通过酿酒酵母和干酪乳杆菌共培养,在单因素实验的基础上,考察Plackett-Burman实验、正交实验,优化酵母菌和乳杆菌共培养的条件,以提高酵母菌产谷胱甘肽的产量.首先进行酵母菌和乳杆菌共培养的单因素实验,挑选出乳糖浓度、发酵培养基初始pH值、共培养温度、转速、乳杆菌接种量、接种时间、发酵时间,这7个对谷胱甘肽产量有影响的因素.利用分析软件Minitabl6,对这7个因素进行Plackett-Burman实验,筛选出3个影响较为显著的因素.利用分析软件SPSS 19,再对这3个因素进行正交实验,得出佳发酵条件.在佳发酵条件下,谷胱甘肽产量比优化前提高了35.14％；相同条件下,比单菌培养提高了33.35％.得到佳发酵条件为:乳糖浓度40 g/L,发酵培养基初始pH值为6.4,共培养温度为36℃,转速为200 r/min,乳杆菌接种量为8％,乳杆菌接种时间为8h,发酵时问为24 h.酵母菌乳杆菌共培养产谷胱甘肽的方法具有可行性,并且利用Plackett-Burman 设计和正交设计可有效优化发酵条件.
作者：尤晓清；许激扬；卞筱泓；赵玉成；向禧；赵刚刚；邵飞 刊期： 2012年第06期
黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI)是药材黄芪中的活性成分之一.由于目前对于黄芪皂苷代谢途径知之甚少,使得通过直接转入皂苷母核合成相关基因从而提高黄芪毛状根中黄芪甲苷含量的方法不能施行.考虑到皂苷中的糖基侧链,增加活性葡萄糖代谢流入也许可以增加黄芪甲苷的终转化效率.为了验证这个假说,该文将ADP-葡萄糖代谢相关基因颗粒结合型淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase,GBSS)转入黄芪毛状根中,分子鉴定表明其基因已经整合进黄芪毛状根基因组,并且在mRNA水平增加了表达；GBSS酶活性分析表明,转基因株系平均酶活增加了约21.8倍；PAS染色结果表明,转基因株系中的多糖成分显著增加；与此同时,ASI含量亦提高了4倍.研究结果表明,通过转入活性糖代谢相关基因方法提高皂苷产量的方法切实可行.
作者：吴晓俊；杜旻；王子艳；胡之璧 刊期： 2012年第06期
考察黄连多糖对高级糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和AGEs受体(RAGE)表达的作用.采用水提,Sevag法去蛋白,醇沉法获得黄连多糖(CCP)；80％汇聚的HUVECs分成6组,分别为空白对照组、BSA对照组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs+ CCP(25μg/mL)、AGEs+ CCP(50 μg/mL)和AGEs+ CCP(100μg/mL),采用MTT法检测黄连多糖对AGEs诱导HUVECs增殖的影响；实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA表达；Westem Blot分析RAGE蛋白表达情况.HUVECs经AGEs诱导48h后,其增殖率显著增殖.黄连多糖可以剂量依赖性的抑制AGEs诱导HUVECs早期增殖作用,定量PCR和Western Blot结果表明CCP可以在mRNA和蛋白水平抑制RAGE表达.黄连多糖可通过抑制RAGE表达,降低AGEs对内皮细胞的激活作用.
作者：尹登科；杨晔；陈松；李云；高向东 刊期： 2012年第06期
为获得高诱导率的花生毛状根诱导条件,同时探究不同浓度的萘乙酸(NAA)和2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响.研究了不同发根农杆菌菌株和不同乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导率的影响；以固体MS培养基为对照,分别添加不同浓度的NAA和2,4-D,培养花生毛状根,探究对毛状根生长和白藜芦醇含量的影响.实验显示花生毛状根诱导率可达到92.3％.花生毛状根随着NAA的浓度升高,生物量同对照相比较无显著差异,各浓度的NAA之间也无明显差异；与对照相比较,白藜芦醇含量显著增高,呈显著差异,但各浓度的NAA之间白藜芦醇的含量无明显差异.添加2,4-D形成的生物量明显偏低,白藜芦醇含量与添加NAA组无差别.以A600为0.8的发根农杆菌R1601菌液侵染花生叶片,在含50 μmoL/L乙酰丁香酮的MS培养基培养时,可以高效的诱导得到花生毛状根；NAA可以作为一种外源激素提高花生毛状根中白藜芦醇的含量.
作者：姚庆收；姜吉刚；单长民；武玉永；于敏 刊期： 2012年第06期
新制癌菌素是1965年发现的烯二炔类抗肿瘤抗生素,聚(苯乙烯-马来酸)-NCS偶联物在日本主要用于临床的肝癌介入治疗,目前该药物在国内还没有生产.为了制备新制癌菌素.新制癌菌素产生菌Streptomyces carcino-staticus ATCC15944被在28℃、250 r/min条件下液体发酵,振荡培养72 h.发酵液经预处理后,离心后取上清液经硫酸铵分级沉淀、纯水膜透析分离纯化得到组分SIPI-ZX-1.HPLC分析表明产物纯度大于90％.SDS-PAGE和质谱数据显示,该蛋白质相对分子质量约为11 ku.该产物的抗人肝癌细胞的体外活性被测定.该结果与新制癌菌素的分子质量和抗肿瘤活性数值基本一致.本制备方法简捷,成本较低,本工作为进一步研究新制癌菌素的制备工艺奠定了基础.
作者：郭兆霞；陈顺；陈秀华；王娟；邵雷 刊期： 2012年第06期
为研究丹参4-羟基苯丙酮酸还原酶基因(SmHPPR在丹酚酸类化合物生物合成中的作用,构建SmHPPR的RNAi植物表达载体.根据SmHPPR的序列,设计4对含有酶切位点的特异性引物,以丹参无菌苗叶片cDNA为模板,分别扩增两段目的基因的正反向片段(约402 bp和346 bp),经T-载体克隆并测序后,将正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置(正向目的片段插人中间载体pKANNIBAL内含子左侧,反向目的片段插入该载体内含子右侧),构建了含有发夹结构的RNAi植物表达载体pART27-HPPR1sa、pART27-HPPR2sa和阴性对照载体pART27-Intron.利用三亲杂交法,将这3个载体导人到发根农杆菌LBA9402中.酶切鉴定和PCR扩增结果表明RNAi表达载体构建成功并成功导入到发根农杆菌LBA9402中,为下一步研究SmHPPR基因的功能奠定基础.
作者：谈荣慧；张金家；赵淑娟；胡之璧 刊期： 2012年第06期
用Xbridge Amide色谱柱测定果糖注射液中果糖的含量.色谱柱为Xbridge Amide(waters,4.6 mm×150 mm,3.5 μm),以乙腈-水-浓氨溶液(80∶20∶0.1)为流动相,示差检测器,柱温和检测器温度为40℃,流速为1.0 mL/min,进样量为20μL.果糖在进样范围为50μg～150μg时线性关系良好,r=1.平均回收率为100.3％,RSD为1.4％(n=9).本法简便、快捷、准确,灵敏度高,重复性好,可用于果糖注射液中果糖的含量测定.
作者：陈华 刊期： 2012年第06期
制备抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(Simplex Herpes VirusⅡ,HSV-2)表面抗原gD的单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定.以基因工程重组制备纯化的HSV2-gD为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规融合制备杂交瘤细胞,通过HAT选择培养、有限稀释法获得单克隆细胞株,用间接ELISA法、Western blot方法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株.获得了4株可稳定分泌抗HSV2-gD抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A11C6、1A11F10、4C9D5以及4C9E9,抗体的类型均为IgG1,轻链均为K型,Western blot结果显示各单抗都可以特异性识别HSV2-gD.用杂交瘤细胞注射小鼠制备腹水,腹水内的抗体效价均大于1×10-5,腹水内的抗体经硫酸铵-辛酸分级沉淀和阴离子交换柱纯化,成功制备了纯度超过95％的高特异性抗体,抗体有较好的特异性.为进一步研究HSV2感染和临床上的预防、诊断及治疗提供了有力的工具.
作者：王耀；刘武；周洁；蔡冉；潘英；李素芹；张庶民；李越希 刊期： 2012年第06期
S-thanatin是一个含有21个氨基酸的抗菌肽,以融合形式在大肠杆菌体内表达,载体构建时人工设计了一个凝血酶位点.为降低重组抗菌肽S-thanatin的生产成本以利于工业化生产,探索了一个处理速度快且成本较低的分离纯化策略.通过大肠杆菌pET-32a/BL21(DE3)系统高效可溶表达融合蛋白后,首先分析了融合蛋白的表达部位,然后利用融合蛋白热稳定性高的性质通过加热去除不耐热的大分子质量蛋白,同时降低蛋白酶对融合蛋白的影响.离心后溶液通过中空纤维超滤来浓缩融合蛋白,之后进行固定化凝血酶酶切.酶切后的TrxA片段和目的多肽利用其分子质量的差异,使用超滤膜包进行分离,后使用制备反相高效液相对S-thanatin进行精制,并检测其对大肠杆菌ATCC 25922的抗菌活性.结果表明,通过这一简单的纯化工艺,可制备出纯度95％以上的S-thanatin,并具有很好的抗菌活性.
作者：邓学鹏；武朋朋；沈子龙；徐寒梅 刊期： 2012年第06期
建立高效液相色谱法测定血管紧张素的肽含量及有关物质.采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6mmx150mm,5μm),以20 mmol/L磷酸二氢钾(磷酸调节pH值至3.0)为流动相A,乙腈-水(1∶1)为流动相B进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,UV检测器波长为220 nm,进样体积20 μL.结果在该条件下,血管紧张素在0.10～0.90 mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),方法的重复性RSD(％)为0.39,平均回收率为98.5％.该方法简单,准确可靠,专属性好,结果稳定,适用于血管紧张素的质量控制.
作者：霍建丽；耿敏；丁金国；张初樑；黄臻辉；琚姝 刊期： 2012年第06期
肌浆网/内质网钙ATP酶(SERCA)主要位于内质网和肌浆网膜上,是生物体内重要的钙离子转运酶.为进一步探讨肝再生过程中SERCA的表达变化,该研究构建了大鼠2/3肝脏切除模型,用实时荧光定量RT-PCR和测定酶活性的方法研究该酶的两种亚型(SERCA2b和SERCA3)在肝切除后O,1,12,24,48,72,120,168,216 h共9个时间点的表达变化,结果发现肝再生早期两种亚型表达量均下调,但在一定时间内显著应激性上升,分别在12h和48h达到峰值,之后表达量下调至原始水平.同时,酶活性测定结果与基因表达变化相类似,在12～48 h酶活性达到峰值,以上结果表明SERCA参与了肝脏再生过程,可能的途径是调控内质网钙离子,进而影响细胞质的钙震荡和细胞周期.
作者：吴灿；侯国俊；支樑健；王颖；叶波平 刊期： 2012年第06期
为提高组织培养的药用石斛生物碱含量,利用一氧化氮(N0)的供体硝普钠(SNP)处理霍山杂交石斛液体悬浮培养的类原球茎.结果表明,NO对类原球茎生长有一定的抑制作用,但有利于生物碱的积累.NO处理的类原球茎在生物碱积累高峰期45 d前,发生活性氧迸发,过氧化氢抗氧化酶(CAT)活性提高明显.类原球茎继代培养表明,不经NO诱导的S0、S00、S000 3代类原球茎的蛋白质SDS电泳条带和POD同工酶条带基本一致,NO处理使蛋白质条带和POD同工酶条带出现差异性.NO处理后类原球茎生物碱含量的提高不能在继代培养中得到保持.
作者：金青；姚瑶；蔡永萍；林毅；樊洪泓；骆倩 刊期： 2012年第06期
基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶在内毒素休克中都扮演重要角色.前期研究发现,同时抑制这两种酶的多肽抑制剂可保护内毒素休克小鼠.该研究合成多肽文库,筛选出了对基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶有选择性抑制活力的多肽抑制剂.在此基础上,建立了体外检测酶活力的模型,并比较了多肽抑制剂HQ1 ～ HQ4对中性粒细胞颗粒释放物中基质金属蛋白酶-9活力的抑制作用,发现5μmol/L的4种多肽抑制剂对基质金属蛋白酶-9酶活力的抑制率分别是79％,80％,43％和63％.同时建立了内毒素休克模型并考察了几种多肽抑制剂的体内活性,发现注射HQ1和HQ4组小鼠的生存率分别为50％和58.3％,而注射HQ2和HQ3组小鼠生存率仅为16.7％.这些结果证明了在该模型中,抑制基质金属蛋白酶具有更好的保护作用.这些工作使我们对内毒素休克模型的发病机理的认识又深入了一步.
作者：邱郑；胡加亮；吴海春；吴宏坚 刊期： 2012年第06期
葡萄糖激酶(glucokinase,GK)是糖代谢途径中的关键酶,参与糖酵解第1步反应,,催化葡萄糖磷酸化,主要存在于胰腺β细胞和肝细胞,促进胰岛素分泌和葡萄糖代谢,有效控制体内血糖平衡.研究表明,普通糖尿病患者及糖尿病动物模型体内葡萄糖激酶活性明显降低,它可能对糖尿病的发生、发展产生重要影响,提高葡萄糖激酶的活性可能成为治疗糖尿病的一种新途径.
作者：汪建辉；欧瑜 刊期： 2012年第06期
蒽醌是一类广泛存在于药用植物中,具有多种药理活性的化合物,但其肝、肾毒性使它的成药性受到很大限制.为了确保含蒽醌类化合物中药临床应用的安全性和有效性,研究人员通过多种体内外实验对蒽醌类化合物的吸收和代谢进行了大量研究.目前针对此类研究的主要方法有在体肠灌流模型、Caco-2细胞模型、肠道菌群代谢、肝/肠微粒体代谢和血药浓度法等.文章就近5年来应用这些方法对蒽醌类化合物化学结构与转运关系、体内外的吸收代谢机制及其影响因素进行了综述.
作者：李翠丽；马江；李会军 刊期： 2012年第06期
葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose phosphate isomerase,GPI)是一类多功能蛋白质,在糖代谢的糖酵解中催化葡萄糖-6-磷酸和果糖-6-磷酸之间的可逆反应,同时它还具有其他重要生理生化功能.人体GPI的缺乏可导致非球型血红细胞贫血症以及神经功能的紊乱,GPI还具有细胞因子的活性,并与类风湿关节炎的发生有密切关系.此外在渔业研究方面有研究表明,鱼体GPI具有特异抑制鱼体自身肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶活性的功能等.文章GPI的功能、空间结构、酶学性质及克隆表达等方面简要介绍了目前研究的一些情况.
作者：韩龙；杜翠红 刊期： 2012年第06期
生物分子的生物活性是通过分子之间的相互作用来实现的,因此研究生物分子之间的相互作用对于揭示生命现象发生发展的基本机制具有重要的意义.表面等离子共振和等温滴定量热分析技术作为研究生物分子相互作用的先进手段,已被广泛应用于分子生物学及其相关领域.现针对两者在工作原理、技术特点及应用领域等方面做一简要介绍.
作者：孙小婷；靳岚；凌沛学 刊期： 2012年第06期
锌离子是人体的必需微量元素,广泛参与细胞的增殖和分化、核酸与蛋白质的合成以及其它许多重要的生理活动.人体内锌离子缺乏会导致免疫力下降、男性生殖功能减退等问题；然而锌离子过剩,也会引发缺铁性贫血、提高心血管疾病发病率等.因此,维持体内锌离子的动态平衡、对于人体健康有着极其重要的作用.文章就细胞内调控锌离子动态平衡的4大关键成分:金属硫蛋白(MT,Metallothionein)、ZIP/SLC39A家族蛋白(solute-linked carrier 39A,SLC39A)、ZnT/SLC30A家族蛋白(solute-linked carrier 30A,SLC30A)、金属转录因子-1(Metal-response element-binding transcription factor-1)的结构功能及与锌离子动态平衡的关系,以及因锌离子动态平衡失衡而引发的多种疾病进行了总结和归纳.
作者：李柯锦；郑伟娟；练鸿振；胡忻；华子春 刊期： 2012年第06期
KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库作为整合了基因、酶、化合物及代谢网络信息的综合性数据库,在生物信息学研究中提供了非常重要的平台.首先,人工获得实验数据并将其组织为计算格式,构建成一个系统功能知识体系:包括KEGG通路图,BRITE等级分类以及KEGG modules.其次,建立并完善跨物种注释步骤KO,把基因组同分子网络联系起来.文章主要介绍KEGG数据库的新进展以及KEGG在生物信息学中的应用.KEGG特有的图形代谢通路以及KO注释,对于重构代谢网络以及跨物种的代谢网络分析提供了很好的信息,KEGG数据库在生物合成以及药物设计方面将会得到越来越广泛的应用.
作者：李向真；刘子朋；李娟；方慧生 刊期： 2012年第06期
探讨本院2009年1月到2012年2月铜绿假单胞菌的临床分布情况及耐药性特点,为临床合理用药提供依据.选取本院2009年1月到2012年2月分离出的152株铜绿假单胞菌,用法国梅里埃全自动微生物鉴定仪对细菌进行鉴定,并做临床常用抗生素耐药性分析,用whonet 5.4软件进行统计学分析.152株铜绿假单胞菌主要来自于呼吸内科、神经外科和重症医学科等科室,标本主要来源于呼吸道感染的痰液标本以及脓液及其分泌物；结果药敏试验结果显示,亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿卡米星以及美罗培南对铜绿假单胞菌有较好的抗菌活性,耐药率依次为15.4％,17.0％,29.9％和23.8％.临床分离的铜绿假单胞菌主要来源于呼吸道感染的痰液标本以及脓液及其分泌物,耐药现象比较严重,临床应根据体外敏感实验用药.
作者：邹华军；张娟娟 刊期： 2012年第06期
前鼻咽癌治疗普遍应用调强放疗,与传统三维适形放疗相比,调强放疗对摆位精确度要求更高,剂量更加准确.由于摆位误差需要对靶区进行外扩,本研究旨在探索与确定合适的外扩边界,在保护正常组织的前提下保证靶区剂量的均匀性.应用IGRT图像引导获取12例患者的摆位误差,在治疗计划系统中相应移动等中心,在不改变射野分布和权重的情况下,重新计算剂量分布.分析移动等中心后计划与原计划中各靶区与正常组织的剂量变化,确定适当的靶区外扩边界,以保证靶区剂量的均匀以及正常组织受量.当摆位误差为5 mm时,8.3％的GTV D99及16.7％的CTVD95剂量减少大于6％,当摆位误差为2 mm时,GTV D99、CTV D95剂量减少均小于3％.误差越大对剂量分布的影响越明显.靶区CTV较GTV对于摆位误差更为敏感,按照Stroom等推荐的公式2.0∑+0.7σ计算GTV外扩边界PGTV:x =4.33 mm；y =2.80 mm;z=4.18 mm,据此生成的计划可有效避免由摆位误差导致的靶区剂量不足.
作者：詹蔚；徐晓婷；郭建；陈龙；周菊英 刊期： 2012年第06期
观察地佐辛用于骨科胫骨平台骨折术后的镇痛疗效及安全性.骨科胫骨平台骨折患者120例随机均分成以下两组；治疗组(60例)和对照组(60例).治疗组患者术后应用地佐辛静脉镇痛,对照组患者术后应用芬太尼静脉镇痛.采用视觉模拟评分(VAS)、镇静评分(Ramsay)评分标准,比较两组患者的术后镇痛效果和不良反应发生率.治疗组与对照组术后VAS评分、Ramsay评分比较差异无统统计学意义(P＞0.05),不良反应发生率治疗组明显低于对照组,两组间比较有统计学差异(P＜0.05).骨科胫骨平台骨折术后应用地佐辛具有良好的镇痛效果而副作用明显减少,值得胫骨平台骨折患者术后镇痛临床推广.
作者：宋建治；肖少雄；徐礼森 刊期： 2012年第06期
