构建霍乱毒素B亚单位(CTB)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B亚单位(Ure B)表位的融合肽表达载体pET-CtUBE,在E. coli BL21(DE3)中表达融合肽CtUBE.以霍乱弧菌基因组DNA为模板,PCR扩增CTB编码序列,克隆到表达载体pET-28a,获得新质粒pET-CTB;化学合成Ure B表位编码序列,克隆到pET-CTB获得CtUBE表达载体pET-CtUBE,并转化E. coli BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导融合肽表达,阴离子交换色谱柱纯化融合肽CtUBE,ELISA分析CtUBE复性结果.结果获得了表达融合肽CtUBE的工程菌,诱导后融合肽表达量占菌体总蛋白34.7%,CtUBE纯化后纯度为95.6%,复性后融合肽可与GM1神经节苷脂和抗Ure B血清结合.实验成功构建了表达Ure B表位融合肽的工程菌,融合肽CtUBE保持了CTB生物活性和反应原性,纯度符合疫苗抗原要求,可以用于抗HP感染的疫苗研制.
作者：赵文锋；徐旭东；吴梧桐 刊期： 2007年第04期
对蛇毒抗肿瘤蛋白的化学成分进行研究.采用RP-HPLC分离蛇毒抗肿瘤蛋白各组分,收集纯化组分Ⅳ.非还原型SDS-PAGE和RP-HPLC鉴定组分Ⅳ的纯度;还原型SDS-PAGE与MALDI-TOF质谱仪测定组分Ⅳ的相对分子质量;测定组分Ⅳ N-末端氨基酸序列并进行Western blot鉴定;MTT法检测组分Ⅳ对体外培养的K562细胞的生长抑制作用.结果表明蛇毒抗肿瘤蛋白组分Ⅳ经SDS-PAGE和RP-HPLC分析为单一成分,MALDI-TOF质谱仪测得其相对分子质量为6714.22,其N-末端前5个氨基酸序列为L-K-C-N-K.经Western blot鉴定蛇毒抗肿瘤蛋白组分Ⅳ为细胞毒素,其对K562细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖关系.
作者：吕萍；陈兴勇；赵宗阁；徐康森 刊期： 2007年第04期
研究促溶剂在简单节杆菌(Arthrobacter simplex AS 1.94)催化甲基睾丸素C1.2位脱氢过程中对甾体转化结果的影响.在简单节杆菌催化甲基睾丸素C1.2位脱氢过程中加入不同的亲水性有机溶剂,以甲基睾丸素的转化率为指标,选择适的亲水性有机溶剂并确定其佳的添加量,同时研究不同的促溶剂配比对转化的影响.结果发酵液中单一的添加4%的甲醇时底物甲基睾丸素的转化率可达80%,添加1‰的Tween-80可使转化率达到46%,两者作为混合促溶剂同时加入,对转化率的提高更明显,达到81%.因此选用4%的甲醇和0.1‰的Tween-80作为混合促溶剂对整个生物转化过程有良好的促进作用.
作者：马书章；别松涛；张一；杜连祥 刊期： 2007年第04期
构建人SMYD3基因原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.通过PCR方法从重组质粒pcDNA-SMYD3中扩增得到SMYD3基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体.将重组质粒转化入E. coli Rosetta(DE3)中,以IPTG诱导融合蛋白表达.表达产物用SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定.酶切鉴定和测序结果证明成功构建了重组表达载体pGEX-SMYD3.SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明人SMYD3基因在大肠杆菌中获得了良好的表达.实验成功地构建了SMYD3基因原核表达载体并在大肠杆菌中获得良好表达,为进一步研究SMYD3蛋白功能奠定了基础.
作者：申静；罗学刚；周庆峰；叶亮；李松；奚涛 刊期： 2007年第04期
研究产气肠杆菌(EAM-Z1)荚膜去除或变薄对于胞内嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)活力的菌体生长量和影响.在培养基中增加碳源以去除荚膜或使荚膜变薄,研究其对菌体生长的影响,并通过转化合成5-氟尿苷的方法研究其对PyNPase活力的影响.结果:在培养基中增加4%的D-甘露糖,1%的甲醇,2%的甘油或2%的丙酮都能使产气肠杆菌的荚膜变薄;其中增加2%丙酮时,菌体量增加43.92%,在工业生产中有重要意义,转化率为57.5%,提高2.8%,PyNPase比活力提高4.8%,转化合成5-氟尿苷的佳反应时间为45min,缩短了1/4.
作者：倪孟祥；张绍谭；石峰；沈振宇；张文婷；吴梧桐 刊期： 2007年第04期
2',3'-双脱氧腺苷(ddA)具有良好的抗病毒作用.以胸苷为起始原料,经由酰化、环化、开环、催化加氢生成2',3'-双脱氧胸苷(ddT),然后ddT和腺嘌呤在胡萝卜软腐欧文氏杆菌的作用下转化成胸腺嘧啶和ddA.结果显示在佳酶反应条件如下:反应温度55℃,磷酸盐缓冲液pH值8.0,磷酸盐缓冲液浓度50 mmol/L,底物20 mmo1/L,菌体量10%时,48 h转化率达54.2%.
作者：辛自豪；丁庆豹；欧伶；邱蔚然 刊期： 2007年第04期
为提高乳清酸到三磷酸胞苷(CTp)的转化效率,克隆并表达了编码CTP合成酶(CTPS)的基因pyrG.根据Genbank的资料,设计了pyrG的引物,经PCR扩增、酶切后,将pyrG插入到表达载体pET-28a中,构建了重组质粒pET28a-pyrG,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,乳糖诱导表达后,经SDS-PAGE对表达产物进行分子量鉴定.分离纯化后,对表达产物CTPS进行活性测定,并对转化工艺进行初步研究.结果:构建的工程菌产生了一种相对分子质量在60.0k的蛋白,该蛋白显示出CTPS的活性,并且可以转化乳清酸为CTP.
作者：叶雯；徐旭东 刊期： 2007年第04期
采用RT-PCR技术从乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis)中克隆甘草鲨烯合成酶(Squalene Synthase,SS)基因,并通过酶切连接的方法构建相关植物表达载体.结果表明,两个SS基因编码区长分别为1242bp、1239bp,分别编码412、413个氨基酸残基的多肽,与Hayashi等报道的光果甘草两个SS基因(GgSQS1和GgSQS2)同源性高达98%,分别命名为GuSQS1和GuSQS2(GenBank登录号分别为:AM182329,AM182330);植物表达载体构建的鉴定结果表明,已将GuSQS1和GuSQS2序列分别正向插入到双T-DNA表达载体中的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,重组质粒分别命名为130/35S-GuSQS1和130/35S-GuSQS2,为今后的次生代谢基因工程研究奠定基础.
作者：卢虹玉；刘敬梅；阳文龙；高山林 刊期： 2007年第04期
在蛋白质分子进化过程中,一些功能上十分重要的残基一旦变异,将引起蛋白质功能丧失,因而在源于不同物种的同源蛋白质中表现为高度的保守性.然而突变研究表明,蛋白质中一些非保守残基也可能是重要的功能残基,它们的变异可能为蛋白质序列中另一或另一些残基变异所补偿,从而维持了蛋白质结构和功能的稳定性.该文基于信息论中的互信息算法,对脯氨酰寡肽酶家族中的脯氨酰寡肽酶(Prolyl Oligopeptide)及其的酶活性区的多序列比对结果进行了共进化分析,分别使用MI、MI/H、R及R/H四种度量方式,并考察了不同截取值对于结果的影响.结果表明互信息的算法对于分析蛋白质的酶活性区域比分析整条蛋白质序列更为有效;在相同截取的情况下,R值可以更好地选择共进化残基,在不同的截取情况下,提高截取值可以提高MI及MI/H参数分析的精确度.
作者：林栋；叶波平；郑珩 刊期： 2007年第04期
用肝素酶Ⅰ(heparinase Ⅰ,EC 4.2.2.7)对肝素进行控制性降解,分别在反应16,32,48 h终止反应,超滤离心粗分级后,用Bio-Gel P6低压柱色谱分离纯化,得到3组不同分子量范围的肝素寡糖混合物.用生色底物法和羊血浆法测定抗X a活性和抗Ⅱa活性.不同反应时间得到的肝素寡糖的抗X a和抗Ⅱa活性分别为82.4/40.3、21.5/11.8和5.6/4.5 IU/mg,其抗Xa/抗Ⅱa活性值分别为2.04、1.82和1.24.结果表明降解16 h所得寡糖可供制备符合小分子肝素药物质控要求的产品.
作者：刘亚梅；何书英；吴梧桐 刊期： 2007年第04期
以赖氨酸为唯一氮源,从土壤中分离到36株能够利用赖氨酸的菌株,从中筛选到2株具有赖氨酸6-氨基转移酶活力的菌株.并对酶活较高的菌株进行形态以及ITS序列鉴定,菌株2-14鉴定为轮枝霉菌(Verticillium sp.).该菌株能将L-赖氨酸代谢转化为L-哌可酸,并且其中几乎不含有D-哌可酸.该研究为国内L-哌可酸生物合成提供了有价值的资料.
作者：颜媛；刘吉华；张剑；余伯阳 刊期： 2007年第04期
来源于牛分枝杆菌的热休克蛋白65(Hsp65)在没有佐剂的情况下可作为载体分子将抗原表位递呈给免疫系统.热休克蛋白具有蛋白酶的催化活性,容易发生自溶而降解,这制约了基于Hsp65疫苗的研究.该研究中,建立了纯化Hsp65及其融合蛋白Hsp65-6×P277(P277为来源于人热休克蛋白60的肽段,线性重复6次)的方法.Hsp65与Hsp65-6×P277以可溶形式表达于大肠杆菌.在低温及添加EDTA的条件下经细胞裂解、硫酸铵沉淀及阴离子交换树脂等纯化方法,可得到电泳纯的目的蛋白.用纯化的融合蛋白Hsp65-6×P277免疫小鼠,可激发机体产生强烈的免疫应答,该融合蛋白有希望作为免佐剂的糖尿病疫苗加以进一步研究开发.
作者：陈庆梅；吴国君；吴洁；李泰明；曹荣月；刘景晶 刊期： 2007年第04期
超抗原(Superantigen,SAg)是一类具有多种免疫活性的蛋白分子,在一定条件下能比普通抗原十至数千倍激活T细胞和抗原呈递细胞.超抗原能引导T细胞产生细胞毒作用(SDCC)和诱导产生一些细胞因子来杀伤肿瘤细胞.然而单用SAg效果差,毒副作用强,其作用受到限制.研究表明使用肿瘤特异性的单抗Fab-SAg融合蛋白,能比单用SAg取得更稳定、更明显的效果.该融合蛋白对肿瘤部位的靶向性强、亲和力高,并能很好地减少系统的免疫原性.另外发现使用突变的Fab-SAg融合蛋白,能进一步增加动物的耐受性、降低毒副作用.目前已有多个用单抗Fab-SAg融合蛋白药物进入临床研究,该药物将会为治疗人类恶性肿瘤带来希望.
作者：朱振洪 刊期： 2007年第04期
甲胎蛋白(alpha-fetaprotein,AFP)是一类胚胎中清蛋白样载体蛋白,在正常成人组织中很难检测到,恶性病变时又有大量产生,常被用作检测肝细胞癌变的指标.AFP基因调控区包括一系列顺式作用元件,特异的反式作用因子直接或间接地调控AFP基因的表达,其基因调控主要在转录水平上.AFP基因表达与肝癌发生中涉及到的某些原癌基因的表达相关.目前,基于对AFP基因表达调控的认识,可以构建出特定表达载体,应用于肝癌的靶向基因治疗.
作者：李娟；白增亮 刊期： 2007年第04期
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是定植于人胃上皮组织引起胃炎、消化性胃溃疡和胃癌的病原菌.尿素酶是幽门螺杆菌重要的定植因子和抗原.近年来,尿素酶成为医药领域的研究热点.文章对Hp尿素酶结构、抗原表位、生物学功能及依赖于尿素酶的抗酸性机制等研究进展作一综述.
作者：谷贵章；宋达峰；顾青 刊期： 2007年第04期
外源基因在大肠杆菌中高效表达时,通常会形成不溶性、无活性的蛋白聚集体--包涵体.包涵体中富含表达的重组蛋白质,它们经分离、洗涤、变性溶解以及复性等过程才能得到具有生物活性的蛋白质.近年来,随着对包涵体体外复性机制的深入研究,从包涵体中复性重组蛋白质已经有了很多的策略和方法.文章就有关工作的进展进行了综述.
作者：张婷婷；叶波平 刊期： 2007年第04期
海洋微生物是抗肿瘤活性物质的重要来源.近十几年来,已从不同的海洋微生物中分离鉴定了许多结构新颖的抗肿瘤活性物质,显示出诱人的研究开发前景.文章就目前国内外海洋微生物抗肿瘤活性物质的研究作一综述,并展望其发展前景.
作者：曹雪；杨瑞丽 刊期： 2007年第04期
作者： 刊期： 2007年第04期
