以DL 2氨基△2噻唑啉-4-羧酸(DL-2-amino-△2-thiazoline-4-carboxylic acid,DL-ATC)作为分离平板中的唯一氮源,从土样中筛选可将DL-ATC生物转化为L-半胱氨酸的微生物菌株,得到5株转化菌株GJx5、GJx7、TJ4、TJ6和TJ7,其中GJx7菌株的转化能力较高.当DL-ATC浓度为1%时,经微生物转化2 h,反应液中L-半胱氨酸含量可达68.3μg/ml.该菌株传代性能稳定,连续传8代后相对转化活力为95.4%.以GJx7菌株为试验菌株的产酶条件试验表明,较适培养基初始pH值为7.0,摇瓶装量为250 ml锥形瓶装50 ml培养基,产酶较佳的碳源和氮源分别为麦芽糖和酵母膏.在较佳产酶条件下,当DL-ATC浓度为1%时,转化液中L-半胱氨酸含量可达320.2μg/ml,较优化前提高4.7倍.
作者： 刊期： 2005年第05期
研究出一种经济、高效、简便且容易放大的提取、分离和纯化辅酶NADH的工艺条件并进行优化.使用化学渗透法处理啤酒酵母细胞Saccharomyces cerevisiae粗提NADH,多级超滤及亲和超滤法进一步分离和纯化NADH.选用酵母醇脱氢酶(YADH)作为亲和配体,在pH值8.0,离子强度为0.1 mol/L时,用YADH和细胞渗透液中的NADH亲和.使用MWCO=30 000的滤膜超滤.结果:NADH YADH复合物留在截留液中,从而与其它小分子物质分离.改变pH值和离子强度,NADH-YADH复合物解离,通过MWCO=1 000的滤膜超滤,NADH分离到滤过液中,YADH作为截留而回收,回收率达93%,活性损失15%.试验表明使用化学渗透法处理酵母细胞,用亲和超滤纯化可获得高的NADH产率.和以前的方法相比具有简单、经济、省时、高效等特点,且容易放大.
作者： 刊期： 2005年第05期
从海洋真菌YC中提取的真菌多糖YCP,选择9,3,1 mg/kg的不同剂量,分别联合60co放疗和Cy化疗正常小鼠和Heps荷瘤鼠,观察药物对放、化疗的减毒作用.以荷瘤小鼠观察药物对小鼠的扶正作用.结果:YCP(9,3,1 mg/kg)剂量组可显著地对抗由大剂量Cy造成的正常小鼠外周血白细胞,骨髓有核细胞数和胸腺指数的下降(P＜0.01,P＜0.05).YCP(9,3 mg/kg)剂量组可显著地抑制由大剂量Cy和60Co照射造成的Heps荷瘤小鼠外周血白细胞,骨髓有核细胞数和脾脏指数和胸腺指数的下降(P＜0.01,P＜0.05).YCP(9,3 mg/kg)可显著提高S180荷瘤小鼠的吞噬指数k和血清半数溶血值(P＜0.01,P＜0.05).结论YCP可明显对抗由60Co照射,大剂量化疗药Cy引起的正常和荷瘤小鼠的血液和骨髓抑制毒性.YCP可显著提高S180荷瘤小鼠免疫功能.
作者： 刊期： 2005年第05期
研究Streptomyces griseus ATCC 13273对黄酮类化合物柚皮苷,橙皮苷,黄芩苷及木犀草素的生物转化.用标准马铃薯培养基培养的S.griseus中加入底物后继续培养4 d,发酵液经乙酸乙酯萃取后采用硅胶柱层析分离纯化,产物的结构根据光谱数据予以鉴定.有6个转化产物得到分离鉴定,分别是柚皮素-7-O-葡萄糖苷,柚皮素,橙皮素,黄芩素、黄芩素-6-甲氧醚和柯伊利素.结果表明此转化过程中涉及到两类反应即糖苷水解和甲基化反应,S.griseus产生的L-鼠李糖苷酶对底物有特异选择性,β-D-葡萄糖苷酶的选择性不强,甲基转移酶仅对黄酮类化合物的特异位点进行甲基化.该研究首次报道S.griseus对黄酮L-鼠李糖苷键和β-D-葡萄糖苷键的水解及对黄酮类化合物特异位点的甲基化.
作者： 刊期： 2005年第05期
为获得大量具有生物学活性的重组人内皮抑素(Endostatin),在毕赤酵母中进行组成型表达的研究.将由毕赤酵母偏爱密码子组成的Endostatin cDNA插入组成型载体pGAPZαA中,构建表达载体pGAPZαA-ENDO,并转化到毕赤酵母X-33中.重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型表达Endostatin蛋白.重组人Endostatin产量达到102mg/L.Western blot显示:表达蛋白能与兔抗Endostatin的多克隆抗体特异性结合.纯化后的重组Endostatin具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞增殖的活性.利用毕赤酵母组成型表达系统能获得大量具有生物活性的Endostatin蛋白.
作者： 刊期： 2005年第05期
为了探讨壳聚糖-DNA复合物的形成机理,通过向Na2SO4、DNA和溴化乙啶(EB)的混合溶液中分别加入不同体积的壳聚糖溶液,运用荧光分光光度计检测溶液荧光值的变化,发现随着壳聚糖浓度的增加,荧光值下降,说明壳聚糖和EB与DNA之间的结合存在竞争性;通过测定Na2 SO4离子浓度对壳聚糖-EB-DNA体系的影响发现,随着离子浓度的增加,壳聚糖-EB-DNA三者形成的平衡体系整体荧光强度不断减弱,这说明,壳聚糖是以静电与DNA相互作用的.
作者： 刊期： 2005年第05期
探讨白杨素和它的四乙基二磷酸酯对人宫颈癌细胞的增殖、分化和核基质蛋白的影响.用终浓度为10μmol/L的白杨素(chrysin,CR)和四乙基白杨素二磷酸酯(tetraethyl bis-phosphoric ester of chrysin,CP)分别处理人人宫颈癌Hela细胞,记录细胞生长数目,进行增殖分化型细胞染色,测定软琼脂集落形成率,应用SDS-PAGE技术分析细胞核基质蛋白成分的变化.CR/CP能明显抑制Hela细胞的增殖,处理组与对照组之间差异有显著性(P＜0.05);处理组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制,对照组集落普遍比药物组集落大,且单个集落中细胞数目多(P＜0.05);通过Quantity One软件分析,实验组(CR组与CP组)与对照组(C组)比较,相对分子质量70 000、68 000、13 000为增加的条带,14 000、17 000、18 000为增强的条带,58 000、43 000是减弱的条带.两实验组相比,以CP组变化显著.CR和CP对Hela细胞具有增殖抑制和诱导分化作用.同时还可以诱导Hela细胞核基质蛋白成分改变,这可能对肿瘤细胞基因表达调控、分化及凋亡起重要作用.
作者： 刊期： 2005年第05期
构建细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白p27mt的重组体,并在大肠杆菌中表达.将已构建的表达细胞周期抑制蛋白p27mt的基因,克隆入pET15b-pep-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达.表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.结果:成功地构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性的表达.PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡提供了理论基础.
作者： 刊期： 2005年第05期
通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体.重组载体转化BL21(DE3)细胞后,提取质粒进行PCR鉴定和序列分析,证明重组质粒pET32a/CB-K5阅读框架和融合基因序列均与预期相符.实验结果显示,成功地构建了抗菌肽CecropinB(CB)和肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)融合蛋白的表达载体pET32a/CB-K5.转化E.coli BL21(DE3),SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,融合蛋白以包涵体的形式在重组转化菌株中获得高效表达,表达量达到菌体总蛋白的50%.
作者： 刊期： 2005年第05期
研究了含有GNA基因的重组大肠杆菌菌株G2和G3在不同诱导培养温度、起始诱导菌体密度(OD600值)、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导培养时间等重要因子对重组GNA表达的影响,以期获得重组GNA表达的佳条件.实验结果表明,不含信号肽的G2菌株和含有信号肽的G3菌株的佳培养条件分别为:起始诱导菌体密度为OD600≈0.6;诱导剂IPTG浓度为0.1mmol/L;诱导培养时间为6 h;G2和G3的诱导培养温度分别为37℃,28～30℃.该研究结果将为发酵生产重组GNA的工艺提供依据,也为重组GNA开发成为生物农药、试剂和免疫增强剂提供支持.
作者： 刊期： 2005年第05期
文章概述了用化学修饰方法所得的半合成酶的研究发展情况,半合成酶的优点,通过化学修饰得到半合成酶的方法,以及半合成酶的应用状况,分析了半合成酶设计的结构基础,设计半合成酶存在的局限性;并展望了半合成酶的发展前景.
作者： 刊期： 2005年第05期
肠激酶是从哺乳动物体内提取的一种丝氨酸蛋白酶,广泛应用于基因T程领域切割融合蛋白.文章对肠激酶的特点及其基因工程研究进展进行了综述.
作者： 刊期： 2005年第05期
综述了免疫亲和层析技术的发展现状,包括层析介质、层析剂制备方法、洗脱方法等的新进展,以及免疫亲和层析技术在制药领域和临床方面的应用,包括抗体和抗原的纯化、临床检测、免疫分析等.
作者： 刊期： 2005年第05期
人β防御素-3是存在于皮肤和上皮黏膜组织的小分子抗菌肽,作为人体重要的内源性抗生素可以有效抵御细菌的侵染.不仅在自身免疫而且在获得性免疫过程中也发挥作用.它作用于微生物细胞膜的防御机理以及不易引起耐药性的特点已引起各国研究者的日益重视.本文对其分子结构、表达调控、抗菌作用机理和药用价值作一综述.
作者： 刊期： 2005年第05期
骨形态发生蛋白-7(BMP-7)作为骨形态发生蛋白家族成员,能刺激未分化细胞定向分化为成骨细胞,调节骨发育,具有较强的骨诱导活性,能够在体内、体外诱导骨、软骨形成完成骨修复能力.BMP 7能完善移植骨的机械性能和功能,增强同种异体移植物的脊柱融合作用.除了在骨科中的应用外,BMP 7在口腔疾病和肾脏疾病中的应用日广.BMP-7在齿、牙槽骨的发育和重建中可发挥骨诱导作用,诱导牙髓牙本质的再生,从而减轻炎症反应.BMP-7在肾脏高度表达,能够保护肾小球完整性,具有抗肾脏纤维化作用.
作者： 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
