目的纤毛黏附因子P97是猪肺炎支原体特异性的外膜蛋白,该蛋白C端的R1区是其主要的抗原决定簇.本研究以大肠杆菌表达的P97黏附因子R1融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c鼠制备单克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)平行筛选,获得两株单克隆抗体杂交瘤细胞株A9-H7、H11-E7.两株杂交瘤细胞经体外连续传代1个月并冻存复苏后均能分泌高效价的抗融合蛋白抗体,并能在小鼠体内形成肿瘤,有效诱导产生高效价的腹水抗体.两株单抗腹水的ELISA效价分别为1×106和1×105.且均与天然Mhp168毒株显示出较强的反应特性.
作者：苏锐；邵国青；张映 刊期： 2005年第03期
目的诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原.采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测,了解广州市诺沃克样病毒流行情况,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较.方法用RT-PCR和ELISA对76份腹泻病人粪便,23份肛拭子,12份食物进行诺沃克样病毒检测.结果粪便通过RT-PCR检出阳性37份,ELISA检出阳性17份,肛拭子仅通过RT-PCR检出1份阳性,食物无阳性检出.结论这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发.RT-PCR的阳性率大于ELISA,且检品以粪便为好.并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于90%.
作者：蒋力云；吴新伟；刘于飞；张伟；刘远；沈纪川；李泽荣；狄飚；周秀珍；王鸣 刊期： 2005年第03期
目的克隆结核分枝杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体pCI-neo,并在真核细胞中进行表达.方法采用基因工程技术,首先以pcDNA3.1(+)-Mtb8.4为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出Mtb8.4-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-Mtb8.4-linker(pML)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12 基因,将hIL-12 基因与pML质粒进行连接重组,构建成Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染COS-7细胞后,用RT-PCR方法鉴定Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况.结果 Mtb8.4/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功;转染COS-7细胞后,Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达.结论 Mtb8.4/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础.
作者：李晖；李榕；钟森；任红 刊期： 2005年第03期
目的通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子.方法分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平;通过SDS-PAGE电泳和免疫印迹技术,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性.结果与结论 SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同.间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平.致弱尾蚴免疫血清共筛选出23种具免疫学活性的抗原分子,分子量分别为:24.5 kDa、28 kDa、36 kDa、43 kDa、44 kDa、48 kDa、54 kDa、58.5 kDa、60 kDa、62 kDa、66 kDa、68 kDa、70 kDa、75 kDa、79 kDa、85 kDa、87 kDa、91 kDa、95 kDa、97 kDa、105 kDa、108 kDa、110 kDa.其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占11种,尾蚴抗原分子4种,雄性成虫抗原分子3种,雌性成虫抗原分子6种,提示这些抗原分子可能为抗日本血吸虫病疫苗候选分子的重要靶标.
作者：吕志跃；汪世平；彭先楚；刘立鹏；李文凯；徐绍锐；周松华；余俊龙；戴橄；姜孝新；肖小芹；曾少华 刊期： 2005年第03期
目的建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术.方法依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物,建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术,并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较.结果与结论新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊.具有比传统的形态学分类方法准确,比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点.适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测.
作者：高琪；周华云；Cooper R.D；李凤华；苏云普；朱国鼎；曹俊；Beebe N.W 刊期： 2005年第03期
目的比较两种不同等位基因型间日疟原虫生物学形态特征.方法现场采集间日疟病人血样并进行基因分型,镜下观察形态并测量大小.结果与结论 72份现场分离株基因分型为Sal-1型40份,Belem型25份,混合感染7份,均查到典型的间日疟原虫,6例多重感染病例均发现在海南分离株,多重感染与基因型混合感染无关联.测量正常红细胞、寄生红细胞、环状体以及核大小差别有显著意义,Belem型比Sal-1型大,两种不同基因型差异的分子机制需进一步探讨.
作者：张山鹰；许龙善；张莹珍；谢汉国；高琪；陆惠民 刊期： 2005年第03期
目的间接ELISA法检测小鼠隐孢子虫抗体诊断隐孢子虫病的敏感性和实用性.方法经过方阵滴定检测确定佳的酶标抗体的工作浓度和佳的抗原包被量,进一步测定血清隐孢子虫抗体的光密度,并设立阴性对照组比较.结果 10、50、100、500个卵囊剂量组和阴性对照组比较均具有显著性差异(P＜0.05);将剂量对数与OD490值作相关分析,IgG的相关系数r=0.990,P＜0.05;IgM的相关系数r=0.954,P＜0.05;各组剂量对数与OD490作回归分析,呈线性关系,P＜0.05.结论间接ELISA法检测血清隐孢子虫抗体具有较高的敏感性和特异性,适合常规的流行病学调查.
作者：夏生林；宋宏；陈成章；余红娥 刊期： 2005年第03期
目的对α-三噻吩(α-T)作用后的白纹伊蚊幼虫进行形态学观察,以进一步探讨α-T对蚊幼虫的毒杀作用机制.方法对不同浓度α-T处理后的蚊幼虫用组织化学的方法进行光镜观察.结果实验组蚊幼虫中肠细胞出现空泡,伸长,破坏;脂肪体细胞轮廓不清,被红染的小滴填充,棕色颗粒增多;马氏管管腔狭窄,形状不规则,胞内蓝色颗粒变浅增多.结论α-T的主要作用靶器官包括中肠、脂肪体、马氏管,其主要作用方式包括触杀、胃毒等.经α-T和近紫外光(UVA)处理后的白纹伊蚊幼虫的死亡是其多个器官受损的结果.
作者：张玲敏；吕慧芳；任晓燕；朱佩娴 刊期： 2005年第03期
目的使用逻辑质方法探讨SARS患者T细胞亚群数量变化特征;方法从已知的关于SARS患者T细胞亚群样本数据,作逻辑质分析;从正与反命题判断正常人与SARS患者的外周血单个核细胞(PBMC)T细胞亚群CD+3,CD+4,CD+8检测结果的差异性;结果 SARS患者T细胞亚群数量与正常人有显著逻辑差异[(t＞4.671, P＜0.05;t＜2.336,P＞0.05)和(t＜1.927, P＞0.05;t＞4.690, P＜0.05)];结论 SARS患者的T细胞亚群数量与正常人的有显著逻辑差异.
作者：孙善才；刘群红；张荣波；孟静 刊期： 2005年第03期
目的探讨旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa 抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性.方法将纯化的重组融合蛋白WN10以20μg/只的剂量分3次免疫小鼠后,攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只,检查旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数、感染35d的肌幼虫数并计算减虫率,同时用ELISA法检测血清中抗WN10抗体IgG滴度.结果 WN10免疫小鼠后获得旋毛虫7日龄成虫、肌幼虫的减虫率分别为64.28%和61.21%,均与感染对照组和佐剂对照组差异显著;获得雌虫产新生幼虫的减虫率为16.46%,与感染对照组和佐剂对照组差异不显著; WN10免疫组小鼠在第3次免疫后1周可检测到高滴度的抗WN10抗体IgG,在攻击感染旋毛虫9周后仍维持在较高水平.结论编码旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白可诱导小鼠产生较强的抗旋毛虫保护性免疫.
作者：原丽红；付宝权；刘明远；张亚兰；高飞；吴秀萍；李莲瑞；林本夫；卢强；陈启军；P.Boireau 刊期： 2005年第03期
目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)S1基因片段,构建原核表达载体,并在宿主菌中诱导表达带组氨酸标记的融合蛋白.方法人工合成SARS-CoV S1基因片段,克隆至pUCm-T载体,经DNA序列分析和酶切后,将酶切片段亚克隆至原核表达载体pET-28b(+),重组子pET-28b/SARS-S1转化大肠杆菌ril,IPTG诱导表达,Western blot鉴定表达产物;纯化表达产物并用ELISA检测其抗原特异性.结果获得了主要以包涵体形式存在的32kD的目的蛋白,Western blot 鉴定其为带组氨酸标记的融合蛋白,ELISA证明其能与合成肽的抗体及病人血清中的SARS-CoV的抗体特异结合.结论成功构建了SARS-CoV S1基因的组氨酸标记表达载体pET-28b/ SARS-S1,并在ril中得到了高效表达 ;表达的S1蛋白具有较好的抗原特异性,便于免疫动物以获得特异抗体,为SARS-CoV的实验室快速诊断打下了基础.
作者：尹卫国；吴移谋；谭立志；肖建华；杨秋林；张文波；曾桥；万艳平 刊期： 2005年第03期
目的克隆A组β-溶血性链球菌(Group A Streptococcus, GAS)DNase B基因序列.方法根据genBank中登录的多种DNA酶B的序列,进行同源性分析,设计相对保守的针对DNase B基因的引物,以链球菌基因组为模板进行PCR扩增,目的片段经TA克隆至pMD18-T质粒后测定其核酸序列,然后进行序列的查询与比对.结果成功克隆出A组链球菌DNase B基因全长序列共810 bp,其中包括中128 bp的信号肽编码区和681 bp的成熟肽编码区,以及5'端非编码区的一个T.结论 A组β-溶血性链球菌DNase B基因序列的成功克隆,为对其深入研究打下坚实基础.
作者：赵宏伟；王滔；林瑜；蔡忠钦；陈骏扬；高建民 刊期： 2005年第03期
目的了解我国不同地区嗜人按蚊的吸血习性.方法以人、畜帐诱捕法,调查广东省珠海市横琴岛(北纬22°05′)和辽宁省沈阳市法库县(北纬42°30′)嗜人按蚊趋吸人、牛血习性;以平均每人(或每头牛)每夜诱获蚊数计算叮咬率,根据平均人、牛叮咬率和当地实际人、畜宿主数加权法估算嗜人按蚊人血指数; 应用牛帐诱捕法观察嗜人按蚊夜间吸血活动节律.结果嗜人按蚊是珠海市横琴岛和沈阳市法库县的优势蚊种,分别占全部捕获按蚊数的81.78%和99.96%.珠海市横琴岛嗜人按蚊趋吸人、牛血率分别为26.45%和73.55%,其中深井观察点估算嗜人按蚊人血指数为0.617,三叠泉渡假区观察点无家畜,嗜人按蚊的人血指数为1.0.沈阳市法库县嗜人按蚊趋吸人、牛血率分别为0.86%和99.14%,估算人血指数为0.056.两地嗜人按蚊均于傍晚为吸血活动高峰,珠海市横琴岛19.00-20.00时占全部诱获蚊的41.75%,23.00-24.00时占6.53%;沈阳市法库县20.00-21.00时占全部诱获蚊的49.25%,23.00～24.00时仅占4.92%.结论珠海市横琴岛和沈阳市法库县嗜人按蚊偏嗜牛血,吸血活动高峰出现于傍晚,明显不同于我国北纬25°～33°地区文献报导的嗜人按蚊,后者偏嗜人血,吸血活动高峰出现于午夜前后.
作者：徐保海；许龙善；谢汉国；朱泰华；刘成模；潘波；刘庆生；吴军；谭爱军；王利群；阮峰；李凤华 刊期： 2005年第03期
目的利用针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0和胶体金标记亲和纯化的羊抗鼠IgG, 建立一种以微孔滤膜为固相载体,快速检测沙门氏菌O9抗原的斑点免疫金渗滤法(DIGFA).方法与结果以沙门氏菌点膜,加入单抗3-47-0,洗涤后再加入胶体金标记的羊抗鼠IgG,阳性结果呈红色圆点,阴性结果无颜色,整个检测过程仅需10 min.肠炎沙门氏菌标准菌株测定该方法灵敏度为6×104CFU/点.该方法可检测所有已知含O9抗原的沙门氏菌,而不与其它沙门氏菌、肠杆菌科其他细菌和常见革兰氏阳性细菌反应.人工感染样品经前增菌和选择性增菌处理后即可进行瞬时检测.结论建立了一种快速、简便、准确检测沙门氏菌O9抗原的斑点免疫金渗滤法,在人类医学和动物医学领域有着广阔的应用前景.
作者：曹春梅；焦新安；刘海侠；张晓明；潘志明；黄金林；张如宽；刘秀梵 刊期： 2005年第03期
目的利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测.方法采用SYBR Green I随机掺入法,以Roche 试剂盒为标准,比较两公司的DNA聚合酶,用鼠疫菌31004建立荧光PCR反应体系;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物,检测其灵敏度和特异性,以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定275株鼠疫耶尔森氏菌,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度.结果建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系;EV76的检测灵敏度可达每反应体系1.6个菌;检测我国18个生态型共计275株鼠疫耶尔森氏菌及28株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果,28株对照菌株均为阴性;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系4 000个菌.结论该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测.
作者：张玲；翟俊辉；周冬生；郭兆彪；毕玉晶；王津；杨瑞馥 刊期： 2005年第03期
目的利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.方法将测序正确的AMA-1(Ⅲ)基因插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选高拷贝转化子,利用甲醇进行诱导表达.表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测.结果 AMA-1(Ⅲ)蛋白表达于培养上清,蛋白的相对分子质量分别为16.3ku,免疫印迹结果表明AMA-1(Ⅲ)基因表达蛋白能被抗AMA-1(Ⅲ)的单抗所识别,出现特异条带,推算AMA-1(Ⅲ)蛋白的表达量为0.8g/L.结论酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.
作者：张忠广；赵恒梅；宫玉香 刊期： 2005年第03期
疯牛病(mad-cow disease),学名为牛海绵状脑病(Bovine Spongiform Encephalopathy BSE),以中枢神经系统退化为主要特征,是一种慢性、致死性、传染性、食源性的人畜共患病.特殊的致病因子Prion不仅能在动物之间相互传染,而且有可能通过食品、化妆品、药品、血液等传染给人(引起人类的疾病主要有库鲁病(Kuru)、新型克-雅氏病(vCJD)、格氏综合征(GSS)等[1-2]).该疾病早于1986年发生在英国,之后传遍整个欧洲,近几年,又波及到日本等国,严重地威胁到人类的身体健康和生命安全,给社会也造成巨大的经济损失.
作者：宋宏新；程军 刊期： 2005年第03期
斑点热群立克次本(Spotted Fever Group Rickettsiae,SFGR)是引起斑点热的病原体,该病原体是立克次体目中复杂的一群.1984年版
作者：张丽娟；范明远 刊期： 2005年第03期
汉坦病毒属布尼亚病毒科(Bunyaviridae)汉坦病毒属(Hantavirus,HV),为分节段的单股负链RNA病毒,病毒基因组有大(L)、中(M)、小(S)3个片段组成,分别编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶、病毒糖蛋白G1和G2以及病毒的糖衣壳蛋白(NP)[1].已知人类感染HV病毒主要引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS).该病毒自1978年韩国和1981年我国被发现并分离成功以来,已建立了许多的实验诊断技术和研究方法,并不断地改进和发展,极大的提高了相关实验技术的特异性和敏感性[2-3].近年来,随着分子生物学技术迅速发展,特别是PCR和序列分析技术的广泛应用,人们对HV病毒分子结构本质和特征的研究取得了突破性进展,新发现的HV病毒数目急剧增加,到目前为止至少有近30种HV病毒血清/基因型[4-5].现将近年基因分型及其分子流行病学研究综述如下.
作者：杨占清；俞守义 刊期： 2005年第03期
由于乙型肝炎病毒(HBV)感染已成为全球面临的严重公共健康问题之一,因此研究HBV感染机制及其致病的分子机理,寻找有效的防治方法极为迫切.随着病毒学、分子生物学及免疫学等相关学科的发展,国内外应用嗜肝病毒感染相关宿主的动物模型开展了有关乙肝感染机制、机体免疫、抗病毒药物等方面的研究, 取得了一些成效.本文就HBV及其它嗜肝病毒感染的动物模型研究进展作一综述.
作者：梁亮；李瑗 刊期： 2005年第03期
囊虫和绦虫在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大.猪的囊尾蚴感染率也较高,每年造成的经济损失达20亿元.猪囊虫病的免疫预防是一个难度很大的课题.主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产.随着分子生物学技术在寄生虫研究领域的应用,通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点.澳大利亚学者Johnson[1] 用基因工程方法克隆并表达了羊绦虫六钩蚴45W抗原,用其制成的疫苗对羊的保护率达94%.这一突破性成功标志着用基因工程的方法研制猪囊虫疫苗是切实可行的.疫苗研究的另一策略是鉴定并克隆宿主保护性抗原的同源序列.分子生物学方法使这一策略可以快速实现,而且在牛囊虫证明是非常有效的.用编码羊绦虫18K保护性抗原的cDNA为探针,从牛绦虫mRNA中克隆了一个同源序列TSA18,其编码蛋白与T.ovis 18(To18)的同源性为80%,表达蛋白能诱导高水平的免疫保护,抵抗牛绦虫虫卵的攻击感染[2].六钩蚴18kD抗原所诱导的免疫保护力在抵抗几种带科绦虫方面也是有效的,有些基因的工程苗已用于实际的生产[3].为了验证TSO18在囊虫病预防中的作用,获得新的更有效的免疫原基因,我们进行了该项研究.
作者：骆学农；郑亚东；吴旭刚；窦永喜；景志忠；才学鹏 刊期： 2005年第03期
卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii,Pc)是一种常见的机会性致病原虫,由其引起的卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)是艾滋病(AIDS)等各类先天或后天免疫机能低下患者常见的并发症和主要死亡原因,近年来在医学界受到高度重视.目前,国内外主要以戊烷脒或复方新诺明治疗本病,但临床发现这些药物存在用药时间长、毒副作用大、停药后易复发等缺点,因此,寻找高效、低毒和廉价的抗PCP药物已成为一项重要研究课题.我们以大蒜素治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎,结果显示具有一定疗效.为进一步探讨大蒜素对卡氏肺孢子虫的杀虫机理,本文利用电镜对经大蒜素治疗后的PCP大鼠肺超薄切片进行了观察.
作者：卢致民；唐宏炜；张振明；张进顺；刘金花；薄爱华 刊期： 2005年第03期
蛔虫是危害地域广、感染人数多的病原生物之一,全球蛔虫感染者约14亿,我国感染人数近全国人口的一半,遍及各省.众所周知,蛔虫成虫在小肠寄生,可引起营养不良导致发育障碍,尤其是在营养差或感染严重的儿童.这种营养不良症状与宿主肠粘膜损伤所致的消化和吸收障碍有关.对这种肠粘膜病理改变作用机制的探讨,以往也仅限于肠组织病理切片检查、以及用光镜和电镜对肠粘膜形态学改变的观察等,在蛔虫感染所引起的这些肠粘膜的改变以及所伴随临床过程的发生和转归,是否有凋亡过程的参与和调节,目前并不清楚.而有关蛔虫ABF与宿主细胞凋亡关系的研究,尚未见文献报道.本文首次观察到蛔虫体腔液诱导肠上皮细胞凋亡的现象并探讨了HCT-8细胞凋亡与ABF浓度和时效的关系.
作者：翁培兰；袁铿；周宪民；彭卫东 刊期： 2005年第03期
社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)是威胁人类健康的常见病.随着生存环境的改变,抗生素的广泛应用以及先进诊断方法的不断出现等,CAP中非典型病原体如肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cp)的感染率在不断上升.为了解本地区下呼吸道Mp、Cp感染的情况,我们对2001年10月-2003年9月期间于我院呼吸内科住院的242例CAP患者进行了回顾性分析.
作者：李球兵；王红阳；李琳 刊期： 2005年第03期
作者：颜松龄；颜苹苹 刊期： 2005年第03期
