肝脏是脂质代谢的重要器官,肝中过量的脂质堆积诱导细胞内大量活性氧的生成,引起肝细胞内质网应激、线粒体功能紊乱及脂毒性,这与非酒精性脂肪肝病发生密切相关.非酒精性脂肪肝病除引起肝脏病变及死亡外,还与2型糖尿病、动脉硬化性心脑肾血管疾病及肝外恶性肿瘤密切相关.近年来研究发现骨质疏松、骨密度减低与非酒精性脂肪肝病之间有一定的相关性,一些骨代谢相关因子在非酒精性脂肪肝病不同阶段存在异常,本文主要就骨桥蛋白、骨保护素、骨形成蛋白、骨硬化蛋白及骨膜蛋白与非酒精性脂肪肝病之间关系研究进展进行综述.
作者：陈新卫；于晓蕾；任路平 刊期： 2017年第07期
乳腺癌患者接受细胞毒化疗可导致机体潜伏或静止状态的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活,甚至出现肝组织损伤,临床可表现为无症状自限性肝炎,或暴发性肝衰竭所致的化疗中断甚至死亡.研究表明,在乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)阳性乳腺癌相关HBV冉激活的患者中,HBV再激活相关肝炎发生率达18.4％～23.5％,相关化疗中断率则达12.7％～33.6％.HBV再激活的发病机制一方面是化疗药物导致的HBV与机体之间的免疫失衡,另一方面则是化疗药物对HBV的直接激活,其危险因素与HBV病原学状态、HBV DNA载量以及化疗方案等有关.为了减少乳腺癌化疗相关HBV再激活及其相关并发症的发生,化疗前应常规筛查HBV感染,对HBsAg阳性患者应预防性使用抗病毒药物,并对HBsAg阴性、HBcAb阳性患者则应密切随访,及早发现HBV再激活并启动抗病毒治疗.
作者：董琳；曾爱中 刊期： 2017年第07期
CRISPR/Cas9基因剪辑技术源于细菌及古细菌CRISPR介导的后天获得性免疫系统,通过引导RNA与靶DNA PAM序列特异性识别,引发Cas9核酸酶定点切割互补双链DNA,在基因剪辑方面具有制备简单、剪辑位点特异性高及易于同时剪辑多个基因位点等优势,已被广泛应用于哺乳动物细胞基因剪辑.本文主要从CRISPR/Cas9技术作用原理和其抗乙型肝炎病毒感染作用及机制等方面进行综述.
作者：罗英英；黄爱龙；胡接力 刊期： 2017年第07期
Tfh细胞是近发现的第5个CD4+ Th细胞新亚群,主要定位于淋巴滤泡中,是T-B细胞相互作用的桥梁,主要在调节B淋巴细胞增殖、浆细胞分化及抗体类别转换等方面发挥作用.以上功能的实现与转录因子Bcl-6、细胞因子IL-21、趋化因子受体CXCR5、共刺激分子ICOS与CD40L及共抑制分子PD-1等密切相关.近年来研究发现Tfh细胞功能的失调在自身免疫性疾病、感染、免疫缺陷病等疾病中发挥重要作用,本文就Tfh细胞的生物学特性及其在慢性肝病中的作用进行综述.
作者：郑怡娟；余雪平；苏智军 刊期： 2017年第07期
病毒表面抗原清除是慢性乙型肝炎功能治愈的主要指标.目前,功能性治愈慢乙肝已成为有望达成的目标.但是,要达到较高的功能治愈率,仍需要发展有别于现有治疗手段的抗乙肝新策略.围绕乙肝表面抗原清除这一目标,本文对现行治疗新策略研究作了简要归纳总结.
作者：黄爱龙 刊期： 2017年第07期
代谢性炎症主要指营养物和代谢过剩所触发的,由内脏组织(主要是脂肪组织)介导的,多种细胞(包括巨噬细胞)与细胞因子共同参与的慢性低丰度性炎症反应.CD36(fatty acid translocase,cluster of differentiation 36,FAT/CD36)又名脂肪酸转运酶,被认为是将机体的天然免疫和代谢有机联合在一起的重要靶点.脂肪酸能诱导肝细胞CD36的表达,并与Toll样受体(toll-like receptors,TLR)TLR4和TLR6结合成异三聚体,促使炎症反应的发生.在代谢性炎症作用下,肝脏摄取合成脂质增加,导致非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂肪肝发生和发展.CD36可能成为治疗NAFLD的潜在靶点.
作者：阮雄中 刊期： 2017年第07期
核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生.耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系.现有的体外表型分析方法存在固有的限制.本文提出一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的新方法,即位点特异性随机突变,通过一轮聚合酶链式反应扩增,在RT区特定位点引入多种突变形式,再结合golden-gate克隆法以及片段替换反应(fragment substitution reaction,FSR)将包含不同突变的DNA片段克隆到相应载体中以进行下一步分析.通过这种方法,构建了阿德福韦(adefovir,ADV)耐药位点rt181和rt236位点的多种突变形式.
作者：刘亚；杨柳青；张文露；黄爱龙；胡接力 刊期： 2017年第07期
目的:评价果糖注射液用于慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)合并2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)的患者血肌酐、尿素氮及血尿酸的影响.方法:71例CHB合并T2DM患者随机分为对照组(38例)和实验组(33例).对照组患者以250mL的5％葡萄糖注射液加入3U胰岛素作为异甘草酸镁注射液或甘草酸二铵注射液的溶媒静脉滴注,实验组患者以250 mL的10％果糖注射液作为异甘草酸镁注射液或甘草酸二铵注射液的溶媒静脉滴注.监测第1天和第5天患者血肌酐、尿素氮及血尿酸水平,同时监测患者血、尿常规、电解质浓度及酸碱平衡、心电图乳酸、动脉血pH值.结果:干预后实验组和对照组疗效之差的双侧90％置信区间结果为血肌酐(-6.94,6.58)和血尿酸(-50.81,36.29)的置信区间上下限在其等效性界值置信区间(-△,△)范围内,表明实验组和对照组疗效相等,尿素氮实验组和对照组疗效之差置信区间下限(-0.38)大于-△(-0.86),提示实验组疗效非劣于对照组的疗效,但不能得出其等效性结论.无其他相关不良反应的发生.结论:果糖注射液对CHB合并T2DM患者的血肌酐、尿素氮及血尿酸无影响,果糖注射液作为甘草酸类制剂的溶媒输液用于CHB合并T2DM患者安全可靠.
作者：俞晓玲；韩荔芬；林云萍；林彩文；吕勇；刘晓燕；林辰青；郑玲 刊期： 2017年第07期
目的:了解终末期肝病患者并发侵袭性真菌感染的情况、临床特点及抗真菌治疗的效果,以期取得更好的疗效,改善临床预后.方法:回顾性分析102例终末期肝病并发侵袭性真菌感染的诱因、临床表现、血常规、G试验、影像学特征、真菌学特点、抗真菌治疗时机和疗效,观察氟康唑、伏立康唑和卡泊芬净抗真菌的疗效.结果:102例患者中确诊28例,临床诊断29例,拟诊45例.其中腹部感染50例,肺部37例,血流8例,中枢4例,腹部肺部同时感染3例.均用过1～2个疗程的广谱抗菌药物,部分患者长期使用糖皮质激素.治疗前G试验阳性患者82例.102例患者中58例口腔肉眼可见毛状白斑,涂片发现真菌.外周血白细胞计数大于10×109个/L者58例(56.9％),中性粒细胞分类大于80％的79例(77.5％);29例患者CT发现肺部病变.氟康唑治疗17例,治愈10例(58.8％),无效7例;伏立康唑治疗23例,治愈15例(65.2％),无效8例;卡泊芬净治疗58例,治愈46例(79.3％),无效12例,治愈率以卡泊芬净组为高,但无统计学差异.结论:终末期肝病有高危因素存在,易并发侵袭性真菌感染,主要病原菌为念珠菌.但临床症状体征无特异性,易漏诊,治疗时间越早,疗效越好.卡泊芬净治疗终末期肝病伴发的侵袭性真菌感染疗效高、安全性好,适合临床应用.
作者：黄祎；李哲；雷宇；凌宁；付潇；周智 刊期： 2017年第07期
目的:丙型肝炎病毒感染是严重的全球公共卫生问题.在中国,丙肝感染者约为1 000万人.全面了解我国医生对丙肝抗病毒知识的掌握治疗现状,有助于进一步提高患者治愈率.方法:2015年7月至2016年6月,对全国(除港、澳、台外)27个省市自治区56家医院的560名医生,就对丙肝的知晓情况、抗病毒药物的选择、抗病毒治疗疗程的影响凶素、对直接抗病毒药物的了解情况等方面,进行了调研.结果:共收回有效调查问卷502份.研究对象中女性略多于男性,平均年龄为37岁;纳入的医生所在科室中,肝病科医生所占比例高,达43.6％,其次是感染科(38％).在丙肝抗病毒治疗药物的选择过程中,93％的医生会首选长效干扰素+利巴韦林.在影响医生决定抗病毒疗程的因素中,只有28.6％医生会考虑到基线病毒载量对疗程的影响.对于抗病毒治疗的治愈指标,高达64.9％的医生对于长效干扰素联合利巴韦林(P/R)治疗后SVR的准确概念尚不清楚.而且在丙肝治疗过程中,当未实现快速病毒学应答(RVR)时,高达93％的医生选择终止治疗.有77％的医生知道DAAs,不同科室医生对DAAs的知晓情况具有统计学差异(P＜0.001).结论:中国大陆部分医生抗HCV治疗尚有不规范之处,亟需培训和提高.
作者：蒋莹莹；卞丹丹；周海洋；段淑丽；王钊；刘霜；刘梅；陈煜；郑素军；段钟平 刊期： 2017年第07期
目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达.方法:运用qRT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;qRT-PCR、Western blot检测HBV复制在HepG2细胞中对14-3-3ζ表达的影响;Western blot检测HBV复制在小鼠肝组织中对14-3-3ζ表达的影响.结果:在HepG2.2.15中,14-3-3 η、γ、ζmRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组明显增加(mRNA:t=16.5、27.86、17.23,P=0.000、0.000、0.000;蛋白:t=35.7、16.97、22.51,P=0.000、0.000、0.000);在HepAD38(Tet-)中只有14-3-3ζmRNA和蛋白的表达水平较HepAD38 (Tet+)对照组明显增加(mRNA:t=14.27,P=0.000;蛋白:t=12.11,P=0.000);HBV复制能使HepG2中14-3-3ζmRNA和蛋白的表达显著升高(mRNA:F=98.8,P=0.000;蛋白:F=118.3,P=0.000);HBV复制能使小鼠肝组织中14-3-3ζ蛋白的表达显著升高(F=109.4,P=0.000).结论:HBV可以促进肝癌细胞内14-3-3 η、γ、ζ的表达,这一发现为控制HBV感染的治疗策略提供新的靶点.
作者：张祥；魏杰；靳鑫；王石磊；阳媛；师悦嫄；牛司强；汪德强 刊期： 2017年第07期
目的:探讨酒精性肝硬化(alcoholic cirrhosis,AC)与肝炎后肝硬化(posthepatitic cirrhosis,PC)患者社会心理学的异同.方法:选取2016年1月至2016年6月于北京佑安院人工肝住院的AC患者40例及PC患者77例,对2组患者在一般社会学资料、临床特征以及心理学等方面进行对比分析.结果:AC患者以男性居多,其男性比例高于肝炎后肝硬化组,差异具有统计学意义(P＜0.05);社会学方面,AC患者居住在城市的比例高于PC患者组(P＜0.05);夫妻关系中,PC患者夫妻关系相比AC患者组较好,差异具有统计学意义(P＜0.05).2组患者在付费形式上略有不同,PC患者外地医保的比例稍高,差异具有统计学意义(P＜0.05).临床特征上,AC组患者黄疸、腹胀、腹痛、乏力、蜘蛛痣及肝病面容的发生率均明显高于PC组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).心理学方面,AC患者组在是否有过自杀想法上阳性率达12.5％,明显高于PC组(0％),差异具有统计学意义(P＜0.05).进一步通过单因素及多因素logistic回归分析所有肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者及AC患者自杀想法的危险因素发现,腹水为LC患者存在自杀想法的独立危险因素(OR=0.363,95％CI=0.134～0.982,P=0.046);户口的形式为AC患者存在自杀想法的独立危险因素(OR=11.549,95％CI=1.035～128.937,P=-0.047),且农村户口的患者存在自杀想法的阳性率显著高于城市户口的患者(P＜0.05).结论:腹水可能为LC患者存在自杀倾向的危险因素,而AC患者比PC患者的社会心理学问题可能更为严重,尤其是农村户口的患者,临床诊疗过程中应给予更多的心理护理.
作者：孙晓玲；王婷；刘梅；郭会敏 刊期： 2017年第07期
目的:了解恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者免疫球蛋白及补体的变化.方法:采用流式细胞仪检测95例慢性乙型肝炎患者在使用恩替卡韦治疗前及80例健康对照组外周血免疫球蛋白的变化,采用Beckman-Coulter Immage 800免疫化学系统及其配套试剂测定血清补体C3和C4,用雅培化学发光法检测HBsAg含量.结果:在治疗6个月结束时,95例患者肝功能明显好转,HBsAg滴度下降前后对比有统计学意义(P＜0.05),26例(27.3％) HBsAg下降＞500 IU/mL;恩替卡韦治疗前后IgG、IgM、IgA水平对比有统计学意义(P＜0.05);C3和C4水平在治疗前分别为(0.602±0.112) g/L和(0.113±0.075) g/L,治疗后分别为(1.201±0.156)g/L和(0.196±0.033) g/L(P＜0.05).结论:慢性乙型肝炎患者存在不同程度的细胞免疫功能低下,恩替卡韦治疗后能得到一定程度的纠正.
作者：林孟新；郭如意；苏智军 刊期： 2017年第07期
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARo)是否参与调控乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)微染色体重塑与病毒复制.方法:HepG2细胞单独转染、共转染线性HBV单体与PPARα表达或PPARα沉默载体;Southern blot检测转染细胞质内HBV核心颗粒DNA;实时定量PCR定量检测细胞质HBV核心颗粒DNA及细胞核内HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测转染细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg);染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,ChIP)检测与cccDNA结合的PPARα、组蛋白和染色质修饰酶.结果:与单独转染线性HBV单体相比,共转染PPARα增加了PPARα与HBV cccDNA的结合,增加了HBV开环DNA(open circular DNA,OC DNA)及HBsAg和HBeAg水平,同时也增加了cccDNA微染色质中组蛋白H3和H4的乙酰化水平及乙酰转移酶p300的水平;共转染PPARo沉默载体则有相反的结果.结论:PPARα能直接与cccDNA结合并有助于乙酰转移酶p300募集到cccDNA上,从而调控HBV微染色质的表观遗传学和HBV复制.这一发现对HBV与宿主转录因子间相互作用的相关分子机制提供了新的机制.
作者：谢冰珏；郭进军；张燕；李青岭 刊期： 2017年第07期
目的:分析比较我院无基础疾病的成人Epstein-Barr(EB)病毒感染不同预后的临床特征,以指导临床诊治.方法:回顾性分析我院2014年12月至2016年6月确诊的成人EB病毒感染患者的临床资料、实验室检查和诊治情况,比较分析预后较好的与预后较差患者的临床特征.结果:在29例无基础疾病的成人EB病毒患者中,主要表现为26例发热,18例咽痛,22例淋巴结肿大,15例扁桃体肿大,4例肝大,8例脾大,14例白细胞升高和19例谷丙转氨酶升高等.预后较好的疾病患者年龄较小(P=0.001),更多见咽痛、扁桃体肿大(P=0.004),预后较差疾病的患者更多见红细胞减少(P=0.000)和血红蛋白降低(P=0.001).常见的并发症为肝损害,不同的年龄在有肝损害与无肝损害患者之间有差异.结论:在无基础疾病的成人EB病毒感染中,不同预后的临床特征有差异,预后较好的疾病患者年龄较小,多为青少年,多见咽痛、扁桃体肿大,预后较差疾病患者多为中老年,易发生二系血细胞减少.
作者：王巧合；胡鹏 刊期： 2017年第07期
目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点.方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denat-uration PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证.结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失.结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点.
作者：陈彦猛；胡杰；黄瑶；袁琳；周星；胡源 刊期： 2017年第07期
目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)对HepG2细胞羟甲基戊二酸单酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A,HMGCoA)还原酶及脂质积聚的影响.方法:200 μg/mL低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)负荷下的HepG2细胞分别给予0 ng/mL(对照组)、20 ng/mL(炎症组)IL-1β处理24 h.荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot分别测定HMGCoA还原酶mRNA及蛋白表达水平;薄层层析法检测HMGCoA还原酶活性;同位素标记法评估胆同醇合成情况;油红O染色及酶法定量检测细胞内脂质.结果:IL-1β处理下,HepG2细胞HMGCoA还原酶mRNA表达水平为对照组的(1.54±0.04)倍(t=5.619,P=0.001)、蛋白表达水平为对照组的(1.92±0.12)倍(t=7.745,P=0.002),且HMGCoA还原酶的酶活性为对照组的(1.73±0.25)倍(t=2.476,P=-0.048).IL-1β处理使HepG2细胞的胆固醇合成增多为对照组的(1.32±0.11)倍(t=2.316,P=-0.036).IL-1β处理的HepG2细胞内红染的脂滴显著多于对照组,且IL-1β处理组细胞内总胆固醇含量(22.43±1.62)为对照组(14.90±1.11)的1.51倍(t=3.845,P=0.018),胆固醇酯的含量(3.84±0.20)为对照组(1.41±0.05)的2.72倍(t=11.730,P=0.000).结论:IL-1β可以上调HepG2细胞HMGCoA还原酶的mRNA和蛋白表达水平,并增强其酶活性,促进HepG2细胞内胆同醇合成和脂质积聚.
作者：邹阳；赵蕾；杨萍；韦莉；阮雄中；陈压西 刊期： 2017年第07期
目的:探讨慢性炎症是否可加剧肥胖状态小鼠糖代谢紊乱,及是否影响肝脏糖异生及相关机制.方法:野生C57BL/6J小鼠随机分为正常饮食组、高脂饮食组、高脂饮食合并炎症组(高脂饮食加酪蛋白注射组).小鼠巨噬细胞标志物F4/80免疫组化染色检测肝脏巨噬细胞浸润情况,实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白-1(Mcp1),糖异生相关基因葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-pase)和磷酸烯醇式丙酮酸(Pepck)mRNA相对表达量,过碘酸-希夫染色和蒽酮法检测肝脏糖原含量,蛋白免疫印迹法检测肝脏组织叉头框蛋白O1(FoxO1),蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化蛋白表达.结果:高脂饮食加酪蛋白注射组较高脂饮食组肝脏组织炎症明显升高(P=0.000),且空腹血糖及胰岛素耐量曲线下面积均明显升高(P=0.040,P=0.025),肝脏糖原积聚亦明显增加(P=0.000),肝糖异生相关基因G-6-pase、Pepck mRNA表达明显升高(P=0.001,P=0.001),而肝脏Akt及FoxO1蛋白磷酸化程度均明显下降(P=0.021,P=0.003).高脂饮食组较正常饮食组肝脏Akt、FoxO1蛋白磷酸化降低,糖异生基因表达增加,但血糖仍维持在正常水平.结论:慢性炎症可进一步加剧肥胖小鼠肝糖代谢紊乱,诱导肥胖小鼠高血糖.
作者：罗旋；谭伟；刘军；杜琳敏；陈压西；阮雄中；杨萍 刊期： 2017年第07期
目的:调查重庆主城某区6～12岁儿童超重肥胖现况及其膳食摄入状况,为预防重庆主城儿童超重肥胖提供参考.方法:采取随机整群抽样的方式,在重庆主城某区抽取5所小学,并对所有符合纳入标准的6 260名小学生进行体格检查和半定量膳食频数法问卷调查.并对可能引起超重肥胖的其他因素进行二元logistic回归分析.结果:儿童超重检出率为16.59％(1 000/6 028),肥胖检出率为11.28％(680/6 028);其中男童超重检出率为19.11％(595/3 114),肥胖检出率为13.74％(428/3 114);女童超重检出率为13.90％(405/2 914),肥胖检出率为8.65％(252/2 914).超重肥胖组儿童每日宏量营养素(蛋白质:77.44 g vs.74.97 g,P＜0.05)及微量营养素(维生素A:989.02 μgRE vs.939.42 μgRE;维生素B1:0、81 mg vs.0.79 mg;维生素B2:1.16 mg vs.1.12 mg;维生素B6:1.16 mg vs.1.12 mg;维生素B12:8.91 μg vs.8.31 μg;叶酸:304.44 μg vs.295.08 μg;烟酸:13.00 mg vs.12.42 mg;铁:13.16 mg vs.12.86 mg;锌:11.71 mg vs 11.43 mg;P＜0.05)摄入量均高于正常对照组.二元logistic回归分析表明家长受教育水平、家庭收入、出生体质量是超重肥胖的影响因素(P＜0.05).结论:该调查地区儿童超重肥胖检出率较高,发病率增长较快,需要高度重视,要加强对儿童超重肥胖的健康教育及综合干预,促进儿童身心健康发展.
作者：徐嘉培；梁小华；杨亭；马苏娟；刘友学；陈洁；张鹏；何春玲；夏祖伟；李廷玉 刊期： 2017年第07期
目的:通过对葡激酶(staphylokinase,SAK)基因序列进行定点突变,表达突变蛋白,并对其进行聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰.通过分子筛分离得到较高纯度修饰蛋白,在体内外鉴定其溶栓活性.方法:根据SAK晶体结构及抗原位点选择突变位点,构建突变质粒,并在大肠杆菌中表达半胱氨酸(cysteine,Cys)突变蛋白S-cys;分离纯化目的蛋白;对目的蛋白在不同条件下进行聚乙二醇修饰,筛选优修饰条件;分离修饰蛋白与未修饰蛋白,得到较高纯度的修饰蛋白peg-S-cys,通过纤维蛋白平板溶圈实验和动物栓塞模型的构建初步对其生物活性进行验证.结果:原核表达、纯化后得到纯度较高的S-cys突变体蛋白;优化筛选S-cys蛋白的PEG修饰实验参数,得到佳修饰条件;应用分子筛分离纯化,成功获得纯度较高的peg-S-cys蛋白(纯度大于90％);初步验证peg-S-cys具有溶栓活性.结论:通过对蛋白质基因序列的定点突变,成功实现了蛋白质的聚乙二醇定点修饰,在体外和体内初步验证其活性,为蛋白质改造提供了一种新的方法与思路.
作者：白垒；徐彦颖；汪德强；周建中 刊期： 2017年第07期
目的:探讨2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者发生心房纤颤(atrialfibrillation,AF)的危险因素.方法:选取2010年9月至2014年6月我院2型糖尿病合并NAFLD患者共208例,收集一般临床资料,常规检查心电图,腹部彩超,将入组患者分为房颤组和非房颤组,然后采用多因素logistic回归模型筛选主要危险因素.结果:房颤组患者的体质量指数、糖化血红蛋白、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶水平明显高于非房颤组(P＜0.05);同时,房颤组患者中有糖尿病家族史、脂肪肝家族史、吸烟比例亦明显高于非房颤组(P＜0.01),且年龄明显高于非房颤组患者(P＜0.01).单因素logistic回归分析表明:2型糖尿病合并NAFLD患者发生房颤与性别、年龄、体质指数、糖尿病家族史、脂肪肝家族史、高血压、糖化血红蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白显著相关(P＜0.05);多因素logistic回归分析表明:仅年龄和TC是2型糖尿病合并NAFLD患者发生房颤的危险因素(OR=2.769,95％CI=1.329～5.769,P=0.007;OR=1.435,95％CI=1.027～2.014,P=-0.005).结论:年龄和TC是2型糖尿病合并NAFLD患者发生房颤的危险因素,对于2型糖尿病合并NAFLD的患者更应注意对胆固醇的控制.
作者：雷微；王艳丽 刊期： 2017年第07期
目的:近年来,代谢与肿瘤发病的病因学研究已经成为热点,同时肺癌仍居恶性肿瘤发病率和死亡率榜首,本研究拟构建一个稳定易操作的肺癌原位移植瘤模型,并初步探讨代谢相关通路在该原位移植瘤模型中的表达.方法:选取雄性6～8周龄BABUc裸鼠10只,优化麻醉用药及手术操作步骤,经气管移植5×106个细胞的A549肺癌细胞成瘤,观察移植瘤形成率、形成部位、大体形态、增殖分化程度.另取4只相同条件裸鼠进行手术空白对照.同时检测代谢相关通路蛋白STAT3、AKT和mTOR的表达情况等.结果:手术佳麻醉条件为75 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射;改进操作后经气管移植的小鼠肺癌形成率为80.0％;肿瘤形成以右肺上叶居多,呈明显腺癌结构,分化程度较低,移植瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达高于肺组织,呈高表达状态.肿瘤负荷肺组织代谢相关通路蛋白信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB即AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平即pSTAT3/STAT3、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值均高于正常肺组织,差异具有统计学意义(t=-4.381,-4.462,-4.951;P=0.041,0.011,0.038).结论:通过改良经气管移植手术方式,可以构建一种操作简单、低成本、高效稳定的A549细胞肺癌移植瘤模型;代谢相关通路在肺癌的发生发展中也发挥了一定作用.
作者：卢蕾；魏思宇；徐彩；蔺晓菁；何芸芸；练雪梅 刊期： 2017年第07期
目的:利用荧光标记的长链脂肪酸,建立一种用于评估动物外周组织游离脂肪酸摄取能力的新方法,为研究体内脂肪酸代谢提供新途径.方法:小鼠腹腔注射和尾静脉注射氟化硼二吡咯荧光标记脂肪酸类似物(BODIPY FL C16),荧光显微镜下观察肝脏和脂肪组织荧光强度.对肝脏和脂肪组织进行脂质抽提,并用酶标仪检测血清、肝脏和脂肪组织相对荧光强度.结果:腹腔和尾静脉注射BODIPY FLC16后均能在小鼠血清[(32 096±2 053)RFU;(22 933±2 430) RFU],肝脏[(40.90±5.08) RFU/mg;(25.70±6.53) RFU/mg]和脂肪组织[(576-90) RFU/mg;(4.990±0.586) RFU/mg]检测到增强的荧光信号(P=0.000);腹腔注射BODIPY FL C 16的浓度与外周组织的荧光强度呈正相关(P=0.000);腹腔注射BODIPY FL C16在30～100 min能够维持一个相对脂肪酸代谢的稳态.结论:成功建立了一种体内研究荧光标记脂肪酸摄取的新方法,该方法具有稳定性、重现性,能够准确地反映外周组织脂肪酸摄取情况.
作者：刘军；左国庆；阮雄中；陈压西；杨萍 刊期： 2017年第07期
目的:研究西罗莫司对小鼠肝脏脂质积聚的影响及机制初探.方法:6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为3组:A组为普通饮食组(n=12),B组为高脂饮食组(n=9),C组为高脂饮食加隔天注射西罗莫司组(n=7),喂养14周.全自动生化分析仪检测血清生化指标.酶联免疫吸附法和酶偶联比色法分别检测肝脏游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)和甘油三酯(triglyceride,TG)的含量.Western blot检测脂肪酸转运酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)蛋白的表达水平.荧光显微镜观察原代肝细胞对荧光标记FFA的动态摄取.结果:与A组相比,B组小鼠体质量(q=6.68,P=0.000),血清TG(q =4.88,P=0.045),高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)(g=6.311,P=0.002),谷草转氨酶(aspirate aminotransferase,AST)(q=8.84,P=0.001)水平明显增高,肝脏组织TG(q=14.4,P=0.000),FFA(q=18.0,P=0.000)也明显增高.C组小鼠较B组体质量(q=7.99,P=-0.000),血清TG(q=4.636,P=0.050),AST(q=5.16,P=0.016)及肝脏TG(q=8.91,P=0.000)和FFA(q=14.1,P=0.000)都显著降低.Western blot结果显示C组小鼠肝脏CD36的蛋白表达水平较B组明显降低.FFA动态摄取实验通过定量荧光强度显示西罗莫司能明显抑制肝细胞对FFA的摄取速度(各时间点P均＜0.05).结论:西罗莫司能抑制肝细胞对外源性FFA的摄取,减轻肝脏脂质积聚,其作用机制可能与CD36相关.
作者：谭伟；陈曜；王川；阮雄中；陈压西；杨萍 刊期： 2017年第07期
目的:系统评价不同途径激素补充治疗(hormone replacement therapy,HRT)对绝经妇女血脂影响,指导临床有效安全应用.方法:检索已发表的关于比较试验组(经皮HRT)和对照组1(口服HRT)、试验组(经皮HRT)与对照组2(空白/安慰剂)对血脂及同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)的影响的随机对照试验(randomized controlled trials,RCT);根据Cochrane协作网推荐的系统评价方法对总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglycerides,TG)、HCY进行系统评价.结果:纳入文献22篇,研究对象共1 507人,试验组为609人,对照组1为589人,对照组2为309人.系统评价结果:试验组与对照组2相比,试验组TC值(MD=0.29,95％CI=0.03～0.55,P=0.030),HCY值(MD=0.71,95％CI=0.10～1.32,P=0.020)均比对照组明显降低;单用雌激素亚组中,两组LDL-C值均降低,且差异有统计学意义(MD=0.31,95％CI=0.13～0.48,P=0.001);两组TG值和HDL-C值的变化均无统计学差异(MD=-0.02,95％CI=-0.11～0.06,P=0.590),(MD=-0.02,95％CI=-0.13～0.09,P=0.750).试验组与对照组1相比,TC值、LDL-C值、TG值、和HCY值的变化均无统计学差异,结果分别为:(MD=0.03,95％CI=-0.14～0.20,P=0.730),(MD=-0.04,95％CI=-0.13～0.04,P=0.270),(MD=0.05,95％CI=-0.16～0.26,P=0.650),(MD=0.32,95％CI=-0.47～1.11,P=0.420).HDL-C值的变化无统计学差异(MD=0.01,95％CI=-0.10～0.12,P=0.860),但单用雌激素亚组中,2组HDL-C值均明显降低,且差异有统计学意义(MD=0.19,95％CI=0.10～0.28,P=0.000).结论:经皮HRT与口服HRT相比,对血脂及HCY的影响几乎无差别,但与未接受HRT的女性相比,经皮HRT对血脂及HCY的影响是有益的,可能对心血管疾病有一级预防作用.
作者：刘媛；沈静；王玉廷；张丽伟 刊期： 2017年第07期
目的:比较Huh7、SMMC-7721细胞系抵抗外源性活性氧类(reactive oxygen species,ROS)物质能力的不同,并初步探究肝癌细胞抗ROS的机制.方法:不同浓度的H2O2处理Huh7和SMMC-7721细胞后,比较两者凋亡、坏死的差异,检测细胞内ROS、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)含量及细胞活性、肿瘤干性分子、ROS清除酶基因和DNA修复酶基因的表达变化.结果:同浓度H2O2处理后,SMMC-7721细胞凋亡和坏死数目多于Huh7细胞,其细胞活性明显低于Huh7细胞,在1μmol/mL H2O2浓度组,计数1 500个细胞内SMMC-7721与Huh7细胞凋亡与坏死数目分别为(841.7±78.7)个、(169.7±76.1)个(t=10.638,P=0.000);SMMC-7721与Huh7细胞活性分别为(0.21±0.02)、(0.74±0.14)(t=6.478,P=0.022).肝癌细胞内ROS的水平随H2O2浓度增加呈升高趋势,但Huh7细胞内明显低于SMMC-7721细胞,在1 μmol/mL H2O2浓度组,SMMC-7721与Huh7细胞细胞内ROS水平分别为(128 793±1 158)、(103 455±1 665)(t=21.639,P=O.000);Huh7细胞比SMMC-7721细胞有更高含量的GSH、SOD,并且在H2O2处理后GSH、SOD下降趋势缓于SMMC-7721细胞,在1 μmol/mL H2O2浓度组,SMMC-7721与Huh7细胞内GSH含量分别为(32.85±4.47) mg/g prot、(106.60-6.83) mg/gprot (t=15.655,P=0.000),SMMC-7721与Huh7细胞内SOD含量分别为(19.22±2.93) U/mg prot、(23.57 ±4.85) U/mg prot(t=1.332,P=0.254);整体上肝癌细胞内GSH、SOD的变化早于细胞内ROS和细胞活性的变化;Western blot提示Huh7细胞比SMMC-7721细胞高表达肿瘤干性分子CD133、Bmi-1、ROS清除酶基因SOD2和DNA修复基因Rad51.结论:Huh7比SMMC-7721有更强的抗ROS能力,相对高表达CD133、Bmi-1、SOD2及Rad51,这些分子可能参与了肝癌细胞抗ROS的过程,且可能通过细胞内GSH、SOD直接发挥作用.
作者：李高峰；徐伟；李培培；李清华；吴东 刊期： 2017年第07期
目的:研究人肝脏DnaJ-like蛋白(human liver DnaJ-like protein,HLJ1)在肝癌细胞中的表达,探讨HLJ1对肝癌细胞SK-Hep1生物学行为的影响.方法:首先,qRT-PCR和Western blot检测HLJ1在肝癌细胞中的表达情况.其次,过表达或干扰HLJ1后转染SK-Hep1细胞株,MTS和克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞早期凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化.结果:qRT-PCR和Westem blot结果显示HLJ1的mRNA水平和蛋白水平在3种肝癌细胞系中均呈低表达.MTS和克隆形成结果显示HLJ1能抑制肝癌细胞的增殖.流式细胞术结果显示HLJ1能促进细胞早期凋亡.划痕和Transwell实验显示,HLJ1能抑制肝癌细胞的迁移和侵袭.结论:HLJ1在肝癌细胞系中低表达,且能抑制SK-Hep1细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡.
作者：谭茜茜；汤华 刊期： 2017年第07期
目的:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)系统在SK-Hep1肝癌细胞系中构建AT富集作用域2(AT-rich interaction domain 2,ARID2)基因敲除模型,并初步观察ARID2敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法:设计并合成靶向ARID2的向导RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR表达载体上,转染HEK293T细胞包装慢病毒并筛选稳定细胞株,采用克隆形成、Transwell和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力.结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的LentiCRISPER-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ARID2敲除的细胞株筛选成功;ARID2基因敲除后,与亲本细胞系相比,其蛋白表达缺失;克隆形成实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)培养至10d时克隆形成数为(125.600±5.131)个,亲本细胞株克隆形成数为(69.000±5.567)个(t=12.962,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)培养至8d时克隆形成数为(94.000±8.737)个,亲本细胞株克隆形成数为(67.000±5.292)个(t=4.635,P=0.010),差异有统计学意义.Transwell结果示ARID2敲除细胞株(1#6)在24 h的迁移细胞数为(180.000±5.542)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(90.400±5.031)个(t=20.731,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)在24 h的迁移细胞数为(138.600±5.749)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(78.400±5.703)个(t=12.891,P=0.000),差异有统计学意义.划痕实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6) 16 h划痕愈合度为(88.000±0.011)％,亲本细胞组划痕愈合度为(52.500±0.047)％(t=12.490,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)16 h划痕愈合度为(71.900±0.020)％,亲本细胞组划痕愈合度为(55.200±0.024)％(t=9.190,P=0.001),差异有统计学意义.结论:ARID2敲除可明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,证实ARID2作为抑癌基因参与肝癌的发生和进程.ARID2敲除细胞模型为肝癌的深入研究提供新的手段.
作者：高庆祝；汪凯；梁利；张韵致；郑亚秋；唐霓 刊期： 2017年第07期
目的:构建人谷胱甘肽-S-转移酶Z1(glutathione S-transferase zeta 1,GSTZ1)重组腺病毒,并初步研究GSTZ1调控粘附连接信号通路(adhesion junction pathway)靶基因SMAD3、IGF1R等影响肝癌细胞的迁移能力.方法:PCR扩增GSTZ1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAdTrack-TO4,构建重组腺病毒质粒pAdTrack-GSTZ1,将重组质粒用Lipofectamine 2000转染至HEK293细胞中,包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdGSTZ1.首先,将SMMC-7721细胞设为3组:Mock组、AdGFP组和AdGSTZ1组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdGSTZ1组为感染腺病毒AdGSTZ1的实验组.然后,通过Transwell实验和MTS实验观察其对肝癌细胞迁移增殖能力的影响,进一步经qRT-PCR及Western blot技术研究GSTZ1通过调控粘附连接信号通路关键分子影响肝癌细胞的迁移.结果:成功构建了高滴度重组腺病毒AdGSTZ1,经Western blot鉴定GSTZ1在SMMC-7721细胞中的表达.Transwell实验结果表明,AdGSTZ1组与Mock组及AdGFP组相比,能够明显抑制人肝癌细胞的迁移能力;与Mock组相比,抑制率为(68.10±1.63)％(P=0.000),与AdGFP组相比,抑制率为(50.70±0.99)％ (P=0.000).MTS实验结果表明,AdGSTZ1组在72 h和96 h的吸光度值分别为(1.13±0.08)和(1.28±0.07),AdGFP组72 h和96 h的吸光度值分别为(1.28±0.03)和(1.45±0.03),AdGSTZ1组在96 h的吸光度值与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).另外qRT-PCR及Western blot结果显示,与Mock组和AdGFP组相比,AdGSTZ1感染细胞内粘附连接信号通路中靶基因SMAD3、IGF1R等的表达明显降低.qRT-PCR结果显示,AdGSTZ1组与AdGFP组相比,TGFBR1相对表达量为(0.58±0.13)(t=4.609,P=0.010),SMAD3相对表达量为(0.51±0.08) (t=8.030,P=0.000),ERBB2相对表达量为(0.46±0.09) (t=9.384,P=0.000),IGF1R相对表达量为(0.45±0.02) (t=14.480,P=0.000),FARP2相对表达量为(0.37±0.13) (t=7.082,P=0.028).Western blot表明,SMAD3组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.96士0.18),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.39±0.01) (P=0.001).IGF1R组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.97±0.05),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.44±0.02)(P=0.000).结论:GSTZ1通过调控粘附连接信号通路相关靶基因的表达抑制肝癌细胞的迁移.
作者：杨翼；李晶晶；梁利；高庆祝；郑亚秋；潘娥；汪凯；唐霓；单幼兰 刊期： 2017年第07期
目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛(Romidepsin,FK228)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导小鼠肝纤维化模型的治疗性作用,初步探讨FK228对减轻小鼠肝纤维化的机制.方法:将30只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、造模组和治疗组,每组10只;对照组腹腔注射生理盐水;造模组腹腔注射10％ CCl4溶液诱导肝纤维化,持续24周;治疗组在诱导纤维化第20周开始采用FK228进行治疗.检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量水平;对肝组织进行HE染色和天狼星红染色,观察假小叶形态结构;进行α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫组化染色,观察肝星状细胞活化程度及肝纤维化进程;Western blot半定量分析α-SMA蛋白在肝脏中的表达情况.结果:造模组血清ALT(67.270±11.109) IU/L,而治疗组小鼠的血清ALT(37.670±8.461) IU/L显著下降(P=0.019);肝组织切片HE染色和天狼星红染色显示造模组纤维化程度高、假小叶形成明显,而治疗组纤维化程度明显减弱;免疫组化染色和Western blot结果显示治疗组α-SMA水平相对于造模组明显降低(P=0.001).结论:研究结果首次证实FK228对降低小鼠肝纤维化程度有治疗性作用,而且其机制可能与抑制星状细胞活化和降低α-SMA蛋白表达水平有关.
作者：李梦辉；周恒宇；刘迪娜；蔡莹；龚建平；唐霓；黄爱龙；夏杰 刊期： 2017年第07期
目的:通过研究肝癌细胞激活白介素-17-蛋白酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活因子3(1L-17-janus protein tyrosine kinase 2/signal transducers and activators 3 of transcription,IL-17-JAK2/STAT3)信号通路调控p53表达并下调化疗的凋亡敏感性,以此探讨肝癌细胞化疗耐药的机制.方法:选取我院2012年5月至2015年1月收治的肝癌患者(病理学确诊)及健康体检者各30例,ELISA检测肝癌患者化疗前后及正常对照组血清中白介素-17 (interlrukin-17,IL-17)浓度;培养肝癌HepG2细胞,分别加入anti-IL-17R及IL-17后与奥沙利铂共培养,24 h后提取细胞蛋白,Western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白BAX,Bcl-2表达情况及JAK2/STAT3信号通路活化情况及p53的表达情况;AG490特异性阻断JAK2/STAT3信号通路后检测p53的表达情况.结果:经奥沙利铂化疗后肝癌患者血清中IL-17的浓度[(143.96±33.20) pg/mL]明显高于化疗前[(77.36±15.66) pg/mL]及正常对照组[(26.61±4.95) pg/mL] (P＜0.05);肝癌细胞加入anti-IL-17R与奥沙利铂共培养24 h后,BAX表达量明显升高、Bcl-2表达量降低,磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活因子(p-STAT3)表达量均明显降低,p53表达量升高;而加入IL-17的肝癌细胞,BAX表达量明显降低、Bcl-2表达量明显升高,p-JAK2、p-STAT3表达量均明显升高,p53表达量明显降低.AG490阻断JAK/STAT通路后,肝癌细胞p53的表达水平明显升高.结论:肝癌细胞化疗过程中通过IL-17激活JAK2/STAT3信号通路调控p53的表达进而下调肝癌细胞凋亡敏感性,由此导致肝癌的化疗抵抗.
作者：郭彬；郭佳培；李雷雷；吴景华 刊期： 2017年第07期
