建立了翻白草及属间两种药用植物黄酮类化合物的HPLC指纹图谱.本文色谱条件为:色谱柱为Atlantis C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(40:60),体积流量为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长:368 nm,进样量20μL.结果检测出10个分离度良好的共有指纹峰,计算了共有峰的相对保留时间和相对峰面积.结果表明该方法可作为科学评价及有效控制中药质量的可行的定性方法.
作者：罗玥佶；李妍；粟敏；王琳；汤婷；曾杰 刊期： 2014年第03期
应用生物信息学分析工具对E.coli O157∶ H7鞭毛蛋白H7抗原(flic 基因)表位进行分析,筛选抗原表位较富集的片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达并化学合成序列.构建重组质粒pGEX-4T-2-flic和pET28a(+)-flic,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导蛋白表达,分别用GST胶亲和层析技术和金属螯合层析技术纯化GST标签和His标签的目的蛋白,获得了高纯度的GST-Flic和His-Flic.使用His-Flic抗原免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测体液免疫效价,兔颈动脉取血并离心制备获得兔抗血清.纯化的两种蛋白和制备的兔血清多抗为研制E.coli O157∶H7检测试剂奠定了基础.
作者：蔡冉；周洁；许桂丽；徐悦玥；潘英；李素芹；李越希 刊期： 2014年第03期
利用Minitab软件进行DOE(Design of experiment,实验设计),考察不同基础培养基、流加物和基础添加物对工程细胞株B2-14(CHO DG44)的细胞密度和抗TNF-α全人抗体表达量的影响.其中基础培养基筛选采用单因素设计实验,流加物和基础添加物的筛选采用全因子分析实验设计.结果表明,经过培养工艺优化,工程细胞株B2-14的大密度由初的3.2×106 cells/mL增加到1.31×107cells/mL,蛋白表达量由72 mg/L增长到421 mg/L,分别增加309％和485％.同时发现,在工程细胞株生长过程中添加必需氨基酸、维生素、葡萄糖和微量元素,给予细胞必要的营养成分,有助于细胞数量的增长和活力的提高,也有利于抗体蛋白表达量的增加.生长因子虽有利于细胞的增长,但对蛋白的表达无影响.而脂类物质及胆固醇可以有效的提高抗体的表达量,但是过多会对细胞的生长有抑制作用.
作者：刘小雅；李文蕾；黄瑞晶；李剑；王旻 刊期： 2014年第03期
羟丙基透明质酸(HHA)是环氧丙烷对透明质酸(HA)的羟基修饰的产物.文章对HHA的制备方法及性质进行了研究,通过比较样品溶液在酶作用下粘度变化情况研究了其抗透明质酸酶降解的特性,并以相近相对分子质量的HA作对照考察了其细胞毒性.结果:建立了碱性条件下的HHA的制备方法,确定了HHA具有明显的抗透明质酸酶降解的特性,与HA相比两者的细胞毒性没有明显区别.
作者：杨桂兰；郭学平；王治敏；臧恒昌；石艳丽 刊期： 2014年第03期
研究松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对同型半胱氨酸(Hcy)所致的血管内皮细胞ECV-304损伤的保护作用及其可能机制.Hcy损伤体外培养ECV-304建立细胞损伤模型,与不同浓度的PDG(0.1～10 g/L)共同培养36 h,检测细胞培养上清MDA、LDH、NO含量,RT-PCR法检测Caveolin-1 mRNA表达,Western blot法检测Caveolin-1的变化.与模型组相比,药物组0.1～10 g/L细胞上清MDA、LDH的含量呈浓度依赖性下降;药物组0.1～10 g/L细胞上清NO含量明显上升,并呈现一定的浓度依赖性.RT-PCR结果显示,与模型组相比,药物组0.1～10 g/L细胞的Caveolin-1 mRNA表达明显下降;用灰度扫描软件处理Western blot结果,药物组0.1～10 g/L细胞的Caveolin-1减少,与模型组比较存在显著差异.PDG拮抗Hcy诱导的血管内皮细胞ECV-304损伤,减少Caveolin-1的表达,这可能是其降血压的作用机制之一.
作者：吴东儿；卞筱泓；许激扬；李江豫；沃龙飞；韩悦 刊期： 2014年第03期
为了建立毛脉酸模悬浮细胞系,研究不同植物激素配比对毛脉酸模愈伤组织性状的影响,研究毛脉酸模悬浮细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化毛脉酸模悬浮细胞培养的条件.结果显示:在2,4-D0.5 mg/L,6-BA 3.0 mg/L,蔗糖30 g/L,培养温度(25±2)℃,光照14 h/d,光照强度1 500 ～2 000 Lx的培养条件下,毛脉酸模愈伤组织呈松散颗粒状,可作为悬浮细胞培养的材料;在初始接种量1g,2,4-D 0.5 mg/L,6-BA2.5 mg/L,蔗糖30 g/L,培养温度(25±2)℃,120 r/min黑暗振荡的培养条件下,可获得悬浮细胞,当培养到24d时细胞鲜重增长量达到大值1.0103 9.结论:应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的毛脉酸模悬浮细胞.
作者：岳赛男；王谦博；刘奂；郭美；王振月 刊期： 2014年第03期
玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)NRRL11379是一种具有环脂肽结构抗生素-达托霉素(Dapto-mycin)的产生菌.建立高效稳定的遗传操作系统是研究该链霉菌各功能基因作用以及构建基因工程菌的基础.实验探索了通过电穿孔、接合转移向玫瑰孢链霉菌中转入外源DNA的可能性.以链霉菌(Streptomyces)噬菌体ΦC31所构建的整合型载体pSET152-dptP为出发质粒,玫瑰孢链霉菌NRRL11379新鲜菌丝体作为受体菌,在不同的电场强度下进行电穿孔实验,结果表明:以玫瑰孢链霉菌NRRL1 1379新鲜菌丝体为受体菌,未获得转化子.以ET12567(PUZ8002,pSET152-dptP)为供体,玫瑰孢链霉菌NRRL11379新鲜菌丝体为受体,选取MS培养基为接合转移培养基,利用属间接合转移将质粒pSET152-dptP转入菌株NRRL11379中.结果表明:当供体大肠杆菌ET12567细胞量和玫瑰孢链霉菌NRRL11379菌丝体量比例为1∶1,MS培养基中MgCl2的浓度为0.01 mol/L,培养20 h后覆盖阿泊拉霉素50 μg/mL以及萘啶酮酸50 μg/mL时,接合转移频率高,可达1.75×10-4.通过PCR验证,质粒pSET152-dptP已整合至玫瑰孢链霉菌NRRL11379菌株的染色体上.确定了玫瑰孢链霉菌属间接合转移的佳条件.
作者：王航；王文轶；吴旻；彭冉；王旻 刊期： 2014年第03期
构建阿达木单抗抗原结合片段(Fragment antigen binding,Fab)表达载体,使其在大肠杆菌内高效共分泌表达,周质空间中获得具有活性的目的蛋白.将带有信号肽的Fab片段重链与轻链克隆于带有双启动子的pETDuet-1载体内,BL21(DE3) Star宿主菌内利用IPTG低温诱导双基因共分泌表达,选用“渗透压冲击法”提取周质蛋白,色谱柱纯化,Western blot分析纯化结果,与纯化的人肿瘤坏死因子(TNF-α)相互作用进行活性分析.SDS-PAGE与Western blot分析在细胞周质中同时存在重链和轻链,大小与预期相符,ELISA试验显示Fab片段与TNF-α结合.结论:得到有活性的人源的阿达木单抗的Fab的可溶性表达产物,为进一步对其进行结构与功能的研究奠定了基础.
作者：范丽君；吕立力；刘煜；陈春麟 刊期： 2014年第03期
抗原结合部位亲和力是其组成氨基酸理化特性、结构特征的集中体现.CDR-H3位于抗体的抗原结合部位中心,构象多变.本研究从人抗体CDR-H3的氨基酸分布序列信息入手,同时选取12个FDA已批准上市的治疗性抗体药物来分析抗体CDR-H3区段的结构特点.结果显示人H3区段高分布频率长度为12,出现概率高的氨基酸为Tyr,Tyr、Trp、Ser、Thr、Gly 5种氨基酸有助于抗原结合部位构象的形成;所选取的抗体药物CDR-H3区段的长度n∈[7,14],Base区域构象均隶属于K构型,β-发夹结构氢键分布变化各异,其中芳香族氨基酸侧链和带电氨基酸分布对抗原结合具有重要促进作用.
作者：刘冬娟；游丽斌；李娟；方慧生 刊期： 2014年第03期
通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法.以0.1 mol/L Tris-HC1、0.1 moL/L NaC1、pH7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm ×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50 μL,检测波长选择280 nm,依据HPLC外标法原理建立CN10含量测定方法,并根据《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》对方法进行相关验证.结果:在该条件下,CN10和人血白蛋白之间有良好的分离度,CN10浓度在0.1～0.6 mg/mL的范围内与其峰面积呈良好的线形关系(R2 =0.998 1),低检出限和低定量限分别0.01 mg/mL和0.04 mg/mL,方法的重复性RSD(％)为0.38,平均回收率为(100.40±2.28)％.用该方法检测CN10冻干制剂中的CN10蛋白含量时,不受人血白蛋白的影响,具有较高的准确性和专属性.
作者：梁凌宇；高雪峰；应莲芳；张轶；杨军；蒋琳 刊期： 2014年第03期
在摇瓶条件下,利用Minitab16软件中的响应面法对酿酒酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基进行了优化.首先通过Plackett-Burman设计方法对影响发酵各因素的效应进行评价.结果表明:葡萄糖、酵母粉、半胱氨酸3个因素对谷胱甘肽产量影响显著,其中葡萄糖、酵母粉呈正效应,半胱氨酸呈负效应,其它因素的影响不显著.利用陡爬坡实验,接近重要因素的优水平,然后应用中心组合设计结合响应面分析确定了重要因素的优水平.优化后的发酵培养基组成为:葡萄糖34.9 g/L、酵母粉12.7 g/L、半胱氨酸0.53 g/L、(NH4)2SO4 7.5 g/L、KH2 PO49 g/L、MgSO4 1.5 g/L、生物素0.1 mg/L.在此条件下进行摇瓶发酵,谷胱甘肽理论产量达到170.58 mg/L.经3批平行试验验证,谷胱甘肽的平均产量为168.72 mg/L,与预测产量接近,比优化前产量(113.43 mg/L)提高了约48.7％.证明用响应面设计方法寻求菌体积累谷胱甘肽的佳培养基组分是可行的.
作者：朱虹；许激扬；卞筱泓；吴东儿；韩林 刊期： 2014年第03期
β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶.该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法.β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反应后通过测量反应液300 nm处的吸光度,可测定反应中生成的胸腺嘧啶的量,从胸腺嘧啶的生成量的多少来判断胸苷磷酸化酶的活性.研究结果表明,在5％菌体浓度、10 mmol/L β-胸苷、0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.9)中,37℃反应20 min,即可准确测定胸苷磷酸化酶的活性.利用上述方法测定胸苷磷酸化酶活性,活性能达80％,高于前人报道的方法所测得的酶活性.其中,乙酰短杆菌来源的胸苷磷酸化酶的表观米氏常数Km为11.9 mmol/L.
作者：冯璐；夏晓敏；邱蔚然；周长林 刊期： 2014年第03期
为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系.从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建真核表达载体pTag-hteTM-SNAP-ETBR,并将其转染至CHO-K1细胞内,加入SNAP-tag荧光底物后,通过荧光显微镜检测发现SNAP-ETBR融合蛋白在细胞中有效表达,使得运用Tag-lite技术进行受体-配体结合检测并发现ETBR激动剂/拮抗剂得以实现,为后期研究奠定基础.
作者：时丽丽；潘晓菲；谭初兵；刘亚晋；徐为人 刊期： 2014年第03期
将脂质体作为模拟生物膜,采用平衡透析法与紫外分光光度法研究附子提取液中乌头碱与脂质体的相互作用,并考察了薄膜分散法、乙醇注入法、缓冲液的pH值以及胆固醇和磷脂的比例对乌头碱与脂质体相互作用的影响.结果显示不同制备方法、脂质体的浓度、环境的pH值都对乌头碱与脂质体的相互作用有一定的影响.脂质体平衡透析法可用于预测有效成分在体内的吸收情况,为其药效物质基础的进一步研究提供依据.
作者：卢杉杉；姜晓燕；葛苗；林贵梅；邵伟 刊期： 2014年第03期
血液中同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)的浓度升高是导致心血管疾病的危险因子,使血管内皮细胞损伤的Hcy浓度高于正常生理浓度数万倍.然而在病理条件下,血管内皮细胞处于高浓度去甲肾上腺素(Norepi-naphrine,NA)环境中,NA将能引起血管内皮细胞氧化损伤.文章将生理浓度的NA和高浓度的Hcy联合应用于体外培养的血管内皮细胞,运用RT-PCR和Western Blot手段,以微囊蛋白-1(Caveolin-1)表达量为指标,研究两者对血管内皮细胞损伤的关系.结果发现,生理浓度的NA对细胞并无明显的损伤作用,当不同浓度Hcy和生理浓度NA联合使用时,对细胞的损伤作用有所增加,Hcy浓度越高时,联合用药的损伤作用越强.深入研究发现,Hcy能够增加细胞微囊蛋白-1 mRNA的转录水平.相反,不同浓度的NA均能够降低细胞Caveolin-1 mRNA的转录水平.
作者：许娟；胡晓川；沃龙飞；韩悦；卞筱泓；许激扬 刊期： 2014年第03期
铁皮石斛是我国常用的名贵中药材,拥有“药中黄金”的美誉,早记载于《神农本草经》,具有2 000多年的应用历史.石斛具有增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤以及养阴生津等疗效.药理学研究表明,石斛中的多糖成分是其主要作用因子,因此,引起了广大研究人员的关注.该文主要就石斛多糖的相关研究进展做一概述.
作者：宋伟；张亚惠；毛碧增 刊期： 2014年第03期
医用软组织粘合剂自问世以来一直备受关注,目前已有多种类型的医用软组织粘合剂上市,主要用于心脏及血管修复、肺修复、软组织修复等医学领域.但是,在其发挥治疗作用的同时,某些不良反应也被报道.因此,对医用软组织粘合剂的进一步研究与改进成为当今研究的热点.文章主要通过检索并归纳国内外相关文献,对医用软组织粘合剂的研究进展及临床应用现状作了综述,分别介绍多种软组织粘合剂的发展历程、基本特点、作用机制及临床应用,以期为医用软组织粘合剂的研究及发展提供有价值的参考.
作者：罗洁；王凤山 刊期： 2014年第03期
近年来,海洋多肽类化合物的生物研究已经提供了大量的药物候选化合物.虽然大部分海洋多肽类化合物只是进入临床前期或者临床早期阶段的研究,但是也有一些多肽像齐考诺肽(Ziconotide)已经上市,还有像普利提环肽(Plitidepsin)即将上市.因此,近年来海洋多肽类化合物引起了较多研究者的关注.文章从海洋多肽类化合物的主要结构类型及其各种生理活性方面对目前国内外海洋多肽类药物的研究现状及其进展进行了综述,为进一步开展海洋活性多肽的研究提供参考.
作者：伊鹏；李英新；张萌萌；王颖；叶波平 刊期： 2014年第03期
活性成分水溶性差是超过40％新药开发失败的主要原因,它不仅会延迟或终止一个重要新药的开发进程,而且使得现有上市产品的剂型改造也变得非常困难.溶解度问题是注射剂中的重要问题之一,在注射用新药开发过程中可以通过不同技术手段进行改善.在解决难溶药物注射剂型问题时,调节pH值、成盐、共溶剂等都是提高难溶药物溶解度的一些常规的重要方法,但每种方法都有其优势和局限性;新技术如纳米悬浮、超临界处理等为难溶药物注射给药系统提供了新的机遇.该综述主要探讨难溶药物注射给药系统的各种增溶技术和方法,以期降低因溶解度问题导致的新化学实体开发成药失败的几率.
作者：汪菊芬；吴旭日；陈依军 刊期： 2014年第03期
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种发病机制不明的肠道慢性炎症性疾病,病变主要累及结肠和直肠,容易反复发作,临床治疗效果不佳,故被列为现代顽疾之一.近年来,多数学者认为UC的发病可能与肠道粘膜免疫紊乱以及肠道菌群失调有关,所以利用肠道共生菌群特别是益生菌调节肠道内稳态治疗溃疡性结肠炎是目前研究热点之一.该文对益生菌治疗溃疡性结肠炎及其作用机制作综述.
作者：方凯；王艺宙；王慧；周长林 刊期： 2014年第03期
口服结肠定位给药系统(Oral colon-specific drug delivery system,OCDDS)是指通过制剂学手段,使药物口服后在胃肠道上段不释放,而到达回盲肠后,由结肠部位某种生理因素触发,药物开始突释或缓释,用于局部或全身治疗的一种给药系统.与传统口服给药系统相比,OCDDS具有靶向性、控制药物释放、实现结肠局部疾病的治疗以及避开肝脏首过效应等优势.OCDDS按作用机制主要分为pH值依赖型、时间依赖型、压力控制型和酶解型等4种给药系统.目前能实现口服结肠定位的剂型主要有微丸、片剂、胶囊、水凝胶和微球等.文章对OC-DDS的触发机制、常用载体材料作了简单探讨,并对这些常见剂型在OCDDS中的应用进行综述,以期为新型OC-DDS的研究和开发提供新的思路.
作者：翟海民；冯玲；于长安；吴后江；王鑫 刊期： 2014年第03期
