目的:研究低氧条件下铁调节蛋白1 (iron regulatory protein 1,IRP1)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁稳态的影响.方法:1％O2处理SH-SY5Y细胞0,1,2,4,6h,蛋白质印迹法检测铁蛋白轻链(ferritin light chain,Ft-L)以及膜铁输出蛋白(ferroportin,Fpn)的表达;Calcein-AM法检测SH-SY5Y细胞对Fe2+的吸收以及细胞可变铁池(labile iron pool,LIP);采用硫氰酸盐分光光度法测定细胞总含铁量;特异性siRNA下调IRP1后检测SH-SY5Y细胞低氧2h铁稳态的变化.结果:低氧0～6h,SH-SY5Y细胞Ft-L和Fpn表达增加,Fe2摄入和LIP增加,但细胞总铁水平不变.siRNA下调IRP1表达后再低氧2h,Ft-L蛋白表达和LIP明显增加,Fpn表达和Fe2+摄入没有明显变化,细胞总铁水平增加.结论:低氧条件下,IRP1是SH-SY5Y细胞铁稳态的重要调节者.
作者：郁敏燕；王丹；朱俐 刊期： 2015年第06期
目的:探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞来源树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫功能的影响.方法:从人骨髓中分离培养MSCs,采用流式细胞仪(FCM)分析鉴定MSCs的纯度.分离SLE患者外周血单核细胞,用重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养DC的同时加入MSCs共培养,设立MSCs处理组,MSCs未处理组.在第7天收集细胞,流式细胞术检测两组DC表面CD 1a,CD14的表达.SLE患者的不成熟DC与MSCs共同培养加入终浓度为50 ng/mL的重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)48 h后收集细胞,流式细胞术检测两组DC表面CD86、CD83、HLA-DR的表达.分别将MSCs处理或未处理的DC和T淋巴细胞共培养,72 h后用MTT法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力.结果:与对照组相比,MSCs处理组DCs表面CD1a、CD86、CD83以及HLA-DR表达明显下降(P＜0.01),CD14表达明显增高,对淋巴细胞的刺激能力明显减弱(P＜0.01).结论:MSCs可能通过抑制SLE患者DC的发育、成熟和功能的途径,抑制SLE患者的免疫反应.
作者：裘影影；何建强；汤郁；李晶 刊期： 2015年第06期
目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响.同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点.方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt ～-14nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-CCL5-FL).然后,将pGL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(pIRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性.另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-CCL5-1～4).将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位.结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功.pGL3-CCL5-FL和pIRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强.pGL3-CCL5-FL、pGL3-CCL5-1～4分别与pIRES2/KLF6共转染GMC后发现,pGL3-CCL5-4的启动活性显著降低.提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt ～-191nt区域.结论:本实验成功构建了大鼠CCL5基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出KLF6在CCL5基因启动子上可能的结合部位在-343nt ～-191nt区域.
作者：刘玉；虞天一；张婧；何风霞；卢燕来；周梦雅；王璐璐；赵聃；邱文 刊期： 2015年第06期
目的:研究内源性双链RNA活化人肝内胆管上皮细胞(human intrahepatic biliary epithelial cells,HiBEC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)引起的凋亡及其信号通路变化.方法:体外培养HiBEC,同时通过反复冻融制备坏死的HiBEC.TLR3活化组:将死亡细胞与活细胞共同培养6h;对照组:以核酸酶处理过的坏死细胞与活细胞共培养,每组设3复孔.以Annexin V/PI测定细胞凋亡率,同时以JC-1荧光探针测定细胞线粒体膜电位.荧光定量PCR法检测TLR3和β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(Toll-interleukin 1 receptor domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)的表达量,同时以流式细胞术测定Caspase-3的活性.结果:TLR3活化组的HiBEC经内源性活化后,凋亡率为(33.32±2.39)％,明显高于通过RNA酶处理后的对照组[(2.83±0.53)％,P＜0.001);线粒体膜电位检测结果表明,TLR3活化组的HiBEC经内源性活化后,表达绿色荧光的细胞比例明显增加,均值为(34.75±6.54)％,明显高于RNA酶处理后的对照组[(3.21±1.24)％,P＜0.001);定量PCR分析发现TLR3活化组的TLR3和TRIF mRNA相对表达量分别为3.75 ±0.22和4.05 ±0.14,均明显高于对照组(分别为0.98 ±0.05和1.03 ±0.07,P＜0.001);流式细胞术检测结果显示,TLR3活化组细胞Caspase-3的平均表达量为(27.1±3.5)％,明显高于RNA酶处理组[(8.5±2.1)％,P＜0.001).结论:内源性双链RNA可以通过活化TLR3诱导HiBEC凋亡,可能在原发性胆汁性肝硬化的炎性损伤过程中发挥重要作用.
作者：蒋廷旺；熊怀民；张红星；许国华；许晔琼 刊期： 2015年第06期
目的:检测转移抑制因子1(metastasis suppressor 1,MTSS1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在结直肠癌中的表达变化及临床意义.方法:在含有240例结直肠癌标本的组织芯片上,利用免疫组织化学法及qRT-PCR法检测MTSS1和VEGF在结直肠癌、癌旁组织中的表达,并分析与结直肠癌临床参数的关系.结果:结直肠癌组织中MTSS1阴性表达率和VEGF阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05).MTSS1阴性表达与淋巴结转移、Duke's分期相关(P＜0.05);VEGF阳性表达与患者年龄(≥60岁)、肿瘤分化程度(低分化)相关(P＜0.05).结论:结直肠癌中MTSS1低表达和VEGF高表达可能与结直肠癌的发生发展及转移有关.
作者：杨洁；韩玮；王永强；曹方；丁厚中 刊期： 2015年第06期
目的:观察龈沟液中核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素水平与上颌快速扩弓过程中牙周组织改建的关系.方法:选取32例安氏Ⅲ类错(牙合)患者,随机分为对照组(只戴入扩弓器但不加力)和观察组(持续扩弓1周),各16例.以右上颌第一磨牙、左上颌尖牙颊侧为检测位点,分别在扩弓前(基线)、扩弓后24 h、1周、2周、1月、3月时采集龈沟液,采用ELISA法检测龈沟液中RANKL、骨保护素的含量.结果:观察组右上颌第一磨牙和左上颌尖牙龈沟液中RANKL水平在扩弓后24 h时明显升高,1周时达峰值,2周时仍维持较高水平,以后逐渐下降,3个月时下降到扩弓前水平;骨保护素水平24 h时明显降低,1周时达低值,2周时维持较低水平,以后逐渐上升,3个月时上升到扩弓前水平.从扩弓后24 h至1个月,观察组RANKL和骨保护素含量与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而至3个月时已无明显差异(P＞0.05).结论:上颌快速扩弓过程中,龈沟液中的RANKL、骨保护素含量的变化可能与矫形力作用下牙槽骨改建的状态有关.
作者：佘鹏；仇晨光；钱良玉；张光建；孔繁芝 刊期： 2015年第06期
目的:研究氨甲环酸对初次人工全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)术后失血和膝关节肿胀程度的影响.方法:将行初次全膝关节置换术的60例膝关节骨性关节炎患者随机分为2组,氨甲环酸组30例在松止血带前静脉滴注氨甲环酸(15 mg/kg),对照组30例给予等量生理盐水静脉滴注.比较两组显性失血量、隐性失血量、输血率、术后D-二聚体、C反应蛋白以及关节肿胀程度,并观察术后是否出现下肢深静脉血栓等围术期并发症.结果:氨甲环酸组显性失血量、隐性失血量、输血率、术后C反应蛋白浓度均明显低于对照组(P＜0.05).氨甲环酸组在术后1周及2周髌上周径和腓肠肌周径均明显小于对照组(P＜0.05).两组患者术后D-二聚体差异无统计学意义(P＞0.05),且均未出现下肢静脉血栓及肺栓塞的临床表现.结论:静脉应用氨甲环酸可以明显减少初次人工全膝关节置换术的显性及隐性失血量,降低输血率,同时可以减轻患肢关节的术后肿胀程度,并且不增加静脉血栓栓塞的风险,有利于患者术后早期康复.
作者：孙继芾；黄永辉；左华；李大鹏；屠海霞 刊期： 2015年第06期
目的:探讨ASAP1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测73例上皮性卵巢癌患者卵巢癌组织石蜡切片中ASAP1蛋白的表达.采用x2检验分析ASAP1表达与卵巢癌患者病理资料间的关系.并采用Kaplan-Meier进行单因素生存分析,比较不同ASAP1蛋白表达水平的卵巢癌患者的预后.结果:ASAP1蛋白表达与腹腔积液量相关(P=0.005);单因素生存分析显示,ASAP1蛋白高表达组与低表达组总生存时间、无复发生存时间比较,差异具有统计学意义(P =0.005,0.001).结论:ASAP1蛋白高表达是上皮性卵巢癌患者预后不良的高危因素.
作者：刘亚南；高爱华；朱维培 刊期： 2015年第06期
目的:观察慢性乙型肝炎抗病毒治疗对乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)表达的影响.方法:选取96例慢性乙肝初治患者,其中HBeAg阳性56例,HBeAg阴性40例.两组患者组内平均分为聚乙二醇干扰素α-2a治疗组(干扰素组)和恩替卡韦治疗组.聚乙二醇干扰素(180 μg,每周1次)疗程48周,恩替卡韦(0.5 mg,1次/d)疗程96周.应用蛋白质印迹法检测治疗前和治疗后48周、96周3个时点各组病例肝组织内HBx的表达.结果:所有患者治疗前肝组织HBx均为阳性表达.治疗后48周,HBeAg阳性干扰素组、恩替卡韦组,以及HBeAg阴性干扰素组、恩替卡韦组HBx阴性表达率别为73.08％ (19/26)、40.74％(11/27) 、42.11％(8/19)、45.00％(9/20).治疗后各组HBx阴性表达率均明显高于治疗前(P均为0.00).HBeAg阳性干扰素组HBx阴性表达率明显高于其他3组(P均＜0.05).恩替卡韦治疗96周时,HBeAg阳性组和HBeAg阴性组HBx阴性表达率无明显差异[48.15％(13/27)、55.00％ (11/20)],和48周时比较也无明显差异(P均＞0.05).结论:干扰素用于HBeAg阳性的慢性乙肝患者,其抑制X蛋白表达的效果明显优于恩替卡韦.
作者：钱贤峰；吴昌平；徐君；郑中伟；葛国洪；邵江波 刊期： 2015年第06期
目的:通过检测子痫前期患者外周血中间型单核细胞HLA-DR表达并分析其与临床指标的相关性,探讨中间型单核细胞HLA-DR在子痫前期疾病过程中的作用.方法:采集22例子痫前期患者(子痫前期组)和23例健康孕妇(对照组)肘前静脉血4 mL,肝素抗凝.流式细胞术检测中间型单核细胞HLA-DR表达和Th17细胞阳性率;液相芯片检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17和IL-10浓度;分析子痫前期患者中间型单核细胞HLA-DR阳性频率与血清细胞因子浓度、Th17细胞阳性率的相关性.结果:子痫前期组中间型单核细胞HLA-DR阳性细胞率为(29.4±8.4)％,比对照组[(20.1±3.8)％]明显增高(P＜0.01);平均荧光强度(MFI)为31.5±5.9,亦明显高于对照组(26.4±4.3,P＜0.01).与对照组比较,子痫前期患者血清中TNF-α、IL-6和IL-17浓度显著升高,IL-10浓度明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);子痫前期患者中间型单核细胞HLA-DR阳性细胞率与Th17细胞阳性率、血清IL-17浓度均呈正相关(r=0.468、r=0.473,P＜0.05).结论:子痫前期患者外周血中间型单核细胞HLA-DR表达明显增加,参与子痫前期的疾病过程.
作者：吕连峥；蔺昕；钱雷；徐卫平；张国英 刊期： 2015年第06期
目的:探讨脑梗死患者血清氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与颈动脉弹性指标的相关性.方法:选取动脉粥样硬化性脑梗死(atherosclerotic cerebral infarction,ACI)患者110例、腔隙性脑梗死(lacunar infarction,LACI)患者90例和健康中老年体检者100例,酶联免疫吸附试验检测血清ox-LDL,hs-CRP和MMP-9水平,同时应用血管回声跟踪技术检测颈动脉压力应变弹性系数(Ep)、僵硬度、顺应性、增大指数及脉搏波传导速度(PWVβ),分析脑梗死患者血清ox-LDL,hs-CRP和MMP-9与颈动脉弹性指标的相关性.结果:与健康组比较,LACI组Ep、僵硬度、增大指数、PWVβ值增高、ox-LDL、hs-CRP、MMP-9水平增高,顺应性降低(P＜0.01);与LACI组比较,ACI组Ep、僵硬度、增大指数、PWVβ值增高、ox-LDL、hs-CRP、MMP-9水平增高,顺应性降低(P＜0.01).脑梗死患者血清ox-LDL、hs-CRP、MMP-9水平与僵硬度、PWVβ呈正相关(P均＜0.01).结论:脑梗死患者血清ox-LDL、hs-CRP和MMP-9与颈动脉僵硬度、PWVβ呈正相关,三者可作为早期发现动脉弹性病变的敏感指标.
作者：郝光；宋爱霞；韩潮；薛茜 刊期： 2015年第06期
目的:探讨冠心病患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)的表达及临床意义.方法:选取因胸闷、胸痛入住心内科患者110例,根据冠脉造影结果及临床表现分为急性冠脉综合征(ACS)组33例、稳定型心绞痛(SAP)组32例和对照组45例.比较3组间的临床资料、血清NGAL水平,分析NGAL与冠心病相关性,并观察其与冠脉病变支数及Gensini积分的关系.结果:ACS组、SAP组血清NGAL水平均明显高于对照组(P＜0.05),ACS组血清NGAL水平明显高于SAP组(P＜0.05).随着冠脉病变支数增加,冠心病患者血清NGAL水平增高(F=17.468,P＜0.05),且与Gensini积分呈正相关(r=0.327,P＜0.01).简单及偏相关分析均显示,血清NGAL水平与冠心病呈正相关性;多因素Logistic回归分析显示,NGAL是冠心病发生的独立危险因素(OR=1.059,P＜0.01).结论:NGAL不仅能对粥样斑块稳定性具有提示性,且与冠脉病变程度呈正相关,可作为冠心病发生的独立危险因素.
作者：贾方；王彦军；朱琳；俞天虹；孙建辉 刊期： 2015年第06期
目的:以体动反应为观察指标,观察相同的镇静深度下,右美托咪定的镇痛作用是否能降低术中镇痛药的使用量.方法:拟行乳房良性肿瘤切除术患者90例,随机分为3组:对照组、右美托咪定0.5 μg/kg组(低剂量组)和右美托咪定1.0 μg/kg组(高剂量组),每组30例,分别输注生理盐水、右美托咪定0.5和1.0 μg/kg,泵注持续时间为10 min,然后分别持续输注生理盐水和右美托咪定0.17、0.33 μg·kg-1 ·h-1.效应室靶控输注丙泊酚,对照组、低剂量组和高剂量组初始浓度分别设定为2.5、1.5和0.5 mg/L,每隔3 min调节靶浓度直至患者对推摇无反应(OAA/S评分=1分),然后效应室靶控输注瑞芬太尼.采用改良Dixon's序贯法进行试验,各组瑞芬太尼初始靶浓度均设定为2.0 μg/L,相邻浓度差值为0.2μg/L,靶控瑞芬太尼3 min后切开乳房皮肤5 cm,观察患者有无体动反应.绘制序贯图,体动反应转变成无反应的中点对应瑞芬太尼浓度的均值即为瑞芬太尼抑制切皮体动反应的半数有效效应室浓度(Ce50).Ce50组间比较采用t检验并用Bonferroni法校正,P＜0.016 7为差异有统计学意义.结果:对照组、低剂量组和高剂量组瑞芬太尼抑制切皮体动反应的Ce50(95％ CI)分别为1.43 ng/mL(1.33 ～ 1.53 ng/mL)、1.58 ng/mL(1.43～ 1.72 ng/mL)和1.53 ng/mL(1.36～1.69 ng/mL),3组间Ce50差异无统计学意义(P＞0.016 7).结论:全麻辅助应用右美托咪定时,在相同的镇静深度下术中抑制切皮体动反应所需的瑞芬太尼用量没有降低.
作者：施蕾蕾；陈正；邵东华 刊期： 2015年第06期
目的:观察靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝癌HepG2细胞系的干扰效率及其对细胞增殖与迁移的影响.方法:设计合成LDHA及对照eGFP shRNA序列,克隆至真核表达质粒pLKO.1-TRC,质粒抽提纯化后测序鉴定.重组质粒用脂质体转染肝癌细胞系,采用反转录(RT)-PCR和免疫印迹检测LDHA的表达,验证shRNA的干扰效率.采用CCK-8和克隆形成实验检测干扰LDHA后细胞增殖的变化,划痕实验检测干扰LDHA对细胞迁移的影响.结果:成功构建针对LDHA和对照eGFP的shRNA表达质粒.与转染sh-eGFP组相比,转染sh-LDHA组HepG2细胞中LDHA mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05).与sh-eGFP组相比,sh-LDHA组72,96 h细胞增殖明显降低,克隆形成数减少,细胞迁移距离短(P均＜0.05).结论:LDHA的干扰质粒能有效干扰LDHA在肝癌HepG2细胞中的表达,明显抑制HepG2细胞的增殖活力和迁移能力.
作者：司素华；熊二梦；杜凤仪；彭琬昕；龚爱华 刊期： 2015年第06期
目的:检测盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease,PID)患者急性发作期血小板和平均血小板体积(MPV)的变化,探讨其临床意义.方法:检测37例PID患者入院时及入院72 h后血小板计数和MPV,与37例健康体检女性(对照组)比较,并进行相关性分析.结果:急性盆腔炎患者入院72 h后血小板水平升高,与入院时及对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.001).患者入院时MPV水平低于对照组(P=0.04),入院72 h后MPV水平进一步降低,与入院时及对照组比较差异有统计学意义(P=0.037,P＜0.001).血小板与MPV水平呈负相关(r=-0.460,P ＜0.001).结论:PID患者急性发作期外周血中血小板增高,MPV降低,利用这些参数并联合其他指标可能有助于建立急性盆腔炎的诊断模型.
作者：陈玥；张乃舒；王佩娟 刊期： 2015年第06期
目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)骨髓侵犯瘤细胞的形态与临床及实验室特征.方法:收集107例DLBCL的临床资料,回顾性分析患者的临床特征、实验室指标及骨髓细胞形态学和流式细胞术(FCM)的检测资料.结果:107例DLBCL患者中17例(15.9％)有骨髓侵犯,其中9例为高度异形瘤细胞,8例为低度异形瘤细胞.与低度异形组比较,高度异形组具有多种不良预后因素,包括较晚的临床分期、增高的乳酸脱氢酶及国际预后指数.FCM诊断出的高度、低度异形淋巴瘤骨髓侵犯病例分别为3例(3/9)、8例(8/8);骨髓涂片诊断出的病例分别为9例(9/9)、1例(1/8).结论:DLBCL高度异形瘤细胞骨髓侵犯与多种预后不良因素密切相关;FCM诊断低度异形DLBCL骨髓侵犯的敏感性高于骨髓涂片,骨髓涂片对高度异形淋巴瘤侵犯的诊断率高于FCM.两种方法联合应用可有效提高DLBCL骨髓侵犯的诊断.
作者：刘敏；井昶雯 刊期： 2015年第06期
目的:探讨以300 ～500μm和500 ～700 μm直径的微球进行子宫动脉分层栓塞治疗后子宫腺肌症患者卵巢功能的变化.方法:回顾性分析采用Embosphere微球子宫动脉栓塞治疗子宫腺肌症21例患者的临床资料,栓塞方法为先直径300～500 μm的小颗粒后500 ～700 μm的大颗粒分层栓塞子宫动脉及其分支,门诊随访复查卵巢功能性激素雌二醇、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)的变化,对采集的检查数据进行配对t检验.结果:术后6、12、24个月时疼痛评分分别为4.38±1.24、3.21±1.54、3.52±1.78,明显低于术前的9.10 ±0.89(P ＜0.01),术后3、6、12、24个月时雌二醇、FSH、LH的水平较术前未见明显下降,差异无统计学(P＞0.05).结论:以直径300 ～500 μm和500 ～700 μm的Embosphere微球进行子宫动脉栓塞能明显缓解子宫腺肌症患者的痛经症状,而对卵巢功能无明显影响.
作者：张建亚；姚群立；王丽梅 刊期： 2015年第06期
目的:探讨雷替曲塞联合顺铂同步放化疗治疗局部晚期食管癌的近期疗效及不良反应.方法:66例局部晚期食管癌患者,利用随机数字表法随机分成观察组及对照组,各33例,观察组放疗同步雷替曲塞加顺铂化疗,对照组放疗同步5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合顺铂化疗.比较两组的近期疗效及不良反应.结果:观察组的近期有效率(完全缓解+部分缓解)为84.8％(28/33),明显高于对照组[60.6％(20/33),x2 =4.889,P＜0.05];两组的1、2年生存率分别为84.8％(28/33),63.6％(21/33)及60.6％(20/33),42.4％ (14/33),组间比较差异有统计学意义(x2分别为4.89、3.88,P ＜0.05),两组不良反应之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:雷替曲塞联合顺铂同步放化疗可提高局部晚期食管癌的无进展生存率和总生存率,不良反应可以接受.
作者：王燕；时亚伟；吴朝阳；许刚 刊期： 2015年第06期
目的:制备伤寒沙门菌ompC缺陷株及ompC-ompF双缺陷株,研究外膜孔道蛋白OmpC、OmpF在伤寒沙门菌耐药中的作用.方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备ompC缺陷株及ompC-ompF双缺陷株,比较伤寒沙门菌ompC缺陷株、ompF缺陷株及ompC-ompF双缺陷株与野生株在多黏菌素B、卡那霉素以及氨苄青霉素处理下的生存能力.结果:成功制备伤寒沙门菌ompC单缺陷以及ompC-ompF双缺陷株.各菌株在普通培养条件下生长情况无差异;多黏菌素B及氨青苄霉素处理条件下ompC缺陷株、ompC-ompF双缺陷株生存能力明显强于野生株,而ompF缺陷株生存能力则低于野生株;卡那霉素处理条件下,各缺陷株生存能力均明显低于野生株.结论:外膜孔道蛋白OmpC、OmpF参与伤寒沙门菌耐药,但对不同药物的耐药机制不尽相同,具体机制有待进一步研究.
作者：汪伟伟；夏歆；王静瑜；张桂红；陈龙；黄新祥；生秀梅 刊期： 2015年第06期
目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法.方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成cDNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性.结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好.结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-α mRNA的定量检测.
作者：姚霜；郑璐；于洋；喻妙梅；潘丽莉；张俊；冯悦华；罗光华 刊期： 2015年第06期
目的:建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法检测HIV-1 DNA.方法:首先从HIV-1数据库和基因库中下载不同亚型的HIV-1的LTR区序列,输入到MEGA 6.0软件中,用Cluster W程序进行比对与编辑,选择相对保守的区域并以FASTA格式输出.将FASTA格式文件上传至在线引物设计软件Lamp primer designing software primer explorer中,获得引物后再次与比对后的HIV序列进行比较,对保守性较差的位点使用简并碱基.用LAMP扩增试剂盒扩增时加入荧光目测试剂,观察反应管颜色变化,判断阴阳性结果.结果:本研究中设计的引物可用于LAMP技术检测HIV-1 DNA,具有较好的灵敏度和特异性.结论:成功地建立了LAMP技术检测HIV-1 DNA的方法,可用于HIV-1的早期诊断.
作者：郭宏雄；还锡萍；周莹；卢静；胡海洋；傅更锋 刊期： 2015年第06期
