目的:运用磁共振氢质子波谱(1 H-MRS )技术对多巴胺激动剂喹吡罗强迫症模型大鼠的海马、额叶组织代谢物进行动态定量分析。方法:将40只行为学评分相近的SD大鼠随机分成对照组(10只)及喹吡罗组(30只),喹吡罗组大鼠每周进行2次喹吡罗颈部皮下注射,对照组给予同等剂量的生理盐水颈部皮下注射,共给药10次;每次给药后对每只大鼠进行3.0 T超高场强MRI扫描及磁共振质子波谱检测,检测指标包括N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、肌酸(Cr)、胆碱复合物(Cho)及肌醇(MI),分别计算NAA、Cho、MI与Cr的比值。结果:①与对照组比较,喹吡罗组大鼠双侧海马区NAA/Cr自建模第10天起明显减低,自第24天起明显升高,P均<0.05;双侧额叶区NAA/Cr从第10天开始较对照组明显升高(P<0.05),第21-34天维持在第21天的水平左右。②喹吡罗组大鼠双侧额叶区Cho/Cr值自第21天起较对照组明显升高(P<0.05);而海马区Cho/Cr与对照组比较未见明显变化(P>0.05)。③喹吡罗组大鼠双侧海马区MI/Cr值从第7天开始较对照组明显减低(P<0.05),第21-34天维持在第21天水平左右;双侧额叶区MI/Cr值较对照组未见显著变化(P>0.05)。结论:喹吡罗组大鼠脑内多个代谢物指标存在异常,且部分呈现一定的规律性。
作者:许晓杰;卢辉群;叶波;周玮;叶向阳;蔡杭美 刊期: 2015年第04期
目的:探讨解整合素金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17)在人胰腺癌细胞株中的表达及其对细胞增殖迁移的影响。方法:利用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测3种人胰腺癌细胞株内ADAM17 mRNA和蛋白的表达水平。构建可诱导表达ADAM17-shRNA的慢病毒载体,转染人胰腺癌细胞株,并筛选出稳定转染的克隆细胞株。在不同浓度(0,30μg/mL)的多西环素诱导ADAM17-shRNA表达后,通过CCK-8法和细胞划痕实验检测人胰腺癌细胞的体外增殖、迁移能力。结果:ADAM17 mRNA及蛋白在人胰腺癌细胞株PANC1、SW1990和Patu8988中均有表达。与未诱导表达ADAM17-shRNA的对照组相比,诱导表达特异性ADAM17-shRNA后,细胞AD-AM17蛋白表达和体外增殖、迁移能力均受到明显抑制(均P<0.05)。结论:ADAM17在人胰腺癌细胞中高表达,在其增殖、迁移过程中可能发挥重要作用。
作者:吴衡 刊期: 2015年第04期
目的:构建含有Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因验证MicroR-NA195与其潜在靶基因Smad7的靶向关系。方法:PCR扩增出Smad7基因3′-UTR区片段,以此构建含3′-UTR的荧光素酶报告基因载体(wild type,WT);将miRNA-195与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性;构建含Smad7基因3′-UTR突变体(mutant,Mut)的荧光素酶报告基因质粒,检测荧光素酶活性变化。结果:测序结果表明,含有Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确;荧光素酶活性实验表明,与对照组相比,miRNA-195可使含Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40%左右;而定点突变Smad7基因3′-UTR的荧光素酶报告重组子荧光活性未有明显变化。结论:成功构建了Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体,而miRNA-195可以直接作用于Smad7基因3′-UTR区,抑制其荧光素酶活性。
作者:孔彪;沈冬丽;芮涛;张国辉 刊期: 2015年第04期
目的:检测哮喘小鼠肺组织中Nuocytes相关指标和GITR-GITRL的表达,探讨哮喘时Th2极化微环境的改变。方法:选择8只Balb/c小鼠,随机分为2组,模型组于第1天,第11天用OVA致敏,第22至26天用2%OVA溶液雾化激发,对照组用PBS处理;采用流式细胞术检测小鼠肺组织内GITR表达和Nuocytes细胞数量;qRT-PCR法检测Foxp3、RORα、ICOS、ST2、IL-5、IL-13和GITR及其配体GITRL的mRNA表达水平;对GITR-GITRL和Nuocytes及其相关分子的表达水平进行相关性分析。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺组织中Nuocytes细胞数和GITR表达均升高,且GITRL、Foxp3、RORα、ICOS、ST2以及IL-5和IL-13 mRNA表达水平均明显上调;GITR与RORα和ST2、IL-5、IL-13的表达水平均呈正相关。结论:哮喘小鼠肺组织中Nuocytes和GITR-GITRL表达增高,提示哮喘时GITR-GITRL上调的T细胞免疫应答可能与Th2主导的免疫失衡和Nuocytes极化相关。
作者:张梦莹;徐芸芸;吴静;张盼;张淡宜;彭静静;齐晨;纪晓昀;夏圣;苏兆亮;王胜军;许化溪 刊期: 2015年第04期
目的:研究miRNA-145(miR-145)抑制肺癌A549细胞增殖活性的机制。方法:应用生物信息学方法预测Sp1基因3′-UTR区与miR-145的结合位点并通过荧光素酶报告基因法进行验证;转染miRNA-145拟似物和阻遏物到A549细胞,实时荧光定量PCR法检测细胞内miR-145含量,蛋白质印迹法检测细胞中Sp1蛋白含量;同时采用MTT法检测转染后24,48和72 h A549细胞的增殖活性。结果:荧光素酶报告基因系统验证结果表明,成功预测了miR-145与人Sp1基因3′-UTR区的结合位点。与单独转染组比较,miR-145拟似物和miR-145阻遏物与野生型荧光素酶报告基因共转染可以明显抑制或增强荧光素酶活性(P<0.05)。转染miR-145拟似物和阻遏物能明显抑制或者促进A549细胞内Sp1蛋白的表达(P均<0.05)。实时荧光定量检测结果表明,转染后48 h,与转染对照组比较,拟似物组细胞内miR-145含量明显上升,而阻遏组细胞内miR-145含量明显下降(P均<0.05),阴性对照转染组和转染对照组miR-145相对含量间的差异无统计学意义(P>0.05)。细胞活性检测结果表明,转染72 h后,拟似物组细胞增殖活性明显降低,而阻遏组细胞活性明显增高(P均<0.05)。结论:miR-145通过抑制Sp1基因表达,明显抑制A549细胞的增殖活性。
作者:王丹 刊期: 2015年第04期
目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,PCR-RFLP )法和直接测序法对 GITRL SNP-rs2236876A/G进行分型并比较。结果:PCR-RLFP法分型结果直接通过电泳图可见,适合少量的实验对象;Taqman-MGB探针法通过不同的荧光区分不同的基因型,适合大量的实验对象;直接测序法交由测序公司测定,样本数量浮动范围较大,费用较高。结论:Taqman-MGB探针法适用于GITRL基因rs2236876A/G基因分型,PCR-RFLP法适用于基因分型结果的验证,直接测序法适用于鉴定有争议的PCR-RFLP法的验证结果。
作者:吴晶晶;仝佳;陈娟;袁靖;田洁;汤新逸;王胜军 刊期: 2015年第04期
目的:研究邻苯二甲酸二辛酯(DOP)和砷(As)联合暴露对小鼠的神经毒性及其初步作用机制。方法:将40只清洁级雄性3周龄ICR小鼠随机分为4组,即空白对照组、DOP组(1000 mg/kg,灌胃)、As组(10 mg/L,饮用)和DOP+As组(DOP 1000 mg/kg,As 10 mg/L)。各组暴露8周后,采用Morris水迷宫实验测试小鼠学习记忆能力,原子吸收法检测脑组织As含量,采用蛋白质印迹法检测小鼠海马组织中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达,采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、一氧化氮合酶(NOS)活性以及丙二醛含量。结果:与空白对照组比较,各暴露组小鼠逃避潜伏期均明显升高,平均穿越平台的次数明显减少(P<0.05),小鼠脑组织As含量显著增加(P<0.05),脑SOD和 AChE 活性显著降低,NOS 活性和丙二醛含量明显升高(P<0.05);海马组织 Bax和Caspase-3蛋白表达量明显升高,Bcl-2蛋白表达量明显减少(P<0.05),Bax/Bcl-2值显著提高。结论:As和DOP均可引起机体氧化损伤,导致细胞凋亡,从而产生神经毒性;而两者联合暴露毒性复杂,协同作用、拮抗作用和无交互作用并存,其联合作用的机制有待进一步研究。
作者:吴雪山;赵婷;茆广华;吴向阳;周兆祥;邹艳敏;邹烨;Samuel Jerry Cobbina;刘红阳;仰榴青 刊期: 2015年第04期
目的:探讨小鼠髓系树突状细胞(BMDC)上HVEM与T细胞上BTLA相互作用对T细胞活化的影响。方法:C57BL/6小鼠的BMDC与T细胞混合培养,HVEM抗体封闭BMDC上的HVEM后,采用MTT法检测T细胞的活化增殖,ELISA试剂盒检测IL-2的分泌。结果:混合培养的启动和早期(0~48 h)、中晚期(48~96 h)以及全程(0~96 h),加入HVEM抗体实验组的T细胞增殖效应均明显高于对照组(P<0.05),同时CD3+T细胞组和CD4+T细胞组IL-2的分泌明显高于对照组(P<0.05)。结论:BTLA-HVEM相互作用产生的负性信号对T细胞的活化起抑制作用,特别是在BMDC与T细胞混合培养的启动和早期(0~48 h),BTLA负性信号就有抑制T细胞活化的作用,有别于传统的负反馈调节抑制,提示T细胞的活化可能存在多种负性调节模式。
作者:王芸芸;蒋玉平;张标;顾宗江 刊期: 2015年第04期
目的:探讨尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌PANC-1细胞系侵袭转移的影响。方法:用荧光定量PCR法检测4种胰腺癌细胞系中UCA1的表达水平,选取PANC-1细胞系,将其随机分为对照组和实验组,对照组细胞转染空载Vector,实验组细胞转染UCA1表达质粒,比较两组细胞UCA1表达水平;Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测两组细胞迁移和侵袭能力;蛋白质印迹检测两组细胞MMP14、MMP2和MMP9蛋白表达。结果:UCA1差异性表达于4种胰腺癌细胞系中;与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01),细胞中MMP14、MMP2和MMP9的蛋白表达水平均明显增加(P<0.01)。结论:上调UCA1促进胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭转移。
作者:赵义;张尤历;张行行;王国英;龚爱华;刘鑫;徐岷 刊期: 2015年第04期
目的:探讨高血压前期左室舒张功能改变与动脉硬化的相关性。方法:收集我院门诊体检人群中未经治疗的高血压前期患者40例为观察组、正常血压者40例为对照组。通过超声心动图评估左室舒张功能并测量主动脉内径评估主动脉弹性参数,测量高敏C反应蛋白评估血管炎症反应程度。结果:与对照组相比,观察组舒张早期二尖瓣血流速度峰值(E)/舒张晚期二尖瓣血流速度峰值(A)比值降低,舒张期减速时间及等容舒张时间延长;收缩末期主动脉内径、舒张末期主动脉内径和平均动脉僵硬指数增加而收缩舒张期主动脉内径变化降低,说明平均主动脉弹性和动脉应变度降低;高敏C反应蛋白增加。多元回归分析显示,在校正年龄、左心室质量指数和平均血压的影响后, E/A比值与高敏C反应蛋白(β=0.002,P=0.019)、动脉僵硬指数(β=-0.128,P=0.028)有显著相关性。结论:高血压前期左心室舒张功能下降的同时动脉硬化已开始,并且两者呈显著相关。
作者:葛青;袁伟;周建英;王中群;严金川 刊期: 2015年第04期
目的:检测桥本甲状腺炎(HT)患者血浆IL-23和IL-17的水平,探讨其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELASA)检测61例HT患者和37名健康对照者血浆IL-23和IL-17水平并分析二者相关性,同时分析IL-23与自身抗体的相关性。结果:HT患者血浆IL-23和IL-17水平明显高于健康对照者(P<0.01),两者存在显著正相关(r=0.4659,P=0.0002);甲状腺功能减低的HT患者血浆中IL-23水平与其血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb,r=0.3929,P=0.0121)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb,r=0.3347,P=0.0348)水平存在正相关,而甲状腺功能正常的HT患者血浆中IL-23水平与其血清TGAb(r=0.1554,P=0.5011)、TPOAb(r=-0.1949,P=0.3953)水平无明显相关性。结论:IL-23在桥本甲状腺炎发病中起重要作用。
作者:柳迎昭;彭辉勇;王丽;吴晨光;王胜军 刊期: 2015年第04期
目的:探讨中晚期(Ⅱb以上)宫颈癌容积旋转调强放疗(volume of rotating intensity-modulated radiotherapy, VMRT)与常规盆腔4野放疗的剂量学差异,比较近期临床疗效及急性毒副反应。方法:对32例中晚期宫颈癌初诊患者进行CT模拟定位,所有患者均设计VMRT和4野两种放疗计划,评估并对比靶区及危及器官的剂量。根据患者意愿分为VMRT组(n=15)及4野放疗组(n=17),分别采用VMRT (50 Gy/28 f)或用4野放疗(45~50 Gy/25~28 f),结合腔内放疗并同步顺铂(40 mg/m2静滴,每周1次,共6次)化疗。比较近期疗效及急性毒副反应。结果:VMRT计划中计划靶区体积(PTV)的靶区均匀性和适形性均优于常规4野放疗计划(P<0.05),VMRT计划中膀胱、小肠以及直肠Dmean、D50、V40、V30均明显低于4野放疗计划(P均<0.05)。VMRT组与4野放疗组完全缓解率分别为86.7%(13例)及82.4%(14例,P>0.05)。VMRT组放射性肠炎、放射性膀胱炎的发生率明显低于4野放疗组(P<0.05),两组均出现不同程度骨髓抑制,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:VMRT计划在剂量学上显示了保护危及器官的优势,与4野放疗的近期疗效相当,但能明显降低急性毒副反应的发生率,推荐宫颈癌患者外照射行VMRT。
作者:王承伟;冯志俊;徐惠;许刚;薛辉;张良 刊期: 2015年第04期
目的:研究首发单相重度抑郁症患者神经环路中神经细胞的葡萄糖代谢水平。方法:选取30例健康受试者及30例首发单相重度抑郁症患者,每位受试者按0.2 mCi /kg静脉注射18 F-FDG,PET-CT检测神经环路各脑区(包括海马、丘脑、额叶及扣带回)的高标准摄取值(SUVmax)值。结果:与对照组相比,首发单相重度抑郁症患者双侧海马、丘脑、额叶及扣带回的SUV max均明显减低(P<0.001或P<0.05),其中双侧丘脑SUVmax在神经环路脑区中减低明显。结论:首发单相重度抑郁症患者神经环路中的神经细胞受损,主要体现在神经细胞对能量的摄取利用上,丘脑尤为明显。
作者:周群;李月峰;朱彦 刊期: 2015年第04期
目的:通过彩色多普勒超声检测原发性高血压(essential hypertension,EH)患者颈动脉血管形态学及血流动力学相关指标,探究EH与颈动脉硬化(carotid atherosclerosis,CAS)的关系。方法:选取于我院就诊的48例高血压患者为观察组,并与同期62例健康体检者进行对照。多普勒超声检查两组研究对象的颈动脉内径(D)、内中膜厚度(IMT)、直径狭窄率(D′)、收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、PSV/EDV、阻力指数、搏动指数,计算大剪切率(SR)和两组患者斑块检出率。利用SPSS 19.0软件包对上述数据进行统计分析。结果:观察组患者的D、IMT、D′、PSV/EDV、阻力指数、搏动指数均明显高于对照组,PSV、EDV、SR明显低于对照组,同时观察组较对照组斑块检出率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:原发性高血压易影响颈动脉血管形态和血流动力学,是颈动脉硬化的重要危险因素。在颈动脉硬化进程中,高血压通过高、低剪切力的协同作用发挥效应。
作者:王菁哲;余转;魏静;张婧;薛玉;陈宝定 刊期: 2015年第04期
目的:检测2型糖尿病患者血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,并探讨其与心脏结构和功能之间的关系。方法:2型糖尿病患者70例作为研究组,同期50例健康体检者作为对照组,ELISA法检测血浆TGF-β1水平,利用M型超声心动图测定心脏各结构指标;脉冲多普勒技术检测二尖瓣口血流频谱,组织多普勒成像检测二尖瓣环运动频谱。比较两组各指标间差异并分析TGF-β1与各指标的相关性。结果:2型糖尿病组患者左房内径(LAD)、室间隔舒张末期厚度(IVSTd)、左室后壁舒张期厚度(LVPWTd)均比对照组患者明显增厚(P<0.01);左室质量(LVM)及左室质量指数(LVMI)明显高于对照组(P<0.01);E 峰及 E′较对照组明显降低(P<0.01),E/E′较对照组升高(P<0.01)。2型糖尿病组血浆TGF-β1和BNP 水平均较对照组明显升高(P<0.01)。TGF-β1浓度与LVM独立相关(β=0.219,95%CI:0.012~0.158,P=0.023)。结论:2型糖尿病患者体内血浆TGF-β1水平明显升高,可作为心室重构的预测因子,为早期诊断糖尿病心肌病提供依据。
作者:李晓丽;刘玲玲;赵龙;孔彪;沈冬丽;张国辉 刊期: 2015年第04期
目的:探讨冠心病及其危险因素与血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平的关系。方法:测定92例冠心病患者和61例对照组的血浆Lp-PLA2、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平并进行比较;同时调查年龄、性别、高血压史、糖尿病史、高脂血症史、吸烟史等危险因素,分析它们与Lp-PLA2的关系。结果:与对照组相比,冠心病患者血浆Lp-PLA2显著增高(P<0.01);男性及高脂血症冠心病患者的Lp-PLA2明显高于女性和无高脂血症冠心病患者(P均<0.05);相关分析显示,血浆Lp-PLA2水平与总胆固醇、LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关,而与年龄、高血压、糖尿病、吸烟及三酰甘油无关;多元回归分析显示,调整其他危险因素后,Lp-PLA2仍与冠心病发病独立相关。结论:冠心病患者的血浆Lp-PLA2水平显著增高,是冠心病的独立危险因子。
作者:陈玲玲;严士荣;杨波 刊期: 2015年第04期
目的:评估输卵管超声造影的耐受性及安全性。方法:收集接受输卵管造影检查的不孕症患者100例,其中输卵管超声造影50例,X线输卵管造影50例,采用视觉模拟评分法(VAS)评估患者的术中疼痛程度,并随访术后常见不良反应及持续时间。结果:输卵管超声造影患者疼痛平均评分为3.84±1.68,明显低于X线输卵管造影患者(4.81±1.62,P<0.05);输卵管超声造影患者术后疼痛平均持续时间为(1.00±0.12)d,明显低于X线输卵管造影患者[(2.00±0.33)d,P<0.05];两组阴道出血平均持续时间分别为(3.00±1.30)d和(3.00±0.23)d,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:输卵管超声造影较X线输卵管造影疼痛程度低,耐受性好,术后不良反应持续时间短,易被患者接受,是不孕症患者首选的检查方法。
作者:张婧;薛玉;单秀红 刊期: 2015年第04期
目的:观察右美托咪定联合利多卡因对芬太尼全麻诱导期诱发呛咳反应的影响。方法:选择240例ASAⅠ-Ⅱ级择期行全麻手术患者,随机分为4组(n=60),对照组给予生理盐水0.15 mL/kg+生理盐水0.05 mL/kg;右美托咪定组给予右美托咪定0.5μg/kg+生理盐水0.05 mL/kg;利多卡因组给予利多卡因0.5 mg/kg+生理盐水0.05 mL/kg;右美托咪定+利多卡因组给予右美托咪定0.5μg/kg+利多卡因0.5 mg/kg。麻醉诱导时先于2 s内快速静脉注射芬太尼3μg/kg,2 min后给予其他药物行全麻诱导,记录芬太尼注射后1 min内呛咳反应的发生率、呛咳程度及发生时间;记录给药期间低血压及严重心动过缓的发生情况。结果:与对照组比较,其他3组的呛咳发生率及轻度反应程度明显降低(P<0.05或P<0.01),右美托咪定+利多卡因组中、重度呛咳发生率降低(P<0.05);利多卡因组与右美托咪定组呛咳反应发生率间差异无统计学意义;与右美托咪定组、利多卡因组比较,右美托咪定+利多卡因组呛咳反应的发生率明显降低(P<0.01);4组患者芬太尼诱导呛咳的发生时间及低血压、严重窦性心动过缓发生率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:右美托咪定联合利多卡因能有效抑制芬太尼诱发的呛咳反应。
作者:谢辉兰;顾连兵;卞清明;黄凤伦 刊期: 2015年第04期
目的:探讨信号淋巴细胞激活分子(signaling lymphocytic activation molecule,SLAM)在过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面的表达及意义。方法:选择18例过敏性鼻炎患者和16例健康体检者,淋巴细胞分离液分离提取外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4+T细胞表面SLAM的表达;同时,采用ELISA法检测血浆中IgE的表达;分析CD4+T细胞表面SLAM表达与血浆中IgE表达的相关性。结果:过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM的表达水平明显低于健康体检者(t=2.29,P<0.05),而IgE水平明显高于健康体检者(t=2.740,P<0.01);过敏性鼻炎患者血浆中IgE的表达与CD4+T表面SLAM的表达呈负相关(r=-0.4848,P<0.05)。结论:过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM表达降低,在一定程度上可反映疾病的严重程度。
作者:杨臖;耿丽娜;彭辉勇;马永明;许化溪;王胜军 刊期: 2015年第04期
目的:评价血栓弹力图(thromboelastograph,TEG)和常规凝血实验对乙型肝炎患者合理输注成分血液的指导作用。方法:选择同时完成TEG检测和常规凝血检测的128例患者,对各参数进行相关性分析,并观察和分析临床报告的患者实际出血情况。结果:部分活化凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、国际标准化比率(INR)与凝血因子反应时间(R)、凝血酶形成时间(K)呈正相关,r分别为0.385、0.440、0.423和0.437、0.300、0.290,P均<0.05。R异常率(19.53%)较INR异常率(32.81%)明显降低(χ2=3.21,P<0.05);大振幅(MA)异常率(15.63%)较血小板异常率(25.78%)也明显降低(χ2=2.62,P<0.05)。结论:TEG联合常规凝血实验对乙型肝炎患者进行精确成分血液输注更有意义。
作者:沈国栋;陈治宇;单来友;江淑芳 刊期: 2015年第04期
目的:制备能够同时检测心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的二联试纸条,用于急性心肌梗死的早期和中期辅助诊断。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并对其相关因素进行考察。将胶体金分别与H-FABP和cTnⅠ的单克隆抗体结合,优化胶体金与单克隆抗体结合的影响因素;将胶体金结合物喷于玻璃纤维膜上制成金标垫,再分别将另一亚型cTnⅠ和H-FABP单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线T1、T2和质控线C,后与吸水垫、经预处理的样品垫和底板组装成二联试纸条。结果:制备的二联试纸条检测H-FABP的灵敏度为10 ng/mL,检测cTnⅠ的灵敏度为3.0 ng/mL,10 min内可判定结果,层析速度均匀,没有背景颜色,两种蛋白之间无交叉反应,二联试纸条稳定性好。结论:成功制备灵敏度高、层析速度均匀和稳定性好的H-FABP/cTnⅠ二联胶体金免疫层析试纸条。
作者:顾梅;阮秀清;康淑娟;刘宏飞;余江南 刊期: 2015年第04期
目的:建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的PCR方法。方法:根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶(nitrate reductase,narGHJI)基因启动子区215位上T-C的转换,设计巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型,测定其敏感性,并用琼脂糖凝胶电泳验证观察巢式荧光PCR产物的特异性。以人型结核杆菌标准株(H37 Ra)、卡介苗培养菌液、人型临床分离株和牛型临床分离株为标本,高分辨熔链曲线分析结核分枝杆菌亚型正态化熔链曲线及熔链温度。结果:巢式荧光PCR特异性地检出结核分枝杆菌narGHJI基因,其敏感性比荧光定量PCR高10倍左右;人型及牛型结核分枝杆菌narGHJI基因PCR产物的高分辨熔链曲线分成2个不同组合,熔链温度分别为(83.08±0.08)℃和(83.96±0.09)℃,差异有统计学意义(t=217.23,P<0.05)。结论:成功建立检测结核分枝杆菌及其亚型的巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线法。
作者:邵雪君;朱宏;黄莉莉;陶云珍;徐俊;何萍;汪健 刊期: 2015年第04期