构建HCU C端截短21个氨基酸的.NS5B(HCV NS5B-C21)的重组原核表达质粒,并获得HCVNS5B-C21蛋白,为以其为靶位的抗HCV药物筛选等创造条件.利用PCR技术扩增HCVNS5B-C21基因,BamHⅠ和Xho Ⅰ双酶酶切后连接到经同样酶酶切的原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,获得阳性重组质粒pET-28a(+)-NSSB-C21,IFTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白表达产物经SDS-PAGE进行鉴定.成功构建了HCV NSSB蛋白表达载体pET-28a(+)-NS5B-C21,经诱导明显表达出6His-NS5B-C21,截短形式的6His-NS5D-C21表达产物的可溶性明显增加.HCV NS5B-C21蛋白在体外得到了有效表达,表达的蛋白主要存在于上清液中,纯化获得了NS5B-C21蛋白,为抗HCV药物筛选等奠定基础.
作者：杨华凤；潘明洁；吕敏；李越希 刊期： 2008年第02期
采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统萃取α-淀粉酶抑制剂,考察了PEG浓度、(NH4)2SO4浓度和NaCl溶液浓度对α-淀粉酶抑制剂分配系数、相比和活力回收率的影响.确定了白芸豆中α-淀粉酶抑制剂提取的佳条件,即PEG质量分数为12.O%,(NH4)2SO4的质量分数为13.3%,NaC1质量分数为O.003%时,分配系数、相比和活力回收率分别为4.40,O.57,71.41%.
作者：张佰鹏；高美风；徐雯；付金香；孔毅；吴梧桐 刊期： 2008年第02期
多糖YCP经CDAP活化与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了质量比(W(VSA)/W(YCP))为0.15的拟糖蛋白(YCP-BSA),用该拟糖蛋白免疫新西兰大白兔,制备了抗YCP的抗血清,采用辛酸一硫酸铵法纯化,间接EUSA测定,获得了效价为1:20000的YCP多克隆抗体.
作者：张华；陆莹；赵虎；高向东 刊期： 2008年第02期
为了观察重组人肝星状细胞激活相关蛋白(rhSTAP)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠肝功能及病理形态学的影响.建立大鼠CCl4肝纤维化模型,从早期干预组自造模开始起注射给药,持续12周,治疗组自造模6周后开始给药,维持6周,造模周期结束后测定大鼠血清中谷丙氨转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)的含量及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量并对肝组织进行病理组织学检查.结果显示重组人源肝星状细胞激活相关蛋白能显著降低大鼠血清中ALT、AST、HA及肝组织中羟脯氨酸含量的升高,明显改善大鼠肝组织病理变化.因此重组人源肝星状细胞激活相关蛋白能有效干预CCl4诱导的大鼠肝纤维化,值得深入研究.
作者：陈东亚；魏威；吴梧桐 刊期： 2008年第02期
制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白.从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp).重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽.插入表达载体pPIC9K中a交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF.电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子.甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性.结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础.
作者：徐钰；孙钧铭；张莲芬；窦文芳；李洁；朱威；朱书峰；金坚 刊期： 2008年第02期
以哇巴因为靶分子,从噬菌体7肽库中筛选与哇巴因特异性结合的短肽.经过3轮淘筛并通过ELISA法鉴定,获得14个阳性克隆,通过对噬菌体ssDNA电泳鉴定和序列分析筛选得到3种短肽:肽A、B和C的筛选一致率分别为64.3%(9/14),28.6%(4/14)和7.14%(1/14).Genbank中蛋白质同源性分析显示,肽A、B、C均不与钠泵蛋白同源.放射性配基受体结合法检测结果表明,合成的肽A能够与哇巴因结合.哇巴因特异性结合短肽的获得将为阻遏内源性哇巴因与钠泵的结合、防治高血压奠定基础.
作者：徐忠伟；徐瑞成；陈小义；刘英富 刊期： 2008年第02期
克隆人CD40 L基因功能性片段(E107-L261),并在CHO细胞中进行表达.从健康人扁桃体组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增CD40 L胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-hCD40 L真核表达载体.将重组质粒pcDNA3.0-hCD40 L转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并western blot-ting鉴定其特异性,通过小鼠脾淋巴细胞增值实验检验其生物学活性.结果,CD40 L胞外区功能性片段(E107-L261)cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO中成功表达,具有免疫学和生物学活性.结论:真核表达载体peDNA3.0-CD40 L的成功构建并在CH0中成功表达.
作者：陈华；蒋玉辉；曹开源；吴梧桐 刊期： 2008年第02期
从被污染的酵母培养液中分离到-菌株,经鉴定为一种革兰氏阳性杆菌,其所分泌的主要蛋白产物经纯化后,测定了它的N-端氨基酸序列,与已知的几种内切壳聚糖酶十分类同.根据其同源DNA序列,通过PCR方法克隆了其全长基因.该菌株生长极快,其组成型分泌产物主要为内切壳聚糖酶.该酶通过疏水层析和分子筛两步即得到纯化.进一步研究了该酶的酶学性质及其催化壳聚糖降解为壳寡糖的条件.提高该壳聚糖酶的产率后,有望用于壳寡糖的生产,有实际应用价值.
作者：徐瑞；郭占云；戚正武 刊期： 2008年第02期
从免疫学的角度出发,设计一种以血管紧张素Ⅱ为功能表位的DNA疫苗,考察其药效及安全性,-并试图阐释其作用机制.抗高血压核酸疫苗以6段血管紧张素Ⅱ为核心,乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)为免疫载体,为克服白体的免疫耐受,又以白介素Ⅳ作为佐剂.肌肉注射肾性高血压模型大鼠,考察该疫苗的免疫原性及药效.结果:试验表明肌肉注射该疫苗能诱导机体产生持续8周的高滴度特异性抗体,有效降低血液中的血管紧张素Ⅱ含量,同时降低模型大鼠的收缩压20 mmHg,降低舒张压9 mmHg.此外,组织病理学检查表明,该核酸疫苗能明显抑制心肌纤维化的发展,有效逆转心肌肥厚.结论:血管紧张素Ⅱ作为高血压的有效靶标,可通过疫苗免疫途径进行阻断.该研究为高血压疫苗的研究提供了一种新的思路,具有较好的应用前景.
作者：谢燕飞；吴若飞；吴洁；李泰明；曹荣月；刘景晶 刊期： 2008年第02期
构建单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV1gB)胞外区基因片段的重组原核表达质粒,并获得HSV1gB胞外区基因的表达.选用真核和原核细胞均偏爱的密码子,化学合成含信号肽序列的HSV1gB蛋白胞外区基因序列,用PCR方法扩增编码HSV1gB胞外区1～696 aa的基因,利用DNA重组技术将其定向插入到原核表达载体pGEX4T-2上,转化大肠杆菌TG1菌株,经IPTG诱导表达及SDS-PAGE鉴定分析.SDS-PAGE检测显示,表达的HSV1gB/GST 融合蛋白分子质量为96 ku.利用亲和层析方法,纯化获得了表达的目的蛋白.ELISA结果表明表达产物具有较好的抗原性和特异性.可溶性重组HSV1gB蛋白的表达成功为单纯疱疹病毒亚单位疫苗的研究奠定了基础.
作者：吕敏；潘明洁；杨华凤；李越希 刊期： 2008年第02期
探讨精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser RGDS)4肽诱导人结肠癌细胞SW480凋亡的作用.采用DAPI染色、DNA琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞技术分析RGDS对人结肠癌细胞SW480凋亡的影响.结果表明,与对照组相比,RGDS处理细胞后,形态学观察显示DAPI染色的细胞核染色质凝聚、细胞溶解形成凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状带(DNA ladder);流式细胞分析可见凋亡峰,凋亡率约是对照组的4.5倍.因此,RGDS具有诱导人结肠癌细胞SW480凋亡的作用.
作者：王晓霞；牛勃；解军；李晓钟；张悦红；王惠珍；王文渊 刊期： 2008年第02期
研究卡莫氟固脂纳米粒对人大肠癌细胞多药耐药的逆转作用,并对其逆转机制进行了初步探讨.采用MTT法比较了卡莫氟不同药物形式的细胞毒作用;采用RT-PCR技术考察卡莫氟固脂纳米粒对敏感和耐药人大肠癌细胞中mdr 1和MRP的基因表达的影响.卡莫氟固脂纳米粒能下调耐药人大肠癌细胞中mdr 1的mRNA表达,对其中的MRP的mRNA的表达没有显著影响.卡莫氟固脂纳米粒能逆转人大肠癌细胞由mdr 1 介导的多药耐药,而对MRP介导的多药耐药没有显著影响.
作者：孟胜男；王欣；王怀良 刊期： 2008年第02期
鉴定抗菌活性放线菌WBF16的分类地位;通过观察其培养特征、生理生化特性,以及对其细胞壁组分和16S rDNA序列的分析,将该菌鉴定到种;该放线菌为链霉菌属假浅灰链霉菌的一个新菌株.
作者：孟繁雯；叶亮；邢莹莹；奚涛 刊期： 2008年第02期
通过有关试验研究及查阅国内外近期文献资料,概述分析熊果酸在医药领域的研究进展.熊果酸属五环三萜类化合物,具有广泛的生物活性,抗肿瘤活性是其主要的药理作用,其抗肿瘤作用是多方面的,并且资源丰富,开发应用前景广阔,但是在动物体内熊果酸生物利用度较低,需通过化学修饰的方法,进一步提高熊果酸的抗癌活性和生物利用度,此方面的研究将是熊果酸系列抗癌药物研发的重要步骤及未来开发的一个方向和热点,熊果酸有望成为一种高效低毒的抗肿瘤新药.
作者：王涛；邵敬伟；郭养浩 刊期： 2008年第02期
RNA干扰首次发现于美丽线虫,siRNAs(小干扰RNA)的产生可诱导特异内源性mRNA的降解,现在被认为是真核细胞在翻译后水平抑制蛋白产生的主要途径.典型的内源性siRNA是由19-23个碱基构成的双链寡核苷酸RNA,由RNase蛋白复合物聚集降解靶mRNA所产生.RNA干扰近常被用作逆转录基因工具来沉默多倍体有机体中的基因表达.表达siRNAs的方法日新月异,已经由初的在体内或者体外利用病毒载体转染合成的siRNA至细胞,发展为在不同型细胞和有机体中建立不同功能的特异蛋白.RNA干扰的方法较之前的方法(反义DNA或抗体封闭技术)在抑制基因表达方面有着明显的优点.RNAi序列特异性的抑制效应是有选择性的、长期的,系统地调节靶向基因.不论是直接转染siRNA或者由RNA载体表达产生,RNAi都可抑制哺乳动物中的特异基因,这无疑加速了基因功能的研究速度,而且极有潜力成为高效的基因特异性治疗方法.药理学家一直梦寐以求可有方法能够选择性的拮抗或剔除个体特异蛋白的功能,RNAi十分有望使其梦想成真.
作者：郭葆玉 刊期： 2008年第02期
细胞色素P450是一种血红素结合蛋白,在生物界广泛存在.自从1958年从小鼠肝脏微粒体中分离到第一个细胞色素P450以来,对细胞色素P450的结构、分子克隆、基因表达机制、功能鉴定及其应用方面的研究取得了重大进展.文章简要总结了植物细胞色素P450基因克隆和功能研究的新进展.
作者：贺丽虹；赵淑娟；胡之璧 刊期： 2008年第02期
文章简要论述了我国专利制度在生物技术保护领域的发展概况,总结了我国生物技术领域的专利保护范围,对我国生物领域专利保护现状进行了介绍和分析,并就如何有效加强我国生物领域的专利保护进行了论述.
作者：焦诠 刊期： 2008年第02期
