目的:分析甲状腺全切除术(total thyroidectomy,TT)和甲状腺次全切除术(sub-total thyroidectomy,STT)治疗甲状腺良性疾病后的并发症、患者术后复发情况及术后甲状腺替代治疗的剂量,探讨TT在甲状腺良性疾病治疗中的地位.方法:回顾性分析我科2009年5月至2010年5月收治的双侧多发性结节性甲状腺肿共86例患者手术治疗的临床资料.依据手术方式分为2组:A组48例行双侧STT,B组38例行双侧TT.结果:经病理结果证实86例患者双侧甲状腺均为良性疾病,A组3例、B组2例发生术后暂时性喉返神经损伤(P＞0.05);A组2例、B组2例发生术后暂时性甲状旁腺功能低下(P＞0.05).A组、B组手术时间分别为:(96.85±22.93) min和(79.05±19.34) min(P＜0.05),A组、B组术中出血量分别为:(110.33±29.98) ml和(58.03±20.09) ml (P＜0.05),A组、B组术后替代治疗的剂量分别为:(131.77±39.19) μg/d和(300.66±48.45) μg/d(P＜0.05).A组、B组术后复发例数分别为:8例和0例,术后86例病例均无永久性甲状旁腺功能低下及永久性喉返神经损伤.结论:TTr与STT相比术中出血量更少、手术时间更短,术后并发症并无明显增多,虽然术后甲状腺替代治疗的剂量明显增多,但术后复发率明显降低,因此,TT是甲状腺多发结节安全的、有效的治疗方式之一.
作者：高寒；姜军；杨新华；唐鹏 刊期： 2014年第11期
目的:评价重庆市复明工程白内障患者手术前后的主观视功能、生存质量.方法:通过流动白内障筛查选择接受手术的患者,应用世界卫生组织和美国眼科研究所为发展中国家所开发的生存质量(quality of life,QOL)量表、视功能(vision function,VF)量表在术前及术后3个月对患者进行问卷调查.由复明工程组织对患者进行免费白内障囊外摘除术联合后房型人工晶体植入术.结果:终334名患者完成术前及术后3个月的调查.受调查患者平均年龄为(70.45±9.78)岁.手术前后VF、QOL比较差异均有统计学意义,手术后较手术前评分增高(P＜0.001).严重盲(severe blindness,SB)组患者VF提高值分别高于视力损伤(vision impairment,Ⅵ)组和单眼盲(unilateral blindness,UL)组,差别均有统计意义(PⅥ=0.008,PUL=0.042);SB组患者QOL提高值分别高于Ⅵ组和UL组,差别均有统计意义(P＜0.001).不同年龄组VF提高值比较差异无统计学意义(F=0.397,P=0.755),小于60岁年龄组和大于等于81岁年龄组的QOL提高值均高于60～69岁年龄组,差别均有统计意义(P＜60=0.038,P≥81=0.009).结论:“重庆市百万贫困白内障复明工程”术后患者主观视功能和生存质量较术前提高,该项目手术效果良好,应该继续实施此类利民工程,同时也应该加强防盲手术过程的质量控制,并重视术后长期随访.
作者：肖旗彬；周希瑗；马华峰；姚华；陶金豆；汤燕玲 刊期： 2014年第11期
目的:观察CO2激光联合平阳霉素的方法治疗喉接触性肉芽肿的临床疗效.方法:回顾性分析我院2011年1月至2012年12月确诊的18例喉接触性肉芽肿患者的临床资料.18例患者于我院共有22次治疗史.9例次采用CO2激光手术联合平阳霉素治疗,另13例次采用单纯CO2激光手术治疗,将所有病例根据治疗方法分为2组(CO2激光联合平阳霉素组与CO2激光组).术后随访6个月以上.结果:CO2激光联合平阳霉素组1次手术治愈9例,治愈率为100.0％.CO2激光组1次手术治愈7例,6例术后复发,治愈率为53.8％,两者比较CO2激光联合平阳霉素1次治疗复发率低于单纯CO2激光手术(P＜0.05).结论:喉接触性肉芽肿有强烈的复发倾向,其发生和术后复发的原因可能是大量纤维细胞、血管增生,对于多次复发者,采用CO2激光联合平阳霉素的方法,可使血管闭塞,肉芽肿无法生长,明显降低复发率.
作者：勾雪；朱江；黎庆辉 刊期： 2014年第11期
目的:探讨甲磺酸双氢麦角毒碱片是否具有改善伴有卒中相关危险因素患者头痛病情的作用;观察患者健康相关生活质量(health-related quality of life,HRQoL)的变化.方法:将伴有卒中相关危险因素的头痛患者随机分为2组:试验组给予口服甲磺酸双氢麦角毒碱片(简称双氢麦角碱片);对照组给予口服安慰剂.采用简要头痛日记记录头痛病情(头痛频率、头痛持续时间及疼痛程度及急性止痛药物的使用情况).采用SF-36健康调查量表评估患者治疗期间HRQoL的变化,观察时间为4周.结果:共有77例患者完成试验,试验组53例,对照组24例.试验组和对照组患者HRQoL以及头痛病情均较给药前有不同程度改善,且试验组优于对照组.其中,心理综合得分、情感职能和躯体综合得分差异较大[效应量(effect size,ES)分别为:0.76∶0.56、0.56∶0.40、0.68∶0.57],急性止痛药用量更少(ES 0.65∶0.43).结论:双氢麦角碱片能明显改善伴有卒中相关危险因素的头痛患者HRQoL,减轻头痛病情,减少急性止痛药的使用.
作者：刘博文；潭戈 刊期： 2014年第11期
目的:研究Slit2基因对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,并探讨丝裂原激活(mitogen-activated,MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)这2条信号通路在此过程中的作用.方法:(1)体外培养人RPE细胞株RPE-19; (2)将腺病毒介导的Slit2(adenovirus-mediated Slit2,Ad-Slit2)转染RPE细胞,培养12、24 h及48 h;(3)转染前将MEK信号通路阻断剂PD98059、PI3K 信号通路阻断剂LY294002预处理RPE细胞1 h;(4)用real-time PCR及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测VEGF的表达水平,用Western blot检测磷酸化ERK、磷酸化AKT的表达情况.结果:Slit2转染的RPE细胞后,real-time PCR结果显示不同时间之间VEGF mRNA表达有差别(F=12.789,P=0.018),组别和时间之间存在交互作用(F=13.375,P=0.017),不同组别有差别(F=16.855,P=0.015),在24 h与48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P4 h=0.002,P48 h=0.018).ELISA结果显示不同时间之间VEGF蛋白表达有差别(F=24.886,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=23.524,P=0.000),不同组别有差别(F=28.250,P=0.006),在48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P=0.003).Western blot结果可见p-ERK及p-AKT的蛋白表达水平增加,阻断剂PD98059及LY294002分别能降低ERK、AKT的磷酸化水平,并与Ad-Slit2组相比较,real-time PCR结果显示VEGF mRNA表达水平在不同时间有差别(F=32.202,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=8.372,P=0.006);不同组别存在差别(F=15.062,P=0.001),ELISA结果显示VEGF蛋白表达水平在不同时间之间有差别(F=90.703,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=4.968,P=0.005),不同组别存在差别(F=69.636,P=0.000).结论:PI3K/AKT以及MEK/ERK这两条信号通路参与了Slit2所诱导的RPE细胞中VEGF表达水平增加.
作者：梅雨；周希瑗 刊期： 2014年第11期
目的:探讨调控Glypican1 (Gpc1)表达对神经胶质瘤细胞株增殖能力的影响以及Hedgehog(Hh)通路在其中的作用,为神经胶质瘤的研究提供基础实验数据.方法:在4株人脑神经胶质瘤细胞中,采用Western blot挑选出Hh信号通路活性及Gpc1表达相对较高的细胞株,采用RNAi技术沉默Gpc1表达后,检测Hh信号通路关键分子Shh、Gli1和靶基因CyclinD1表达的变化,MTT法检测Gpc1 RNAi稳定细胞株增殖活力的改变;另构建Gpc1过表达质粒,检测对Hh信号通路活性改变.结果:采用RNAi沉默Gpc1表达后,Hh信号通路活性受到抑制(F=8 407.34,P=0.000),神经胶质瘤细胞株增殖活力下降(F=27.68,P=0.000);上述结果可被Gpc1过表达所逆转.结论:Gpc1对神经胶质瘤细胞株的增殖能力有着明显的调节作用且该调节受Hh信号通路介导.
作者：陆西萍；陆西旬；赵晓莉 刊期： 2014年第11期
目的:探讨抑制核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)1基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制.方法:将空载慢病毒pGIPZ和NPM干扰慢病毒shNPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60.采用qRT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞及NPM1A型突变(NPM1-mA)基因和蛋白的表达,流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2)和p-ERK信号分子表达;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶胞外信号调节激酶信号通路抑制剂(PD98059)处理后OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡率的改变.结果:干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-mA的mRNA水平(F=20.078;P=0.000,PMock vs shNPM0.001,PpGIPz vs shNPM=0.003,PMock vs pGIPZ=0.333)和蛋白水平,伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱;干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率(F=25.236,P=0.000,PMock vs shNPM=0.001,PpGIPz vs shNPM=0.001,PMock vs pGIPz=0.729),同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征.此外,干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和mRNA表达(F=7.649,P=0.000;PMock vs shNPM=0.015,PpGIPZ vs shNPM=0.015,PMock vs PGIPz=0.984)、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和mRNA表达(F=5.190,P=0.000;PMock vs shNPM=0.034,PMock vs shNPM=0.029,PMock vs shNPM=0.909);干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达,PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡(F=25.643,P=0.007).结论:NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用,潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关.
作者：王娟；陈莎娜；全静；贺金刚；张帅帅；鲜敬荣；张伶 刊期： 2014年第11期
目的:探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1 (phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响.方法:设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,PCR电泳及基因测序验证.转染293T细胞,Western blot筛选佳干扰序列,包装产生慢病毒.转染TCA8113细胞,筛选、建立稳定转染细胞株;real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率;划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞(KD组)、空病毒转染细胞(NC组)及TCA8113细胞(CON组)迁移、侵袭能力变化.结果:PCR电泳及基因测序证实5条shRNA序列定向插入慢病毒载体质粒中.Western blot筛选出PRL-1-shRNA-1基因沉默效率高,包装获得慢病毒滴度为7×108 TU/ml.通过转染、筛选,建立了TCA8113细胞稳定转染细胞株;real-time PCR测得PRL-1基因mRNA表达明显下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低,穿过人工基底膜的细胞数KD组(25.5±0.4)明显少于NC组(81.5±2.0)和CON组(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000).结论:沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力.
作者：时恩来；季平；刘平；潘丽；徐望 刊期： 2014年第11期
目的:初步探讨脊髓损伤大鼠肠道细菌移位的途径.方法:①绿色荧光蛋白标记大肠杆菌肠道定植.②24只Wistar大鼠分为正常组(NG=8),损伤组24 h/48 h(EG1=8/EG2=8).③肠系膜淋巴结、肝脏细菌培养,门静脉血测内毒素;小肠进行光镜、荧光显微镜及电镜观察;肝脏、肠系膜淋巴结进行光镜观察.结果:①肠黏膜屏障破坏明显,细菌通过肠黏膜上皮细胞和裂隙进行跨壁;②淋巴结损伤明显,菌培养:EG1(100％,8/8),EG2(100％,8/8),菌落数EG1开始显著增多;③肝脏损伤明显,菌培养EG1 (87.5％,7/8),EG2(100％,8/8),菌落数在EG1开始增多;④EG1(4.11±1.06) U/ml、EG2(6.94±1.50) U/ml内毒素水平均较正常组(0.70±0.04) U/ml升高(F=69.774,P=0.000).结论:脊髓损伤后细菌及内毒素增多,肠黏膜通透性增加,细菌跨壁后通过淋巴、血行途径转移;形成内毒素血症,使局部及全身炎症反应扩大,形成恶性循环.
作者：白春宏；彭朋；刘浩；李双英 刊期： 2014年第11期
目的:探讨乳酸-羟基乙酸共聚物(ploy lactic-co-glycolic acid,PLGA)微球联合神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对视神经损伤大鼠视神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用.方法:PLGA为原料制备包载有NGF的PLGA微球.检测载药微球的载药量和包封率,观察其形态特点测量粒径分布.将Sprague-Dawley(SD)雄性成年大鼠69只随机分为5个组,正常组(A组)和假手术组(B组)各9只大鼠,生理盐水注射组(C组)、神经生长因子注射组(D组)、PLGA微球联合NGF注射组(E组)各17只大鼠,B～E组大鼠均行超声辐照处理.各组分别于0.5、1、3、7d取样行视网膜切片免疫组化染色和和苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE),观察视网膜上葡萄糖钙调蛋白(glucose regulated rrotein 78 kD,GRP78)表达和组织病理的变化,并采用荧光金(fluorogold,FG)逆行标记视神经节细胞于视神经钳夹损伤造模后第7d取样计数各组RGCs数量.结果:PLGA载药微球包封率68.4％,载药量0.032 3％,体外7d的累计释放率82.6％,微球粒径(3.17±0.6) μm.FG逆行标记RGCs计数5组间差异有统计学意义(F=65.858,P=0.000),A组与B组间差异无统计学意义(P=0.862＞0.05),其它各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组化染色A组、B组未见阳性细胞,RGCs的GRP78阳性细胞率显示,C～E组不同时间各组间差异有统计学意义(F组别=184.330,P组别=0.000),各组在各时间点间差异亦有统计学意义(F时间=21.472,P时间=0.000).HE染色提示第7天时E组视网膜水肿较C、D组减轻.结论:NGF-PLGA微球联合超声治疗视神经损伤大鼠能提高对RGCs的保护作用.
作者：周鹤；刘苏；王志刚 刊期： 2014年第11期
目的:探讨促肝细胞再生磷酸酶1 (phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)对舌癌细胞侵袭能力的影响及其可能的机制.方法:应用siRNA-PRL-1慢病毒载体转染处理舌癌TCA8113细胞株后,分别采用荧光定量PCR和蛋白质印迹检测PRL-1基因和基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA和蛋白水平;采用Transwell小室模型实验检测癌细胞的侵袭能力.结果:siRNA-PRL-1慢病毒转染组癌细胞PRL-1在RNA(0.425 0±0.010 0)和蛋白(2.720 0±0.110 0)水平明显下调(P=0.000,P=0.000),同时MMP-2及MMP-9在RNA(0.562 2±0.180 0,0.617 1 ±0.100 0)及蛋白(0.592 4±0.010 0,0.476 2±0.020 0)表达水平降低(P=0.024,P=0.010,P=0.000,P=0.000);Transwell实验siRNA-PRL-1慢病毒转染组细胞通过数(64.33±4.04)明显减少(P=0.000).结论:siRNA-PRL-1转染可抑制舌癌细胞侵袭,其机制可能与PRL-1基因下调MMP-2及MMP-9的表达有关.
作者：潘丽；季平；刘平；时恩来；徐望 刊期： 2014年第11期
目的:探讨小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast cell,MEF)作为滋养细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞(alveolar epithelial typeⅡ cells,ATⅡ)干性的维持作用.方法:通过分散酶(Dispase)、分散酶/胶原酶(colleganse/disapase)和脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ)联合消化小鼠肺组织,制备肺单细胞悬液,通过免疫黏附法纯化ATⅡ.高糖DMEM添加10％FBS、双抗(青霉素20 U/ml,链霉素20 U/ml);将传代后的ATⅡ接种至丝裂霉素处理的MEF(inactivated MEF,iMEF)培养,并以肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SPC)和水通道蛋白5(aquaponns 5,AQP5)为标记蛋白进行鉴定.结果:平均每只成年小鼠可得到总有核细胞数为(1.7～2.0)×107.ATⅡ细胞传代接种于滋养细胞前3代都能维持在未分化状态,第4代分化成为肺泡上皮Ⅰ型细胞(alveolar epithelial type Ⅰ cells,AT Ⅰ);而传代后没有接种在滋养细胞上的ATⅡ细胞在第1代就分化成ATⅠ细胞.结论:小鼠胚胎成纤维细胞在一定时段能够维持ATⅡ的干性.
作者：余静；曾灵；李勇；邓婷婷；蒋建新；王继红 刊期： 2014年第11期
目的:探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对脓毒症诱导的小鼠急性肝损伤丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的影响.方法:将小鼠随机分为假手术组(SHAM组,n=25)、脓毒症组(SEP组,n=25)、APS处理组(APS组,n=25)、生理盐水处理组(NS组,n=25),采用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation puncture,CLP)造模,APS组经腹腔注射APS 50 mg/(kg·d),NS组经腹腔注射等量生理盐水,SHAM组和SEP组不做特殊处理.染色观察肝脏组织病理变化;检测①血浆中MDA、caspase-3和ICAM-1变化;②肝组织匀浆MDA和caspase-3变化;③肝脏组织中caspase-3蛋白的表达.结果:SEP组12 h开始表现肝细胞水肿进行性加重,48 h达到高峰.APS干预后,肝细胞损害严重程度较SEP组明显改善.通过APS处理后,24、48 h APS组血浆中MDA[(29.69±4.62) mol/ml,P=0.041;(23.95±4.10) mol/ml,P=0.003]、caspase-3[(33.12±9.01)μmol/L,P=0.000; (31.25±8.68) μmol/L,P=0.000]和ICAM-1[(439.49±71.66)μg/L,P=0.009; (321.87±68.64) μg/L,P=0.000]浓度降低,肝组织匀浆MDA与caspase-3浓度亦在相应时相点开始降低.24、48 h APS组easpase-3蛋白[(19.93±4.53) μmol/L,P=0.005;(16.91±4.76) μmol/L,P=0.000]表达较SEP组明显降低.结论:APS可有效减轻急性肝损伤,其作用可能与降低MDA、ICAM-1以及抑制caspase-3表达有关.
作者：罗成；沈娜 刊期： 2014年第11期
目的:探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的方法及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响.方法:将hUC-MSCs分离培养并进行细胞表面标志物及多向分化潜能鉴定,取第5代细胞以终浓度分别为10、15、20、25 μmol/L BrdU进行标记,采用空白BrdU作为对照组,分别培养24、48、72 h及96 h后,台盼蓝排斥实验检测细胞活力;MTT法检测细胞增殖能力;AnnexinV-FITC检测细胞存活率及凋亡率,免疫组化法检测各组标记率.结果:台盼蓝排斥实验检测细胞活力都在96％以上,实验组与对照组比较均无统计学意义(不同浓度组间比较P=0.89,各时间点比较P=0.61,时间与不同浓度的交互作用P=0.89).MTT结果显示BrdU对细胞增殖无抑制(P＞0.05).不同浓度标记组间细胞增殖率及凋亡率的差异(增殖率F=12.02,P＜0.001,凋亡率F=6.14,P=0.009).结论:BrdU标记hUC-MSCs是安全可靠的,BrdU标记hUC-MSCs的佳剂量和时间为20μmol/L、72 h,适于hUC-MSCs在临床前实验研究的体内示踪.
作者：高黎；祝华；张荣；王莉佳；邹琳；符州 刊期： 2014年第11期
目的:观察miR-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨miR-451在DN发病机制中的作用.方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、miR-451组及对照组.腹腔注射法进行质粒注射处理2周后,光镜下观察肾小球形态学变化,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测肾脏组织miR-451的表达水平,Western blot和激光共聚焦检测肾脏组织中miR-451的靶基因酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白(tyrosine3-monooxy-genase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)及其相关的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及其上游激酶MKK3 (MAPK kinase 3)的表达水平.结果:7周龄db/db小鼠未处理组相比对照组出现高血糖且尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAE)增加,提示进入早期DN阶段,给予30mg/(kg·d)质粒注射实验2周.光镜观察和肾小球直径测量发现,miR-451处理组肾小球形态减小(P=0.000).Real-time PCR检测显示miR-451组小鼠肾脏组织中miR-451的表达水平增高1.79倍(P=0.002),Western blot和激光共聚焦结果显示,miR-451组较未处理组和空质粒组肾脏组织Ywhaz的表达受到下调,同时p38MAPK及上游激酶MKK3蛋白表达水平减少(P均=0.000).结论:miR-451可能通过直接靶向Ywhaz基因,调控MAPK途径中关键蛋白p38MAPK、MKK3的表达,从而抑制肾小球肥大,在DN发病机制中可能起着重要的作用.
作者：彭睿；周吉；李天驹；孙艳；尹频；彭惠民；张政 刊期： 2014年第11期
目的:研究在Transwell小室环境条件下,脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分别对青年人来源和老年人来源成纤维细胞功能的影响及其差异.方法:从人脂肪组织中分离、培养ADSCs,从青年人和老年人皮肤组织中分离、培养青年人来源成纤维细胞和老年人来源成纤维细胞,用Transwell小室建立共培养模型,细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测共培养后成纤维细胞增殖情况,RT-PCR检测共培养后成纤维细胞Ⅰ型胶原、基质金属激酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、β-半乳糖苷酶mRNA表达.结果:(1)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞增殖分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组增殖高于老年人实验组(P=0.000).(2)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶mRNA表达分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶mRNA表达均高于老年人实验组(P=0.002、P=0.000).(3)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达分别低于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),青年人实验组的MMP-1 mRNA表达低于青年人实验组(P=0.055),差异无统计学意义,此结果的产生可能与共培养后青年人成纤维细胞和老年人成纤维细胞增殖均较活跃,产生的MMP-1均较少有关.结论:ADSCs与成纤维细胞共培养,能促进不同年龄成纤维细胞的增殖能力和胶原蛋白的分泌能力.
作者：杜云鹏；沈为民；申霄 刊期： 2014年第11期
目的:三联基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)为泛素化E3连接酶,通过抑制TRIM25表达,研究其对肺癌顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响.方法:针对TRIM25基因设计4条不同序列shRNA,分别构建重组质粒载体pt1、pt2、pt3、pt4.利用脂质体将质粒转染至A549/DDP细胞,采用real-time PCR、Westernblot检测抑制效果,MTT实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)实验分别检测在DDP作用下细胞耐药性改变和凋亡情况.结果:干扰质粒pt1在mRNA和蛋白质水平上均能特异性地抑制TRIM25的表达;MTT法结果显示,抑制TRIM25表达后,干扰组pt1细胞IC50值低于pNC组(P=0.001)及对照组(P=0.000);FCM结果显示,干扰组pt1的细胞凋亡率明显低于pNC组(P=0.005)、对照组(P=0.004).结论:抑制TRIM25表达后,能有效地降低A549/DDP细胞株的DDP耐药性并促进其凋亡.
作者：粟林；秦霞；敬怀志；屈灿；邱峰 刊期： 2014年第11期
目的:探讨MRL-lpr狼疮小鼠模型中B细胞表面Fcγ受体ⅡB(FcγRⅡB)的表达情况及其病理意义.方法:构建MRL-lpr狼疮小鼠模型,在4、8、12、20周龄时检测外周血总IgG、抗dsDNA抗体、抗ribosomal P0抗体、抗smRNP抗体含量,分析狼疮小鼠的疾病活动度;流式检测20周龄的MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB及CD69表达情况,分析FcγRⅡB的表达情况与B细胞活化的关系.结果:随着周龄的增加,MRL-lpr狼疮小鼠外周血总IgG及抗dsDNA抗体、抗ribosomalP0抗体、抗smRNP抗体含量逐渐升高;MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB表达丰度明显降低(均有P＜0.05),CD69表达水平明显升高(P＜0.05),且正常C57BL/6小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγRⅡB表达上调,但MRL-lpr狼疮小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγR ⅡB表达无明显变化.结论:MRL-lpr狼疮小鼠B细胞表面FcγRⅡB的表达与B细胞的活化有关,FcγRⅡB的表达异常可能是MRL-lpr狼疮小鼠B细胞异常活化的分子机制之一.
作者：李频；林威；郑祥雄 刊期： 2014年第11期
目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)提供新的治疗思路.方法:体外培养并鉴定人RPE细胞、HCMEC;200 μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型,Transwell小室建立细胞共培养模型;将缺氧的RPE细胞随机分为Slit2组(加入Slit2)、Slit2 ShRNA组(加入Slit2 ShRNA)、空腺病毒组(加入空腺病毒)、缺氧组,12、24、48 h后采用CCK 8(Cell Counting Kit-8,CCK 8)法检测HCMEC的增殖.结果:不同组别存在组间差别,差异均有统计学意义(F=98.122,P=0.000),不同时间点存在差别(F=3388.913,P=0.000),组别与时间点的交互作用(F=82.863,P=0.000).Slit2组吸光度(absorbance,A)值在24 h、48 h均高于其他组(与缺氧组P=0.001,其余P=0.000),Slit2 ShRNA组A值在24 h、48 h均低于其他组(48 h与缺氧组P=0.003,与空腺病毒组P=0.008,其余P=0.000).结论:Slit2的高表达可明显促进HCMEC的增殖,沉默RPE细胞中的Slit2的表达后,会明显抑制HCMEC的增殖.
作者：汤艳玲；周希瑗 刊期： 2014年第11期
目的:研究大鼠实验性牙周炎在发生发展过程中,糖尿病对其的发挥的作用及影响.方法:选取48只雄性SD大鼠采用在右上颌第一磨牙牙周拴丝的方法构建大鼠牙周炎模型.随机均分为2组,每组24只,糖尿病+牙周炎组(G1组),牙周炎组(G2组).G1组大鼠通过在腹腔内注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型.分别在建模后第1、2、3、4周每组(G1组,G2组)随机处死6只大鼠,测量龈沟出血指数(sulcular bleeding index,SBI),牙周探诊深度(probing depth,PD),牙槽骨丧失高度(alveolar bone loss,ABL),进行牙周形态学的观察和免疫组化检测牙周组织中白介素1β (interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达.结果:(1)在同一时间,SBI、PD和ABL G1组＞G2组,组间比较具有统计学差异(P＜0.05);(2)G1组牙周组织形态炎症表现较G2组严重;(3)在同一时间点,牙周组织中IL-1β、TNF-α的表达,G1组＞G2组,组间比较有统计学意义(P＜0.05).结论:本实验条件下,糖尿病可以使大鼠牙周炎病变进一步恶化.
作者：邓婕；倪灵；戴红卫；万朝霞；李丛华；钟晓波 刊期： 2014年第11期
目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响.方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达.用ROCK抑制剂Fasudil处理SKOV3细胞,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞凋亡水平,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3 (cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性,Western blot检测凋亡相关蛋白p53表达,比较不同浓度Fasudil对细胞增殖、细胞凋亡、caspase-3活性以及凋亡相关蛋白表达的影响.结果:ROCK在恶性卵巢上皮性肿瘤的阳性表达明显高于良性肿瘤(x2=20.961,P=0.000),在晚期上皮性卵巢癌组织中其表达高于早期肿瘤(x2=16.675,P=0.000).不同浓度Fasudil处理组SKOV3细胞24 h增殖抑制率和凋亡率均明显高于未加药组(F=402.537,P=0.000;F=124.251,P=0.000),并均随药物浓度增加而逐渐升高,且Fasudil呈浓度依赖性地增强caspase-3 活性(F=32.423,P=0.000)和p53蛋白的表达(F=31.599,P=0.000).结论:ROCK在卵巢癌组织中有较高表达,可能在卵巢癌细胞增殖和凋亡抑制中扮演一定角色.
作者：钟立；孙彤；刘祖翠 刊期： 2014年第11期
目的:了解男男性行为者(men who have sex with men,MSM)在艾滋病暴露前预防用药(pre-exposure prophylaxis,PrEP)临床试验中的队列保持力及其影响因素.方法:采用非概率抽样法招募并筛选出297名MSM进入研究,随机分为每日用药组、高危行为前后用药组和空白对照组,每3月进行临床随访和问卷调查.利用Kaplan-Meier估计的生存曲线描述不同试验组的累积队列保持率,单因素和多因素Cox回归用于分析队列保持的影响因素.结果:43.1％(128/297)的MSM完成了本研究的随访,队列平均保持时间(5.85±3.99)月.高危行为前后用药组相对空白对照组(AHR=0.62,95％CI=0.42～0.91)、年龄30岁以上(AHR=0.65,95％CI=0.47～0.90)的MSM有更高的队列保持力.结论:本研究中MSM人群PrEP临床试验队列保持力不高,在后期研究中需加强空白对照组和低年龄MSM的队列管理,以提高临床试验的队列保持力.
作者：付春静；钟晓妮；彭斌；张燕；叶孟良；孔翠娥；何佳桐；曾馨；荆少华 刊期： 2014年第11期
目的:应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究.方法:用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况.结果:小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的.小鼠出生6d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部.结论:Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用.
作者：宋红霞；张思仲 刊期： 2014年第11期
目的:检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinotidol 3-kinase/protein kinase B,PI3k/Akt)信号通路及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在早孕期正常妊娠和自然流产绒毛组织中的表达情况,并探讨其表达与自然流产的关系.方法:采用real-time PCR、免疫组织化学方法和Western blot技术检测20例早孕期自然流产绒毛组织与20例正常人工流产绒毛组织中PI3k、Akt、p-Akt、张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、MMP-2、MMP-9等表达情况.结果:荧光定量PCR结果显示,PI3k (P=0.000)、Akt(P=0.005)、MMP-9 (P=0.000)的mRNA水平在自然流产组(SPO组)明显低于正常人工流产组(NOR组),PTEN的mRNA水平在SPO组则高于NOR组(P=0.000).免疫组化结果显示PI3k(P=0.006)、Akt(P=0.000)、p-Akt(P=0.000)、MMP-9(P=0.000)在SPO组表达明显低于NOR组,PTEN的表达则呈现相反的趋势(P=0.000),MMP-2在SPO组与NOR组没有明显变化(P=0.092).Western blot结果与免疫组化结果一致,PI3k(P=0.047)、Akt (P=0.011)、p-Akt (P=0.001)、MMP-2(P=0.893)、MMP-9 (P=0.005).结论:PI3k/Akt信号通路参与了早孕期自然流产的发生,可能通过影响MMP-9的表达而影响其侵袭功能.本研究对于揭示自然流产发生的分子机制具有重要意义,为临床上预防与治疗早期流产的发生提供了新的方向.
作者：刘丽媛；何俊琳；刘学庆；丁裕斌；王应雄；陈雪梅 刊期： 2014年第11期
目的:比较不同年龄组新发前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者的临床特点及预后因素分析.方法:将我院从2006年1月至2013年5月间收治的新发PCa患者共105例分为低龄组(＜60岁)和高龄组(≥60岁),其中低龄组45例(中位年龄56岁)、高龄组60例(中位年龄72岁).比较2组人群的首发症状、国际前列腺症状评分(international prostate symptom rating scale,IPSS)、总前列腺特异性抗原(total prostatespecific antigen,TPSA)、病理Gleason评分、临床分期、骨转移情况以及治疗方式.结果:2组患者却以尿频、排尿困难为首发症状占主导,只有骨痛症状在2组间有统计学意义(Z=-2.436,P=0.015);低龄组患者中IPSS评分为轻、中、重症状的有11、23、11例,高龄组患者分别为8、15、37例,高龄组中患者症状较重(Z=-3.460,P=0.001);低龄组和高龄组患者的TPSA中位值分别为97.77、47.32 ng/ml,有统计学意义(Z=-2.830,P=0.005);低龄组和高龄组Gleason评分小于7分、等于7分、大于7分的患者分别为12、17、16例和30、19、11例,有统计学意义(Z=-2.580,P=0.01);低龄组患者临床分期为Ⅰ～Ⅱ期有17例、Ⅲ～Ⅳ期有28例,高龄组患者临床分期为Ⅰ～Ⅱ期有32例、Ⅲ～Ⅳ期有28例,2组临床分期无统计学意义(Z=2.500,P=0.114);低龄组和高龄组的骨转移分别为28例和22列,有统计学意义(x2=4.618,P=0.032);低龄组和高龄组行前列腺癌根治术的患者分别有15例、26例,余患者行内分泌治疗.结论:低龄组和高龄组患者多数以尿频、排尿困难为首发症状就诊,低龄组中以骨痛症状为首要表现的患者更多;低龄组患者较高龄组症状轻,但TPSA值更高、病理恶性程度高且更易发生骨转移,而2组间临床分期无明显差别.
作者：姚烽；王明；苟欣 刊期： 2014年第11期
目的:采用二氯化钴(cobaltous chloride,CoCl2)化学诱导法构建人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3的乏氧耐药模型,并比较二者耐药特性.方法:(1)体外培养的A2780和SKOV3细胞分别加入不同浓度CoCl2培养液作用12、24、48、72 h,采用MTT法检测其增殖活性及对紫杉醇的耐药倍数;(2)采用150 μmol/L CoGl2培养液作用24 h构建乏氧环境,RT-PCR检测常氧和乏氧条件下乏氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF) 1α mRNA的表达情况.结果:2种细胞的增殖抑制率与CoCl2呈剂量-时间依赖关系(A2780组:F=1 165.416,P=0.000;SKOV3组:F=2 802.394,P=0.000).随着CoCl2浓度的增加,A2780和SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数增加(F=7 842.711,P=0.000);在相同CoCl2浓度作用下,SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数明显高于A2780(50 μmol/L组:t=-48.287,P=0.000;100 μmol/L组:t=-263.205,P=0.000;150μmol/L组:t=-143.305,P=0.000).150 μmol/LCoCl2作用24h,2种细胞耐药倍数分别为(9.84±0.11)和(21.08±0.08),并出现稳定的HIF-1α mRNA表达,其中SKOV3细胞HIF-1α mRNA的表达增加量明显高于A2780细胞(t=-5.573,P=0.000).结论:CoCl2化学诱导法可成功建立卵巢癌细胞乏氧耐药模型,其耐药倍数与细胞类型有关.在相同条件下,SKOV3细胞株乏氧耐药模型较A2780更易建立,是乏氧耐药逆转研究较为理想的细胞株.
作者：尹明月；孙江川；常淑芳；刘莉 刊期： 2014年第11期
目的:分析严重生精障碍男性的染色体异常和无精子因子(azoospermia factor,AZF)的特点.方法:采用G显带技术分析染色体核型,应用多重PCR技术检测AZF微缺失.结果:在443例无精症与183例严重少精症患者中,79例染色体出现异常(12.62％),其中无精子组68例(15.35％),严重少精症组11例(6.01％).同时,在严重少精症组中发现1个未经报道的易位核型46,XY,t(4;8)(q35;q22).Y染色体AZF微缺失68例(10.86％),其中无精子组和严重少精子组发生率分别为11.51％和9.29％.在AZF微缺失中,以AZFc缺失为常见,其次是AZFb和AZFd缺失,构成比分别为41.18％、20.59％与10.29％.在68例Y染色体微缺失中,14例合并染色体异常,无精子组和严重少精子组分别为10例和4例.结论:遗传异常是严重生精障碍患者的重要病因,在行辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)前,需要进行染色体和Y染色体的微缺失检测,以减低父代异常基因遗传给后代的风险.
作者：何海洪；周后钢；陈艳清；姚万有；杨秀珠 刊期： 2014年第11期
目的:初步探讨环磷酰胺(cytoxan,CTX)导致生精细胞凋亡中睾丸组织内转化生长因子β1 (transforming growth factorsβ1,TGF-β1)的表达及意义.方法:将CTX作用于9d龄雄性Wistar大鼠,用药后24 h、4周、8周实验组和对照组分别取材10只,采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,采用RT-PCR技术检测睾丸组织中TGF-β1表达.结果:(1)用药后24 h实验组较对照组生精细胞凋亡无明显差异(F组间=1.25,P=0.924),TGF-β1-mRNA表达无明显差异(F组间=1.59,P=0.339).(2)用药后4周、8周实验组生精细胞凋亡较对照组明显增多(F组间=126.73,P=0.005),实验组TGF-β1-mRNA表达明显大于对照组(F组间=32.86,P=0.007).结论:CTX可增加生精细胞凋亡,且伴有TGF-β1表达明显增加,提示CTX引起TGF-β1表达增加可能导致生精细胞凋亡增多.
作者：代江涛；李旭良；吴春；魏光辉；林涛；何大维 刊期： 2014年第11期
目的:观察不同灸法对部分雄激素缺乏综合征大鼠性激素/促性激素分泌调节以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)的影响.方法:将50只雄性SD大鼠随机分成2组:正常组(n=10)和模型组(n=40),模型组腹腔注射环磷酰胺中老年男性部分雄激素缺乏综合征(partial androgen deficiency of aging male,PADAM)大鼠模型.从造模成功的大鼠中随机选取32只平均分为4组:温和灸组、瘢痕灸组、药物组和对照组.于造模前、造模后和治疗后测定大鼠血清总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)值及悬尾和强迫游泳时间.于治疗后测定血清黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平及肾脏、睾丸匀浆SOD、MDA含量.结果:(1)运用环磷酰胺复制PADAM大鼠模型成功.(2)治疗结束后,温和灸组、瘢痕灸组、药物组血清TT、FT含量较治疗前及对照组明显提高(P值均为0.000);血清LH、FSH含量较对照组明显下降(P值均为0.000);悬尾和强迫游泳时间明显改善(P值均为0.000);肾脏、睾丸SOD含量明显高于对照组(P值均为0.000)而MDA含量明显低于对照组(P值均为0.000);温和灸组与瘢痕灸组、药物组相比较疗效更明显(P=0.004,P=0.009; P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.003),瘢痕灸组、药物组比较无统计学差异(P=0.762,P=0.282,P=0.247).结论:(1)2种灸法均可提高PADAM大鼠血清TT、FT水平及肌张力和抗疲劳能力,其作用与丙酸睾丸素相当.(2)2种灸法均可提高PADAM大鼠体内SOD而降低MDA,提示灸法治疗PADAM可能与其改善体内自由基系统有关联.(3)温和灸疗效更佳,为临床灸法选择提供实验依据.
作者：任毅；杨晓光；李学智；张愉；汪莹 刊期： 2014年第11期
目的:探讨siRNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制.方法:设计并合成3条Chk1 siRNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段.将Chk1 siRNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1siRNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因CyclinA、CDK4、Cdc25A蛋白表达.结果:3个siRNA中,1条是有效siRNA.该有效Chk1 siRNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6％,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000).转染48 h后,Chk1 siRNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)％,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)％(P=0.000).流式细胞仪检测显示Chk1 siRNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)％,明显低于未转染组(19.35±2.19)％和脂质体转染组(19.76±2.67)％(P=0.000).Western blot结果显示转染Chk1 siRNA后,细胞内与细胞周期相关的CyclinA、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000).结论:siRNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关.
作者：王炼炼；邓幼林；李聪 刊期： 2014年第11期
目的:通过对克罗米芬(clomiphene citrate,CC)抵抗的多囊卵巢综合征(plycystic ovary syndrome,PCOS)患者相关危险因素的logistic回归分析,探讨临床上难治性PCOS诊疗的思路和策略.方法:92例PCOS患者分为CC有效组和CC抵抗组,均测其体质量、身高、年龄、葡萄糖耐量实验(glucose tolerance test,OGTT)(0’、120’)、胰岛素(insulin)(0’、120’)、卵泡刺激素(ol-licule-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)以及同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy),并计算体质指数(body mass index,BMI)和稳态模式评估法测定胰岛素抵抗指数(homeostasis modelassessment for insulin resistance,HOMA-IR).将差异有统计学意义的指标进行logistic回归分析以及ROC曲线分析.结果:CC抵抗组与CC有效组之间比较,年龄(P=0.000)、BMI (P=0.005)、Hcy(P=0.000)、OGTT(0’)(P=0.000)、INS(0’)(P=0.014)、T(P=0.042)、HOMA-IR(P=0.000)差异有统计学意义;Hcy、OGTT(0’)、INS(0’)、T、HOMA-index、BMI、年龄指标与CC抵抗呈负相关;Hcy的ROC曲线下面积为0.981,95％CI=0.972～0.990.结论:Hcy在预测难治性CC抵抗的PCOS中是1项佳的危险预测指标.
作者：刘燕；李聪；王炼炼 刊期： 2014年第11期
目的:观察大电导钙激活钾通道(big conductance Ca2+-activated K+ channel,BKca)对糖尿病勃起功能障碍(diabetesmellitus-induced erectile dysfunction,DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组(DMED治疗组)7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂(NS1619)阴茎海绵体注入2周.观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压(intracavernous pressure,ICP)/平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR(real-time PCR)方法检测RhoA、ROCK1、ROCK2表达,反应RhoA/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)磷酸化程度.结果:成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善(P=0.025、0.024),阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高(P=0.031、0.024)并且RhoA、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基(myosin phosphatasetarget subunit,MYPT)-1蛋白和mRNA表达水平下调(P=0.029、0.003、0.002),但仍未达到正常对照组大鼠水平(P=0.018、0.040、0.003),ROCK1表达无明显差异(P=0.533).结论:DMED大鼠因RhoA/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调RhoA/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能.
作者：罗家宇；吴方昊；曾李；赵亮；肖明朝 刊期： 2014年第11期
目的:比较顺铂(cisplatin,CDDP)与紫杉醇(paclitaxel,PTX)不同的给药方案对卵巢癌细胞种群恢复的影响.方法:(1)CDDP、PTX或CDDP联合PTX分别于第1天(D1)或D1及D8处理卵巢癌SKOV3细胞;(2)倒置显微镜观察不同处理组中,SKOV3细胞凋亡与种群恢复的情况;(3)CCK-8法分别测定不同处理组在D7和D21时SKOV3细胞的吸光度(absorbance,A)值.结果:(1)单用CDDP组中,单次给药组与分次给药组相比较,二者对SKOV3细胞的凋亡与种群恢复的影响无明显差异(P=0.970);(2)单用PTX组中,与单次给药组相比,分次给药组明显抑制了SKOV3细胞的种群恢复(P=0.000);(3)CDDP联合PTX组中,分次给药组较单次给药组对SKOV3细胞的种群恢复明显抑制(P=0.000),并且在分次给药组中,CDDP联合PTX组较单用PTX组明显抑制SKOV3细胞的种群恢复(P=0.000).结论:CDDP联合PTX分次给药较单次给药可能通过抑制卵巢癌细胞的种群恢复从而抑制卵巢癌的耐药或复发.
作者：何欢；李雪梅；成敏；令狐华 刊期： 2014年第11期
目的:研究人生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SV-neo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用.方法:构建Gadd45α短发夹干扰RNA,以阴性对照组作为参照,转染人滋养细胞HTR8/SVneo,即分为实验组(si-Gadd45α)和阴性对照组(si-NC)进行实验;应用流式细胞仪检测转染效率,并应用qRT-PCR和Western blot检测转染后各组细胞中Gadd45α mRNA和蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)显色法检测转染后各组细胞增殖能力;应用流式细胞仪对转染后各组细胞进行细胞凋亡分析;采用Transwell法检测转染后各组细胞迁移和侵袭能力;采用早孕绒毛外植体培养模型观察敲除Gadd45α基因后对绒毛外滋养细胞外生性迁移能力的影响;收集各组细胞培养上清液,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达,蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of MMPs,TIMPs)的表达.结果:流式细胞仪检测转染效率约为90％;转染后实验组较对照组Gadd45α mRNA的表达量约降低80％,蛋白表达水平约下降70％,差异均有统计学意义(P＜0.01),证明干扰Gadd45α表达成功.MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,结果显示实验组和对照组细胞增殖和凋亡均无统计学差异(P＞0.05).Transwell实验表明干扰Gadd45α后HTR8/SVneo侵袭能力明显增加,约为对照组的1.65倍;迁移能力也明显增加,约为对照组的2倍,均有统计学差异(P＜0.01).早孕绒毛外植体培养结果显示:与阴性对照组的绒毛相比,Gadd45α干扰片段处理的绒毛外滋养细胞外生性迁移的距离明显增加,差异有统计学意义(P=0.005).明胶酶谱实验结果显示干扰Gadd45α后基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和MMP-9的活性增强,而Westem blot检测发现其抑制因子TIMP-1和TIMP-2相应地下降(P＜0.01).结论:推测Gadd45α可能是通过调控蛋白酶的活性来抑制滋养细胞的迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展.
作者：刘西茹；慕华桥；罗欣；漆洪波 刊期： 2014年第11期
