目的:原核表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白(rhoptry proteins,ROPs) 18,建立检测和定位虫体ROP18蛋白的方法.方法:运用PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因,克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中诱导表达,经KC1染色切胶纯化重组ROP18蛋白,并制备其兔多克隆抗体.采用蛋白质印迹技术和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测和定位ROP18在弓形虫速殖子体内的表达.结果:成功表达重组ROP18蛋白,并获得其多克隆抗体.经蛋白质印迹技术检测出虫体ROP18特异性条带,IFA技术检测出ROP18分布于虫体棒状体.结论:通过制备多克隆抗体,利用蛋白质印迹技术和IFA技术能检测和定位ROP18蛋白在弓形虫体内表达.
作者：鞠爱萍；吴亮；沈进；李礼；姜旭淦；陈盛霞 刊期： 2013年第03期
目的:建立获取和培养人原代肥大细胞的方法,为探讨肥大细胞的免疫调节作用及其机制奠定基础.方法:用重组人源干细胞因子、IL-6和IL-3刺激CD34+造血干细胞使之分化成肥大细胞；Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选法,分离肠道黏膜肥大细胞.应用免疫荧光染色技术分析所获得的原代肥大细胞表面分子CD117和FcεRⅠ,甲苯胺蓝染色或间接免疫荧光染色检测胞内类胰蛋白酶含量.结果:黏膜肥大细胞及CD34+造血干细胞刺激分化而来的肥大细胞均表达CD117和FcεRⅠ,胞内均含有类胰蛋白酶.结论:这两种方法均可以有效地获得大量纯化的原代肥大细胞,且各有优势,所得细胞适用于肥大细胞在机体免疫调节和病原防御等生理功能的后续研究.
作者：翟荣荣；蒋金凤；张济；丁永斌；王建华；魏继福 刊期： 2013年第03期
目的:建立体外分离培养获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)的方法,并观察其形态、免疫表型、生物学特性.初步探讨其体外成骨过程中出现成脂现象的原因及机制.方法:剖宫产手术获得腹部皮下脂肪,0.15％Ⅰ型胶原酶消化法获得人脂肪间充质干细胞并进行体外培养.行MTT细胞增殖实验绘制增殖曲线,使用流式细胞及细胞免疫荧光技术检测细胞表面抗原,行成骨成脂分化鉴定其分化潜能.通过RT-PCR技术检测成骨成脂过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2 (peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和骨桥蛋白mRNA表达情况.结果:通过分离培养,获得了大量旋涡状生长的人脂肪间充质干细胞.MTT法显示细胞增殖能力强.流式细胞鉴定结果显示,CD29、CD73、CD105、CD166高表达,CD31、CD34、CD45、HLA-DR低表达.细胞免疫荧光结果与之相符.hADSCs在特定诱导条件下,具有成骨成脂分化潜能.在成骨分化过程中同时伴有成脂发生.RT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂诱导组PPARγ-2 mRNA有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,成骨诱导组骨桥蛋白,PPARγ-2 mRNA均有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:建立了一种分离培养hADSCs简单可靠的方法.获得的细胞具有贴壁生长、增殖活性强、干细胞表型以及多向分化等特征.hADSCs体外成骨过程中,三酰甘油的形成对成骨具有一定的促进作用.
作者：闵敏；张雪静；马红；许辉；李遇梅 刊期： 2013年第03期
目的:基于口服免疫耐受原理,建立针对人特异性免疫耐受的人类肿瘤小鼠荷瘤模型.方法:将90只昆明种小鼠随机分为肿瘤模型组、无关肿瘤对照组和空白对照组,每组30只.分别以人肝癌HepG2细胞系、人卵巢癌3AO细胞系和等体积生理盐水连续灌胃7d,然后于背部皮下注射人肝癌HepG2细胞系.观察肿瘤形成情况,测量不同时间段肿瘤组织的大小,并对肿瘤组织作病理切片于光学显微镜下观察.结果:人肝癌HepG2细胞系能在HepG2细胞灌胃小鼠的皮下成活并形成肿瘤,致瘤率可达90％ (27/30)；而生理盐水对照组和无关肿瘤对照组的小鼠均未成瘤.局部组织经病理切片,HE染色,在肿瘤模型组可见肿瘤组织,而无关肿瘤对照组和生理盐水对照组可见明显的肿瘤细胞死亡后的残留痕迹.结论:通过口服肿瘤细胞产生特异性免疫耐受,成功地建立了相应的人肿瘤小鼠模型.
作者：刘霞；成静；范兴文；周小兵；周丹；吴卫疆；华晔；邵启祥 刊期： 2013年第03期
目的:研究有氧运动对衰老模型大鼠骨骼肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:建立衰老大鼠模型,随机分为对照组和2组运动组,运动组分别给予6次/周和3次(隔日)/周的游泳训练,每次运动持续90 min,共训练12周,于末次训练48 h后处死动物.TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡,免疫印迹法检测骨骼肌细胞内Bcl-2、Bax的表达,并计算Bcl-2/Bax的比值.结果:与对照组相比,2组运动组骨骼肌细胞凋亡指数和Bax蛋白表达均显著降低(P均＜0.01),而Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显升高(P均＜0.01)；与6次/周运动组比较,3次/周运动组骨骼肌凋亡指数和Bax表达明显降低(P均＜0.05),而Bcl-2表达和Bcl-2/Bax明显升高(P均＜0.05).结论:有氧运动能优化Bcl-2/Bax的比值,降低骨骼肌细胞凋亡指数,有效减少衰老导致的骨骼肌过度凋亡；且隔日有氧运动效果更佳.
作者：刘宁宁；李明学；金雯 刊期： 2013年第03期
目的:研究银杏酚对体外SMMC-7721肝癌细胞的毒性作用,及对体内荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用.方法:MTT法测定银杏酚对SMMC-7721细胞的抑制作用,计算半数抑制质量浓度IC50.建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,并随机分为模型对照组,环磷酰胺组,银杏酚20、40、80、160 mg/kg组,分别于腹腔注射生理盐水,环磷酰胺,20、40、80、160 mg/kg银杏酚,连续给药7d.于末次给药后24 h,眼球采血后脱颈处死小鼠,剥离瘤体,分别摘取脾脏、胸腺,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数,并作血常规检测.结果:银杏酚作用于SMMC-7721细胞24、48和72 h的半数抑制质量浓度IC50分别为(15.33±1.19)、(12.20±1.08)、(10.88±1.03) mg/L.银杏酚20、40、80、160 mg/kg组的抑瘤率分别为8.96％、39.81％、48.51％和28.36％,除外40 mg/kg组,其余组与环磷酰胺组(42.94％)比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).银杏酚组的胸腺指数较模型对照组均明显降低(P均＜0.05)；银杏酚组的外周血淋巴细胞数明显高于模型对照组与环磷酰胺组(P均＜0.05).结论:银杏酚于体外能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并呈时间和剂量依赖关系；于体内能显著抑制荷H22肝癌小鼠肿瘤生长,其抑瘤作用可能与调节机体的免疫功能有关.
作者：王云飞；杨小明；李月英；李洁；黄炳忠；郭婵元；易楠；刑朝晖 刊期： 2013年第03期
目的:探讨脂多糖(LPS)存在的炎症环境下巨噬细胞株RAW264.7对小鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因表达及迁移能力的影响.方法:采用全骨髓贴壁法分离小鼠骨髓MSCs,与RAW264.7细胞进行Transwell迁移及共培养实验,分为培养液对照组,RAW264.7作用组,LPS作用组及RAW264.7与LPS共作用组.Transwell迁移实验比较各组MSCs的迁移数量,同时qRT-PCR检测各组MSCs表达转化生长因子-β1 (TGF-β1)、白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA水平.结果:LPS刺激巨噬细胞活化,使其高表达IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及MCP-1.RAW264.7作用组MSCs迁移数量多于对照组(P＜0.01).与LPS作用组相比,LPS活化的RAW264.7显著增加MSCs的迁移数量(P＜0.01).qRT-PCR结果显示活化的RAW264.7增加了MSCs的TGF-β1、IL-6和MCP-1 mRNA表达(P＜0.05).结论:炎性条件下巨噬细胞能增强MSCs的迁移能力并改变其细胞因子的表达水平.
作者：高硕；蔡梦洁；毛飞；杨婷婷；张洁；张玲；赵露露；坎吉克孜·阿不来提；钱晖 刊期： 2013年第03期
目的:观察乌头碱对中脑多巴胺能神经元细胞的毒理作用,以了解和预防乌头碱及其衍生物产生的神经毒性作用.方法:从孕14 d的小鼠中取出胎鼠中脑,并分离出多巴胺能神经元细胞,于5％ C02,37℃和100％湿度条件培养,培养第10天加入不同浓度的乌头碱(0.1,0.5,l,5,10,50和100 μmol/L)作用48 h,于第12天免疫组化染色.选取神经元细胞数、神经元树突的长度和数量作为观察指标,并进行分析.结果:乌头碱作用48 h后,不同浓度的乌头碱(0.5 ～ 100 μmol/L)对神经细胞生长均有明显的抑制作用,并表现出浓度依赖性神经毒性作用,高浓度乌头碱(10 ～ 100 μmol/L)的抑制强度高于低浓度组(0.5～5 μmol/L).结论:体外实验证实了乌头碱对中脑多巴胺能神经元有神经毒性作用.
作者：严妍；杨茂；Wolf-dieter Rausch；王喜军 刊期： 2013年第03期
目的:探讨miR-375在糖尿病心肌病心肌纤维化发生发展过程中的作用机制.方法:原代培养小鼠(C57BL/6)心肌成纤维细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定细胞纯度.将培养的第2～3代心肌成纤维细胞随机分成对照组和高糖组,高糖组在处理6,12,24 h后,采用实时定量PCR方法检测各组细胞中miR-375的差异性表达.miR-375抑制剂瞬时转染心肌成纤维细胞,实时定量PCR检测转染效率.免疫组织化学染色检测心肌成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:原代分离培养的第2代心肌成纤维细胞纯度可达90％；心肌成纤维细胞经高糖处理6,12,24 h后其miR-375的表达有增加趋势；抑制miR-375的表达后,高糖处理的心肌成纤维细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达显著降低.结论:miR-375可能在糖尿病心肌病心肌纤维化中发挥重要的作用.
作者：黄燕；张赢予；王好；周艳芳；张国辉；芮涛 刊期： 2013年第03期
目的:研究S100B在多柔比星诱导心肌细胞损伤中的表达变化及作用.方法:将体外培养的心肌细胞随机分为对照组,多柔比星损伤组(DOX组),多柔比星+阴性siRNA对照组(DNC组),DOX+ S100B-siRNA组(DSB组).用脂质体RNAi-MAX将S100B-siRNA转染到心肌细胞48 h后,多柔比星(2.0μmol/L)处理2h.分别采用四甲基噻唑蓝(MTT法)、流式细胞术、蛋白质印迹法检测细胞存活率、凋亡率、S100B蛋白变化.结果:MTT测定显示,DNC组与DOX组存活率相比差异无统计学意义(P＞0.05),DSB组与DOX组相比,其存活率增加(P＜0.05).流式细胞术分析表明,DOX组与DNC组凋亡率相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；与DOX组相比,DSB组凋亡率降低(P＜0.01).蛋白质印迹检测S100B蛋白结果显示,DOX组与DNC组相比,差异无统计学意义(P ＞0.05)；DSB组与DOX组相比,S100B蛋白表达下降(P＜0.01).结论:S100B在多柔比星诱导损伤的心肌细胞中表达明显增加并且可能促进心肌细胞凋亡.
作者：韩尧辉；潘皓；毛俊倩；周艳芳；张赢予；王好；鲍永辉；赵龙；刘玲玲 刊期： 2013年第03期
目的:研究纳米银抗3型副流感病毒(parainfluenza virus 3,PIV3)的作用,并初步探讨其作用机制.方法:采用细胞培养技术、MTT法和免疫荧光法,分析纳米银对PIV3感染狗肾细胞(MDCK)的预防作用、治疗作用以及对PIV3的直接灭活作用；通过神经氨酸酶活性抑制实验,观察纳米银对PIV3神经氨酸酶活性的影响；利用透射电镜(TEM)负染技术观察纳米银对病毒形态结构的直接影响；小鼠体内实验,观察纳米银对鼠肺组织病理变化的影响.结果:纳米银作用后(治疗给药组、预防给药组和直接灭活组)MDCK存活率分别为93.05％,90.32％,94.81％,与病毒对照组(25.50％)相比,差异均有统计学意义(P均＜0.01)；与病毒对照组形成的强特异性荧光相比,纳米银作用后(治疗给药组、预防给药组和直接灭活组)MDCK特异性黄绿色荧光明显减少；纳米银作用组对PIV3神经氨酸酶活性的抑制率均高于80％,而病毒对照组和溶剂作用组的抑制率低于20％；纳米银对PIV3形态结构的破坏作用随着时间的延长而增加；纳米银治疗组的肺组织与正常肺组织比较相近,病变较轻,而病毒对照组的肺组织出现水肿,炎性浸润,形态结构消失.结论:纳米银对PIV3具有明显的抑制作用,其机制可能与纳米银破坏病毒粒子结构及抑制神经氨酸酶活性有关.
作者：尹俭俭；李秀景；郑丛龙 刊期： 2013年第03期
目的:观察Forsus推杆式矫治器在治疗骨性安氏Ⅱ类错(牙合)伴中线不正中的临床应用效果.方法:随机选择16例恒牙列初期,安氏Ⅱ类错(牙合)伴中线不正患者,采用Forsus推杆式矫治器辅助MBT直丝弓矫治技术进行矫治,并对治疗前后模型及头颅侧位片测量结果进行统计学分析.结果:Forsus平均使用9.2月,前牙覆(牙合)、覆盖明显减小,下颌骨可见明显生长,磨牙关系调整为中性,中线不正得到纠正,矫治效果理想,疗程显著缩短.结论:Forsus配合MBT矫治技术不仅可以矫治骨性安氏Ⅱ类错(牙合),促进下颌骨生长,而且还能有效纠正中线不正.
作者：李将；佘鹏；钱良玉；巢华军；孔繁芝 刊期： 2013年第03期
目的:利用近红外光谱技术建立一种快速鉴别不同厂家生产的色甘酸钠滴眼液方法.方法:用固体光纤探头采集了9个厂家53批色甘酸钠滴眼液的近红外漫反射光谱,采用化学计量学方法对光谱进行预处理,建立色甘酸钠滴眼液的一致性检验模型,并进行模型验证.结果:将经一阶导数+矢量归一化法预处理所建立的模型用于识别各厂家生产的色甘酸钠滴眼液,其准确性和专属性均良好.结论:所建模型可用于色甘酸钠滴眼液的快速鉴别,为鉴别色甘酸钠滴眼液提供了一条准确、简单、有效的途径.
作者：尚如霞；邵吉；陈黎 刊期： 2013年第03期
目的:克隆表达伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY并制备多克隆抗体.方法:通过PCR技术从伤寒沙门菌基因组DNA中获得伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY,再将此基因片段克隆到表达载体pET22b(+)上,并转入大肠埃希菌JM109进行表达；Ni柱纯化后的OsmY蛋白作为抗原免疫家兔,并获得多克隆抗体.结果:成功制备伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY的蛋白表达菌株,并获得了纯化的OsmY蛋白,成功制备兔抗OsmY的多克隆抗体.结论:成功克隆表达了伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY,并获得了多克隆抗体,有助于今后研究OsmY在伤寒沙门菌高渗应激中的作用.
作者：翁晓琴；张红；詹莉芳；张晓磊；生秀梅；徐顺高；黄新祥 刊期： 2013年第03期
目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori CagL蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并鉴定其特性.方法:用原核表达并纯化的CagL融合蛋白免疫BALB/c小鼠,6周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株；ELISA法鉴定mAb的亚型；间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液效价及其相对亲和力；相加ELISA法分析mAb的识别表位；蛋白质印迹法鉴定mAb特异性；冻溶法检测杂交瘤细胞株的稳定性.结果:获得3株能稳定分泌抗CagL的杂交瘤细胞株,其中两株单抗属IgM类,一株单抗属IgG2a类,轻链型别均为κ型；杂交瘤细胞培养上清效价在1∶64～1∶128之间,腹腔积液的效价均达1∶16000以上；相对亲和力较高；3株mAb识别3种不同的抗原表位；3株mAb都能与融合蛋白反应,其中两株能与H.pylori全菌蛋白发生特异性反应；杂交瘤细胞经冻存复苏后,体外传代仍能稳定分泌mAb.结论:成功制备了抗H.pylori CagL蛋白的单克隆抗体,为深入研究幽门螺杆菌CagL蛋白的功能和Ⅳ型分泌系统的致病机制奠定了基础.
作者：朱虹；陈珵；凌峰；邵晨；余敏；邵世和 刊期： 2013年第03期
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病发病的主要病理基础.典型的AS病变表现为大、中动脉某些部位内膜局限性增厚,其中有大量脂质沉积、单核细胞和淋巴细胞浸润、血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)凋亡异常、中膜平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)迁移至内膜并大量增生,同时伴有胶原、蛋白聚糖等多种细胞外基质积聚,逐渐形成深部富含脂质和坏死成分的脂核以及突出于血管腔面的VSMC纤维帽.随着病程的进展,斑块破裂导致血栓形成、伴有病灶破裂或溃疡形成、钙化等继发性改变.这些病变形成的分子机制十分复杂,虽有脂质浸润学说、炎症学说、单克隆学说等许多学说对其发生发展过程进行了解释,但迄今为止,仍有许多尚未认识的问题.Wallace等[1]于1991年首次提出,线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)损伤与冠心病有关.从那以后,越来越多的研究开始关注DNA损伤与AS之间的关系[2-3].
作者：达静静；钱民章 刊期： 2013年第03期
目的:制备靶向抗癌药物新剂型—长循环磁性盐酸表柔比星脂质体.方法:用沉淀法制备纳米磁性Fe3O4粒子,以聚乙二醇单甲醚(mPEG)为修饰剂,采用乙醇注入-硫酸铵梯度法制备盐酸表柔比星纳米长循环磁性脂质体；用透射电镜、红外光谱、外加磁场等对制备的脂质体进行表征；采用葡聚糖凝胶柱(Sephadex)-紫外法测定脂质体中盐酸表柔比星的包封率,并分别观察水浴孵化时间、卵磷脂与胆固醇的质量比、盐酸表柔比星用量、mPEG用量和不同溶剂等因素对盐酸表柔比星包封率的影响.结果:制备的纳米磁性Fe3O4为近球形颗粒,平均粒径约20 nm,以此磁性材料为磁核所制成的mPEG化盐酸表柔比星磁性脂质体颗粒较圆,平均粒径约50 nm,药物包封率达到57.5％,具有良好的磁响应性、体外稳定性和缓释效果.结论:此法制备的脂质体包封率高,重现性好,简便易行.
作者：方瑜；陈进；吴询燊；吴修艮；姜德立；陈敏；谢吉民 刊期： 2013年第03期
目的:克服传统小分子卟啉药物的自淬灭,获得含卟啉药物核的靶向型高分子纳米微粒.方法:通过开环聚合和酯化反应合成了卟啉为核的聚己内酯-嵌段-聚乙二醇(SPPCL-b-PEO)共聚物,并利用凝胶渗透色谱、核磁共振谱、红外光谱、紫外可见光谱对其进行了表征.荧光探针法分析SPPCL-b-PEO的光动态效率.透射电镜观察SPPCL-b-PEO的自组装行为.紫外可见光谱分析SPPCL-b-PEO的载药及释放性能.结果:共聚物中大分子聚己内酯-聚乙二醇(PCL-PEO)骨架能有效延缓卟啉内核的自淬灭.随着共聚物中亲水聚己内酯(PCL)链段质量分数的减小,自组装胶束的形态由球状变为蠕虫状.负载多柔比星的SPPCL-b-PEO纳米微球具有较高的载药量和包封率,且体外释放具有pH依赖性.结论:潜在的卟啉核以及对pH 5 ～6的肿瘤组织靶向性使SPPCL-b-PEO满足抗肿瘤光动力治疗和肿瘤靶向给药系统的要求.
作者：黄雅菲；戈延茹；戚雪勇；戴晓晖 刊期： 2013年第03期
目的:观察他克莫司联合小剂量激素治疗IgA肾病的临床疗效.方法:将25例IgA肾病患者随机分为2组,单纯激素组(n=14)和联合治疗组(n=11)；前者给予单纯激素治疗,后者给予他克莫司联合小剂量激素治疗.分别监测治疗前及治疗后10 d,1,2,4,6个月的血压、24 h尿蛋白量、血常规、肝功能、肾功能、不良反应以及他克莫司的血药浓度变化等,维持他克莫司血药浓度为3～5 μg/L.结果:联合治疗组在起效时间、完全缓解率等方面均优于单纯激素治疗组；比较两组血压、血肌酐、血糖等,差异无统计学意义.在治疗各个阶段他克莫司血药浓度为3.76～4.35 μg/L,呈平稳波动.结论:他克莫司的血药浓度控制在3.76～ 4.35 μg/L时,联合小剂量激素治疗IgA肾病起效快、临床缓解率高.
作者：张俊贤；钱建忠 刊期： 2013年第03期
目的:分析上海市宝山区民工子女乙型肝炎病毒(HBV)传播的相关危险因素,为进一步开展民工子女HBV感染的防治工作提供科学依据.方法:采用统一编制的调查表对宝山区民工子女HBV感染进行流行病学调查,对问卷调查结果做HBV感染危险因素的单因素和多因素Logistic回归分析.结果:宝山区民工子女HBV总感染率为3.0％,主要危险因素有3个,分别是母婴传播、家庭乙型肝炎病史和乙型肝炎疫苗接种.结论:加强对民工及子女乙型肝炎相关知识的健康教育,采取提前免疫预防、培养卫生的生活习惯是防止乙型肝炎传播的关键.
作者：朱一冰；殷建华；吉伟；刘华；李光萍；周彦平 刊期： 2013年第03期
