目的了解华支睾吸虫囊蚴在鱼体内自然感染状态及其在保存液中的存活情况.方法从草鱼和鳙鱼中以常规方法分离出华支睾吸虫囊蚴,统计各发育阶段囊蚴的情况.分别以4℃和30℃,以及10ml容积和100ml容积等不同条件保存囊蚴,观察囊蚴的存活情况.结果鳙鱼体内囊蚴的成熟率和成活率大于草鱼;30℃保存的囊蚴发育成熟的速度较快,保存期短;4℃保存的囊蚴出现一定程度的滞育,20天后仍有较高数量的趋于成熟的囊蚴.保存液体体积的不同对囊蚴的发育生存没有明显影响.结论囊蚴群体在鱼体内及体外环境中的生长保持一定的稳定性;囊蚴群体中各发育态的同时存在,使其具有持续发育成熟的能力,并保持相对稳定的感染力.
作者：吴军；阮彩文；崔惠儿；张启明；方悦怡 刊期： 2004年第02期
目的探索中国健康人PrP基因129位点密码子的多态性.方法取60名健康人基因组后,用PCR法扩增PrP基因的外显子,后用NspⅠ酶切,进而对PrP基因129位点多态性进行分析.结果 60例健康人中,52例为甲硫氨酸(Met)/甲硫氨酸(Met),8例为甲硫氨酸(Met)/缬氨酸(Val).结论东西方人PrP基因129位点密码子Met/Met型、Met/Val型与Val/Val比例不同,而且根据现有报道东方人中缺乏Val/Val型.
作者：南善姬；赵节绪 刊期： 2004年第02期
目的建立一种以PCR为基础的的检测和鉴定医学重要真菌的方法.方法将白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、都柏林念珠菌和新型隐球菌的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上;用标记生物素的真菌通用引物扩增经提取的各真菌DNA,与固定在膜上的探针杂交.结果所用的真菌通用引物可扩增12种临床常见的真菌DNA,扩增片段长度在350bp左右.8种特异性探针分别与上述真菌PCR扩增产物杂交,结果表明8种探针具有高度的特异性.通过39例临床标本和25例临床分离菌株的检测,PCR-反向杂交法与真菌培养法的结果基本一致,且鉴定时间也由传统培养鉴定方法约需1周的时间缩短至2天.结论该方法可快速、正确地将8种临床常见真菌鉴定到种水平,如经大量临床标本的检测验证,可望在临床微生物实验室开展.
作者：郭梅；牟兆钦；谢湘峰；陈建魁；尹秀云 刊期： 2004年第02期
目的了解中国大陆广州管圆线虫病首例死亡病区终宿主种类及鼠类自然感染情况.方法采用药械诱捕鼠类,解剖心肺,收集统计虫体.结果褐家鼠、黄毛鼠、板齿鼠、黄胸鼠和小家鼠自然感染率分别为8.33%(6/72),6.25%(3/46),5.26%(2/38),3.33%(1/30)和0%(0/35).平均自然感染率为5.43%(12/221).结论存在广州管圆线虫阳性鼠类,表明该地是广州管圆线虫自然疫源地.小家鼠不是广州管圆线虫的适宜终宿主.
作者：沈浩贤；谢瑾灼；陈代雄；陈新宇；李小敏；马长玲；梁成结 刊期： 2004年第02期
目的构建真核重组表达质粒pVAX1-SAG1,并探讨其诱导的体液免疫应答.方法采用多聚酶链反应技术,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增截短型的SAG1基因片断,并克隆至载体pMD18-T,经菌落PCR鉴定和测序分析后,亚克隆至真核表达载体pVAX1,构建重组真核表达质粒pVAX1-SAG1,并予菌落PCR和双酶切鉴定.以此为疫苗候选分子免疫小鼠,检测其诱导产生的抗体.结果 PCR扩增出SAG1基因的截短型片段,其大小约780bp;测序的阳性TA克隆除两处发生同义突变外,其余序列与原序列一致;TA克隆的插入片段被亚克隆到真核表达载体pVAX1,构建了重组表达质粒pVAX1-SAG1;该质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体.结论成功构建了弓形虫表面抗原SAG1的DNA疫苗.
作者：黄达娜；吴少庭；袁仕善；高世同；张仁利；雷明军；潘晖榕；林琦萍；秦莉 刊期： 2004年第02期
目的对引起家畜及野生动物胰吸虫病的阔盘属吸虫:腔阔盘吸虫,胰阔盘吸虫及分别来自牛、羊和野生动物山麂的枝睾阔盘吸虫基因组DNA多态性进行比较分析.方法分别提取这五类胰吸虫的基因组DNA,利用10碱基随机引物进行RAPD-PCR扩增反应,选取重复性好、谱带清晰并呈多态性的引物,根据这些引物扩增的谱带利用UPGMA方法进行聚类分析.结果从60个随机引物中筛选出重复性好、谱带清晰并呈多态性的引物22个,共扩增出199条DNA带,其中多态性位点114个,占57.3%,羊枝睾阔盘吸虫和麂枝睾阔盘吸虫的遗传距离近,腔阔盘吸虫和麂枝睾阔盘吸虫的遗传距离远.结论寄生在野生动物山麂的枝睾阔盘吸虫与寄生在家养动物的几种胰吸虫具有很高的DNA多态性
作者：叶向群；左正宏；杨文川；彭文峰 刊期： 2004年第02期
目的在新的抗体检测试剂基础上了解普通人群戊型肝炎病毒感染特点.方法利用戊型肝炎病毒多聚化重组抗原组装的抗HEV IgG ELISA试剂(E2-IgG)对山东某地社区普通人群的戊肝感染情况进行检测.结果本地人群各个年龄组共2,998人中抗HEV IgG抗体总阳性率(年龄性别标化)为14.1%,男性标化阳性率为16.2%,女性为11.9%.20岁以下人群戊肝感染率不足1%,自20岁起男性和女性分别以每年接近0.9%和0.8%的速度平稳上升.戊肝感染者中男性与女性的平均抗体水平基本相同,基本上随着年龄的上升,人群中感染者的平均抗体水平也缓慢上升.随机选取的10份E2-IgG阳性血清与抗原的反应均被抗-HEV单克隆抗体明显阻断.结论该地区为戊肝流行区,感染主要发生在成年之后,以每年接近1%的新感染率稳定上升.中小学生中戊肝抗体阳性率极低,学校内戊肝暴发的预防应引起高度重视.
作者：王延臣；葛胜祥；孙鲁民；严庆峰；聂希会；靳祥堂；康伟民；张军；夏宁邵 刊期： 2004年第02期
目的了解人B组轮状病毒近20年来基因变异情况,为轮状病毒疫苗的研制提供依据.方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增人B组轮状病毒WH-1株NSP2基因489bp的片断,并将其克隆到载体pUCmT,转化感受态细胞One-shot Top10F',提取转化菌质粒经限制性内切酶PstI酶切分析,筛选出阳性菌提取质粒,对插入片段进行了测序和核苷酸序列分析.结果利用GeneBee与其他B组轮状病毒株ADRV(人)、CAL-1(人)及IDIR(鼠)的NSP2基因进行同源性比较,发现毒株WH-1与ADRV核苷酸序列的同源性达99.8%,与CAL-1达93.7%,与IDIR(鼠)的同源性为80.0%.使用PredictProtein软件分析WH-1NSP2的蛋白组成,发现其编码的149个氨基酸组成的多肽中,含有1个潜在的N-糖基化位点和多个磷酰化位点.从氨基酸序列的同源性看,WH-1与ADRV的同源性达99.3%,与CAL-1达98.6%,而与IDIR为86.2%.结论 WH-1与ADRV的起源相同,且B组轮状病毒NSP2基因保守性很高.对人B组轮状病毒NSP2基因序列分析将有助于B组轮状病毒的流行病学、基因进化以及轮状病毒疫苗的研制都将有重要意义.
作者：唐少文；叶临湘；王斌；郑华英；李燕；杨继红 刊期： 2004年第02期
目的将艾滋病病毒外膜蛋白与干扰素(HIV-1 env/IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白,作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答.方法将IFNα-2b基因片段插入到env基因的nt8383位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选,挑出重组痘苗病毒.经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.以小鼠为实验对象,用重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b免疫小鼠,以生理盐水和野生型痘苗病毒为对照,用MTT法和3H-TdR掺入法动态检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、Lps的反应性与CTL杀伤活性.结果脾淋巴细胞对ConA、Lps刺激指数与CTL的杀伤活性百分率,其实验组与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).ConA、Lps刺激指数实验组间比较差异有显著意义(P＜0.05).结论重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b能增强小鼠脾淋巴细胞的保护性细胞免疫.IFNα-2b能作为免疫佐剂加强env蛋白的免疫原性,提高免疫小鼠的T淋巴细胞免疫能力.
作者：王洪军；金宁一；年春志；江文正；王继群；魏安明；吴益民 刊期： 2004年第02期
目的构建单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LMO)溶血素基因重组表达质粒.方法本文采用PCR方法扩增出LMO 0586株溶血素(Hemolysin,hly)基因,将其克隆到pMD18-T中,筛选带有插入片段的阳性质粒.经酶切和PCR鉴定,然后进行测序.继而用SalⅠ和XbaⅠ双酶切阳性质粒,目的片段定向插入pPROEXTMHTa中进行鉴定.结果 hly基因体外扩增产物大小约为1646bp.核苷酸序列鉴定后,其核苷酸序列与国外报道的LMO F6789株、LMO F2365株同源性分别为99.70%和99.39%.推导出的氨基酸序列与其相应菌株比较,同源性分别为99.82 %和98.90%.重组表达质粒经PCR及酶切鉴定表明为正确重组子.结论在国内首次克隆到LMO hly全基因,并构建出含hly基因的原核表达载体.此项工作为进一步LMO溶血素基因的表达奠定了基础.
作者：任艳红；李一经；王新生 刊期： 2004年第02期
目的观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答.方法将旋毛虫肌幼虫编码31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Western blot分析.结果 IFAT表明pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光.Western blot检测结果显示,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的31kDa抗原组分,而pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应.结论旋毛虫DNA疫苗pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答.
作者：崔晶；王中全；张红卫；韩化敏；卫海燕；晋雪香；李雍龙 刊期： 2004年第02期
目的克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶.方法根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶(prophenoloxidase-activating enzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆和测定插入片段;所得序列进行BLAST查询,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA,通过SDS-PAGE和Western blotting 检测表达产物.结果和结论获得了3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列,即AdsP1(512bp),AdsP2(488bp)和 AdsP3(512bp).AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫 PPAE和黑腹果蝇Easter很相似,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用.另外,成功表达了AdsP1和AdsP3 部分cDNA序列.
作者：徐文岳；黄复生；夏莉莎；段建华 刊期： 2004年第02期
目的构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10-ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG).方法以pQE30-CFP10-ESAT6质粒为模板,通过PCR扩增633bp lhp-esat6基因,将该基因定向克隆到穿梭表达载体pJCH02中构建重组pJCH02-CFP10-ESAT6质粒.用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,将rBCG培养23天,于收菌前3天每天45℃热诱导45min,对表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析.结果重组质粒pJCH02-CFP10-ESAT6经酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达出了具有CFP10及ESAT6抗原性的CFP10-ESAT6融合蛋白.结论成功构建能表达CFP10-ESAT6融合蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定了基础.
作者：陈全；朱道银；骆旭东；蒋英；江山 刊期： 2004年第02期
目的通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上,为进一步研究其功能奠定基础.方法将插入于pBluescript质粒上的cDNA进行随机测序,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifsan、Scanprosite等程序对其进行结构域分析.根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物,进行PCR扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T-1和真核表达载体pcDNA3上.构建的PGEX4T-1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实.结果发现华支睾吸虫新基因--csTCTP,完整阅读框含510个碱基,编码169个氨基酸,理论分子量为19.4596 Kd.序列分析表明,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签.所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符.结论发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒.
作者：何东苟；余新炳；吴忠道；徐劲；吴德；胡旭初；陈守义 刊期： 2004年第02期
目的体外研究汉滩病毒(HTNV)S基因及其5'端、3'端表达的意义,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础.方法设计2套引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S基因全读码框(37-1326bp)及S基因5'端(37-501bp),S基因3'端(502-1326bp)用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体,并通过脂质体转染至Vero-E6细胞中,进行了瞬时表达.结果间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C在Vero-E6细胞中的表达.结论 pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体有较高的转染效率,目的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义.
作者：潘蕾；白雪帆；黄长形；李光玉；王九平 刊期： 2004年第02期
目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程.方法口服免疫BALB/c小鼠,一个月后,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验(MTT法)及T细胞亚群的测定;不同免疫时间段内,收集实验鼠血清,ELISA法检测抗体水平的变化.结果 P30乳酸球菌口服免疫组脾淋巴细胞ConA刺激后增殖能力比两对照组显著提高,CD+4和CD+8的百分数均明显升高;第12周(即后一次免疫结束一个月),P30乳酸球菌口服免疫组检测到特异性抗体IgG.结论 P30乳酸球菌口服疫苗有效地激发了小鼠细胞免疫反应,特异性抗体IgG在免疫结束一个月后生成明显.
作者：李文姝；陆惠民；张惠琴；夏超明；黄伟达 刊期： 2004年第02期
目的表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用.方法用基因重组技术,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体pGMC上;在IPTG诱导下,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白;用SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达纯化产物;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次,分别在0、2、4周进行.第6周每鼠经腹部感染40±1条日本血吸虫尾蚴.42天后剖杀冲虫,计数虫数及肝卵数.结果纯化的重组铁蛋白分子量为40kD,具有较好的免疫原性,能被日本血吸虫感染兔血清识别.与对照组相比,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为24.5%,减卵率为45.8%.结论重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫.
作者：王敏；易新元；曾宪芳；袁仕善；李先平；罗秀菊 刊期： 2004年第02期
登革热病毒(dengue virus,DV)属于黄病毒科黄病毒属,是有包膜的单股正链RNA病毒,基因组长约11kb,整个基因的编码顺序为:5'Ⅰ型帽子结构、非编码区、AUC蛋白(核衣壳蛋白)基因、M蛋白(膜蛋白)基因、E蛋白(包膜蛋白)基因、NS1-2a-2b-3-4a-4b-5基因、非编码区3'[1].
作者：王立军；赵卫；曹虹；龙北国 刊期： 2004年第02期
20世纪70年代,电镜和免疫电镜技术的发展,使研究者先后发现诺瓦克病毒、轮状病毒、星状病毒和腺病毒等是引发胃肠炎的病因,从而认识到病毒在感染性腹泻中占有重要的位置[1].
作者：张之伦；周萍 刊期： 2004年第02期
现代生物技术的飞速发展,使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化,疫苗研究领域变得异常活跃,人们越来越重视多肽衍生疫苗及疫苗佐剂的发展,融合蛋白作为外源抗原决定簇载体的研究也方兴未艾.将相关抗原融合到合适的载体蛋白上具有毒性小、表达和纯化相对容易的特点,同时可将融合的多肽以确定的构型引入免疫系统之中.霍乱毒素 B 亚单位(CTB)因其独特的生理功能,近年来已成为国内国外研究的热点,将它作为载体蛋白和免疫佐剂产生了很多新的免疫疫苗.
作者：任学毅；朱成钢；张耀洲 刊期： 2004年第02期
伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)是1982年Burgdorfer等自硬蜱体内分离并由Barbour从患者体内分离培养证实的[1]新发现的人兽共患性传染病--莱姆病(Lyme disease)的病原体.它能引起人类慢性游走性红斑(erythema chronicum migrans,ECM,EM)以及心脏、神经和关节等多系统受累的疾病,可使病人有不同程度的活动障碍和肢体瘫痪[2].
作者：吕冰；万康林 刊期： 2004年第02期
狂犬病是由狂犬病毒引起的脑炎与脊髓炎,一旦出现症状病死率为100%.随着生活条件的改善,城乡养犬、猫的数量增加,人被咬伤、抓伤的现象时有发生.
作者：李秋梅；俎燕会；张立新；张纵 刊期： 2004年第02期
狂犬病是狂犬病毒侵犯中枢神经系统所致的急性传染病,目前缺乏有效的治疗手段,其病死率近100%,患者一般于发病后3～6日内死于呼吸衰竭或循环衰竭[1].
作者：谌翠容；顾慧华；潘明霞 刊期： 2004年第02期
聚合酶链反应(PCR)是20世纪80年代发展起来的分子生物学技术.随着Taq酶的应用和自动化扩增仪的发展,PCR技术迅速渗透到生命科学的各个领域.
作者：梁江明；黄德蕙；林新勤；秦石英；周树武；韦锦平；鲁翠芳；陈达宗 刊期： 2004年第02期
弓形虫可侵犯患者的多种脏器,中枢神经系统受损常见,也是受损严重的部位,而且临床表现十分复杂[1].我们通过检测精神分裂症患者血清中的弓形虫循环抗原(CAg),弓形虫抗体(IgM、IgG),对阴性与阳性者的临床近期疗效及副反应做了前瞻性的研究,并对可能机理进行了探讨.
作者：朱毅平 刊期： 2004年第02期
肾综合征出血热(HFRS)在我国流行已有70余年,其病原汉坦病毒(Hantaan virus,HV)至少有10个型,我国证实有汉坦(Hantaan,HTN)和汉城(Seoul,SEO)型流行,可能还存在较多的亚型和其他型别[1].
作者：杨海；靳玲；姚培杰；杨钢 刊期： 2004年第02期
带状链尾蚴(Strobilocercus fasciolaris)是泡尾带绦虫(Hydatigera taeniaeformis)的幼虫,主要寄生于各类脊椎动物的肝脏中;人类也有感染的报道[1,2].
作者：张世炎；梁练；李玉莲；胡杰；戴广祥；易建荣；吴军 刊期： 2004年第02期
由于近年来国内饲养宠物者增多,家中所饲养的宠物与人朝夕相处、亲密无间.许多宠物生病是源于人,而有些人所患的疾病却是源于宠物,因此人与宠物共患病也呈不断上升的趋势.
作者：李善春；王英俊；郑辉明；戴育坚；叶彤 刊期： 2004年第02期
亚洲绦虫病是亚洲绦虫成虫寄生人体小肠引起的一种新认识的带绦虫病. 广泛分布于韩国、中国台湾、泰国、菲律宾、印度尼西亚等亚洲国家.近年来国内有关研究资料报告我国云南兰坪亦有流行[1,2].
作者：张莉莉；陶洪；张炳翔；王会珍；王云济；李增荣；杨继昆；杨炳新；李彦忠；庞颜坤；张皓明；李瑛；武樱 刊期： 2004年第02期
我国肺吸虫病不仅病原种类多,分布范围广,涉及全国24个省市自治区,症状复杂多样,易造成误诊.
作者：王文林；陈伟建 刊期： 2004年第02期
EHEC为人畜共患病,自1982年在美国首次报道了肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7大肠杆菌引起的出血性肠炎以来,目前世界上许多发达国家和一部分发展中国家都发生了O157∶H7大肠杆菌感染的爆发流行,已成为世界性的公共卫生问题.
作者：麻顺广 刊期： 2004年第02期
三峡库区为肺吸虫病流行区,该病的病原体为斯氏肺吸虫,患者以青少年居多[1].
作者：张敬如；王英；杨松；张锡林 刊期： 2004年第02期
作者：苏玲 刊期： 2004年第02期
禽流感(Avian Influenza)是禽流行性感冒的简称,是一种由A型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾病综合征,被世界动物卫生组织(OIE)规定为A类传染病,又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟.
作者：周祖华 刊期： 2004年第02期
