目的建立原发性胆汁性肝硬化(PBC)特异性免疫学检测方法.方法在重组质粒表达的基础上,用亲和层析进一步纯化重组蛋白后,用酶免疫吸附法检测M2抗体.结果在PBC组11例患者中全部检出M2抗体,阳性率为100%,而非PBC组75例患者中无一检出M2抗体.本法与病理检查和临床诊断的相关性有非常显著意义(P<0.01).结论本法检测M2抗体有较好的敏感性及特异性,为PBC的早期发现和临床诊断提供了有力的工具.
作者：姜小华；仲人前；胡寅；范列英；王皓；朱烨；侯晓菁；孔宪涛 刊期： 2002年第02期
目的建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术.方法利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞,各置于0.2 ml簿壁反应管的裂解液中,合成针对抑癌基因P53第5～9外显子(e)的引物,运用15mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增P53基因第e5～9的1 900 bp片段及含第5,6外显子的580 bp片段.并用ABI-377测序仪测定其序列.结果运用稀释至0.01 ng的基因组DNA扩增1 900 bp片段,优化PCR的条件.分别从30个单个纤维母细胞扩增上述1 900 bp片段,10个获得1 900 bp片段,成功率为33%.扩增580 bp片段,则阳性率可达60%.序列分析证明确为人P53基因第5,6外显子序列.结论运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段,并测定其序列,作出基因诊断.
作者：刘敬忠；王立荣 刊期： 2002年第02期
目的建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法.方法将急性早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)分别经喜树碱(CAM)、紫外线诱导,及喜树碱和N-甲苯磺酰基-L-苯基丙氨酸氯甲基酮(TPCK)共同诱导后,用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V)进行标记,进行标记，经1%不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定,再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后,流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率,并与DNA链缺口标记法(TdT)和常规Annexin V法检测结果进行比较.结果细胞凋亡的周期特异性分析:膜联蛋白V/碘化丙啶法(PA法)和TdT法结果一致,CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期;CAM 和TPCK共同诱导试验显示,PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度,TdT法则不能有效检测;而常规Annexin V法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析.细胞凋亡率的检测:HL-60经CAM、紫外线、CAM与TPCK 三种方法诱导后,PA法检测凋亡率的结果(17.3%、34.7%、35.9%)与常规Annexin V法的检测结果(18.1%、35.6%、37.0%)一致(P>0.05),而TdT法(10.7%、19.5%、-)则明显偏低(P<0.01).结论 PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测,其稳定、可靠、灵敏度高.
作者：陶德定；冷彦；覃吉超；周晖；申漫里；余源；龚建平 刊期： 2002年第02期
目的探讨全自动免疫分析系统(VIDAS)快速定量检测D-二聚体(DD)在诊断肺栓塞中的临床价值.方法使用VIDAS DD测定法对可疑静脉血栓塞患者血浆中纤维蛋白降解产物D-二聚体进行检测,并对这些可疑肺栓塞患者进行3个月的随访,了解是否有肺栓塞或深部静脉栓塞的症状.结果共有104例患者参加检测,32例患者(30.8%)的D-二聚体检测值<494 ng/ml,72例患者血浆中的D-二聚体检测值>494 ng/ml, 其中有16例患者通过肺通气-灌注扫描(V/Q)证实为肺栓塞.VIDAS DD法的敏感性为100%, 阴性预期值为100%.结论 VIDAS DD法可作为排除诊断肺栓塞的首选筛选试验,可在临床诊断中推广应用.
作者：胡云建；陶凤荣；王厚东；赵丽；朱震宏；张秀珍 刊期： 2002年第02期
目的建立简便、灵敏、试剂稳定性好的分光光度法测定血清镁.方法在表面活性剂TritonX-100存在下,用国产常用试剂偶氮氯膦Ⅰ作显色剂,EGTA掩蔽钙,在pH 9.8三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲体系中分光光度法测定血清镁.结果该方法显色络合物大吸收波长为582 nm,线性范围达3.0 mmol/L,表观摩尔吸光数为1.98×104L/(mol*cm).回收率为99.4%～102.2%,批内变异系数(CV)和批间变异系数(CV)分别为3.2%与3.8%,与甲基百里酚蓝(MTB)光度法比较具有良好的相关性,Y＝0.989X+0.011,r=0.981 4,P>0.05,67名健康人血清镁含量为0.70～1.15 mmol/L(±2s).结论该法具有快速、简便、灵敏可靠等优点,适于血清镁的手工测定和自动分析.
作者：曹建明；姜红鹰；陈晓东；周铁丽；陆永绥 刊期： 2002年第02期
目的检测假肥大型肌营养不良(DMD/BMD)基因缺失及提高缺失检出率. 方法采用26对引物和多重聚合酶链反应(mPCR)及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳技术,对74例DMD/BMD患者进行基因检测分析.结果共检出42例基因缺失病人,缺失率为56.7%,主要分布于中央缺失热区和5′端缺失热区,其中以48号和49号外显子缺失为多见, 这两种技术结合应用,可检出常规方法未能检出的缺失.结论基因缺失主要分布于44～52号外显子和1～19号外显子两个缺失热区.采用26对引物mPCR技术及PAGE电泳技术可有效提高基因缺失检出率.
作者：盛文利；陈江瑛；朱良付；杨志华；侯清华 刊期： 2002年第02期
目的建立一种新的简便易行的AmpC酶的表型筛选方法并对其进行评价.方法采用表型筛选和三维试验,对144株阴沟肠杆菌进行AmpC酶检测,对检测结果进行比较,并检测部分菌株的等电点和ampD基因.结果 144株阴沟肠杆菌表型筛选结果显示高产AmpC酶的菌株共有35株,占24.31%(35/144).表型筛选与三维试验相比总符合率为89.58%(129/144).2种方法检测结果相反的有5株菌,其中4株菌的等电点条带均不能被氯唑西林抑制,另1株菌株等电点检测有5条带(其中2条被氯唑西林抑制).3株ampD基因阳性菌株测序结果显示均存在71,72,75位氨基酸发生改变,其中有2株还存在101位氨基酸改变.结论表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简便,易于在临床实验室中推广应用.
作者：周志慧；李兰娟；俞云松；裘云庆；马亦林 刊期： 2002年第02期
目的研究血液样品采集过程中温度、溶血和抗凝剂对嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)水平的影响.方法收集10名健康志愿受试者静脉血标本,在6种不同条件(0℃,22℃,37℃,溶血,肝素钠,EDTA)下处理后,用固相双位点酶放大化学发光法检测ECP水平,探讨上述因素对ECP测定结果的影响.结果 0℃组和22℃组血清ECP水平分别为(2.3±0.95) mg/L和(2.28±0.97) mg/L,差异无显著意义(P>0.05);37摄氏度组血清ECP水平为(18.94±10.55) mg/L,明显高于前两组(P均<0.01);溶血组ECP水平为(24.58±10.75) mg/L,是所有各组中高的;以肝素钠和EDTA抗凝的血浆ECP水平分别为(2.16±0.94) mg/L和(3.84±1.51) mg/L,与血清对照组的差异无显著意义(P>0.05).结论温度、溶血对ECP水平有不同程度的影响;抗凝剂对ECP水平影响不显著,血液凝结过程非收集ECP血标本所必需.
作者：张志斌；朱锦英；徐人卫 刊期： 2002年第02期
目的探讨重庆地区结核病分子流行病学的发展趋势.方法建立随机扩增多态性DNA聚丙酰胺凝胶电泳(RAPD-PAGE)指纹分型法;采用1对随机引物对重庆地区287例肺结核患者416株结核分枝杆菌进行DNA指纹分型.结果 416株分离菌株其DNA指纹可分为7种类型,以Ⅰ型(35.5%)、Ⅱ型(29.3%)和Ⅲ型(22.6%)为主,其中20～39岁和40～49岁年龄组的初治患者在3型中分别占58.0%和46.2%.在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中初治患者分别占52.0%、46.4%和58.5%,至少耐利福平和异烟肼(MDR)的初治患者又分别占的11.3%、35.9% 和24.3% ,至少耐利福平和其他药物的多重耐药株在3型中占21.7%(初治).结论 RAPD - PAGE指纹分型法,是一种简便、特异、敏感、重复性好的菌株分型方法,可用于结核病分子流行学的研究;以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型为主的结核分枝杆菌正在重庆及周边地区的人群中传播; MDR株和含利福平的其他多种耐药株的传播占有较高频率.
作者：钟敏；温博海；陈炜；陈荣；钟明；娄乐山；王安容；蹇锐 刊期： 2002年第02期
基因诊断是以检测感染者体内病毒核酸的有无,或含量多少来进行病原学诊断的一种方法,它可用在各种感染性疾病的诊断中,尤其在病毒性肝炎的诊断方面得到广泛应用.病毒性肝炎基因诊断包括病毒基因种类、含量、基因分型、亚型和变异及准种等的诊断.由于甲型肝炎和戊型肝炎无慢性化,且有较好的血清学诊断指标,故一般不需进行基因诊断.至于庚型肝炎病毒和经输血感染的病毒(TTV),因至今尚未明确其对人类的致病性,这两种病的基因诊断在临床上也较少应用,目前主要用于基础和实验研究.为此,仅对基因诊断在慢性乙型肝炎和丙型肝炎中的应用加以切磋.
作者：陶其敏 刊期： 2002年第02期
迄今为止,已经明确的人单基因遗传病达4 000余种.虽然其绝大多数的发病率很低,但总患病数非常可观.据全球调查资料显示,3%～4%新生儿出生时就有严重先天缺陷.在西方发达国家,遗传病和先天性疾病正替代传染病,与心血管疾病、癌症一样,成为严重危害人类健康和致死率高的3种疾病.在美国,遗传病患儿占住院总数的30%.我国近期进行的出生缺陷调查表明,各种先天性缺陷及遗传病约占13%.目前,人类对这些先天性疾病和遗传病基本上还没有有效的治疗方法和手段.因此,对患有这类疾病的高危家系进行遗传咨询,对高危胎儿进行孕期筛查和产前诊断,防止新的病儿出生,阻断有害基因逐代下传,对于提高人口素质,落实优生优育的基本国策具有重要意义.随着分子生物学技术的飞速发展,人类已能对许多遗传病及部分先天性疾病进行基因诊断、携带者检查和产前诊断.
作者：刘敬忠 刊期： 2002年第02期
研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)细菌的检测及耐药性,对指导临床用药方面具有重要的意义.我们重点比较了3种ESBLs的检测方法,分析了37株产ESBLs细菌的耐药性,报告如下.一、材料和方法1.菌株:系 2000年1月～2001年6月,从门诊和住院患者的尿、痰、脓等标本中分离.大肠埃希菌232株;肺炎克雷伯菌 58株,产酸克雷伯菌38株;阴沟肠杆菌 21株,产气肠杆菌 12株,板崎肠杆菌和聚团肠杆菌各1株.质控菌株:大肠埃希菌 ATCC25922(阴性对照),肺炎克雷伯菌 GY2000(阳性对照),均由杭州天和微生物试剂有限公司提供.
作者：赵建平；周秀岚；方君；刘瑞平；宿俊彪 刊期： 2002年第02期
根治幽门螺杆菌(H.pylori)感染已成为治疗慢性活动性胃炎、消化性溃疡的重要组成部分.近来发现H.pylori感染患者粪便存在H.pylori特异性抗原[1,2],测定粪便H.pylori抗原可能是诊断H.pylori感染的理想方法之一[3].本研究通过自行建立的酶免疫法对H.pylori感染患者进行粪便H.pylori抗原测定,报道如下.
作者：林洁；谢鑫友；朱永良；赵锋 刊期： 2002年第02期
免疫聚合酶链反应(免疫PCR)是近年出现的全新的标记免疫分析技术.它以一段DNA作为标记物来代替酶等常规标记物,标记在抗体或抗原上,在抗原抗体反应完成后,用PCR技术对标记的DNA进行扩增将信号放大,然后,根据PCR产物的有无及量的多少测定待测抗原或抗体.本研究以碳化二亚胺为连接分子构建单链DNA标记的免疫探针,并将其用于免疫PCR中,现将结果报道如下:
作者：邬国军；陈淑贞；陈利玉；姚孟辉；戴橄；罗敏华 刊期： 2002年第02期
随机扩增多态性DNA(RAPD)是一种新兴的基因分型方法,可对细菌等病原微生物进行基因分型并广泛应用于分子微生物学的追踪调查及医院感染的分析[1].该方法的大特点是可对模板序列未知,而随机引物可以是任意10个bp的单链寡聚核苷酸片段.本研究以临床常见的8种细菌为对象,各筛选200条随机引物,并应用反应曲面设计(RSD)方案[2]对反应体系中关键反应成分(模板、引物及镁离子)浓度进行了优化,旨在为相关细菌的RAPD反应体系标准化及分型提供科学依据.
作者：叶明亮；吴海寰；袁著忻 刊期： 2002年第02期
非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者中冠心病(CHD)的发生率比非糖尿病人高2～4倍,这种易感性不能用单纯糖尿病本身的病理改变来解释.近期研究表明,血管紧张素转换酶(ACE)基因第16内含子插入(I)或缺失(D)多态性,不仅在NIDDM发展中起作用,而且也与NIDDM并发冠心病相关[1].胰岛素抵抗(ISR)对冠心病发病也起重要作用,高胰岛素血症与冠心病呈负相关.但在NIDDM病人中ISR与冠心病发病的相关性尚有争议[2].为此,我们在一组NIDDM合并冠心病患者中进行ACE I/D多态性和ISR研究,旨在探讨三者之间的相关性,并为冠心病的早期预防和治疗提供依据.
作者：管立学；王敬先；王景明；陈亮；朱国明；王瑞丽 刊期： 2002年第02期
本研究建立了一种无需聚合酶链反应(PCR)扩增将一种新的裂解液与DNA探针、化学发光自显影优化组合成一个整体,,具备高敏感度和高特异性的检测结核分枝杆菌的新方法.该法操作简便、经济,适用于常规检测.报告如下.一、材料和方法1.仪器:TGL-16G型台式离心机,AG9600型PCR仪和DYY34型电泳仪.
作者：杨树德；杨华卫；高振翔 刊期： 2002年第02期
DNA是生命活动中重要的遗传物质,易受各种因素的作用而出现损伤,导致DNA完整性的改变,引起细胞及机体损害.对DNA损伤进行修复则是机体抵御各种损害的基础.由于DNA损伤和修复的直接检测过于复杂和困难,一般需采用间接的灵敏可行的生物标记物法.生物标记物是指生物系统内直接或间接与环境暴露相关的、可测量的生化、生理、细胞、免疫或分子变化,以及可测量的体液或房室中的代谢物水平[1].DNA损伤修复的生物标记物可主要分为3种:特异性酶和代谢产物、特异性修复基因、DNA加合物[1,2].根据不同的生物标记物,可采用不同的检测方法.
作者：吕斌；周宜开 刊期： 2002年第02期
在血液免疫检测工作中,保证检测结果的可靠性,通常采用室内质量控制和参与室间质量评价的方法.酶联免疫吸附法室内质量控制,可选择L-J质控图、免疫即刻法两种方法.在实际工作中,我们运用Excel2000计算机软件制作L-J质控图,对血液乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗体、艾滋病抗体检测进行质量控制,取得了良好的效果.现报道如下.
作者：陈家宝；李斌；陶静；周波 刊期： 2002年第02期
目前对性传播疾病主要病原体淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)的病原检测,主要采用培养法和常规PCR技术.本试验采用Taqman技术对临床标本中NG,CT及UU进行定性检测,并与培养法和常规PCR方法比较,评价Taqman技术在性病病原体定性检测中的临床应用价值.
作者：杨元；丁显平；邓少丽；张思仲 刊期： 2002年第02期
RAPD(随机扩增多态DNA)分析细菌基因组结构的突出优势是无须知道待测细菌的遗传背景,技术成熟简便,从扩增产物可以比较不同属、种、型及株系间的DNA指纹特征.1998年6～10月,呼和浩特地区发生小儿急性肠炎,为进一步认识腹泻的病原菌,对保存菌株进行了RAPD分析.一、材料与方法12株福氏志贺菌2a型、2株福氏志贺菌6型和5株奇异变形杆菌进行细菌基因组DNA的RAPD分析.随机引物选择CyberSyn生物工程公司的CY10系列套式引物,PCR扩增在PE 480型上进行.收集生长对数期菌体,0.9% NS洗涤2次,15 000 r/min离心5 min,用EB平板测定DNA含量,稀释至4 ng/ml.25 μl常规反应体系,40个循环,退火温度根据引物的不同选择从37℃到40℃.1.5%的琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下拍照记录.
作者：鲁辛辛；周凌云；梁春梅；梁建林；朱华 刊期： 2002年第02期
常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定,常规方法通常需要24 h左右才能获得较确切的结果,会延迟正确的诊断和治疗,因此对于临床而言,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的.生物芯片是一种新兴的高通用技术,在面积较小的载体,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1].本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨.
作者：宋亚军；王津；翟俊辉；郭兆彪；张敏丽；杨瑞馥 刊期： 2002年第02期
腹腔及腹腔内脏器的厌氧菌,以脆弱类杆菌和消化链球菌常见,但多为单一菌属,有时合并需氧菌混合感染,2种不同菌属的厌氧菌同时感染致肝脓肿较为少见,现报告如下.患者,女,46岁,因右上腹部阵发性疼痛伴油腻感、食欲差20余天,于2001年4月6日入院.血常规检查:WBC 9.3×109/L,N 0.87,L 0.13;RBC 2.4×1012/L,Hb 50 g/L;胸腹部B超提示:肝右叶脓肿;右侧胸腔积液.入院后第二天行肝穿刺做厌氧菌及需氧菌培养,分离出吉氏拟杆菌及微小消化链球菌.先后用甲硝唑、奈替米星、氧氟杀星给予治疗,3周后患者好转出院.
作者：赵立红；王玉珍；刘明；王娜 刊期： 2002年第02期
患儿男,5岁.于1997年因关节疼痛伴全身淋巴结肿大,病理诊断为恶性淋巴瘤.2000年8月,因关节疼痛伴发热,作淋巴结活检为反应性增生,骨髓涂片检查(BM)提示:见异常淋巴细胞.患儿于2001年2月到本院门诊就诊.膝关节片显示:右胫骨上段溶骨性破坏.BM提示:增生性骨髓象.血象:WBC 4.1×109/L,HB 107 g/L,PLT 219×109/L.生化:血清球蛋白58 g/L,经琼脂糖凝胶蛋白电泳(法国HYDRASYS Sebia)可见γ 34.6%,并且呈现单株峰.继续进行免疫固定电泳,出现双M蛋白: IgM伴λ轻链型和IgG伴λ轻链型.免疫球蛋白定量(Behring BN100 散射比浊法) IgG 8.7 g/L、IgA 1.2 g/L、IgM 37.7 g/L、κ 1.1 g/L、λ 9.2 g/L.显示M蛋白所属Ig部分显著增高,非M蛋白所属Ig部分并无显著降低,再经流式细胞仪作白细胞分化抗原(CD)分型,结果为CD19(-)、CD20(-),进一步提示了此阶段B细胞已成熟至浆细胞.
作者：汪萍；沈霞 刊期： 2002年第02期
我室从一患者血液中分离出1株格林蒙勒米诺菌(L*grimontii),现报道如下.患儿3岁,汉族,因7 d前发热,体温37.9～39.6℃,在当地个体诊所治疗,曾用青霉素、庆大霉素等治疗病情无明显好转,2001年6月15日到我院就诊.体温38.3℃,血象:WBC 11.4×109/L、N 0.75、 L 0.25.6月15日和6月17日两次取静脉血培养,细菌学鉴定均为格林蒙勒米诺菌,使用阿米卡星治疗,5 d后痊愈.
作者：张红光 刊期： 2002年第02期
2001年3月,我们从一胆石症患者的胆汁中分离出1株酪黄肠球菌(E.casseliflavus),报告如下.患者,男,65岁,汉族,因急腹症入院.查体,WBC 1.8×109/L,N 0.8,L 0.2,B超提示为胆石症.行手术治疗,术中无菌收取胆汁3 ml,注入肉汤中(OXID)增菌,同时接种血平板和麦康凯平板.置35℃孵育24 h后,肉汤增菌瓶明显混浊,遂移种于血平板和麦康凯平板,35℃ 24 h孵育,有湿润、圆形、凸起,直径为0.7 mm左右的菌落生长,α溶血、产生黄色素.涂片染色为革兰阳性链球菌.
作者：魏莲花；张俭；邹凤梅；刘刚；张新芳 刊期： 2002年第02期
作者：北京市检验学会继续教育委员会 刊期： 2002年第02期
作者：毛家都 刊期： 2002年第02期
聚合酶链反应(PCR)现已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测.由于PCR是对原始待测模板核酸的一个扩增过程,任何干扰PCR指数扩增的因素都会影响扩增产物的量,使得PCR扩增终产物的数量与原始模板数量之间没有一个固定的比例关系,通过检测扩增终产物很难对原始模板进行准确定量.近年来,研究人员为克服上述影响因素,研究了各种相对准确的定量PCR方法[1-3].
作者：李金明 刊期： 2002年第02期
诊断性试验在检验医学文献中是比较多见的科研设计类型.根据临床流行病学对诊断性试验的评价原则,我们仅就<中华检验医学杂志>近 5年刊出的诊断性试验类论文中,关于诊断标准方面的问题进行了分析,汇报如下.1996～2000年中,<中华检验医学杂志>共发表有关诊断性试验的正式论著111篇,占全部论著的32.9%(细菌耐药性的有关论文未记入).这类论文绝大部分为各医院检验科或临床实验室新的检测方法的研究和应用性文章.
作者：臧焰；秦晓光 刊期： 2002年第02期
