非酒精性脂肪性肝病（ non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种非饮酒引起的代谢性肝损伤，在我国部分地区儿童NAFLD的发病率呈逐年上升趋势。目前针对儿童NAFLD的发病机制的研究较为广泛，但其具体的发病机制仍未完全阐明。 Kupffer细胞，即肝脏的巨噬细胞，在不同状态下可发生M1和M2两种极化，在NAFLD发病过程中起着十分重要的作用。本研究在建立NAFLD幼年大鼠模型基础上，通过检测血清中Kupffer细胞相关细胞因子的水平变化，初步分析Kupffer细胞在NAFLD的发生发展过程的激活状态。
作者：张霞；刘红；朱明利 刊期： 2015年第04期
目的：探讨白细胞介素4（ IL-4）－590位点和IL-13－1112位点的单核苷酸多态性（ SNP）与支气管哮喘的关系及其对表型血浆总IgE（ TIgE）水平的影响。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法（ PCR-RFLP），检测250例哮喘组儿童和200例对照组儿童血浆两基因位点的多态性；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组儿童TIgE的水平。结果（1）两个位点的基因型频率在哮喘组和对照组间的分布差异有统计学意义（P均＜0．01）。（2）哮喘组和对照组中IL-4－590C／T位点C等位基因频率分别为23．00％和35．25％，T等位基因频率分别为77．00％和64．75％。 IL-13－1112C／T位点C等位基因频率分别为59．20％和70．50％，T等位基因频率分别为40．80％和29．50％。两组之间等位基因频率分布差异有统计学意义（P均＜0．01）。（3）两个位点的变异等位基因携带者患哮喘危险性高于非携带者（P均＜0．01），OR分别为1．82（95％CI 1．36～2．44）和1．647（95％CI 1．246～2．178）。（4）两位点各基因型血浆TIgE水平哮喘组均高于对照组（P＜0．05）。（5）IL-13－1112C／T位点变异等位基因T携带者与非携带者TIgE水平比较，P＞0．05；IL-4－590C／T位点哮喘组变异等位基因T携带者TIgE水平与非携带者比较，P＜0．05。结论两位点T等位基因与哮喘的发病有相关性。 IL-4－590C／T位点变异等位基因T使血浆TIgE水平升高。 IL-13－1112C／T位点变异等位基因T与血浆TIgE水平无明显相关性。
作者：邓胜蓝；李波；杨俊；朱晓萍 刊期： 2015年第04期
目的：构建变异链球菌clpC缺陷突变株，检测该基因对变异链球菌感受态形成的影响。方法分别以变异链球菌UA159基因组和pIB107质粒为模板，PCR扩增clpC基因片段和卡那霉素基因盒（lox71-KMR-lox66）；将clpC基因片段插入pMD-19T simple载体，经ClaⅠ／EcoRⅠ酶切、补平后连入卡那霉素基因盒，构建clpC缺陷突变同源重组载体pCKX2；SalⅠ线性化pCKX2并转化变异链球菌，卡那霉素筛选阳性菌落；质粒pCrePA转化阳性菌株，30℃培养剔除卡那霉素基因盒；37℃培养去除pCrePA，获得clpC缺陷突变株，PCR和测序鉴定；提取细菌总RNA并逆转录成cDNA，用RT-PCR法扩增clpC缺失序列的核苷酸片段并进行产物的电泳分析；pDL276分别转化变异链球菌和clpC缺陷突变株，观察感受态细胞形成变化。结果 PCR和测序结果证实成功构建同源重组载体pCKX2及变异链球菌clpC缺陷突变株；RT-PCR结果显示，△clpC缺失的核苷酸片段PCR产物电泳结果并无相应的条带出现；clpC缺陷突变株的感受态形成期延迟并延长维持期。结论 clpC基因具有负调控变异链球菌晚期感受态细胞形成的作用。
作者：徐巧丽；饶慧华；马晓波；黄朝阳；郑港森；张加勤；宋秀宇 刊期： 2015年第04期
目的：探索大肠埃希菌（ Escherichia coli， E．coli） FtsZ 突变体 FtsZP74R、FtsZG77D和FtsZA81R对FtsZ功能和胞内自身组装的影响。方法利用分子克隆和定点突变技术，常规构建带His或YFP标签的FtsZ及其突变体融合表达质粒，亲和纯化得到相应的蛋白；采用同源重组技术构建FL37（△ftsZ-Cat）菌株；活细胞成像观察FtsZ及其突变体在胞内定位模式；免疫共沉淀试验检测FtsZ与其突变体间的相互作用；光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响；高压液相色谱法检测FtsZ突变体GTPase酶活性的变化。结果 FtsZP74R、FtsZG77D和FtsZA81R突变体在E．coli内不能正确定位和形成功能性Z环、FtsZ-FtsZ倡单体间的相互作用减弱或消失、突变体体外聚合效率减少及FtsZA81R的GTPase酶活性显著降低。结论 P74、G77和A81是影响FtsZ功能和胞内正确组装的重要氨基酸；A81可同时影响FtsZ的侧面相互作用和GTPase活性。
作者：郑晓伟；卢乔楠；霍雨佳；马远方；卢锋 刊期： 2015年第04期
近年来随着临床碳青霉烯类药物的广泛应用，鲍曼不动杆菌对该类药物的耐药率也逐年增加，耐亚胺培南鲍曼不动杆菌（ CRAB ）菌株的出现和流行，给临床抗感染治疗带来很大困难。本研究检测了碳青霉烯酶基因及插入序列ISAbal在本地区分离的CRAB中的分布情况，为本地区CRAB所致医院感染的治疗以及预防提供依据。
作者：刘丽娟 刊期： 2015年第04期
目的：了解HIV感染者中人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus， HCMV）糖蛋白N （ glycoprotein N， gN）的型别分布；探讨HCMV-HIV共感染对患者疾病进程的影响及不同gN基因型感染与获得性免疫缺陷综合征（ acquired immuno-deficiency syndrome，AIDS）发病和相关死亡的关系。方法对359例HIV感染者进行HCMV pp65抗原血症检测，利用HCMV gN（UL73）基因巢式PCR扩增HCMV活动性感染患者全血DNA，限制性核酸内切酶MboⅠ、ScaⅠ和SalⅠ对巢式PCR产物进行限制性片段长度多态性分析（ restricted fragment length polymorphism analysis， RFLP），队列随访研究不同型别HCMV感染与AIDS患者发病和死亡的关系。结果 HCMV pp65抗原血症检测发现，359例HIV感染者中HCMV活动性感染患者28例，对其中20例HCMV活动性感染患者的全血DNA样本进行PCR-RFLP分析，结果表明，HIV感染患者中HCMV gN基因型分布如下：gN-3a，4／20（20％）；gN-1，4／20（20％）；gN-4b，1／20（5％）；gN-4d，1／20（5％）；混合感染，10／20（50％）；在随访期内，HCMV UL73基因阳性的HIV感染者更易转变为AIDS患者（RR＝9．78），且gN-1和gN-4型感染者发病和相关死亡风险是其他基因型的4．6倍（P＜0．05）。结论 HCMV活动性感染可能会加速HIV感染者疾病进程，其中以gN-1和gN-4型HCMV活动性感染相对危险度高。
作者：俞俊岭；吴建军；胡中旺；类延花；李国兰；张文昌；赵俊；张俊玲；甘霖；余莉；陈敬贤；王明丽 刊期： 2015年第04期
目的：分析2013年聊城市手足口病（ hand foot and mouth disease， HFMD）病原构成及柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16， CVA16）VP1区基因特征。方法采集聊城市2013年1—12月监测点医院手足口病患儿的粪便和咽拭子标本，采用RT-PCR方法对HFMD疑似病例标本进行病原鉴定，选取CVA16核酸阳性标本，使用RD细胞和Vero细胞进行病毒分离。对9株CVA16病毒阳性的分离物进行VP1区基因扩增及核苷酸序列测定，与其他各基因型及亚型的代表株序列构建亲缘进化树，并进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果2013年聊城市共检测手足口病病例标本961份，阳性者747份，阳性率77．73％。其中人肠道病毒71型（ enterovirus 71， EV71）74份，占阳性标本的9．91％，CVA16130份，占17．40％；其他肠道病毒543份，占72．69％。应用 BioEdit 和 MEGA 4软件分析发现，9株CVA16彼此间VP1核苷酸和氨基酸水平同源性较高，分别在97．7％～100％和99．3％～100％之间。亲缘进化树分析显示山东聊城CVA16分离株与B2b基因亚型的代表株处于同一分支，属于B2b基因亚型。结论2013年引起聊城市手足口病的主要病原体以其他肠道病毒为主，兼有CVA16和EV71参与，而CVA16属于B2b亚型。手足口病的病原谱正发生改变，应加强EV71、CVA16及其他肠道病毒的分子流行病学监测，了解其基因特征，对预防和控制手足口病具有重要意义。
作者：许光银；裴耀文；张世英；王志玉 刊期： 2015年第04期
目的：利用Meta分析的方法对国内发表文献中的流行性感冒（流感）发病情况进行系统的分析，找出国内近几年流感发病情况的规律和特点，为流感病毒防治提供参考。方法从中国知网CNKI等中收集到2005年至2012年发表的符合纳入标准的文献，利用Review Manager 5．0软件对流感发病情况进行Meta分析。结果共筛选出22篇文献，流感样病例（ ILI）样本量总数达957901例，病原检测数样本量达148233份。流感样病例方面，0～4岁婴幼儿组与15～59岁组无差别，与60岁以上老年人组有较大差别；60岁以上老年人组与15～59岁组也存在较大差异。病原学方面，各年龄段之间以25～59岁组流感病毒检出率高；2009年病毒检出数较其他年份多（合并OR：2．17，95％CI：1．27～3．70），甲型H1N1流感病毒检出数较甲型季节性流感病毒有统计学差别（OR：2．25，95％CI：1．30～3．91）；甲型流感病毒与乙型流感病毒相比差异有统计学意义（ OR：4．05，95％CI：2．53～6．47）。结论两个年龄段（0～4岁、≥60岁）在ILI确诊率存在较大差异，应加强对这两组流感病毒感染的高危人群的防控；25～59岁人群流动性大、接触面广，应加强防控；新型甲型H1N1病毒暴发的2009年，流感病毒检出率较其他年份多；甲型流感H1N1病毒暴发后，其检出率是季节性甲型流感的2．25倍，要加强对新型甲型流感或者暴发流行流感病毒的防控；甲型流感病毒的检出率是乙型流感病毒检出率的4．05倍，应加强对甲型流感的防控。
作者：胡云光；徐兴丽；王晶晶；宋杰；王艳翠；李海巍；刘龙丁；施海晶 刊期： 2015年第04期
固有免疫系统是人体抵抗病毒入侵的第一道防线，固有免疫系统中的多种效应细胞能快速识别病原体并产生Ⅰ型干扰素（ interferon， IFN）及细胞因子，抑制病毒复制和传播。干扰素调节因子3（interferon regulatory factor 3，IRF3）作为干扰素调节因子家族中的一员，主要负责诱导Ⅰ型IFN、干扰素刺激基因（ interferon-stimulated gene，ISG）和促炎性细胞因子的生成，在固有免疫中发挥了重要的作用。人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus，HCMV）属于β疱疹病毒家族亚科，是有包膜的线性双链DNA（ double-stranded，dsDNA）病毒，它的基因组约有250 kb，可以编码超过200个蛋白发挥逃避免疫应答的作用［1］。成人免疫力正常者初次感染HCMV后呈潜伏感染状态并且持续终身，但当免疫力低下如艾滋病或者移植手术后，病毒会大量复制，引起HCMV原发感染。此外， HCMV感染还会导致新生儿的出生缺陷，引起听力下降、脑瘫、小头畸形和智力低下等后遗症。
作者：王璐璐；周国平 刊期： 2015年第04期
柯萨奇病毒A组16型（ coxsackievirus A16， CVA16）属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属（Enterovirus），其病毒颗粒呈20面体立体对称的球形结构，直径23～30 nm，由内部的核酸和衣壳蛋白质组成，无脂质包膜［1］。其核酸为单股正链RNA，全长约7410个核苷酸。 RNA 两端为5′-和3′-非编码区（ UTRs），中间的开放阅读框（ ORF）编码一个多聚前体蛋白，经蛋白酶水解为P1、P2和P3三个前体蛋白。 P1进一步酶解为VP1、VP2、VP3和VP4，共同组成病毒衣壳［2］，VP1含病毒主要的中和抗原决定簇［3］。 CVA16与肠道病毒71型（ EV71）是引起手足口病（ hand， foot and mouth disease， HFMD）的主要病原体［4-5］。 HFMD多发生于5岁以下婴幼儿，其临床特征为发热和手、足、口腔等部位皮疹或疱疹，少数患儿可出现心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症，重症患儿病情发展较快，甚至死亡［6］。 HFMD是全球性传染病，英国［7］、德国［8］、日本［9］、新加坡［4］、马来西亚［10］等许多国家均有此病流行的报道。1957年新西兰首次报道该病［11］，1958年从患儿标本中分离出CVA16［12］。1972年，美国加利福尼亚州暴发HFMD疫情，随后世界范围内每年都会发生该病的流行，发病率和死亡人数逐年攀升。中国大陆1981年在上海始见本病［13］， HFMD自2008年开始暴发流行，2009年报告病例数超过百万，2012年超过200万，2014年截至11月已报道2712927例（据中国疾病预防控制中心网站）。迄今为止中国大陆除西藏外其他各省市均有HFMD报道［14］，已成为HFMD高流行区［15-16］。 CVA16与EV71常混合或交替流行［17-20］，近年EV71相关研究进展迅速，针对CVA16的研究还相对较少［21］。然而CVA16引起的重症和死亡病例呈明显增长趋势，英格兰、中国台湾、新加坡及中国大陆部分地区都先后出现过主要由CVA16引起的HFMD疫情［4，7］。 CVA16已成为中国大陆地区HFMD的主要病原之一［22-24］。有报道称CVA16能引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎、迟缓性麻痹、心肌炎、肺炎、自然流产等严重疾病［11，25-27］。此外CVA16与EV71混合感染还会加重患者病情，甚至导致病毒基因重组，从而使HFMD的防控更加困难［15，28-29］。因此，对于HFMD的防控不能只依赖于EV71单价疫苗，CVA16和EV71双价疫苗的研发迫在眉睫。
作者：邓咪；陈晓琦；申硕 刊期： 2015年第04期
高效抗逆转录病毒疗法（ highly active antiretroviral thera-py， HAART）由多种抗病毒药物共同组成，目前国内治疗HIV-1感染者的标准治疗方案为2种核苷类逆转录酶抑制剂（ nucleoside reverse transcriptase inhibitors， NRTIs）配合1种非核苷类逆转录酶抑制剂（ non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors， NNRTIs）或蛋白酶类抑制剂（ protease inhibitors， PIs）［1］。高效抗逆转录病毒疗法降低了HIV-1感染者的发病率和死亡率［2-3］。抗病毒治疗的效果与很多因素有关，如病毒学、免疫学、药代动力学以及患者服药依从性等。
作者：燕晶；阮玉华；邢辉 刊期： 2015年第04期
目的：筛选并鉴定致病性问号钩端螺旋体（简称钩体）外膜蛋白Loa22优势T细胞和B细胞（ T／B）联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR检测我国流行的8群8型株问号钩体loa22基因，T-A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株loa22基因原核表达系统。 Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rLoa22并制备其兔抗血清及其IgG。采用生物信息学软件预测Loa22的T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合Western blot法、ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白展示的T-B联合表位肽和人工合成T-B联合表位肽的免疫原性。采用MTS法和ELISA分别检测T-B联合表位肽诱导T细胞活化及其分泌IL-2、IL-4和IFN-γ情况。结果所有受检的致病性钩体株均能检出loa22基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性高达85．5％～99．8％和93．9％～99．5％。所构建的loa22基因原核表达系统能高效表达rLoa22。 Loa22-77、Loa22-90、Loa22-125和Loa22-157这4个T-B联合抗原表位中，仅有Loa22-90显示了很强的Western blot阳性条带。 Loa22-90能有效诱导CD4＋T细胞增殖及IL-2（Th1）和IL-4（Th2）水平显著升高（P＜0．05）。结论 Loa22是问号钩体序列保守的属特异性外膜蛋白抗原，其优势T-B联合抗原表位为Loa22-90，该表位可作为钩端螺旋体多抗原肽疫苗的候选表位。
作者：阮萍；赵金方；李阳；严杰；胡玮琳 刊期： 2015年第04期
目的：制备由H5N1亚型人禽流感病毒血凝素（HA）和基质蛋白1（M1）两种结构蛋白组装而成的H5亚型流感病毒样颗粒（ viruslike particles，VLPs）并检测其生物活性。方法构建同时包含 A／Indonesia／05／2005（ H5N1） HA 和 A／Anhui／01／2005（ H5N1） M1基因的重组转移载体pFBD-M1-HA，筛选获得重组杆粒（重组杆状病毒质粒） rBacmid-M1-HA后，转染Spodoptra frugiperda （Sf9）昆虫细胞，包装重组杆状病毒rBV-M1-HA；Western blot和间接免疫荧光鉴定HA和M1的表达；大量制备并纯化后，在透射电镜下观察VLPs的形态结构；血凝试验检测VLPs的生物活性。结果应用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达H5N1 HA和M1两种结构蛋白可以高效组装产生流感VLPs，纯化后的VLPs血凝效价为1024 HAU／50μl。结论成功利用A／Indonesia／05／2005（H5N1）来源HA和A／Anhui／01／2005（H5N1）来源M1两种结构蛋白，在杆状病毒表达系统中制备有较好生物活性的人禽流感病毒H5亚型VLPs，为下一步研究人H5亚型禽流感VLPs疫苗奠定基础。
作者：陈恒；蓝佳明；杨扬；刘源；宋敬东；屈建国；高基民；谭文杰 刊期： 2015年第04期
目的：分析流感减毒活疫苗的生产用工作毒种A／17／California／2009／38（H1N1）、A／17／Perth／09／87（H3N2）的遗传稳定性。方法将流感减毒活疫苗生产用工作毒种接种鸡胚尿囊腔进行传代，扩增第2、3、5、10代毒株的全基因组进行测序分析，其中每个代次的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS测序结果分别与冷适应供体毒株进行比对分析，血凝素（ HA）和神经氨酸酶（ NA）基因的测序结果分别与世界卫生组织（ WHO）推荐的适用于北半球的2011—2012年流行毒株进行比对分析，从而判断疫苗生产用工作种子毒株的基因遗传稳定性。结果扩增至10代次后，H1N1疫苗毒株基因总突变率为0．035％，H3N2疫苗毒株基因总突变率为0．022％，突变位点均未发生在冷适应性（ ca）、温度敏感性（ ts）和减毒性（ att）表型的决定位点。结论生产用工作毒种具有良好的基因遗传稳定性，扩增至第10代次的疫苗毒株同原始种子代次的同源性大于99％，工作种子批毒种符合2010年版《中华人民共和国药典》的要求。
作者：刘黎红；臧阳；姜皓；徐菲；朱昌林；葛鹏；刘新涛；张艳；姜春来 刊期： 2015年第04期
目的：建立通过CD137分子对HIV特异性T淋巴细胞进行单克隆分选和体外扩增的方案，对扩增后T细胞的数量和表型进行鉴定。方法分离HIV感染者外周血单个核细胞，采用多色流式细胞染色技术，分离HIV Gag特异性CD3＋CD8＋CD137＋T细胞，单个细胞分选入96孔板，在体外加入饲养细胞和细胞因子进行培养，克隆扩增后14 d对扩增的细胞进行表型鉴定，14 d和28 d分别计算扩增倍数。结果 CD137分子在未接受抗原刺激的状态下表达量很低， Gag肽库刺激后， CD137表达升高，并且表达CD137的CD8细胞均分泌IFN-γ。体外扩增14 d可以获得106的CD8 T细胞，28 d可获得107～108的 CD8 T细胞。在 Gag 肽库刺激后可达到接近100％的活化。结论CD137可替代IFN-γ等传统的细胞因子对HIV抗原特异性T细胞进行筛选和体外扩增，扩增后的T细胞仍保持非常好的活性状态。
作者：李丹；梁华；鞠斌；范瑾；李亚锋；王硕；邵一鸣 刊期： 2015年第04期
目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。
作者：吴雪伶；赵龙；冯建平；樊金萍；赵翔；孟淑芳 刊期： 2015年第04期
