目的 了解发热门诊呼吸道感染患者中的肺炎衣原体感染状况,为临床诊断和治疗提供依据.方法 采集2010年11月15日至12月15日在北京友谊医院发热门诊就诊,诊断为呼吸道感染患者的咽拭子标本92例,采用国际肺炎衣原体参考菌株TW-183作为阳性对照和优化PCR条件.用肺炎衣原体种特异性引物对其16S rRNA基因进行PCR检测,阳性产物进行基因测序,结果采用SPSS 10.0软件进行数据统计分析,计数资料比较用(2检验,P≤0.05为差异有统计学意义.结果 CpnA-CpnB PCR可检测到5×10-1 IFU的肺炎衣原体.92例呼吸道感染患者的咽拭子标本中PCR阳性者为30例,阳性率为32.6％.男性和女性、不同年龄组、以及上呼吸道和下呼吸道感染病例的阳性率间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 在发热门诊有呼吸道症状的病例中,肺炎衣原体感染率较高.临床医生应对肺炎衣原体感染加以重视.CpnA CpnB PCR法是一灵敏快速的肺炎衣原体筛查方法.
作者：刘志广；齐海宇；郑晓燕；阴赪宏；万康林；蒋毅 刊期： 2015年第05期
目的 了解肺炎克雷伯菌主要的β-内酰胺酶和整合子耐药基因型,明确其耐药特性.方法 回顾性分析我院2012年1月至2013年5月临床分离的242株肺炎克雷伯菌药敏结果,聚合酶链反应(PCR)检测其β-内酰胺酶及整合子耐药基因.结果 242株肺炎克雷伯菌对16种抗生素存在不同程度的耐药,其中氨曲南、头孢唑啉、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松和头孢他啶耐药率较高,分别为76.86％、65.70％、63.64％、62.40％和59.92％;亚胺培南、丁胺卡那、厄他培南和哌拉西林/他唑巴坦较为敏感,分别为17.77％、18.88％、18.88％和23.55％.PCR结果显示,ESBLs基因阳性155株,占64.05％,主要为TEM型和SHV型,两者均存在的菌株有114株,占产ESBLs基因菌株的73.55％(114/155).其次为KPC基因86株,占35.54％;此外AmpC基因43株,占17.77％,全部为DHA型.整合子基因128株,占52.89％,以整合子1(intI-1)为主,共检出120株,占49.59％.结论 我院肺炎克雷伯菌耐药情况严重,主要的耐药基因型为TEM型、SHV型、KPC和intI-1.
作者：郭普；贺晓珊；梅传忠；李兴武；刘双成；沈继龙 刊期： 2015年第05期
目的 评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MehPro TB/SL的分析性能以及临床性能.方法 首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价.结果 该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分.可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA.当突变比例为30％或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分.23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性.和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0％(9/10),阿米卡星80.0％(8/10),卷曲霉素85.7％(6/7);特异性为卡那霉素98.8％(85/86),阿米卡星98.8％(85/86),卷曲霉素96.6％(86/89).试剂盒检测结果与测序结果一致.结论 该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床.
作者：张婷；付军；王国治；陈保文；杨蕾；卢锦标；许晔；李庆阁 刊期： 2015年第05期
目的 比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果.方法 选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析.结果 中和试验的阳性检出率为34.4％(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0％(45/90),47.8％(43/90)和38.9％(35/90).灵敏度高的是Keqian,为90.32％,但其特异度只有71.19％;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87％和79.66％;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94％和16.95％.与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04.显示3种试剂盒具稳定性.结论 目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高.
作者：马淑娟；熊益权；张琼花；周军华；李杏；郑雪燕；蒋丽娜；钟雪珊；陈少威 刊期： 2015年第05期
目的 克隆表达粉尘螨第24组过敏原eDNA,研究其免疫学特性,为深入研究尘螨致敏机制提供基础.方法 以粉尘螨cDNA文库为模板,根据Der f24基因序列(GenBank Accession No.KC669700)设计引物,PCR扩增Der f24 cDNA,构建原核表达载体pET-His-Derf24,并经酶切鉴定和DNA测序,转化至E.coli BL21(DE3) plysS,用异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达;重组产物经Ni2螯合层析纯化,获得重组的Der f24(14 kDa);对重组蛋白进行IgE-Western blotting(WB)实验和IgE-ELISA实验;通过Swiss-model软件模拟Der f24的3D结构并通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞表位,合成三个肽(位置分别为75-88 aa、44 57 aa和104 117 aa)进行IgE-ELISA实验.结果 克隆的Der f24基因cDNA序列全长为357 bp,编码118个氨基酸(GenBank Accession No.KP064571);Der f24原核表达主要形式为不可溶的包涵体,纯化后的重组Der f24蛋白分子量约为14 kDa.IgE-WB结果显示,重组Der f24与10例粉尘螨过敏患者血清呈强阳性反应,而与10例健康对照组均为阴性.IgE-ELISA结果显示,合成表位肽(No.1 75-88 aa:Z=5.6734、No.2 44-57 aa:Z=5.6720和No.3 104-117 aa:Z=5.6791;P＜0.0001)均与22例粉尘螨过敏患者血清呈阳性反应,而与22例健康对照组血清呈阴性反应.结论 本研究成功克隆表达了Der f24 cDNA,重组Der f24可结合粉尘螨过敏血清IgE,鉴定了3个潜在的IgE B细胞表位.本研究为进一步防治螨性过敏性疾病奠定了技术基础.
作者：邱聪龄；钟小军；黄毅；刘晓宇；蔡泽浪；刘志刚；吉坤美 刊期： 2015年第05期
目的 探讨疟疾感染过程中调节性T细胞(Treg)对DCs免疫功能的抑制作用与机理.方法 建立P.y17XL感染和Tregs消除BALB/c小鼠模型,计数红细胞感染率;感染后第0、3和5d制备脾细胞悬液,FACS检测脾脏中DCs亚群数量变化;DCs表面分子MHC-Ⅱ、CD80和CD86的表达水平及分泌IL-10的DCs数量变化.结果 与正常感染组小鼠相比,Tregs消除组小鼠于感染后第3 d DCs亚群,MHC-Ⅱ,CD80和CD86的表达均明显增加,感染后第5 d DCs亚群数量、MHC-Ⅱ和CD80表面分子的表达均明显减少;然而分泌IL-10的DCs数量于感染后第5d明显增加,是同天感染鼠的3.5倍.另外,我们采用两种anti CD25mAb体内阻断Tregs,效果有着明显的差异.7D4能长期有效的阻断CD25表达,而PC61仅能短期内维持CD25低表达.结论 P.y17XL感染早期,BALB/c小鼠Tregs数量升高与DCs功能受损具有相关性.Tregs能抑制DCs的免疫功能,这一现象可能与Tregs调控DCs的亚群、表型和细胞因子分泌模式等方面有关.
作者：陈光；刘蕾；王芳芳；罗兰；苏菊香；蔡连顺；代月 刊期： 2015年第05期
目的 鉴定自鸵鸟粪便内分离到的隐孢子虫虫种,了解其生物学特性.方法 显微镜观察卵囊形态结构,基于18S rRNA基因位点进行PCR扩增.建立试验动物感染模型,通过临床症状、排卵囊规律和组织学等方面进行观察研究.结果 卵囊大小为(7.41±0.12)μm×(5.70±0.07)μm,卵囊指数为1.30,经序列分析鉴定该分离株为鼠隐孢子虫(Cryptospo-ridium muris).Balb/c鼠和蒙古沙鼠接种1.0×10 6个鸵鸟源C.muris卵囊后,潜隐期分别为9d和13d,显露期分别为37 d和72 d,排卵囊高峰期分别在接种后17～31 d和接种后31～64 d;罗曼雏鸡不感染鸵鸟源C.muris.感染C.muris的试验动物均未表现出胃肠道紊乱的临床症状.组织学和电镜扫描观察发现大量虫体寄生于胃腺粘膜内,并可见其各发育阶段.结论 分离鉴定鸵鸟源C.muris,成功建立Balb/c鼠和蒙古沙鼠感染模型,为隐孢子虫的分类地位及人兽共患性研究提供了参考.
作者：齐萌；刘利敏；黄磊；徐利纳；张素梅；张龙现 刊期： 2015年第05期
目的 研究副溶血性弧菌VopT蛋白的菌群特异性,为建立致病性副溶血性弧菌的快速检测方法以及探讨VopT的作用机制奠定基础.方法 根据副溶血性弧菌VopT蛋白基因(VPA1327)序列设计合成引物,通过PCR从副溶血性弧菌致病株WX06152(血清型O3:K6)中扩增出目的基因,构建原核表达载体pET-30a(+)-VPA1327并转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导表达,重组蛋白应用MALDI-TOF-MS/MS鉴定和His镍柱纯化,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清,建立副溶血性弧菌VopT蛋白的间接ELISA检测方法,并分析其敏感性和毒力菌株特异性.结果 成功表达了大小为33 kDa融合蛋白,肽指纹图谱与副溶血性弧菌VopT蛋白一致.重组VopT抗血清能够特异性检测副溶血性弧菌毒力株的全菌细胞及其裂解蛋白,与环境株及其它种属菌株无明显交叉反应,灵敏度达到105CFU·mL-1.结论 重组VopT的抗血清具有良好特异性,为探讨VopT致病机理和分泌机制研究提供了一定的参考依据.
作者：杨振泉；饶胜其；高璐；薛峰；李平；方维明；焦新安 刊期： 2015年第05期
目的 构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP).方法 将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶Ⅰ启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNAPOLI系统,此系统被克隆入pBluescript Ⅱ sk(+),获得重组质粒pBluescript Ⅱ sk(+)tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光.来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光.结果 所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光.结论 所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达.
作者：连孟洋；王昕；彭博；武伟华；刘慧；董方圆；丁小满；房师松；郑青 刊期： 2015年第05期
目的 了解北京市一些地区生肉中单增李斯特菌的污染情况及其分子流行病学特征.方法 采用北欧食品分析标准(NMKL)对北京市一些地区采集的340份牛、羊、猪、鸡和鸭生肉标本进行单增李斯特菌的分离鉴定,并对分离菌株进行血清学分型(Serotyping)、脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型及多位点序列分型(Multilocus Se-quence Typing,MLST)分析.结果 生肉标本中单增李斯特菌污染率为6.2％(21/340).分离菌株含3种血清型(1/2a,1/2b和1/2c),以1/2c为优势血清型(占47.6％).PFGE分析中,使用内切酶AscI酶切电泳将21株单增李斯特菌分为12个型别,可聚类为3个群.MLST分析将21株单增李斯特菌分为7个ST型,其中ST9型多(10株).结论 北京市一些地区的生肉类食品中存在6.2％的单增李斯特菌污染率,这些单增李斯特菌以家系Ⅱ菌株占据绝对优势(80.1％),其中1/2c型,GX6A16.CN0004和ST9型分别为血清型、PFGE带型以及MLST序列型的优势型别,与我国食源性单增李斯特菌的优势菌群特征一致.
作者：马爱静；王艳；王毅；李东迅；许华青；袁雪娇；刘凯；叶长芸 刊期： 2015年第05期
目的 探讨汉防己甲素(tetrandrine,TET)对伊曲康唑(itraconazole,ITR)、伏立康唑(voriconazole,VRC)和泊沙康唑(posaconazole,PCZ)体外抗烟曲霉有无增效活性.方法 参照MS8-A2方案的微量稀释法,以23株烟曲霉临床株为研究对象,测定TET对其的大非细胞毒性剂量和ITC、VRC、PCZ单独及联合TET对其的小抑菌浓度(minimal inhibitoryconcentrations,MICs).结果 TET抗烟曲霉的大非细胞毒性剂量为80 μg/mL.ITC单独及联合TET对烟曲霉的MIC值范围分别为0.5 μg/mL～32μg/mL和0.0625 μg/mL～4 μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05);VRC单独及联合TET的MIC值范围分别为0.25 μg/mL～2 μg/mL和0.03125 μg/mL～0.25 μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05); PCZ单独及联合TET的MIC值范围分别为0.125 μg/mL～1 μg/mL和0.03125 μg/mL～0.25 μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 汉防己甲素在体外对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑抗烟曲霉有增效活性.
作者：李水秀；宋延君；石建萍；郭慧；张玲玲；张宏 刊期： 2015年第05期
目的 初步探讨MLST(multilocus sequence typing)分型技术在致病性钩端螺旋体中的应用.方法 对我国3个省份的39株致病性钩端螺旋体黄疸出血群菌株提取DNA,采用7个位点进行PCR扩增、序列测定,应用eBURST和BioNumerics (Version5.10)软件进行分析.结果 39株菌株呈现5个ST型别,ST1为中国三省份中主要的基因型,占53.85％(21/39).eBURST分析显示:39株菌株分为2个Clonal complexes和1个singleton,其中Group1占66.67％(26/39),Group2占20.51％(8/39),一个singleton占12.82％ (5/39);BioNumerics软件聚类分析显示:39株菌株分为3个Group,与eBURST分析中的分群结构一致.MLST基因型别具有明显的地域性特征.结论 MLST方法可初步应用于致病性钩端螺旋体分子流行病学、种群结构、亲缘进化关系等研究.
作者：张翠彩；徐建民；李秀文；曹志强；蒋秀高 刊期： 2015年第05期
目的 研究肺孢子菌p55抗原人工合成串联基因的真核表达载体构建及其表达鉴定.方法 从肺孢子菌p55蛋白5个变异体中选取可能在肺孢子菌肺炎中起重要作用抗原表位,串联合成一段多表位基因,命名为TAG.将TAG双酶切后克隆到pIRES hrGFP-1a真核表达载体,构建重组质粒pIRES-hrGFP-1a/TAG,将重组质粒转染至感受态TG-1大肠杆菌中进行扩增后,经提取纯化质粒再转染至HEK293细胞,用Western blot鉴定蛋白表达水平.结果 构建的pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒经酶切后测序鉴定,证明其序列正确,成功转染至HEK293细胞,Western blot检测其在HKE293细胞中能进行有效基因表达.结论 本研究构建了pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步阐明TAG的免疫保护功能以及核酸疫苗的研究奠定基础.
作者：樊华；国九英；马素丽；张楠；安春丽 刊期： 2015年第05期
吸血蠓(Blood-sucking midges)是世界上为微小的有害昆虫类群之一,其不仅刺叮骚扰人畜,还是蓝舌病、赤羽病、施马伦贝格病、土拉弗氏菌病等多种人兽共患病的传播媒介.控制和消灭传播媒介是预防和减缓蠓传疾病暴发流行的有效途径.但吸血蠓体小、分布广、扩散性强、孳生地类型复杂,一般的防治手段很难对其进行有效防治,选择科学、合理、安全的防治措施将有助于提高防治效果.本文综述了近几十年来国内外对吸血蠓的防治对策和经验,为日后开展蠓的防治工作提供理论参考.
作者：王飞鹏；黄恩炯 刊期： 2015年第05期
Tahyna病毒(Tahyna virus,TAHV) 2007年在位于青藏高原的青海省格尔木市分离到,后续研究证实青海省新分离TAHV是引起当地发热性疾病的新病原,TAHV感染成为我国除乙脑、登革之外的第三种蚊虫传播病毒性疾病.本文从生物学特征、自然循环、人畜动物流行病学、临床致病特点等方面对青海省TAHV相关研究结果等进行系统综述.
作者：李文娟；付士红；姜双应；王志玉；梁国栋 刊期： 2015年第05期
利什曼病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病.诸多国内外研究显示,除了犬以外,其他动物也能感染利什曼原虫并可在利什曼病传播中起一定的作用.本文对犬之外的动物感染利什曼原虫的研究进展作一综述.
作者：陈凯；伍卫平；官亚宜 刊期： 2015年第05期
目的 应用突变敏感性分子开关检测肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药性.方法 采用微量稀释法检测5种常用大环内酯类抗生素对40株Mp临床分离株的药物敏感性;建立高保真聚合酶和3 '硫化修饰引物的分子开关,用分子开关进行Mp临床分离株的PCR扩增,检测其是否存在Mp 23S rRNA 2063、2064和2617 3个热点突变,并通过基因测序进一步确定是否存在点突变,分析点突变与大环内酯类抗生素敏感性之间的关系.结果 5种大环内酯类抗生素中,Mp对14元环的红霉素和克拉霉素耐药程度高,其MIC≥128 mg/L;对15元环的大环内酯类抗生素阿奇霉素和交沙霉素相对敏感,其中交沙霉素抗Mp活性高,其MIC≤4 mg/L.用高保真聚合酶和3 '硫化修饰引物的分子开关行PCR扩增,检测出35株发生了2063位点基因突变,3株发生2064位点基因突变,未检测出2617位点突变.用基因测序检测到35株Mp发生A2063G的突变,3株发生A2064G的突变,未检测到2617位点突变,与分子开关的检测结果一致,并且2063、2064位点突变Mp株均对大环内酯类药物高度耐药.结论 分子开关可识别23S rRNA基因突变,可用于分析Mp对大环内酯类抗生素的敏感性.
作者：刘艳；刘丹；朱翠明 刊期： 2015年第05期
目的 对贵州省一疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定.方法 将患者血液分离菌株接种羊血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验和生化反应后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特有的荚膜多糖编码基因(cps2J)以及溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp)、溶血素基因(sly)和细胞外蛋白因子编码基因(ef).结果 传统方法和PCR技术将病例来源菌株鉴定为猪链球菌2型,PCR鉴定结果显示该菌株的毒力基因cps2J、mrp、sly和Ef均为阳性.结论 贵州省一例人感染猪链球菌疑似病例来源菌株为猪链球菌2型强毒株.
作者：马青；李世军；刘英；田克诚；唐光鹏；王定明 刊期： 2015年第05期
目的 分析6例确诊为棘阿米巴性角膜炎的实验室检查与临床诊疗.方法 回顾性分析2011-2013年我院6例棘阿米巴性角膜炎的显微镜检查、病理检查及角膜共聚焦检查和临床诊疗经过.结果 6例检及棘阿米巴包囊或滋养体而确诊,经过0.02％氯已定加抗真菌药物治疗后,4例治愈.无效者分别再行角膜移植和眼内容物摘除.结论 结合多种实验室检查方法查找病原体是诊断棘阿米巴性角膜炎的有效手段.早期诊断对预后及有效治疗有重要意义.
作者：顾云峰；王友沛；秦晓怡；李亚利；赵泽林；杨小玲；郑美琴 刊期： 2015年第05期
羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重.为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09％(342/742).其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60％(12/20)、42.86％(51/119)、52.75％(48/91)、40.13％(122/304)、51.91％(68/131)、30.56％(11/36)、67.74％(21/31)和90％(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重.与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势.绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27％(268/576)和42.28％(74/175),表明前者感染率要高于后者.
作者：成伟伟；彭靖雯；张克山；刘永杰；孔汉金；尚佑军；刘湘涛；刘磊 刊期： 2015年第05期
目的 随着输入性疟疾的增加,通过镜检结合PCR方法,提高检出率.方法 福建省2013年成立基因诊断参比实验室,用PCR方法回顾性筛查过往病例时发现有3例卵形疟原虫误诊为间日疟.结果 镜检结合PCR扩增和序列分析发现F J1、F J2为卵形疟亚种curtisi和恶性疟混合感染,FJ3为单一卵形疟亚种curtisi感染.结论 福建省以往卵形疟报道很少,需要加强诊断培训,镜检结合PCR检查提高检出率.
作者：林耀莹；张山鹰；杨发柱；谢汉国；欧阳榕；陈朱云 刊期： 2015年第05期
目的 分析石渠县2001-2013年青海田鼠鼠疫疫源地监测数据.方法 运用Excel统计分析石渠县鼠疫疫源地监测数据.结果 2001-2013年青海田鼠平均密度是244.73只/ha;青海田鼠体蚤12 733匹,3科4属8种,蚤指数为0.90、染蚤率为42.96％;青海田鼠巢蚤22 512匹,3科4属8种,染蚤率为100％、蚤指数为55.59;夜行鼠420只,3目4科5属9种和1种未定的水栖鼠;血清学检测青海田鼠血清1 787份,阳性率为5.60％,牧犬血清784份,阳性率9.54％;自毙青海田鼠鼠疫菌检出率为14.57％,活体青海田鼠鼠疫菌检出率为0.22％.结论 石渠县动物鼠疫继续流行,应做好鼠疫防治工作.
作者：祁腾；杨孔；汪立茂；段勇军；谢飞；杨军；李光军；谭文明 刊期： 2015年第05期
