目的 通过克隆十二指肠钩虫的ITS1-5.8S-ITS2,初步分析钩口属的系统发育,构建基于ITS1、ITS2的圆线目线虫的系统进化树,为进一步研究其遗传进化关系奠定基础.方法 从厦门海沧东孚镇收集标本,分离,形态鉴定为十二指肠钩虫,分别克隆了供试钩虫的ITS1-5.8S-ITS2序列,经NCBI网站的BLAST比对以及基于ITS1和ITS2序列的钩口属的系统发育分析.结果 供试钩虫的ITS1、5.8S和ITS2序列,它们的长度分别为366 bp、153 bp和221 bp,登陆http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov进行BLAST,在数据库中没有与之相匹配的序列,将获得的序列作为新的序列上传至GenBank中进行注册,各序列的GenBank登录号分别为:5.8S rRNA基因:EU344796、ITS1-5.8S-ITS2:EU344797.结论 从系统进化树中,本实验的供试十二指肠钩虫均与GenBank中已公布的十二指肠钩口线虫自然聚类在一起.
作者：汪家旭；苏成豪；黄建炜；叶曦；李国伟 刊期： 2015年第07期
目的 了解本地区结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)相关耐药基因katG和inhA的突变特征,评价基因芯片法对MTB INH耐药性检测的临床应用价值.方法 应用基因芯片法对经PCR-荧光探针法鉴定为MTB阳性的2 738例病人标本进行INH耐药性检测,分析其相关耐药基因katG和inhA的突变特征,同时应用比例法检测上述同期送检的相同病人的同类型标本经罗氏培养MTB阳性菌株的INH耐药性,比较两种方法的检测结果.结果 2 738例MTB核酸阳性标本经基因芯片法检测,INH耐药465例,耐药率16.98％,其中以katG 315 (AGC→ACC)突变为主,基因突变率为78.06％,其次为inhA-15(C→T),katG 315 (AGC→AAC),突变率分别为16.13％和5.59％.上述病人同期送检的同类型标本有1 493例经罗氏培养MTB阳性,比例法检测,INH耐药255例,耐药率17.08％,对应的基因芯片法检测结果为INH耐药249例,耐药率16.68％.以比例法结果为判断标准,基因芯片法测定INH耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)及准确性分别为85.49％、97.50％、87.55％、97.03％和95.45％.结论 本地区INH耐药以katG 315 (AGC→ACC)和inhA-15(C→T)突变类型为主;基因芯片对MTB INH耐药性检测具有高敏感性、特异性、准确性和快速性,可用于本地区MTBINH耐药性的快速检测.
作者：欧维正；陈峥宏；陈静；骆科文；王燕；秦万；蒙俊 刊期： 2015年第07期
目的 建立香港海鸥形菌(Laribacer hongkongensis,LH)的多重PCR(multi-PCR)及嵌合荧光法(SYBR GreenⅠ)PCR检测方法,并对其在临床及环境微生物方面的应用前景进行评价.方法 通过对62株香港海鸥形菌16S RNA基因和16S-23S rRNA基因间隔区(16-23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行PCR扩增和多序列比对,设计两对特异性引物,建立多重PCR体系,用15种细菌性腹泻标准菌株及临床菌株进行PCR特异性和敏感性检验;并在此基础上针对两对引物分别用嵌合荧光PCR法进行浓度梯度检测,以确定低检测限.结果 香港海鸥形菌多重PCR法特异性为100％,低检出限为5×103 CFU/mL菌液;而嵌合荧光PCR法两对引物的低检出限均达到5×102 CFU/mL菌液.结论 该法的建立为临床及环境微生物学提供了一种快速和灵敏的香港海鸥形菌检测手段.
作者：沈林海；孔庆鑫；孙建荣；徐虹；金慧；韦凌娅；查捷；王英红；倪晓平 刊期： 2015年第07期
目的 四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重.然而,缺乏有效检测鉴定四翼无剌线虫的技术.本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据.方法 应用直接镜检法对肠道中的四翼无刺线虫进行筛查.应用多重PCR和测序技术鉴定四翼无刺线虫特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28S rRNA.结果 采用直接镜检实时动态显微视频技术在肠道中检出数量众多的四翼无刺线虫虫卵、幼虫和成虫.根据四翼无剌线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种.应用多重PCR和测序技术从分离获得的四翼无刺线虫中鉴定出特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28S rRNA,与其他不同种寄生虫无交叉反应.SPF和清洁级实验动物四翼无刺线虫感染率分别为41.5％和40.8％.结论 直接镜检法和多重PCR结合测序技术能够快速准确检测鉴定出四翼无刺线虫.实验动物在四翼无刺线虫的传播中可能起着重要的储存作用.因此,需要考虑该寄生虫的潜在健康危害,以防传染人类.
作者：高正琴；岳秉飞 刊期： 2015年第07期
目的 研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组双歧杆菌(Bb)疫苗在不同保存条件下的稳定性.方法 分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转入长双歧杆菌(B.longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.lon gum和pGEXTSO45W-4B-TSOL18/B.longum,分别置于不同条件下保存,取出菌液,抽提质粒,电泳检测,进行稳定性分析.结果 阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.long um和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum分别在常温下、4℃、-20℃、-80℃、-196℃(液氮中)分别保存48 h、1周、1月、2月,抽提质粒,电泳发现阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45 W-4B-TSOL18/B.longum在液氮中、-80℃、-20℃中比较稳定,而在普通的室温环境下,很快发生质粒丢失现象.结论 猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组Bb疫苗低温保存稳定,常温差,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础.
作者：周必英；刘美辰；杨凤娇 刊期： 2015年第07期
目的 通过制备氯磷酸二钠脂质体(LE-Cl2 MDP),选择性剔除日本血吸虫感染小鼠模型中Kupffer细胞,研究抑制Kupffer细胞功能对日本血吸虫肝脏肉芽肿形成的影响.方法 采用脂质体包裹CL2MDP;6～8周龄雌性BALB/c小鼠分为3组:PBS组,日本血吸虫感染组,日本血吸虫感染联合LE-Cl2 BMP组;对于联合组,小鼠尾静脉注射LE-Cl2 MDP(0.1mL/10 g),每周2次,连续6周;感染后第12周,剥杀小鼠,留取血清及肝脏,用于细胞因子和免疫组织化学检测等,数据统计分析.结果 经过LE-Cl2 MDP处理后,日本血吸虫感染肉芽肿周围Kupffer细胞细胞明显减少;无论是感染第8周,还是第12周肝组织中虫卵肉芽肿周围炎症细胞浸润明显减少,纤维化程度减轻;同时降低感染第12周小鼠血清IL-10水平,LE-Cl2MDP组为(42.6±10.4)pg/mL,感染组为(67.4±12.9) pg/mL(P＜0.05).结论 本研究建立LE-Cl2 MDP剔除小鼠肝脏Kupffer细胞的日本血吸虫感染模型,抑制了肝组织中虫卵肉芽肿周围炎症反应.
作者：杨江华；孙静；梁曼曼；盛浩宇；王文节 刊期： 2015年第07期
目的 构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.方法 分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3 '、5 '侧翼序列,将clpP基因及其3'、5 '侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37 bp～453 bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoR Ⅰ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.结果 经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功.结论 本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础.
作者：张加勤；饶慧华；徐巧丽；黄朝阳；房丽丽；马晓波；宋秀宇 刊期： 2015年第07期
目的 克隆表达粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N端B细胞表位与自身免疫性疾病的关系.方法 ①设计特异性引物,从文库中克隆ENOA cDNA;②通过BamH UEcoR Ⅰ双酶切位点,将ENOA基因克隆至pET-His原核表达载体,表达纯化,获得了重组ENOA蛋白;③测定重组ENOA酶活性;④通过Swiss-Model软件模拟ENOA蛋白3D结构,并分析其潜在的N端B细胞表位;合成ENOA的N端表位肽,测定其与类风湿性关节炎患者血清IgG的反应性.结果 ①克隆了ENOA全长cDNA(GenBank登录号KJ421213.1);②成功构建了pET-His-ENOA表达载体,经纯化获得了重组ENOA蛋白.③重组蛋白具有烯醇化酶活性;④瓜氨酸修饰的合成表位肽与类风湿性关节患者血清IgG-ELISA呈阳性反应,与健康对照组血清均不呈反应(P＜0.05).结论 本课题首次克隆表达的重组ENOA蛋白具有烯醇化酶活性;其N端B细胞表位与类风湿性关节炎相关.本研究为尘螨与自身免疫性疾病的相关性研究提供了新的思路.
作者：罗文丽；邱聪龄；余炜嘉；刘志刚；吉坤美；蔡泽浪 刊期： 2015年第07期
目的 利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析.方法 提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta (DE3),IPTG诱导表达.运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析.结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831 bp.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33 kD的位置,与预期相符.Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白.结论 成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料.
作者：张亚粉；刘岩；王皓钰；郝金童；高红丹；林志强；刘阿倩；雷田田；王一同 刊期： 2015年第07期
目的 为建立一种能同时鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染的诊断方法.方法 与结果 根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒和圆环病毒2型的基因序列,分别设计一对特异性引物,扩增长度分别为612bp和238 bp.将PCR产物进行测序,与PRV“Yangsan”株和PCV2“JX0301”株的同源性分别为98.6％和99.2％.通过反应条件的优化,建立同时检测PRV和PCV2的双重PCR方法.利用该方法对临床采集的78份疑似病料进行检测,其中59份为PCV2阳性,17份PRV阳性,其中11份为PRV和PCV2共感染.结论 建立的双重PCR检测方法可以用于PRV和PCV2的临床快速鉴别诊断和流行病学调查.
作者：吴学敏；陈如敬；车勇良；王隆柏；陈秋勇；严山；刘玉涛；周伦江 刊期： 2015年第07期
目的 探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制.方法 用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24 h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降.结论 灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关.
作者：石立莹；李梅；张磊；耿鹏；李咏梅 刊期： 2015年第07期
目的 兔戊型肝炎病毒(HEV)是近年来新发现的,根据其分子生物学特征可能成为HEV的新基因型.为提高对兔HEV的检出率,本研究设计了针对兔HEV RNA的特异性引物和TaqMan探针并对其进行考评.方法 1)从GenBank中下载14条兔HEV全长序列,分别在其ORF1、ORF3片段的保守区域设计一条TaqMan探针和一对上、下游特异性引物,其中ORF1片段的探针及引物为C组,ORF3片段的为B组;A组的探针及引物为Jothikumar N等所报道的通用引物;2)制备相应的质粒标准品来构建定量标准曲线,并利用上述3套引物、探针对49份兔粪便及44份兔血液样品进行检测,将B、C组检测结果与A组的检测结果进行比较.结果 新建立了两套兔HEV定量PCR的TaqMan探针及引物(B、C组),其标准曲线的斜率分别为-3.455和-3.469;使用上述3套引物及探针(A、B、C组)对49份粪便标本进行荧光定量PCR检测,其HEV RNA阳性率分别为67.35％ (33/49)、67.35％(33/49)、57.14％(28/49),平均HEV RNA(log copies/g)拷贝数为6.18、5.90、6.11;44份血液标本的HEV RNA阳性检出率分别为65.90％(29/44)、56.82％(25/44)、50.00％(22/44),平均HEVRNA(log copies/mL)拷贝数为3.62、3.43、3.03;结果显示以上3组探针及引物均可用于粪便和血液标本的定量检测.结论 兔HEV虽然有其独特的基因结构,但使用HEV通用引物检测不影响检出率.
作者：曾航；张玉林；王麟；刘鹏；王玲 刊期： 2015年第07期
目的 建立GⅠ、GⅡ型诺如病毒的常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测方法,并对两种方法进行应用.方法 优化筛选出佳PCR反应体系与反应条件,并从灵敏性、特异性、临床样品检测等方面对建立的方法进行比较与评价.结果 该两种方法特异性强,与札幌病毒、轮状病毒、星状病毒、腺病毒同时检测无交叉反应,同一体系内GⅠ、GⅡ型诺如病毒相互之间没有干扰;常规RT-PCR低检测限为103 copies/μL,荧光定量RT-PCR低检测限为102 copies/μL;对180份临床粪便样品进行检测,常规RT-PCR则检测率为5.56％(10/180),符合率达97.22％,荧光定量RT-PCR检测率为8.33％(15/180),符合率达100％;对15份阳性样品测序分析,证实均为诺如病毒.结论 建立的常规RT-PCR与荧光定量RT-PCR均可用于诺如病毒的快速检测,荧光定量RT-PCR更为灵敏.
作者：钱明明；许海燕；宗晴；阴甜甜；杨文彬；宋召军；黄金林；焦新安 刊期： 2015年第07期
目的 通过原核表达系统制备裂谷热病毒Gn片段主要抗原区蛋白,获取纯化蛋白,并分析抗原性.方法 将合成的裂谷热Gn基因用PCR的方法扩增具有保护性抗原表位的两段Gn1和Gn2,并将其定向插入原核表达质粒pColdⅠ中,构建重组表达质粒pCold Ⅰ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2,并将重组质粒转化到BL21 (DE3)感受态中,以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白和表达量,并利用His-tag Ni柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白.结果 所构建的质粒pColdⅠ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2序列正确,SDS-PAGE检测到目的蛋白,Western-blot显示截断的Gn蛋白具有很好反应原性.结论 成功纯化了裂谷热病毒Gn主要抗原区的表达蛋白.
作者：夏鹏；魏建超；陆莹梅；武专昌；李蓓蓓；刘珂；邵东华；邱亚峰；钟登科 刊期： 2015年第07期
结核病是由结核分枝杆菌复合群所致的以呼吸系统感染为主的慢性传染病,传统的检测方法检出率低、漏诊率高,导致结核菌继续传播和病人治疗延误.因此,迫切需要发现新的结核病诊断标志物以建立快速、敏感、高效的结核病诊断方法,而生物标记物正可以达到此目的.结核病中的某些生物标记物还具有治疗的作用,有些生物标记物可用于研制TB疫苗.对生物标记物不断深入的研究将有利于理解结核病的发生发展过程.本文就结核病中的生物标记物作一综述.
作者：于梦梦；孙林 刊期： 2015年第07期
弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和恒温动物体内的原虫,有着复杂的生活史和致病机制.近年来关于弓形虫种群结构的研究表明其具有遗传多样性和地域差异性.目前,已从全球分离到1 457个弓形虫虫株,确定了189个基因型(http://ToxoDB.org),其中南美的基因型具有高度的遗传多样性,关于我国流行的弓形虫虫株基因型及致病性的研究尚十分有限.本文总结了我国弓形虫分离虫株的基因型及特点,以期为深入研究中国弓形虫种群结构、流行病学及致病机制提供有力依据.
作者：付晓莹；冯永杰；梁宏德；杨玉荣 刊期： 2015年第07期
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患.致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole,PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane,PVM)的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录.近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一.本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路.
作者：胡玲英；张念章；王金磊；林旋；周东辉；朱兴全；王寿昆 刊期： 2015年第07期
目的 分析四川省自贡市2014年3例单增李斯特菌感染的临床特征及其病原学特征.方法 搜集临床病例信息;采用血清分型,脉冲场凝胶电泳技术和多位点序列分型方法对单增李斯特菌进行分子分型.结果 3例患者均为免疫力低下人群,有发热和败血症症状;3株单增李斯特菌中2株为1/2a血清型、ST8型,1株为1/2b血清型、ST778型,3株PFGE带型均不同.结论 免疫力低下人群易受单增李斯特菌侵袭性感染.通过与国内外食品及病人单增李斯特菌相关流行学资料比较,提示国外流行克隆群以及国内某些流行型菌株可引起国内李斯特菌病散发,甚至成为将来暴发的隐患.
作者：王红；王艳；张正东；陈曦；邓建平；肖波；刘祥；王斌；文海 刊期： 2015年第07期
目的 了解自然条件下家兔感染戊型肝炎病毒(HEV)的方式和感染标志物的动态变化.方法 对养兔场28 d龄家兔断乳、分笼饲养,每周1次采集粪便检测HEV RNA,粪便HEV RNA转为阳性的家兔,每周采集静脉血,所有家兔每满1月龄时采集静脉血,进行血清HEV RNA、抗HEV-Ab及转氨酶检测,动态观察各种指标的变化直至家兔满5个月龄出栏.结果 共对47只家兔追踪观察,7周至5个月龄的10只家兔(21.3％,10/47)粪便中检测到HEV RNA,排毒时间在3～10周以上;其中7只家兔(14.9％,7/47)形成了病毒血症,病毒血症的出现晚于粪便排毒1～3周,持续时间为2～5周;至出栏时共有11只家兔(23.4％,11/47)转化为抗HEV-Ab阳性.基因序列分析显示HEV分离株均为兔HEV.结论 家兔从断乳到出栏的整个生长过程均对HEV均易感.家兔粪便排出病毒的时间比病毒血症持续时间长,但有家兔出栏时还处于病毒血症时期,因而家兔粪便及肉类制品可能具有传播兔HEV的危险性.
作者：李军；张宏馨；廉海晨；周艳春；耿彦生 刊期： 2015年第07期
目的 了解黑龙江省中俄边境11个口岸鼠类宿主动物携带汉坦病毒(Hantavirus,HV)状况及其分子流行病学特征.方法 采用夹夜法和鼠笼法捕获鼠类,应用巢式PCR方法对鼠肺样本进行检测,对阳性样本测序并分型,获得序列用MEGA6进行分析.结果 此次调查共捕获鼠类动物346只,经鉴定隶属3科9属11种.检测出汉坦病毒核酸阳性样本17份,平均带毒率为4.90％,包括汉滩型病毒(Hantaan virus,HNTV)6例,汉城型病毒(Seoul virus,SEOV) 11例,首次在黑龙江口岸东方田鼠中检测到1例SEO型HV.进化分析表明,6株HNT型HV均与HNT型HV原型株76-118亲缘性较远(86.82％～88.43％),分别与HNT型HV株BAO14、HXZ244同源性高;11株SEO型HV分别与SEO型HV株Gongzhuling97、北京株BjHD01、越南株HaiPhong3-11同源性高.结论 黑龙江中俄边境口岸宿主动物感染汉坦病毒至少2个类型,相对较高的感染率提示着中俄边境地区开展肾综合征出血热监测和防控的迫切性.
作者：程成；鞠文东；付维明；曹苏娅；徐宁；王艳梅；耿聪；王玉龙 刊期： 2015年第07期
