目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1( PR-1)功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达重组蛋白TFPR1,采用ELISA法筛选阳性菌株后,SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果重组表达质粒pPICZαA-TFPR1经双酶切和测序鉴定证明构建正确；重组蛋白以分泌形式表达,相对分子质量约16×103。结论利用巴斯德毕赤酵母表达系统成功表达TFPR1蛋白,为进一步研究其功能和作为佐剂的应用提供参考资料。
作者：宁秀哲；寇志华；孙维来；朱青；杨裔；邱洪杰；郭晶晶；郭彦；于虹；周育森 刊期： 2016年第04期
目的：研究IFN-α对不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain containing protein 1, SAMHD1)表达的诱导,以及miR-181a在此过程中的作用。方法以THP-1和Jurkat细胞为细胞模型,用不同剂量 IFN-α(200 IU/ml和1000 IU/ml)处理后定量 PCR检测 SAMHD1 mRNA 和 miR-181a 的表达水平,并用Western blot检测SAMHD1蛋白的表达水平。转染miR-181a过表达质粒p-181a后再用IFN-α(200 IU/ml)处理细胞,检测SAMHD1表达量的变化。结果 IFN-α可以显著增加SAMHD1 mRNA和蛋白水平的表达,同时抑制miR-181a的表达,尤其以Jurkat细胞结果更为显著。过表达miR-181a能够显著降低IFN-α诱导的SAMHD1表达。结论 IFN-α可以通过抑制miR-181a水平间接调控SAMHD1的表达。
作者：饶和平；王炜；金祥宁；靳昌忠 刊期： 2016年第04期
目的：探究anti-CD24中和抗体对刀豆蛋白A( ConA)诱导急性肝损伤的调节作用及其可能的分子机制。方法建立ConA诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体(200μg/鼠)和ConA(10 mg/kg)联合注射组小鼠肝脏解剖学上的改变；HE染色观察小鼠肝组织损伤程度；血清学方法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶( ALT)的变化；流式细胞术分析anti-CD24中和抗体对小鼠肝内Kupffer细胞( KC)亚型分布的影响；胞内染色分析anti-CD24中和抗体对M1型KC细胞分泌TNF-α的影响。结果从解剖学上,anti-CD24中和抗体和ConA联合注射组(实验组)肝组织肿大；HE染色观察实验组小鼠肝脏出现明显的肝细胞点状坏死和炎性细胞浸润；实验组小鼠血清ALT水平显著高于对照组(P<0.001)。流式细胞术分析表明：实验组小鼠M1型KC细胞百分数显著增加(P<0.01),M2型KC细胞百分数变化不明显。胞内染色流式细胞术表明：anti-CD24中和抗体显著促进小鼠KC细胞分泌TNF-α(P<0.001)。结论 Anti-CD24中和抗体可促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤,这可能与CD24中和抗体促进M1型KC细胞分泌TNF-α有关,其免疫机制与信号传导通路正在进一步探讨之中。
作者：刘宏宇；海蕾；项杰；樊亚童；李雄飞；张华；龚菊贞；张学军 刊期： 2016年第04期
目的：建立寨卡病毒分离方法,为寨卡病毒的分离积累经验。方法将寨卡病毒血清阳性标本通过颅内注射途径接种1~3日龄BALB/c乳鼠,接种6日后处死,提取乳鼠脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤和肠组织,均浆取上清提取病毒核酸,real-time RT-PCR进行核酸检测鉴定。阳性脑组织上清进行乳鼠传代接种。分离的病毒株用巢式PCR进行扩增,所获得的序列用MEGA6.0软件进行系统进化分析。结果从接种寨卡病毒的乳鼠脑、心和肝等组织中均可检测出寨卡病毒核酸,其中心和脑组织寨卡病毒Ct值低,分别为24.4和25.3个循环。传代乳鼠病毒接种后2日可在乳鼠脑组织中检测出病毒核酸。巢式PCR成功扩增出1034个碱基大小的片段,进化分析结果显示本次分离的毒株属于亚洲族系。结论利用乳鼠颅内接种法,成功分离1株寨卡病毒,该病毒属于亚洲族系。
作者：吴德；谈琦琪；孙九峰；周惠琼；管大伟；张欢；宁丹；柯昌文 刊期： 2016年第04期
目的：探索利用HCoV-OC43感染性克隆表达外源基因的可行性及插入区域。方法在HCoV-OC43全长感染性克隆pBAC-OC43 FL的基础上,利用融合PCR和酶切连接等方法,成功构建了在3个不同位置插入绿色荧光蛋白报告基因( GFP替换 NS2基因或NS12.9基因以及插入N基因后)的重组质粒,利用反向遗传学操作技术进行病毒拯救,通过免疫荧光、Western blot和病毒感染等试验对重组病毒进行鉴定分析。结果 GFP替换NS2或NS12.9基因的感染性克隆可以成功拯救出重组病毒(OC43-GFPΔNS2和OC43-GFPΔNS12.9),其中OC43-GFPΔNS2在感染BHK-21细胞后能够观察到GFP基因的高效表达,OC43-GFPΔNS12.9在感染细胞后仅有少量GFP基因的表达,而GFP插入N基因后的感染性克隆未能拯救出病毒。结论 NS2基因可以作为HCoV-OC43感染性克隆表达外源基因的插入位点,并且外源基因插入至该位点可获得稳定高效表达,为进一步研究HCoV-OC43的复制规律及研发基于HCoV-OC43的冠状病毒载体提供了参考依据。
作者：杨扬；申梁；陆柔剑；王惠娟；王文玲；谭文杰 刊期： 2016年第04期
目的：探讨登革热( dengue fever ,DF)患者病毒载量和特异性IgM抗体在疾病过程中的动态变化规律及其与疾病严重程度的相关性。方法收集1140例DF患者(其中轻症1050例,重症90例)发病第1~10天的血清1508份,用荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法检测特异性IgM抗体。结果 DF患者病毒载量在发病第1天时高达108拷贝/ml,随病程进展逐渐下降,第10天时降至103拷贝/ml,重症患者病毒载量在发病的第5~7天高于轻症患者,差异有统计学意义；核酸阳性率也随病程进展逐渐下降,但至第10天时,仍有约40%的阳性率,重症患者核酸阳性率在第6天和第8天高于轻症患者,差异有统计学意义。 IgM抗体早可在发病的第2天检测到,随病程进展逐渐上升,第10天时水平仍在上升；轻症患者IgM抗体水平在发病第4天高于重症患者,差异有统计学意义。 IgM抗体阳性率在发病第6天时达到95%,轻症患者的IgM抗体阳性率在发病第5~6天显著高于重症患者,差异有统计学意义。结论登革热退热期的高病毒载量和低IgM抗体水平与疾病的严重性密切相关。
作者：赵令斋；高秀洁；庾蕾；洪文昕；邱爽；王建；张复春 刊期： 2016年第04期
目的：原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。间接法ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性,使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后不同时间点的UL7蛋白表达量进行检测。结果 GST-UL7重组蛋白在E. coli BL21( DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶105以上。 Western blot试验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的不同时间点均检测到了UL7蛋白的表达。结论成功获得GST-UL7融合蛋白,且制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的不同时间点均有表达。
作者：周洁楠；徐兴丽；高有；张莹；王晶晶；刘龙丁；李琦涵 刊期： 2016年第04期
由寨卡病毒感染引起的寨卡病毒病是一种自限性急性传染病，主要通过伊蚊叮咬传播，也可以垂直传播，近也有性传播的一些证据。随着寨卡病毒的暴发，对寨卡病毒的认识具有重要的意义。本文就寨卡病毒的传播与暴发史、病原学特征、诊断与治疗、寨卡病毒感染与新生儿小头症的潜在相关性、引发细胞自噬等异常免疫应答的研究进展进行了综述。
作者：曹璐；王鑫；张志刚；赵勤俭 刊期： 2016年第04期
目的：实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR)技术快速评估恒河猴外周血细胞中的猴免疫缺陷病毒( SIV)病毒储存库的方法学及初步应用。方法以SIVmac239毒株序列为标准,在gag保守区设计1对引物和TaqMan探针,用于实时定量PCR扩增。 EcoRⅠ和SpeⅠ酶切含有SIVmac239毒株5′端长片段(含SIV-gag区)的质粒p239SpSp5,得到长度为2090 bp的SIV-gag区保守片段,纯化后定量系列标准品以绘制标准曲线。测定SIVmac239毒株感染恒河猴急性期和慢性期的外周血单个核细胞中SIV DNA拷贝数以反映病毒储存库水平,并分析该水平在不同感染状态中的病毒学特征。结果标准品浓度在10~1010拷贝/μl之间与Ct值呈线性正相关。 SIV急性期感染14~22 d可测出高水平的SIV病毒DNA,急性期病毒DNA水平高于慢性期1~2个log水平。相同动物样本的每106个细胞中的病毒DNA水平较其血清中病毒载量低将近1个log左右。 SIV病毒DNA水平与病毒载量比值( DNA/RNA)在慢性感染期显著高于急性期。结论本研究制备的SIV病毒DNA荧光探针定量RT-PCR方法特异性、敏感性高,线性范围广,可用于评估猴免疫缺陷病毒潜伏的病毒储存库水平。higher than those in the acute phase. Conclusion The established TaqMan probe-based real-time fluores-cent quantitative PCR was a highly sensitive and specific assay for the detection of SIV DNA with an advan-tage of wide linear range. It could be used for the quantitative evaluation of latent reservoirs of SIV.
作者：朱丽妍；范雪营；谢喆；沈弢；邵一鸣 刊期： 2016年第04期
目的：分析戊型肝炎病毒( HEV)抗原检测试剂在供血浆人群和戊型肝炎系列阳转血清的检测情况,评价HEV抗原( HEV-Ag)检测试剂的性能。方法从36340份样品中选择HEV-Ag检测阳性的样品,利用实时荧光HEV RNA检测试剂检测其核酸,并对核酸阳性者利用巢式RT-PCR的方法扩增检测HEV 的ORF2片段,对阳性扩增产物进行序列测定确认HEV、构建基因进化树划分基因型。同时,利用HEV-Ag试剂和HEV核酸试剂平行检测Biomex的戊型肝炎系列阳转血清,比较其相关性。结果在36340样品中有26份HEV-Ag阳性样品(0.07%),利用巢式RT-PCR方法检测阳性比例为25/26,序列确认后的比例为23/26。在供血浆人群中HEV RNA确认阳性的比例为1∶1580(0.06%)。基因序列分型表明基因1型17份(74%),基因4型6份(26%)。戊型肝炎系列血清检测发现HEV-Ag和HEV RNA相关性好,HEV-Ag阳性样品其HEV RNA均为阳性,与HEV RNA的滴度峰值一致。结论 HEV-Ag试剂与HEV RNA的相关性高,HEV-Ag筛查可作为降低血源戊型肝炎感染的一种策略。
作者：黄维金；宋爱京；乔杉；赵晨燕；贾雪荣；张燕；王佑春 刊期： 2016年第04期
目的：以偶联甲型流感病毒单克隆抗体的免疫磁珠作为示踪标记物，利用免疫磁珠的分离、富集特性，建立免疫磁珠富集与免疫层析一体化的甲型流感病毒检测方法。方法以 EDC/NHS方法制备了免疫磁珠，采用双抗体夹心法和免疫层析技术，建立甲型流感病毒的磁珠免疫层析直接检测方法，并进一步将磁珠免疫层析直接检测法与免疫磁珠分离技术相结合建立一种新型的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测技术。通过检测甲型流感病毒感染的患者和正常人的临床咽拭子样本，与常规的胶体金免疫层析法进行比较来评价一体化检测方法的特异性、灵敏度及阳性符合率等指标。结果磁珠免疫层析直接检测方法与胶体金免疫层析法在特异性、灵敏度上大致相同，一般可以检出荧光定量PCR检测Ct值≤22的甲型流感病毒阳性样本，而一体化检测方法可以检出Ct值≤28的阳性样本，灵敏度得到明显提升。结论建立了检测甲型流感病毒抗原的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测技术，适用于临床现场快速检测。
作者：吴学敏；张丽萍；马雪征；赵勇；高基民；胡孔新 刊期： 2016年第04期
目的：分析2002—2015年北京市大兴区流动人口麻疹流行病学特征,为提出针对性的防控措施提供依据。方法利用麻疹监测信息报告管理系统数据及麻疹病例个案流调资料,对流动人口麻疹发病特征进行流行病学分析。结果2002—2015年大兴区报告流动人口麻疹病例1263例,占全人群发病数的73.09%。3~6月份为麻疹发病高峰,发病1027例,占全部病例数的81.31%,黄村镇、旧宫镇、西红门镇、亦庄镇、瀛海镇发病数居全区前5位,合计发病占病例总数的80.29%。<8个月145例,8个月~14岁412例,>14岁706例；有免疫史224例,无免疫史576例,免疫史不详463例。结论多种途径维持免疫服务人群高的3剂次麻疹疫苗接种率,提高外来务工人员麻疹疫苗接种率,加强麻疹监测,是控制、消除麻疹的有效手段。
作者：唐金凤；李冬梅；陈丽岩；吕庆伟；侯文俊；王涛 刊期： 2016年第04期
目的：分析明确上海市闵行区2013—2014年水痘突破性病例致病水痘-带状疱疹病毒流行株的基因特征。方法采集闵行区2013—2014年水痘暴发点水痘罹患者水痘疱疹液,提取水痘病毒基因组DNA,对其ORF22和ORF62区域进行测序,并利用生物信息学方法对ORF22和ORF62序列特征进行分析。结果上海市闵行区2013—2014年水痘暴发疫情中采集并测序成功的24份样本经分析表明均为野生型水痘病毒株,其中23株与亲本株( P-Oka)和疫苗株( V-Oka)同源性较高,推测为野生型J基因水痘病毒株,1株基因型介于M型和E型间,与mosaic(M)CA123株(M1)同源性更高,推测其可能为野生型M1基因水痘病毒株。结论上海市闵行区流行的水痘病毒株主要为野生型J基因病毒株,也有M基因型和其他基因型局部流行。同为J基因型的不同野生型病毒株的基因间也存在一定变异。这些非疫苗保护基因型水痘病毒株的存在及流行可能是水痘突破病例产生的原因之一。
作者：陆佳；杜艳；汪曦；王烨；金宝芳；梅克雯；田霞；张莉萍 刊期： 2016年第04期
目的：评估23价肺炎链球菌多糖疫苗对上海市闵行区60岁以上老年人呼吸道感染性疾病的临床症状及发病的流行病学效果。方法采用前瞻性队列研究,选取接种组和未接种组老年人各1200名,每季度随访,为期1年,比较两组呼吸道感染性疾病的临床症状及发病情况、呼吸道慢性疾病急性发病情况等。结果接种组的呼吸道感染性疾病相关临床症状发生率显著低于对照组(RR=0.894,95%CI：0.804~0.994)。肺炎疫苗对75岁及以上的老年人的呼吸道感染性疾病发病的保护率为57.7%(95%CI：0.207~0.775)。结论肺炎疫苗可有效降低60岁及以上老年人的呼吸道感染性疾病相关临床症状的发生率,并对75岁及以上老年人呼吸道感染性疾病的发病具有保护作用。应进一步开展接种前后抗体水平测定等研究进行免疫学效果评估。
作者：汪曦；王烨；金宝芳；梅克雯；陆佳；张莉萍 刊期： 2016年第04期
作者：[1]中华医学会学术会务部；[2]中华医学会微生物学与免疫学分会 刊期： 2016年第04期
1.根据GB/T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。
作者： 刊期： 2016年第04期
为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下(按英文首字母顺序排列)，本刊在论文中将不再注释。
作者： 刊期： 2016年第04期
《中华微生物学和免疫学杂志》为中华医学会主办。1981年创刊，主要报道医学微生物学和免疫学方面的研究论文、简报、评论、综述、国内外学术动态、书评及消息等。
作者： 刊期： 2016年第04期
