目的 对2007年深圳市报告的一起输入性疑似登革热病例查明病因.分离鉴定病原体,从分子水平分析分离株的生物学特征.方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、胶体金免疫层析法和实时荧光定量PCR方法分别检测登革病毒IgM、IgG抗体和病毒核酸,并用C6/36细胞分离登革病毒.采用RT-PCR方法扩增病毒PrM/M-E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革毒株进行同源性比较和进化树分析.结果 从患者血清标本中检测到登革病毒IgM、IgG抗体和登革3型病毒核酸,并首次成功分离到登革3病毒,将其命名为DEN3-SZ0739.深圳市登革3型病毒分离株SZ0739与登革3型国际标准株H87株、国内外流行株80-2、GWL-25株在PrM/M-E基因上核苷酸同源性分别为94.1%、93.9%、96.9%,而与登革1、2、4型国际标准株HAWAII、NGC、H241同源性分别为66.1%、59.1%、58.2%.进化树显示SZ0739株与2007年新加坡分离株SGEHI(D3)0235Y07亲缘关系近,在进化树的同一分支上,和1 416株(India 1984)、1 326株(Sri Lanka 1981)、1 696株(Samoa 1986)等同属基因Ⅲ亚型.结论 从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该输入病例是由登革3型病毒引起,该毒株有可能来源于新加坡.
作者：阳帆；张仁利；吴春利；黄达娜；许少坚；武伟华；李玥 刊期： 2012年第09期
目的 克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ) 亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvum NJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系.方法 根据GenBank上C.parvum Iowa II株CyP-type PPIase基因序列,设计2对引物,应用巢式PCR扩增目的 基因,并将其克隆入pMD18-T载体,对重组子进行双酶切和菌落PCR鉴定并测序,应用生物信息学方法分析C.parvum NJ株CyP-type PPIase基因与其它隐孢子虫株的核苷酸和氨基酸序列差异.结果 巢式PCR扩增获得特异的目的 基因,双酶切和菌落PCR鉴定获得正确的重组子,测序表明,扩增基因组DNA序列为746 bp,含有目的 基因ORF全长570 bp,编码190个氨基酸.序列分析表明,我国C.parvum NJ 株与国外分离的Iowa II 株CyP-type PPIase基因的氨基酸序列具有99%的同源性.进化树分析表明,C.parvum NJ株与Iowa II 株CyP-type PPIase基因之间的亲缘关系近,与脑膜炎双球菌的亲缘关系远.结论 成功克隆C.parvum CyP-type PPIase基因,C.parvum CyP-type PPIase基因在氨基酸水平高度保守.
作者：付芹芹；杨光；王穗湘；孙小会；郭志云；张丽菊；陈川；刘国宁；荆春霞 刊期： 2012年第09期
目的 构建尘螨1类变应原ProDer f 1和ProDer p 1基因的改组文库,并筛选出编码优势T细胞表位和低B细胞表位的嵌合基因.方法 PCR扩增ProDer f 1和ProDer p 1基因,等量(V/V)混合PCR产物,DNaseⅠ酶切200 s,回收50～150 bp的基因片段,进行3轮无引物PCR,以此为模板分别用ProDer f 1和ProDer p 1基因的特异性引物进行有引物PCR,切胶回收与ProDer f 1和ProDer p 1基因大小相当的基因,连接pUCm-T载体,并转化E.coli DH-5α,涂LB板(Amp+)37 ℃过夜培养,随机挑取单克隆菌落进行PCR验证,100个阳性克隆测序并进行序列比对及T细胞和B细胞表位预测.结果 ProDer f 1特异性引物扩增并筛选出10个改组明显的重组基因,生物信息学分析显示:与野生型变应原相比,6个重组子的T细胞表位增加,B细胞表位减少;而ProDer p 1特异性引物扩增的基因未发生明显交换.结论 应用DNA shuffling技术成功构建尘螨变应原ProDer f 1基因的嵌合文库,并筛选出了编码优势T细胞表位、低B细胞表位的嵌合基因.
作者：郭伟；马玉成；姜玉新；李朝品 刊期： 2012年第09期
目的 应用酵母双杂交技术筛选人类胰腺细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用的结合蛋白.方法 醋酸锂法将诱饵质粒pGBKT7-HBeAg转化酵母菌AH109;同时扩增纯化人胰腺细胞cDNA文库并转化酵母菌株Y187.应用酵母双杂交系统3将二者进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和X-α-gal上进行双重筛选.提取阳性菌落质粒并电击转化感受态大肠埃希菌DH5α,BglⅡ酶切鉴定及与诱饵质粒的共转化回交实验验证,将阳性克隆测序并在GenBank里进行同源性比对和生物信息学分析.结果 初步筛选出包括顺乌头酸酶在内的13个与HBeAg相互作用的蛋白.结论 HBeAg可能与胰腺文库蛋白相互作用,与2型糖尿病和肝脏脂肪变性等代谢性疾病密切相关.
作者：王晓春；李朝品 刊期： 2012年第09期
目的 在大肠杆菌中表达重组1-4型登革病毒外膜蛋白,为研制登革病毒抗体快速检测试剂提供原材料.方法 根据基因序列设计、合成引物并经PCR方法扩增1-4型登革病毒部分外膜蛋白基因片段,克隆至表达载体pET30a(+)并在大肠杆菌中诱导表达.小量表达以及纯化后的重组蛋白做SDS-PAGE分析并经WB实验验证其免疫活性.结果 酶切消化及电泳结果表明4种重组质粒均构建成功.经IPTG诱导后,4种重组大肠杆菌均可表达相应的重组蛋白.纯化前后的重组蛋白经WB实验表明,4种重组蛋白均能与对应型别的病毒感染者血清反应.结论 利用大肠杆菌表达系统,成功表达重组1-4型登革病毒外膜蛋白,4种型别的重组蛋白可被各自血清型的抗体结合,均具有免疫反应活性.
作者：翁育伟；张志珊；林梅清；王金章；黄萌；郑奎城；严延生 刊期： 2012年第09期
目的 建立一种灵敏的环介导等温扩增方法(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)用于空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)的快速检测.方法 根据已公布的空肠弯曲杆菌旋转酶基因(gyrA)设计引物,建立并优化LAMP反应体系,对检测方法的特异性和灵敏度进行验证,并运用该方法对我国不同地方鸡种空肠弯曲杆菌的携带率进行调查.结果 该方法能扩增出典型的梯形条带,且扩增产物的酶切鉴定结果与理论值相符;对单增李斯特菌等8株实验菌株进行检测,仅空肠弯曲杆菌的LAMP结果为阳性;该方法检测空肠弯曲杆菌纯培养物的灵敏度为20 cfu/mL,高于常规PCR;不同地方鸡种空肠弯曲杆菌携带率介于6%～90%之间,差异显著.结论 本试验建立的空肠弯曲杆菌LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,有望在临床样品检测中发挥作用.
作者：唐梦君；周生；张小燕；唐修君；顾荣；高玉时 刊期： 2012年第09期
目的 构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应.方法 克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定.将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2 w肌注免疫(100 μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1 d和末次免疫后2 w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG.各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间.结果 真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61 kDa.pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答.攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长.结论 构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性.
作者：赵焕阁；王华；黄用豪；周松林；郭峻莉；黄凤迎；林映莹；谭光宏 刊期： 2012年第09期
目的 阐明来源于福建省耐药性调查的46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征,为福建省耐多药结核病快速诊断方法的建立提供一定的分子基础.方法 对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验.选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增包含rpoB热点突变区的基因片段,测序后比对分析.结果 15株全敏感株未检测到突变.42株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因检测到13种突变类型,涉及10个氨基酸,突变率为91.30%.突变均位于核心突变区内,包括9种点突变、1个插入突变和3种联合突变,531位和526位密码子的点突变率之和达69.57%.结论 福建省耐多药结核分枝杆菌杆rpoB基因常见的点突变发生于531位和526位.
作者：魏淑贞；陈求扬；万康林；林淑芳；梁庆福；赵永；林建；郑金凤 刊期： 2012年第09期
目的 有效检测狂犬病毒抗原.方法 本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子.将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+) 分别双酶切、胶回收后连接并转化至Rosetta(DE3) 菌株.挑选阳性重组表达菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定.同时对佳表达条件进行了研究,重组菌在30℃、IPTG终浓度为0.6 mmol/L、诱导表达6 h时重组蛋白的表达量达到大值.结果 狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区通过密码子优化后能够在大肠杆菌中成功表达,表达产物具有良好的反应原性.结论 该项研究为后续检测狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的研发建立基础.
作者：鞠美芳；殷相平；柳纪省 刊期： 2012年第09期
目的 探讨气象因素与发热伴血小板减少综合征(FTLS)发病的关系.方法 对信阳市2011年FTLS各月发病数进行描述性分析,对可能影响FTLS发病的月平均气压、月平均气温、月平均湿度、月平均风速度和月降水量进行单因素相关分析和多元逐步回归分析.结果 FTLS发病与月平均气压呈负相关(P<0.01),与月平均气温、月平均相对湿度和月降水量呈正相关(P<0.05).逐步回归法筛选出回归方程为:Y(月发病数)=-12.70+0.28X2(月平均气温),决定系数R2=0.76.结论 气温对FTLS发病有重要影响.
作者：尤爱国；康锴；王海峰；唐晓燕；陈豪敏；许汴利 刊期： 2012年第09期
目的 本研究根据GenBank中登录猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)株的3D蛋白序列基因特征,设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PKV的实时荧光定量RT-PCR方法.结果 该方法检测PKV的3D基因在6.42×102 ~ 6.42×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%,扩增产物的融解曲线分析只出现1个单特异峰,融解温度为(84.94±0.24)℃,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号,特异性强.所建立实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.26%~1.14%,组间变异系数0.63%~1.79%,重复性好.结论 本方法的建立为PKV的早期诊断及定量分析PKV感染水平和确定感染靶器官提供新的检测方法.
作者：修金生；陈小权；王斌；李涛 刊期： 2012年第09期
目的 建立运用多重PCR和基因芯片技术一次检测腹泻病粪便同一标本中7种常见致病菌的方法.方法 筛选7种常见腹泻病致病菌的特异基因作为检测目的 基因,并据此设计引物及探针,制备相应的寡核苷酸芯片,检测了标准菌株,并直接检测腹泻病粪便标本64份.结果 以多重PCR扩增出7种腹泻病致病菌特异的致病基因片段,并与基因芯片相应的探针杂交.低检测菌数为10到100 cfu/mL.64份腹泻病粪便标本检测出45份致病菌.其中33份志贺菌、12份副溶血弧菌.敏感性高于粪便培养方法.结论 该基因芯片直接检测腹泻病致病菌,具有较高的敏感性和特异性,达到了高通量即高效的检测目的,具有较好的实用性.
作者：王军；逄建涛；刘玉琦；周越朔；程云；曲芬；姚志建；周骋 刊期： 2012年第09期
目的 观察脱落酸抑制剂氟啶酮对小鼠弓形虫病的影响.方法 给感染弓形虫RH株的小鼠腹腔注射氟啶酮,观察小鼠生存延长率、体重变化;光镜及电镜观察腹腔中弓形虫形态;脏器组织印片评估体内弓形虫扩散情况.结果 与对照组相比,氟啶酮治疗的小鼠弓形虫病症状出现晚且程度较轻,生存时间延长(P<0.05),生存延长率为45%,体重减少率为6.13%,而对照组体重减少率为7.23%;对照组小鼠腹腔中以游离速殖子为主,实验组则以细胞内虫体为主;实验组小鼠脏器受虫体累及的时间稍晚,感染程度也比对照组轻.结论 氟啶酮能对小鼠弓形虫病起抑制作用.
作者：孔璟；叶彬；武卫华 刊期： 2012年第09期
目的 在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1 HA并分析其免疫原性.方法 根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/ Bip/ V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA.酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro 共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平.结果 获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的 蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1 HA 抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体.结论 获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景.
作者：于虹；温晶；杨裔；俞建萍；佟双；郭彦；赵光宇；寇志华；周育森 刊期： 2012年第09期
目的 长角血蜱(Hemaphysalis longicornis)不仅吸食家畜血甚至人血,还是多种疾病的传播媒介,对该蜱的研究具有重要的医学和兽医学意义.在大肠杆菌中表达长角血蜱的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)(HlGPx),为该酶在长角血蜱中的生理作用研究奠定基础,为该病媒的免疫防控提供参考.方法 根据长角血蜱EST文库提示的片段序列的信息,设计引物采用PCR方法从长角血蜱成蜱的cDNA中扩增谷胱甘肽过氧化物酶基因.利用定点突变将该基因编码序列中一个编码硒半胱氨酸的密码子TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC,与表达载体pGEX-4T-1重组,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及免疫印迹分析.结果 成功获得了长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶全长序列,突变后在大肠杆菌中诱导表达了约51kDa的重组蛋白,Western-blot显示表达产物与抗GST抗体有很强的交叉反应.结论 突变的HlGPx可以在大肠杆菌中表达并可用于下一步制备免疫血清及功能分析.
作者：张超颖；郭果为；王正朝；黄晓红 刊期： 2012年第09期
目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原(Der f 3)诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果.方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组(阴性对照组)、卵清蛋白(OVA)组(阳性对照组)和Der f 3组(实验组),OVA组和Der f 3组分别使用OVA和纯化Der f 3蛋白于第0、7、14 d进行腹腔注射致敏,于第21 d开始雾化吸入,连续7 d,PBS组则换成PBS进行腹腔注射和雾化吸入.后一次雾化吸入24 h后,分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液(BLAF)中的白细胞计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BLAF和脾细胞培养上清中IL-4、IL-2、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化.结果 OVA组和Der f 3组小鼠肺部支气管、血管粘膜下及周围肺组织有明显的炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落,血管壁明显水肿等,而PBS组未见明显病理改变;Der f 3组的BALF中白细胞总数[(19.99±1.03)×106个/mL]及嗜酸性粒细胞(EOS)[(1.81±0.07)×106个/mL]计数均明显高于PBS组(P<0.01);与PBS组相比:BALF中IL-4 [(80.99±9.06) pg/mL]、IL-17 [(209.69±31.86) pg/mL]呈高水平表达(P<0.01),而IL-2 [(8.29±1.27) pg/mL]和IFN-γ [(55.04±18.85) pg/mL]含量则显著下降(P<0.01);上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化.Der f 3组血清中IgE [(31.92±2.68) U/mL]、IgG1 [(16.46±4.32) μg/mL]的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和Der f 3组间所有指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论 粉尘螨重组Der f 3蛋白可成功建立小鼠变态反应性气道及肺部炎症动物模型.
作者：唐小牛；马红丹；姜玉新；李朝品 刊期： 2012年第09期
目的 利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法.方法 根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度.利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性.通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证.结果 应用多重TaqMan荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR低检测下限均约为102copy/μL(13~24 fg /μL),是常规PCR灵敏度的100倍.结论 建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌.
作者：刘志国；罗成旺；张利；姜海；赵鸿雁；朴东日；田国忠；崔步云 刊期： 2012年第09期
宿主激素和细胞因子对体内血吸虫虫体的寄居、存活、生长及成熟均具有重要影响,可明显改变二者的适应性.对影响血吸虫发育的宿主激素和细胞因子生物学效应的分子水平研究,已成为探索控制血吸虫病新途径的重要内容.本文重点就近年来发现和证实的影响血吸虫发育的宿主相关激素和细胞因子及它们间的相互作用等作一简要综述.
作者：成钢；王京仁 刊期： 2012年第09期
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人兽共患病,给养殖业、人类健康和动物源性食品安全带来很大威胁.布鲁氏菌的IV型分泌系统在布鲁氏菌的致病力上发挥重要作用,与布鲁氏菌在宿主细胞内生存、复制有密切关系.IV型分泌系统由virB操纵子编码,由同一启动子调控,是一个多蛋白的跨膜复合物,受感染宿主细胞类型、生长温度、营养条件、pH值等多因素调控;并且对布鲁氏菌的胞内、胞外的生存产生重要影响.
作者：刘倩宏 刊期： 2012年第09期
目的 了解鄱阳湖湖沼型血吸虫病亚类疫区血吸虫病流行特征.方法 选择每种亚类型疫区流行村进行社会经济状况、血防知识和血防意识水平以及疫水接触方式等流行因素问卷调查.结果 职业以农民、渔民为主;文化程度以小学、初中为主;收入来源以捕鱼、种田、打工为主;血防意识水平普遍较高;疫水接触方式多样,以捕鱼接触疫水为主.洲垸型疫区收入来源90%以种田为主,洲岛型73%以捕鱼为主;洲滩型和洲岛型血防知识知晓率(80%以上)好于洲垸型(53.85%)和湖汊型(31.25%);湖汊型和洲岛型捕鱼接触疫水占62.5%和69.23%,湖汊型洗衣服接触疫水频率高.结论 鄱阳湖湖沼型亚类疫区血吸虫病流行因素多样,特征复杂,注重从血吸虫病的传播特点及当地流行特征因地制宜制定综合防治模式.
作者：朱静；赵安；程巧贞；黄朝清；唐启强；张刚刚 刊期： 2012年第09期
目的 通过对我院52例脊柱结核的误诊分析,提高临床医师对脊柱结核的认识,降低误诊率.方法 对我院2005-2011年收治的257例脊柱结核患者中52例误诊病例进行综合分析.结果 2例误诊为颈椎病,2例误诊为颈肩筋膜炎,4例误诊为肋间神经炎,3例误诊为棘上或棘间韧带炎,13例误诊为腰肌劳损,8例误诊为腰椎间盘突出症,13例误诊为椎体肿瘤,7例误诊为骨质疏松及压缩性骨折;给予抗结核及手术治疗后49例痊愈,3例复发.结论 提高对脊柱结核临床特点的认识,重视体检和影像学表现,拓宽诊断思路,以减少误诊率.
作者：林章雄；叶君健；陈宣维；陈春永；谢其扬 刊期： 2012年第09期
