目的 研究HepG2细胞的Rho家族RhoA因子在Lm侵袭中的作用.方法 构建真核表达载体p3×FLAG-Myc-CMV-24-RhoA,经脂质体法转染HepG2细胞,使HepG2细胞过表达RhoA;同时针对RhoA序列合成siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,抑制HepG2细胞RhoA表达.2种细胞同时感染Lm,通过Real-time PCR检测HepG2细胞RhoA上调/下调时培养物中Lm-Hly基因拷贝数,评估Lm数量.结果 HepG2细胞转染p3×FLAG-Myc-CMV 24-RhoA载体后,Western blotting法检测RhoA表达量升高,且48h升高显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显低于对照组;HepG2细胞转染siRNA后,Western blotting法检测RhoA表达量降低,且72 h降低显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显高于对照组.结论Lm侵入受HepG2细胞RhoA因子调控,主动下调细胞RhoA因子表达可能是Lm侵袭机制之一.
作者：吴亮；王妍然；刘原；苏丹华；付涛；姜旭淦；陈盛霞；许化溪 刊期： 2016年第11期
目的 建立炭疽芽孢杆菌临床分离株和疫苗株的鉴别诊断方法,为炭疽疫情判断和疾病控制提供依据.方法以炭疽芽孢外壁胶原样蛋白的编码基因bclA和pXO1质粒上的aat序列为靶点,设计引物,通过PCR扩增片段多态性和测序结果分析可变串联重复序列(VNTR).在生物安全3级实验室分离炭疽菌体蛋白,使用MALDL-TOF/TOF质谱仪进行检测,BioTyper软件分析图谱.结果 炭疽分离株与Ⅱ号、无荚膜疫苗株,VNTR分析结果均有不同.2个分离株测定bclA基因序列全长均为1 113 bp,编码的蛋白包含66个GXX重复和5个BclA重复.质谱分析发现,2个分离株菌体蛋白表达峰图基本一致,而2个疫苗株与之相比有很大的差异,许多蛋白的表达明显下调.结论 两种方法都能够有效鉴别炭疽临床分离株和疫苗株.
作者：祝令伟；郭学军；李吉平；顾贵波；刘军；纪雪；冯书章；孙洋 刊期： 2016年第11期
目的 探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征.方法 布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330 S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析,确定待测菌株的序列型(STs),用软件BioNumerics(Version 5.0)构建菌株的小生成树.结果 116株羊种布鲁氏菌全部为ST8型,9个MLST位点的变异完全相同,分离株种群结构单一;羊种菌的生物型与ST型无明显关联,ST8型菌系该地区的主要流行菌种,并与内蒙古地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,且有密切的亲缘关系.结论 羊种布鲁氏菌的序列分型(ST)与常规生物分型存在差异,ST8型菌可能具有较强的环境适应性和致病性.MLST是一种较好的羊布鲁氏菌种群和进化关系研究方法,但更适合于具有较大时间跨度和地理分布菌株间的流行病学调查.
作者：刘志国；王妙；刘日宏；赵鸿雁；朴东日；崔步云；夏咸柱 刊期： 2016年第11期
目的 比较食品与临床分离的致病性副溶血性弧菌耐药性差异,为该菌耐药机制研究提供基础.方法 运用K-B纸片法,对上海市28株临床菌株、18株食品源菌株的副溶血性弧菌进行耐药性监测,以PCR分析菌株的耐药基因.再用多位点测序技术揭示46株副溶血性弧菌的遗传多样性,针对相同进化分支中不同来源的分离株进行耐药性比较.结果 28株临床菌株的耐药率(100％)明显高于18株食品源分离株(88.9％),而且临床菌株全部为多重耐药性菌株(n=28),而食品源中仅有2株具有多重耐药性.临床菌株所携带的耐药基因数量比食品源分离菌株更多、种类更为丰富.多位点测序分型结果也显示相同的趋势,在同一进化分支中,临床菌株的耐药性也显著高于食品分离株.结论 本研究系统地比较食品与临床分离的致病性副溶血性弧菌耐药表型与耐药基因型的差异,分析了耐药性形成的原因,为副溶血性弧菌耐药性的起源、传潘与控制提供依据.
作者：李欢；张昭寰；汤荣；娄阳；赵莉；陈雯静；洪庆；潘迎捷；赵勇 刊期： 2016年第11期
目的 研究国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况.方法 本研究对2014-2016年采集的40份冷冻原肠样品进行检测,其中包括16份国产猪原肠和24份进口羊原肠.经过奇异变形杆菌的分离、表型特征鉴定和16S rDNA鉴定,同时收集GenBank中不同地域和宿主动物的奇异变形杆菌,以及其他重要食源性致病菌的16S rDNA序列,结合本研究测定序列共同进行比对分析.结果 40份样品中有10份样品为PM检测阳性,总的PM检测阳性率为25.00％,其中,国产冷冻猪原肠的PM检测阳性率为31.25％,澳大利亚和新西兰进口冷冻羊原肠的PM检测阳性率分别为27.27％和15.38％,另外,发现不同原肠PM分离株之间的16S rDNA同源性差异较大,且同源性的高低和PM菌株的分离地域及宿主动物均未呈现明显的关联性.结论 国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况比较严重,相关管理和研究应进一步加强.
作者：仇保丰；宋鸿雁；董蓉莲；蒋荧梅；高雪梅；刘文斌；胡顺林 刊期： 2016年第11期
目的 掌握藏猪群中链球菌的流行情况及耐药特性.方法 从西藏拉萨、林芝2地采集藏猪喉头黏液、扁桃体、脾脏和关节液等样品共211份,分离细菌,通过细菌生化及PCR方法鉴定藏猪链球菌后,采用WHO推荐的K-B纸片法测定常用抗菌药物的敏感性.结果 211份样品中分离鉴定出6株藏猪链球菌,分离率为2.8％.这些菌株对11种抗菌药物产生了不同程度的耐药.其中对万古霉素耐药率高,达100％,对克拉霉素、四环素耐药率较高,达66.7％,对青霉素、红霉素、氯霉素耐药率为50％,对克林霉素、环丙沙星、呋喃妥因耐药率为33.3％,但耐药菌株对诺氟沙星、左氟沙星敏感性较高,达83.3％.结论 藏猪链球菌分离株对常用抗菌药存在着一定的耐药现象.
作者：贡嘎；益西措姆；罗润波；王刚；索朗斯珠 刊期： 2016年第11期
目的 对长沙市首例人源H9N2禽流感病毒进行病毒分离与HA基因特征序列分析.方法 用细胞培养法在可疑病例标本中分离H9N2禽流感病毒毒株,RT-PCR方法扩增禽流感病毒HA基因全长并测序,对所得结果进行氨基酸同源性与进化树分析.结果 分离的毒株命名为A/Hunan/44558/2015,GenBank登录号为KX595338.毒株存在2处新发突变位点,HAT197D、HAD483N,第313位出现与湖南省人源H9N2毒株A/Lengshuitan/11197/2013相同的糖基化位点NCS.与A/Wild Chicken/Shanghai/C1/2014和A/Envionnment/ Hunan/28028/ 2014的同源性分别为97.9％和97.6％.进化树分析分离的毒株处于Y280分支.结论 发现病毒2处新的基因突变位点,与2014年湖南省环境源毒株同源性较高,存在基因交换重组,从分子水平揭示病毒HA基因的进化趋势.
作者：黄政；欧新华；袁洁；刘晓蕾 刊期： 2016年第11期
目的 对福建地区分离的猪源葡萄球菌进行耐药性分析以及耐药基因分布特征研究.方法 采用琼脂稀释法测定196株菌对18种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法检测10种葡萄球菌重要耐药基因的携带情况.结果 所有菌株对万古霉素为敏感,对利奈唑胺和利福平的敏感性下降.对青霉素、四环素、红霉素、氨苄西林、泰乐菌素、阿奇霉素、苯唑西林和克林霉素表现为高水平耐药,耐药率依次是83.2％、75.5％、74.5％、74.0％、68.9％、67.3％、54.1％和52.6％.对替米考星、恩诺沙星、氟苯尼考、泰妙菌素、庆大霉素、环丙沙星和氯霉素表现出中等水平耐药,耐药率分别是48.5％、41.8％、36.2％、32.1％、30.1％、27.6％和25.5％.在196株菌中,187(95.4％)株菌携带有耐药基因,共检出9种重要耐药基因,其中mecA(46.9％)检出率高,cfr检出率低(3.1％),其他耐压基因检出率依次为ermC(44.9％)、ermB(38.3％)、tetK(32.1％)、fexA(25.5％)、tetM(23.0％)、tetL(21.9％)和ermA(11.7％).结论 福建地区猪源葡萄球菌对β-内酰胺类、四环素类和大环内酯类均表现出较强的耐药性,并且介导这3类药物耐药基因的携带率较高,因此,在选择抗菌药治疗该病时应尽量避免使用以上药物.
作者：杨守深；王晶；范克伟；杨小燕 刊期： 2016年第11期
目的 分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Of x)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系.方法 对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征.结果 89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00％,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36％,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G.Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(x2 =62.937,P＜0.001;Fisher双侧P＜0.001).结论 gyrA基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因.
作者：胡彦；杨春；逄宇；卢楠；刘洁；沈静；朱大冕；冯鑫 刊期： 2016年第11期
目的 对DSS诱导小鼠急性结肠炎早期分泌IL-17A和IL-22的主要淋巴细胞来源和分布情况进行初步探索.方法 用3％ DSS诱发C57BL/6J小鼠急性结肠炎;多色流式细胞术检测表面染色的淋巴细胞表面标记和胞内染色的IL-17A和IL-22的分泌情况.结果 DSS处理导致C57BL/6J小鼠肠道上皮内淋巴细胞所占比例下降,固有层淋巴细胞发生明显聚集.C57BL/6J小鼠肠道能产生IL-22和IL-17A的固有层Lineage+ CD4+淋巴细胞所占的比例分别是:对照组为(0.26±0.08)％和(0.31±0.09)％,实验组为(0.29±0.08)％和(0.57±0.28)％,即固有层的Lineage+ CD4+的淋巴细胞几乎不参与DSS诱导的早期急性结肠炎中IL-17A和IL-22的分泌.在DSS诱导的小鼠早期急性结肠炎中,分泌IL-22和IL-17A的固有层Lineage-CD127+淋巴细胞所占的比例分别是(45.13±2.39)％和(16.71±2.05)％,即肠道固有层Lineage-CD127+淋巴细胞是DSS诱导的小鼠早期急性结肠炎中IL-22和IL-17A的主要细胞来源之一.结论 DSS诱导的小鼠急性结肠炎早期IL-17A和IL-22的淋巴细胞来源之一是肠道固有层Lineage-CD127+淋巴细胞.
作者：华玉婷；李先平；王淑京；宋利琼；蒋佳璇；任志鸿；蒋秀高 刊期： 2016年第11期
目的 评价结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+ Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内的安全性.方法 小鼠慢性毒性实验:C57BL/6J小鼠间隔2周、皮下3次注射100 μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察临床症状表现和器官病理学改变.小鼠急性毒性实验:C57BL/6J小鼠皮下注射100 μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察小鼠临床症状、体重、摄食摄水量、器官的脏器系数和病理学表现.豚鼠全身过敏实验:Hartley豚鼠间隔2d、皮下3次注射1 000 μg、100 μg、10 μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2均按质量1∶1混合),16d后用二倍剂量足背静脉注射激发,观察体重变化和全身过敏症状.结果 小鼠慢性毒性实验表明,亚单位疫苗多次注射后不引起临床症状和病理损伤;小鼠急性毒性实验表明,亚单位疫苗对小鼠不产生临床症状,对小鼠体重、摄食摄水量、脏器系数、器官病理学改变影响无统计学意义;豚鼠全身过敏实验表明,疫苗短期多次致敏对豚鼠的体重无明显影响,低剂量疫苗不引起豚鼠产生全身过敏反应.结论 亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+ Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内均表现出良好的安全性,可用于进一步TB预防和治疗性疫苗的研制.
作者：路延之；王丽梅；康健；杨锐；张鑫；姚庆港；柏银兰；徐志凯 刊期： 2016年第11期
目的 分析表皮葡萄球菌SrrAB生物信息,表达及纯化SrrA蛋白,为SrrA功能研究奠定基础.方法 以表皮葡萄球菌SE1457基因组为模板,PCR扩增srrA基因,构建重组表达质粒pET28a-srrA,转入大肠杆菌BL21,利用纯化的重组蛋白SrrA免疫小鼠,制备SrrA多克隆抗体,并检测SrrA在表皮葡萄球菌不同生长时期的表达水平.序列比对利用Clust-alw2软件,蛋白结构域分析用DNAMAN软件.结果 表皮葡萄球菌SE1457 SrrAB单独组成一个操作子,SrrA位于胞浆中,与金黄色葡萄球菌和枯草杆菌类似物的同源性分别为95％和65％oo,SrrB为跨膜蛋白,与上述细菌类似物的同源性分别为71％和33％;表皮葡萄球菌SrrA于对数生长中期表达量高.结论 成功表达并纯化了表皮葡萄球菌SrrA蛋白,为SrrAB下游调控机制研究奠定基础.
作者：武有聪；王涛；韩海燕；瞿涤；白丽 刊期： 2016年第11期
隐孢子虫病严重影响了人和动物的健康,对人类公共卫生造成了很大的威胁,目前尚无有效药物防治隐孢子虫病.研究表明,隐孢子虫的毒力相关基因及其编码的蛋白对宿主的影响,贯穿整个感染和发病阶段.因此,找到与虫体黏附及侵入宿主细胞相关的毒力基因,并研究其编码蛋白的功能,对防治隐孢子虫病药物和疫苗的研制有重要意义.本文就隐孢子虫部分毒力基因及其编码蛋白应用进行了综述,旨在为隐孢子虫病的防治与疫苗研发提供新的思路和工具.
作者：刘珍珍；张璐；张龙现；菅复春 刊期： 2016年第11期
目前钩虫病仍然在中低等收入的热带和亚热带国家流行,对社会经济及公众健康造成极大影响.感染钩虫虫种确切的检测及鉴定对于治疗药物的选择、流行病学研究及防治措施的制定意义重大.本文重点介绍发展迅速的分子生物学钩虫虫种鉴定方法的新研究进展,以指导将来在实际工作中的应用.
作者：孙艳红；杨亚明 刊期： 2016年第11期
沙门菌鞭毛蛋白是其鞭毛丝状部组成元件,参与一系列生理及病理过程.鞭毛蛋白通过结合细胞表面TLR5和胞质NLRC4,激活下游信号通路从而激发固有免疫应答和获得性免疫应答.此外,鞭毛蛋白可促进针对外源抗原的获得性免疫应答,因此可作为佐剂用于疫苗研制,而鞭毛蛋白与TLR5和NLRC4的相互作用也被用于研究其佐剂效应机制.
作者：周莹莹；康喜龙；潘志明；焦新安 刊期： 2016年第11期
目的 分析结核病高发县结核分枝杆菌临床分离株及其基因型特征,探索高疫情地区结核菌株流行情况.方法 在罗甸县结核病定点医院门诊收集临床分离的分枝杆菌菌株,用PNB生长试验、结核分枝杆菌散在重复单位(VNTR)和RD105缺失基因检测法分别进行菌种、结核分枝杆菌DNA多态性和北京基因型鉴定.结果 80株菌株中非结核分枝杆菌占12.5％,70株结核分枝杆菌中北京家族占42.9％,非北京家族占57.1％.VNTR结果显示,菌株可分为5个基因群,其中Ⅰ群占15.7％,含11个基因型,Ⅱ群占35.7％,含25个基因型,Ⅲ群占15.7％,含11个基因型,Ⅳ群占30.0％,含21个基因型,V群占2.9％,含2个基因型,未见成簇菌株.结论 初步证实罗甸县结核分枝杆菌存在基因多态性,Ⅱ群、Ⅳ群为当地主要流行群,同时存在一定比例的非结核分枝杆菌感染.
作者：袁薇；郑雯琳；何昱颖；魏川川；周扬 刊期： 2016年第11期
目的 分析贵州省2010-2014年人间钩端螺旋体(简称钩体)病流行病学特征与鼠类动物带菌情况,为钩体病的防控提供科学依据.方法 收集2010-2014年贵州省钩体病例报告数据,利用描述性流行病学方法进行分析.对钩体疑似病例标本进行血清学检测和菌株培养和鉴定.采用夹夜法捕获老鼠对贵州省钩体病高发地区进行鼠类宿主动物及带菌情况进行监测,分析鼠间带菌情况与人间疫情的相关性.结果 2010-2014年贵州省报告钩体病人共73例,死亡10例,病死率13.70％.疫情主要集中在黔东南州,5年合计报告病例数52例占全省同期病例的71.23％.6-9月份达到发病高峰.发病人群以农民为主,占总病例数的69.86％.检测钩体疑似病人血清样本18份,其中阳性7份,阳性率为38.89％,均为黄疸出血群抗体.未从钩体疑似病人分离到钩体菌株.鼠间动物监测有效布夹数6 750夹次,共捕鼠646只,鼠密度9.57％,黑线姬鼠密度呈上升趋势,共分离钩体菌株56株,全部分离自黑线姬鼠,带菌率8.67％,经PCR检测均为黄疸出血群钩体.结论 贵州省2010-2014年间钩体疫情主要集中在黔东南州,黑线姬鼠为主要带菌鼠类动物,带菌群别为黄疸出血群,与钩体病人血清抗体群别相匹配,提示黑线姬鼠带菌与人间疫情存在相关性.
作者：刘英；陈峥宏；李世军；姚光海；黄荷；马青；周敬祝；唐光鹏；王定明 刊期： 2016年第11期
