2001年“炭疽邮件”事件后,美国投入了大量经费用于提高国家生物防御能力.生物防御经费投入的分布及年度变化在一定程度上可以反映国家生物防御的整体规划.本文基于美国生物防御经费投入情况的一些数据资料,分析了2001财年后美国生物防御经费的分布与年度变化,主要包括卫生与公众服务部、国土安全部、国防部、农业部、环境保护局等联邦行政部门,疾病预防控制中心、国立卫生研究院、食品和药物管理局、国防高级研究计划局、国防威胁降低局等应对机构,以及国家战略储备、生物盾牌计划、化学和生物防御项目、国家灾难医疗系统、生物监测计划等生物防御计划.从本文的分析可以看出,美国生物防御经费投入具有几个特点:生物防御经费大幅度增加、建立新的机构加强统筹管理、企业获得大量生物防御经费、生物防御与传染病应对相结合、重视基础设施建设与应对产品研发.
作者：田德桥；朱联辉；王玉民；郑涛 刊期： 2013年第02期
目的 获得人类B细胞激活因子(B cell activating factor,BAFF)胞外段融合蛋白并对其生物活性进行分析.方法 构建pET32a/BAFF的原核表达载体,进行原核表达、亲和纯化,并通过SDS-PAGE、Western印迹进行鉴定.利用非还原电泳后的Western印迹与HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式.ELISA、Octet RED系统检测rhBAFF结合受体TACI的能力并做出实时动力学分析.MTS法检测rhBAFF促进B细胞增殖的活性.结果 融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达,经Ni-NTA纯化获得的目的蛋白纯度超过90％；SDS-PAGE、Western 印迹显示在相对分子质量为36×103位置有目的蛋白的特异条带；非还原电泳及HPLC分析表明,重组蛋白以三聚体的形式存在；ELISA、Octet RED系统同时证实BAFF可与受体TACI结合；增殖实验证实重组蛋白具有生物学活性.结论 成功获得纯度超过90％的rhBAFF可溶蛋白,实验证实为具有生物学活性的三聚体结构.
作者：王茹；林周；魏化伟；彭辉；侯春梅；冯健男；沈倍奋；黎燕 刊期： 2013年第02期
目的 建立定量测定人体尿液中芥子气生物标志物硫二甘醇(TDG)的同位素稀释气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS).方法 样品中的TDG,经过HLB柱固相萃取(SPE),五氟苯甲酰氯(PFBC)衍生化后,采用GC-MS/MS选择反应监测模式分析,以氘代硫二甘醇(Ds-TDG)为内标进行定量测定.结果 方法在1～150 μg/L范围内线型关系良好(r =0.9997),低检出限和定量限分别为0.1、0.5 μg/L,回收率为99.5％～108.8％,相对标准偏差小于10％.结论 所建方法专属性强、灵敏度高.该法曾在国际禁止化学武器组织(OPCW)举办的两次生物医学样品分析国际实验室间的盲样比对测试中,取得了良好的定性定量结果.
作者：冯建林；白海红；林缨；陈佳；刘勤；李春正；唐吉军；吴弼东；谢剑炜 刊期： 2013年第02期
目的 构建炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)A16R株lysA基因缺失突变株,为后续的定量蛋白质组学研究奠定基础.方法 以炭疽杆菌活疫苗A16R株lysA基因为目的缺失基因,利用软件设计上下游同源臂以及抗性基因的引物,用同源重组酶将3个片段连入质粒中,构建重组质粒,并将重组质粒导入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,筛选炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,对其进行验证.后绘制缺失突变株和野生株生长曲线并进行生理生化分析.结果 成功构建了重组质粒,经同源重组后获得lysA基因缺失突变株.鉴定表明目的基因已经丢失.结论 成功获得炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,为定量蛋白质组学研究奠定了基础,也为炭疽杆菌重要基因功能的研究建立了良好的技术平台.
作者：高飞；王东澍；冯尔玲；朱力；王恒樑；廖祥儒；刘先凯 刊期： 2013年第02期
目的 利用生物发光技术,在细胞体系中实时监测caspase-3蛋白酶的活性,为细胞凋亡研究以及进行抗凋亡药物的筛查、评价提供技术支持.方法 利用萤火虫荧光素酶作为细胞内凋亡发生的报告基因,构建载体,转染细胞,药物诱导细胞凋亡,利用活体荧光成像和Western印迹检测caspase-3蛋白酶的活性.结果 成功建立了一种实时、动态、方便简单的检测caspase-3蛋白酶活性的细胞模型.结论 该细胞模型为细胞水平上进行细胞凋亡的研究以及抗凋亡药物的筛查提供了技术平台.
作者：段相国；付秋霞；阎少多；王礼翠；张玉华；周勇；詹林盛；丁剑冰 刊期： 2013年第02期
目的 构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv).方法 利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段.将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库.以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体.scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性.采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值).检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率.结果 构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体.原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40％～45％.包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1L培养物经纯化后可获得4 ～6 mg scFv蛋白.亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L.3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5％,58.6％和51.5％.结论 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础.
作者：王晗；于蕊；张晓鹏；任军；谢娜；樊红艳；张金龙；房婷；于长明；陈薇 刊期： 2013年第02期
目的 对丁茄全草60％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行化学成分研究.方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备薄层和重结晶等方法进行分离纯化,通过理化性质和波谱技术对单体化合物进行结构鉴定.结果 分离鉴定了12个苯丙素类化合物,分别鉴定为N-反式阿魏酰酪胺(1),N-对反式香豆酰酪胺(2),丁香树脂酚(3),松柏醇(4),楝叶吴萸素B(5),erythro-1,2-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,3-propanediol(6),蛇菰宁(7),simulanol(8),山橘脂酸(9),threo-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-{ 4-[(E)-3-hydroxy-1-propenyl]-2-methoxyphenoxy}-1,3-propanediol (10),tribulusamide A(11),咖啡酸(12).结论 化合物1～12为首次从该植物中分离得到,化合物5～10为首次从该属植物中分离得到.
作者：李杰辉；尹海龙；董俊兴 刊期： 2013年第02期
目的 探讨微波辐射对大鼠空间学习记忆功能、海马组织结构、苔藓纤维出芽及其与突触素Ⅰ表达的影响.方法 实验选用雄性Wistar大鼠,随机分为假辐射组及辐射组,采用30 mW/cm2微波辐射Wistar大鼠,于辐射后6h、1d、2d、3d、4d、7d、14 d以Morris水迷宫对辐照后大鼠空间学习记忆功能改变进行观察；于辐射后6h、1d、3d、7d、14 d、28 d采用HE染色和免疫荧光对大鼠海马组织结构和突触素Ⅰ表达进行观察；于辐射后7d、14 d、28 d进行Timm染色,对学习记忆后大鼠海马苔藓纤维出芽情况进行观察.结果 30 mW/cm2微波辐射可引起大鼠海马齿状回颗粒细胞和CA3区锥体细胞损伤,锥体细胞层和颗粒细胞层部分锥体细胞及颗粒细胞固缩深染,部分胶质细胞固缩、深染,血管周围间隙增宽,辐照后6h～7d,30 mW/cm2组损伤程度呈逐渐加重趋势,辐射后14 d,30m W/cm2组损伤呈恢复趋势；辐射后6h、1d、2d、7d,30 mW/cm2组Morris水迷宫平均逃避潜伏期,较假辐射组明显延长(P＜0.01或P＜0.05)；Timm染色结果显示,辐射后即水迷宫后7d、14 d和28 d,30 mW/cm2组海马苔藓纤维出芽,与假辐射组比较,苔藓纤维出芽明显减少(P＜0.01或P＜0.05).免疫荧光结果显示,微波辐射后3d,海马CA3区及齿状回突触素Ⅰ表达明显减少,且其表达减少的部位和时间与海马神经元损伤以及苔藓纤维出芽受抑制的部位和时间一致.结论 微波辐射可能通过抑制海马突触素Ⅰ的表达,导致突触结构损伤(表现为苔藓纤维出芽生长抑制),终导致学习和记忆能力下降.
作者：乔思默；胡向军；王丽峰；彭瑞云；高亚兵；王水明；赵黎；徐新萍；董霁；常公民；苏镇涛 刊期： 2013年第02期
目的 建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法.方法 将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(△opaR)中表达水平的差异.结果 成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白；Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符.结论 成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究.
作者：闫小娟；张义全；王丽；刘梦颖；杨世亚；杨瑞馥；周冬生；邱景富 刊期： 2013年第02期
目的 构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子.方法 在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入Pac Ⅰ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep.同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(R.luc)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.hc.将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和R.luc活性.结果与结论 获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致.将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,R.luc的活性随时间延长而增强.本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础.
作者：张富军；李晓峰；曹飞；赵慧；邓永强；朱舜亚；姜涛；秦鄂德；秦成峰 刊期： 2013年第02期
目的 构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性.方法 从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序；脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响.结果 构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低.结论 构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低.
作者：汪莹；王文军；魏从文；郑子瑞；张艳红；张部昌；钟辉 刊期： 2013年第02期
目的 研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价.方法 根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片.设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价.结果与结论 芯片杂交结果与理论预期结果一致.本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台.
作者：刘梦颖；张义全；王丽；闫小娟；杨世亚；周冬生；杨瑞馥；邱景富 刊期： 2013年第02期
非致命武器作为现代武器装备的重要组成部分,其应用和发展正逐步改变战争的作战方式和作战原则.随着生物科技的迅猛发展,军事对抗逐步进入生物超微领域,这也为非致命武器发展带来新的机遇和挑战,其设计思想和攻击原理必将随着微观操控技术的成熟发生新的变化.为赢得更加贴合未来战场要求的非致命武器发展先机,我们需要瞄准军事生物科技发展前沿,准确把握未来非致命武器“生物化”发展方向,主动创新和变革,这具有重要的战略和现实意义.
作者：霍焜；郭继卫 刊期： 2013年第02期
目的 为了研究肝细胞癌的发病机制,探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在肝细胞癌组织中的表达及意义,以及CCRK与乙肝病毒X蛋白(HBx)之间的关系.方法 RT-PCR法和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测CCRK和HBx在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达情况.结果 肝癌组织中CCRK mRNA及蛋白水平均明显高于癌旁肝组织,差异具有统计学意义(P＜0.05)；CCRK的表达与肝癌患者的性别、年龄,HBsAg,肿瘤大小均无关,而与临床分期有关；CCRK与HBx没有相关性.结论 CCRK在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织,对肝细胞癌的发生发展具有促进作用,但是与HBx没有相关性.
作者：吴武佳；陈李影慧；宋晨源；秦东春 刊期： 2013年第02期
研究发现,在细菌纲和古细菌纲中发现的规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)构建了一种特殊的防御系统,能够有效地抵抗噬菌体和外界各种基因元件对其造成的干扰.CRISPR因其在结构上的特殊性以及功能上的特异性正逐渐成为细菌研究领域的热点.本文综述了近 年来有关CRISPR系统的作用机制、分类、结构与相关功能的研究进展.
作者：杨超杰；邱少富；宋宏彬 刊期： 2013年第02期
学校停课是一种重要的流感疫情非药物防控措施,在历次流感大流行中被世界各国广泛实施.实践和仿真结果均表明,实施该措施的公共健康收益受到学校停课时机、停课时间长短、停课方式等诸多可选因素影响,若措施实施不当,对疫情发展可能并不会产生有利影响,如何更有效地实施该措施控制疫情发展是决策者要慎重考虑的问题.近几年来大量研究指出实施该措施会造成巨大的经济损失,使得在流感疫情中实施该措施饱受争议.本文综述近几年来相关研究成果,总结如何实施学校停课措施才能更好地控制流行病疫情,为国内控制疫情制定决策提供参考.
作者：许晴；祖正虎；张文斗；徐致靖；郑涛 刊期： 2013年第02期
生物恐怖视角下天花传播的应急防控需要科学的应对策略.本文首先介绍天花应对策略计算实验的一般过程,然后从实验环境、计算模型及干预策略3个方面总结当前的研究及取得的进展,并就天花应对策略模拟存在的问题及进一步研究方向进行讨论.
作者：祖正虎；许晴；张文斗；徐致靖；黄培堂；郑涛 刊期： 2013年第02期
本文回顾并评述了近几年来美军在药品经费控制、用药安全管理、药学服务质量改善方面进行的创新性改革及其效果,并提出对我军药品保障管理的启示.
作者：赵晓宇；刁天喜 刊期： 2013年第02期
