按嵌套设计进行细胞电敏感性实验,通过嵌套设计的方差分析了解电穿孔转染缓冲液的pH值、电场强度及电容与活细胞数量的关系.根据嵌套设计结果安排L9(34)正交设计,以接近50％存活率为期望指标,同时分析主因素间的交互作用并确定优转染方案.CHO-dhfr-细胞电穿孔转染的优化参数为pH 7.2的低离子强度Tris-Cl缓冲液,525 V/ema、75 μF电击2次,间隔1 min.该方法不但确定了电穿孔转染CHO-dhfr -细胞的条件,而且适用于其它种类细胞的电穿孔转染条件的快速优化.
作者：陆俭；马亚茹；李萍；陈勇；蒋琳 刊期： 2012年第02期
通过采用正交实验设计法及酸性染料比色法,建立防己黄芪汤醇溶性生物碱的含量测定方法及其超声提取的佳提取工艺.选用溴甲酚绿为显色剂、邻苯二甲酸氢钾溶液为缓冲液,测定样品在419 nm波长处的吸收度.粉防己碱对照品溶液在0.0208～0.1664 mg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为Y=0.110 6X-0.1028,R2=-0.9982.该方中醇溶性生物碱的平均回收率为110.12％,RSD为2.28％.在超声提取时,笔者采用时间(20,30,40 min)、次数(1,2,3)、料液比(1∶30,1∶40,1∶50)为因素的3因素3水平的正交试验,终确定了超声提取脂溶性生物碱的佳提取工艺.提取工艺为:料液比1∶50,时间30 min,次数3次.通过正交试验测定结果表明,所建立的方法简便、准确,可用于防己黄芪汤醇溶性生物碱的质量控制.
作者：张珂；肖娅萍；邵显会；王晶；梁晓庆 刊期： 2012年第02期
研究整合素阻断多肽HM-3体外对血管生成的作用.应用鸡胚尿囊膜实验、大鼠动脉环实验及Matrigel实验考察整合素阻断多肽HM-3抗血管生成作用.结果:鸡胚尿囊膜实验和大鼠动脉环实验表明HM-3能够抑制体外血管生成,多肽HM-3 0.05 μg对鸡胚尿囊膜新生血管生成的抑制作用强,多肽HM-3 8 μg/mL对大鼠动脉环微血管生成抑制作用强.Matrigel实验表明HM-3 7～8μg/mL对内皮细胞生长因子添加剂(ECGS)诱导的HUVEC细胞体外分化成管状结构抑制作用强.整合素阻断多肽HM-3具有显著的体外抗血管生成的作用.
作者：张晓娟；任印玲；徐寒梅 刊期： 2012年第02期
20世纪90年代,随着生命科学的发展和生物技术的进步,基于靶点的药物发现模式逐渐取代了传统的基于药物化学结构的发现模式,成为现代创新药物研发的主流模式.桑迪亚公司新研发的蛋白质形状折叠码技术对蛋白质的复杂三维结构提供了一个完整和简单的构形描述.本文通过使用该技术对十字孢碱的多靶标结合模式进行了深入分析.并采用PDB数据库1SM2结构作为模版,使用定义的靶点片段对蛋白激酶一维码数据库进行扫描以期发现十字孢碱新的作用靶标.结果显示,筛选出的排名前5％的蛋白结构几乎全部覆盖了Drugbank数据库所公布的十字孢碱的靶受体.
作者：刘颖 刊期： 2012年第02期
建立吲哚美辛缓释微球中吲哚美辛含量的高效液相色谱方法.采用Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以pH 3.0的0.1mol/L冰醋酸溶液-乙腈(20∶80)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为320 nm,进样量20μL,用外标法测得.吲哚美辛在2.0～80.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.70％,RSD为1.50％.本方法灵敏度高,操作简单可靠.
作者：高颖；吴艺君；金蓉蓉；陆丹红；温俊；李文生 刊期： 2012年第02期
Agacutase是自尖吻蝮蛇蛇毒中分离出的新的具有止血功能的蛇毒类凝血酶,它能够将纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体.通过SDS-PAGE和ELISA方法,我们研究了Agacutase体外水解牛纤维蛋白原的分子机制.实验结果显示,Agacutase仅仅水解牛纤维蛋白原的α亚基并释放血纤肽A,而对牛纤维蛋白原的β和/或γ亚基没有影响.研究表明Agacutase属于血纤肽A类(FP-A类型)的类凝血酶.
作者：刘玉超；周东；李谦；颜丽云；唐松山 刊期： 2012年第02期
构建空肠弯曲菌表面蛋白特异性多表位抗原原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,免疫动物后检测其抗血清与空肠弯曲菌菌体的反应性.从空肠弯曲菌的6个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段,将其插入原核表达载体,获得重组质粒pET-32a(+ )-CJMEA-A,经IPTG诱导后表达出25k的目标蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,Western blot和间接ELISA检测重组蛋白抗原性和抗血清反应性.结果表明目标蛋白具有良好的反应原和免疫原性,抗血清能与菌体发生反应.其抗体可用于C.jejuni免疫磁珠和免疫胶体金等检测方法的建立.
作者：欧瑜；鄢方兵；唐泰山；祝长青；蒋原；张常印 刊期： 2012年第02期
分离鉴定宝华玉兰根皮乙醇总提取物(EERMZC)的挥发性成分,并考察其对小鼠成纤维细胞NCI-3T3的体外生长抑制作用.分析EERMZC的挥发性成分,用气-质联用(GC-MS)技术分析,并用峰面积归一化法测定各成分相对含量,采用MTT方法检测75,100,200,300,400μ g/mL的EERMZC对NCI-3T3细胞体外生长抑制作用.气相色谱共分离出21个色谱峰,鉴定出其中14种化合物,占该挥发性成分总量的93.61％.EERMZC对NCI-3T3细胞的抑制率呈浓度依赖关系.在EERMZC的挥发性成分中,银胶菊素含量高达54.36％,其它含量较高的成分有非洲桧素(7.49％)、亚油酸乙酯(6.25％)、木香烯内酯(5.43％)等成分.EERMZC能明显抑制NCI-3T3细胞的生长.为进一步开发利用宝华玉兰药用价值提供科学依据.
作者：宋晓凯；李靖 刊期： 2012年第02期
研究培养条件对三叶青愈伤组织生长及黄酮积累的影响,建立用愈伤组织生产三叶青黄酮的方法.以三叶青的叶诱导产生的愈伤组织为材料,分别采用单因素实验、正交实验的方法比较了不同光照周期、不同有机添加物、不同前体、3种基础培养基、不同6-BA与NAA浓度的培养条件下愈伤组织生长的情况及黄酮含量.用愈伤组织生产三叶青黄酮可采用两步培养法来进行:先在促进愈伤组织生长的佳处理组合条件:12 h/d间断性光照、MS+3.0 mg/L-6-BA+2.0 mg/L NAA+2 g/L蛋白胨下培养30d,再转入利于黄酮积累的处理组合:连续光照、B5 +4.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+40 mg/L苯丙氨酸下培养20d.采用该方法培养的愈伤组织中总黄酮大浓度可以达到28.4±3.9 mg/g DW.采用愈伤组织培养方式生产三叶青黄酮,不仅可以大大地缩短生产周期,而且培养物中的总黄酮含量也明显高于原植株叶片,接近于根茎中的黄酮含量,具有较大的可行性.
作者：彭昕；林言娜；何军邀；凌庆枝 刊期： 2012年第02期
谷胱甘肽转移酶(Glutathione S-transferases,GSTs,EC 2.5.1.18)是生物体内重要的一种解毒和抗氧化酶类.为进一步研究该酶在木榄适应盐生环境中的作用,从前期构建的木榄幼叶cDNA文库中克隆到编码theta型GST(BgGSTT)的cDNA全序列,分析和预测了其编码产物的结构特征,探讨了该基因在不同盐度下生长的木榄幼苗叶片及根中的表达变化.结果发现:编码BgGSTT的cDNA全长1111 bp,编码区为753 bp,编码的蛋白由250个氨基酸残基组成,理论相对分子质量为28.1k,pI为9.42.系统发育分析显示BgGSTT与来源于拟南芥和乳浆大戟的GSTT同源性较高(identity分别为72％和65％).利用荧光实时定量RT-PCR检测了BgCSTT在不同盐度下生长的木榄幼苗叶片及根中的表达变化,结果发现BgGSTT基因在木榄幼苗叶片中表达量较高,并且随着培养盐度的升高其表达逐渐加强,在25％盐度达到高,随后稍有下降但仍维持在较高水平.根据上述结果,推测BgGSTT基因可能参与了木榄适应盐胁迫的过程,并且该基因的表达在木榄幼苗叶片和根中具有严格的转录调控机制.
作者：周小群；李谊；胡文军；叶波平 刊期： 2012年第02期
以菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该菌的β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因及其调控元件并克隆至pUC19载体.测序结果经分析,该基因编码的蛋白序列与菊欧氏杆菌Ech586的β-1,4-内切葡聚糖酶同源性达到98％.将celY的开放阅读框基因插入到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌E.coli BL21( DE3),采用LB-CMC平板刚果红染色筛选含celY基因的转化子.12％ SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符.CMCase活力测定显示重组pET-28a-celY阳性菌分泌到培养基中的CelY酶活力为84.4 U/L,周质中的酶活力为12.7 U/L.β-1,4-内切葡聚糖酶CelY工程菌的获得,为研究菊欧氏杆菌纤维素酶基因在菊欧氏杆菌同源转化中的表达及工程菌的酶学特性提供了重要的资料.
作者：黄潇；王泽宇；邢芸；侯景；李泰明；刘景晶 刊期： 2012年第02期
高通量的筛选药物结构数据库,可以辅助药物设计.该文从DrugBank数据库获取4886种药物的化学结构信息,建立了一个免费的在线药物化学结构分析平台.基于Tanimoto系数预先计算了药物两两化学结构相似性矩阵作为后台数据,从而提高了高通量药物结构分析的速度.该平台实现了药物通用名、商品名和别名的检索,药物化学结构相似性搜索查看及其聚类分析可视化的功能.应用该系统进一步验证了与相同靶蛋白关联的药物,其化学结构更相似的结论.本文系统可通过http://122.70.220.99/bme的Drug and Disease访问.
作者：王志刚；陈鑫；谢丽芳；彭屹；张正国 刊期： 2012年第02期
采用补料培养流加方式研究达托霉素发酵过程中前体物质癸酸的起始添加时间、添加量、癸酸耦合剂以及变速流加癸酸对发酵法生产达托霉素的影响.研究表明,达托霉素发酵过程中前体癸酸佳起始添加时间为开始发酵后第36 h；癸酸佳添加量为癸酸:油酸甲酯(1∶1)70 μL/12 h；癸酸佳耦合剂为乙醇,配比为2.5∶1；变速添如癸酸溶液可使达托霉素的产量略有提高.
作者：吴旻；王文轶；王泽根；刘敏；王航；王旻 刊期： 2012年第02期
在成功构建人血清白蛋白突变体干扰素α2h融合蛋白(rmHSA-IFN-α2b)毕赤酵母工程菌株PicZαA/rmHSA -IFN -α2 b/X33的基础上,建立了发酵分泌表达rmHSA-IFN-α2b的纯化工艺.对工程菌进行9L罐高密度发酵后,离心收集发酵液上清,rmHSA-IFN-α2b的表达量为421 mg/L.对发酵液上清,依次进行3步纯化.第一步采用SP sepharose FF除去大部分色素和部分杂蛋白.第二步采用Blue sepharose FF根据亲和作用原理除去部分杂质.第三步采用Q sepharose FF除去溶剂和其他杂质以及类毒素.终得到高纯度、有活性的rmHSA-IFN-α2b.通过HPLC检测和SDS-PAGE检测,终产品的纯度都大于95％；通过活性检测,rmHSA-IFN-α2b的比活为1.5×106 IU/mg.纯化总收率为25.3％.连续重复纯化6批,结果稳定.该工艺简单稳定,容易放大,适合规模化生产.简单高效纯化工艺的建立,为rmHSA-IFN-α2b后续研究奠定了坚实的基础.
作者：肖建国；阮振兴；汤火龙；蔡煜；陈慧敏；张国华 刊期： 2012年第02期
为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12％ SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白.该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构.GM1 -ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性.
作者：杨洁；王华倩；熊祺琰；黄文睿；李泰明；吴洁；曹荣月；刘景晶 刊期： 2012年第02期
为开发从酶反应液中分离纯化5-氟尿苷的方法,研究了利用阴离子交换树脂以及硅胶柱色谱实现转化产物分离纯化的工艺；实验采用HPLC为检测方法,以5-氟尿苷含量为考察指标,从吸附量,洗脱率,回收率的角度考察了各种条件的影响.终确定以D301树脂为吸附剂；佳吸附条件为动态吸附,温度25℃,pH 8；动态洗脱,洗脱剂5％ NaCl溶液,体积流量为3BV/h;再利用硅胶柱色谱,采用200～300目硅胶,以正己烷∶乙酸乙酯=12∶88作为洗脱剂,洗脱后结晶可得到5-氟尿苷纯品,色谱纯,终收率72.4％.
作者：倪孟祥；王刚；顾觉奋 刊期： 2012年第02期
近年来,越来越多的抗体被用于疾病的诊断与治疗,已占据生物药品市场的20％,对抗体的大量需求就要求我们对新的抗体纯化策略进行探索.在过去的几十年里,学术界和产业上的进步共同推动了抗体分离纯化技术的发展,色谱法已经成为抗体分离纯化的一个重要方法,并将继续在抗体纯化领域发挥重要作用.文章对当前的色谱法纯化抗体的技术及其应用进行了一个简要的综述.
作者：柳萌；周亚丽；劳兴珍；郑珩 刊期： 2012年第02期
血管紧张素转化酶(ACE)在血压调节中起着重要作用,ACE抑制剂(ACEI)可以抑制ACE的活性,从而阻碍血管紧张素Ⅱ的生成和舒缓激肽的失活,使血压下降.文中介绍了ACEI的作用机制、合成ACEI的现状、国内外天然ACEI的研究现状、活性检测方法,以期为ACEI进一步研究提供参考.
作者：刘会敏；张聪颖；曹雨；孔毅；杜迎翔 刊期： 2012年第02期
随着片剂生产工业的发展,对多功能性辅料的要求特别是对流动性和可压性的要求也越来越高.复合辅料是2种或是多种已有辅料经过一定的处理得到的亚微颗粒,所有辅料各取所长、优势互补.这种多功能复合辅料显著的减少了片剂中的辅料数量.文章介绍直接压片(direct compression,DC)复合辅料的优势、局限,例举了已经上市的DC辅料及其应用前景.
作者：李亚正；臧恒昌；张娜；翟光喜；李连 刊期： 2012年第02期
代谢网络是目前研究多的生物网络,在代谢功能研究,生物代谢过程控制,疾病诊断分析和药物靶标设计等方面有重要理论和实践意义.基因水平上的代谢网络以基因组序列为基础,通过构建了基因-蛋白质-反应的关系重构生物体内代谢过程.这为理解生物体内代谢过程提供了一个高效的平台.文章综合近年来研究者在代谢网络重构的研究成果,介绍了代谢网络的重构步骤和重构工具,并探讨了重构代谢网络研究中存在的难题和研究前景.
作者：徐晓燕；张莹；方慧生 刊期： 2012年第02期
手性化合物发展迅速,已广泛应用于药学领域.生物催化的手性合成具有反应条件温和,选择性强,副反应少,产品光学纯度高,无污染等优点,是目前研究的热点和发展方向.文章综述了生物催化反应在手性药物合成中的应用,并对其应用前景进行了展望.
作者：郑南波；吴梧桐；高向东 刊期： 2012年第02期
探讨奥曲肽和生长抑素联合泮托拉唑治疗急性上消化道出血的临床疗效及安全性.对我院收治的148例急性上消化道出血患者随机分为奥曲肽联合泮托拉唑组(56例)、生长抑素联合泮托拉唑组(50例)和对照组(42例),观察3组患者的临床疗效及不良反应情况.奥曲肽联合泮托拉唑组与生长抑素联合泮托拉唑组患者总有效率无明显差异,但均明显高于对照组(P＜0.05).奥曲肽联合泮托拉唑组与生长抑素联合泮托拉唑组患者出血明显缓解时间亦无明显差异,但均明显短于对照组(P＜0.05).3组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).对于急性上消化道出血的患者,在泮托拉唑治疗基础上加用奥曲肽和生长抑素进行治疗均能明显提高临床疗效,能缩短止血时间,且并未增加不良反应发生率,值得临床应用.
作者：曹宪伟 刊期： 2012年第02期
观察胰岛素泵治疗与多次胰岛素治疗对Ⅱ型糖尿病患者的短期疗效差异.对住院病患60例中Ⅱ型糖尿病患者随机采用胰岛素泵持续皮下输注胰岛察( CSⅡ)或多次皮下输注胰岛素(MSII)治疗,比较二者达标时间以及血糖控制情况.CSⅡ与MSⅡ相比,CSⅡ达标时间更短,所需胰岛索量更少,发生低血糖次数更少.胰岛素泵强化治疗Ⅱ型糖尿病,可在短期内安全有效地使血糖达标.
作者：刘晓丽；倪卫惠 刊期： 2012年第02期
探讨乳腺癌与血浆D-二聚体水平的相关性.对我院收治的乳腺癌及良性乳腺病患者手术前后的血浆D-二聚体水平进行检测,并与健康女性血浆D-二聚体水平进行对比分析.术前乳腺癌组患者的D-二聚体水平及阳性率均明显高于良性乳腺病组及健康组(P＜0.05和P＜0.01)；D-二聚体浓度、阳性率随病变的恶性程度升高而有上升趋势(P＜0.05和P＜0.01)；Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者术后D-二聚体改善程度明显高于Ⅲ期乳腺癌患者(P＜0.01).血浆D-二聚体浓度可作为临床上预测乳腺癌患者临床分期及预后的一项重要指标.
作者：周卓能 刊期： 2012年第02期
