道感染人类,感染后发病率高,传染性强,致死率高,缺乏有效的预防方法,病愈后多留有后遗症,所以被国际社会列为防制生物恐怖的主要病种之一,备受世界各国关注.
作者：王林林；杨宇；王振东；胡健萍；王静 刊期： 2011年第06期
目的 建立一种快速、灵敏、特异性高的方法定量检测丙型肝炎病毒RNA.方法 根据丙型肝炎病毒基因5'UTR序列中8个基因区段设计3对特异引物同时加入SYBR GreenⅠ染料在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下60℃等温条件下扩增1 h后根据荧光曲线进行定量.结果 120例经实时荧光定量PCR检测阳性的血清样品进行检测阳性符合率100%.110例健康体检者的血清经两种方法检测均阴性.对卫生部临检中心提供105 IU/ml的质控样本采用阴性血清稀释后进行灵敏度的实验,结果显示荧光定量环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)技术可检出10 IU/ml浓度的RNA分子颗粒.结论 成功建立了荧光定量环介导逆转录等温扩增技术检测丙型肝炎病毒的方法.该技术具有快速、灵敏度高、特异性强的特点.
作者：张永乐；刘寿荣；杨劲 刊期： 2011年第06期
目的 构建分枝杆菌膜锚定表达载体,并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位.方法 在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造,人工合成结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)相对分子质量(Mr)为19×103的脂蛋白膜分泌信号序列,将其插入高效的突变型 furA基因启动子(pfurAma)下游构建新型的分枝杆菌膜锚定表达载体pMFA42M.PCR扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因,亚克隆至上述两种载体中并电转化耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms),分别获得重组EGFP融合表达菌株和膜锚定表达菌株;接着将Mtb主要保护性抗原Ag85A及其嵌合抗原Ag856A2的编码基因亚克隆入膜锚定表达载体pMFA42M中构建Mtb抗原-EGFP融合表达菌株;通过Western blot和流式细胞表面标记技术来分析目标抗原的表达水平及其亚细胞定位,并进一步通过荧光显微镜直接观察重组EGFP融合表达菌株在体外和感染巨噬细胞后的荧光强度.结果 通过引入Mtb 19×103脂蛋白膜分泌信号,在高效pfurAma启动子的驱动下,成功地构建了分枝杆菌膜锚定表达载体.利用EGFP作为标签抗原,通过Western blot、荧光显微观察和流式细胞表面标记等技术均证实了外源目标抗原可在分枝杆菌中高水平表达并定位至细胞膜上.结论 本研究为重组BCG和分枝杆菌膜蛋白功能研究提供了一种新型的膜锚定表达载体,所构建的EGFP重组表达菌株亦可作为一种模式示踪菌为细胞吞噬和动物免疫中的细菌定植和移位分析提供新思路.
作者：王鑫；范小勇；马辉；曲勍；朱越雄 刊期： 2011年第06期
目的 获得WU多瘤病毒重组衣壳蛋白,分析其抗原性,筛选具有诊断价值的抗原.方法 采用PCR技术扩增WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的基因片段,并将目的基因插入PGEX-20T表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达.用免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定和分析并用临床样本进行初步验证.结果 重组质粒在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、SDS-PAGE和免疫印迹鉴定显示在相对分子质量(Mr) 69×103、63×103和56×103处出现清晰条带,重组质粒经双酶切鉴定,表达产物经GST标签鉴定均正确.16份呼吸道分泌物WU多瘤病毒核酸阳性血清标本和70份阴性标本免疫印迹分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 成功构建了WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的表达载体,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究提供了资料.
作者：张银辉；王琼；贾雪；林广裕；黄烈；刘建；陆学东 刊期： 2011年第06期
目的 建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型,对细胞内病毒蛋白和核酸的表达水平进行定量.方法 把neo抗性基因插入到Luc-JC1中,构建Luc-JC.将体外转录的Luc-JC RNA转染Huh7细胞,经筛选后获得的G418抗性克隆,通过荧光素酶活性检测、Western blot和HCV NS3/4A对eYFP-MAVS的切割试验进行鉴定.用IFN-α处理筛选到的细胞,观察细胞中荧光素酶活性、HCV相关蛋白和RNA的变化,对复制细胞在抗病毒药物评价方面的应用进行初步验证.结果 G418加压筛选得到了多个含HCV全基因组的细胞克隆.在细胞克隆中,荧光素酶活性检测观察到萤火虫荧光素酶;Western blot检测到HCV NS3和NS5A蛋白的表达;由于NS3/4A的切割,eYFP-MAVS的定位由线粒体转移到细胞质.IFN-α处理阳性克隆细胞,荧光素酶活性、HCV蛋白表达和RNA水平明显降低.结论成功建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型,报告基因能用来指示细胞内HCV蛋白和RNA的表达水平,为进一步开展HCV致病机制研究和治疗药物筛选奠定了基础.
作者：高博；贾帅争；彭剑淳；王怡；樊炜；李银太；詹林盛；许金波 刊期： 2011年第06期
目的 探索肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1蛋白作为抗原成分在临床血清抗体检测中的应用.方法 通过生物信息学分析P1基因主要抗原决定簇,选择其分值较高的部位进行原核表达、纯化,并进行Western blot鉴定,用纯化后的蛋白免疫小鼠,评价其免疫原性,同时用其作为抗原,采用ELISA方法检测肺炎支原体患儿血清抗体并与全菌体抗原进行比较.结果 成功构建了pET-28C-P1-534原核表达载体,经表达、纯化后获得了相对分子质量为26×103的融合蛋白;Western blot检测其能与Mp阳性血清发生特异性反应;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性免疫应答,抗体滴度可达 1∶2000;用此蛋白作为抗原成分检测患儿血清,其敏感性和特异性分别为85.00%及97.67%.结论 重组表达的P1-534蛋白具有良好的免疫原性,作为新的抗原成分其敏感性和特异性优于全菌体抗原,为肺炎支原体抗原成分及其蛋白保护作用的研究奠定了基础.
作者：薛冠华；孙红妹；赵汉青；王洛平；冯燕玲；李少丽 刊期： 2011年第06期
目的 研究华北地区3株吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barré syndrome,GBS)相关空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)的cstⅡ基因序列并寻找GBS相关及GBS无关的两类空肠弯曲菌菌株间可能与GBS致病性相关的基因突变位点和蛋白高级结构变化,分析菌株间遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序,与GenBank中GBS无关空肠弯曲菌基因序列进行配对对比,寻找两类菌株间可能导致空肠弯曲菌致病能力差异的cstⅡ基因碱基突变位点及蛋白高级结构改变,观察这种变化是否为GBS相关菌株的共性,并构建遗传进化树.结果 与GBS无关菌株相比,3株致GBS菌株cstⅡ基因的氨基酸序列二级结构的第7个α螺旋的165～180区段均被打开形成了折叠或转角,该变化在其他GBS相关菌株的二级结构变化中同样得到体现.实验中75%的GBS相关菌株cstⅡ基因为双功能,25%GBS相关菌株及所有GBS无关菌株cstⅡ基因为单功能.LL株与实验中涉及的GBS相关菌株在进化上高度类聚.结论 双功能cstⅡ可能与空肠弯曲菌的致GBS特性相关.LL株cstⅡ基因在一定程度上反映了亚洲地区的GBS相关菌株cstⅡ基因的序列特征,为进一步探索GBS发病的地域性特点并对GBS菌株进行监测提供了资料.
作者：孙世超；白欣立；陈娟；王莹；邢丛丛；付金生；李震中 刊期： 2011年第06期
目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunogloblin-like receptor,KIR)基因KIR2DS4及其变体KIR1D与属于KIR基因单体型A (haplotype A)的梅毒(syphilis)患者的关联性.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析192例无血缘关系的健康人和190例梅毒患者KIR基因的单体型,在归类于单体型A的梅毒患者和健康人群中分析KIR2DS4和KIR1D基因与梅毒的关联.结果 在192例健康者中,含有KIR2DS4基因的个体为187例,其中有91例归类于纯合子(homozygous)单体型A,占48.7% (91/187);在190例梅毒患者中,出现KIR2DS4基因的个体为181例,其中有89例归类于纯合子单体型A,占49.2% (89/181).在归属于单体型A的人群中,KIR1D/KIR1D在梅毒病例组的基因型频率为16.9%,显著高于对照组(6.6%,P＝0.032),而KIR2DS4/KIR2DS4和KIR2DS4/KIR1D基因型频率在两组间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 KIR1D/KIR1D可能与纯合子单体型A中的个体的梅毒发生相关联.
作者：庄云龙；张毅；宋永红；田洪青；聂向民；刘艳；朱传福 刊期： 2011年第06期
目的 观察人T细胞白血病病毒1型(HTLV-1)的Tax蛋白阳性细胞中早期生长反应基因-1(EGR-1)与NF-κB的关系.方法 RT-PCR扩增MT2细胞中EGR-1的cDNA全长,连接于真核表达载体pcDNA3.0;用脂质体介导的方法将pcDNA3.0-EGR-1转染TaxP/TaxN细胞,48 h后PCR检测EGR-1和p65 mRNA的表达,Western blot检测EGR-1及p65蛋白的表达;将pcDNA3.0-EGR-1和NF-κB报告基因共转染TaxP及TaxN细胞48 h后检测荧光素酶活性.结果 成功构建了重组表达质粒pcDNA3.0-EGR-1,Tax可以促进EGR-1 mRNA和蛋白的表达;EGR-1可以促进TaxP细胞p65 mRNA和蛋白的表达,上调NF-κB活性.结论 EGR-1可能通过促进NF-κB活化参与成人T淋巴细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL)的发病.
作者：牛志国；余志豪；陈丽媛；黄青松；高攀；何钰辉；王辉 刊期： 2011年第06期
