目的 筛选具有活化Toll样受体9(TLR9)的牛种布氏菌基因外重复回文序列(Repetitive Extragenic Palin-drome Squence,REPs)并检测其活性,为布氏菌病的治疗提供新思路.方法 基于Brucella abortus A13334基因组序列,利用生物信息学技术识别其REPs后,合成序列.将合成的天然骨架的脱氧寡核苷酸(ODNs)转染小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,以ELISA检测IFN-α的分泌水平.采用TLR9-siRNA沉默RAW264.7中的TLR9,将上述诱导IFN-α分泌增加的阳性ODN序列转染RAW264.7,ELISA方法检测IFN-α的分泌变化.结果 筛选出1857条牛种布氏菌REPs,选择2级茎环结构较好的5条ODNs序列进行合成,ELISA方法检测显示ODNs M4、M5介导IFN-α分泌量显著高于阴性对照(P＜0.05),且阳性ODN M5所介导的IFN-α分泌可以被TLR9-siRNA显著抑制.结论 布氏菌基因组中存在可以活化TLR9信号通路的REPs,此结果有助于对布氏菌致病和免疫机制的认识.
作者：张雅娴；白丽云；王占黎；王英；于慧 刊期： 2016年第05期
目的 建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况.方法 根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测.结果 建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5％,灵敏度可达100 CFU/mL.对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98％、75％和98％.在可被MLST分型的89株菌株中,groupⅠ的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupⅡ的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupⅢ的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出.结论 本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义.
作者：刘二龙；袁慕云；吕英姿；陈颖；王娉；许龙岩；李嘉琪；郑高彬；杜雅萍 刊期： 2016年第05期
目的 监测和分析2011年和2013年武汉市婴幼儿和成人病毒性胃肠炎病原.方法 用聚丙烯酰胺凝胶电泳及RT-PCR对胃肠炎患者腹泻大便样本进行轮状病毒、诺如病毒、星状病毒以及札幌样病毒检测,部分样本测序并比对同源性.用PCR检测腺病毒.结果 轮状病毒、诺如病毒、星状病毒、札幌样病毒检出率分别为21.6％(296/1368)、35.7％(488/1368)、10.2％(140/1368)和7.7％(105/1368);肠道腺病毒在儿童患者中的检出率为8.2％(70/853).诺如病毒和轮状病毒易感人群为13～24月龄和7～24月龄儿童,及40～59岁成人.轮状病毒检出高峰在秋冬季.星状病毒、札幌样病毒和腺病毒多发于2岁以下的婴幼儿,无明显季节分布.196人份A组轮状病毒基因型以G9P[8]为主(40.8％),其次为G1P[8](26.5％),G3P[8](16.3％)和G2P[4](11.7％).经测序比对诺如病毒基因型分别为GⅡ.4型(7/12),GⅡ.3型(5/12);星状病毒为1型(8/13),8型(4/13)和5型(1/13);札幌样病毒为GI.1型(2/6),GⅠ2型(2/6)和GⅡ.1型(2/6).结论 2011年和2013年武汉市婴幼儿和成人胃肠炎主要病原是诺如病毒,其次是轮状病毒.
作者：庞蓓蓓；周璇；Nobumichi Kobayashi；彭劲松；王远虹 刊期： 2016年第05期
目的 对一例暴露因素不明的人狂犬病病例进行实验室确诊,通过分子流行病学分析探索其可能的感染来源.方法 通过对存活疑似人狂犬病病例的唾液、脑脊液、血清标本采用直接免疫荧光试验、反转录-聚合酶链式反应和快速荧光灶抑制试验进行实验室确诊;通过时空进化分析探索该病例可能的感染来源.结果 病例唾液标本直接免疫荧光试验结果呈阳性,病例血清标本经快速荧光灶抑制试验检测抗狂犬病病毒中和抗体呈阳性.病例唾液标本经反转录-聚合酶链式反应获得狂犬病病毒核蛋白基因预期扩增片段,序列测定进一步证实为狂犬病病毒.该狂犬病病毒株与2011年安徽省一株犬源狂犬病病毒株核苷酸序列同源性高,为98.4％.结论 该疑似狂犬病病例可确诊为狂犬病病例.其发病源于至少2011年以来的某次不自觉的狂犬病病毒感染.
作者：李幸乐；李凤丽；李懿；孙建伟；黄学勇；许汴利 刊期： 2016年第05期
目的 本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法.方法 以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线.将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较.结果 荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9).将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4％,细菌分离培养检测阳性率为9.9％,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致.结论 本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控.
作者：崔玉花；田莉莉；王晓亮；姜海蓉；范伟兴；彭方毅 刊期： 2016年第05期
目的 研究群体感应信号分子AI-2合成酶编码基因luxS对嗜水气单胞菌ATCC 7966生理特性及毒力因子的影响.方法 利用同源重组原理,构建含有中间为卡那霉素抗性基因,两侧为luxS基因上、下游同源序列片段的基因敲除质粒,将构建好的质粒转化大肠埃希氏菌SM 10(λpir)感受态细胞,利用接合法将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC 7966,通过抗性筛选、PCR和DNA测序确认嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株.比较野生株ATCC 7966和luxS基因缺失突变株生长速度、AI-2合成、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差异.结果 嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株△luxS构建成功.与野生株相比,突变株生长周期延长,基本丧失合成AI-2和胞外蛋白酶的能力;突变株生物膜形成能力降低,生长24 h时生物膜形成能力为野生株的14.5％,36 h时生物膜形成能力为野生株的60.0％,突变株生物膜形成速度明显比野生株缓慢,结构更为疏松.结论 luxS基因参与调控嗜水气单胞菌的生长、AI-2合成和毒力因子表达,本研究为进一步研究luxS基因在嗜水气单胞菌致病性中发挥的作用奠定基础.
作者：崔一；赵晶；张福蓉；郭婉萍；陈明；权春善；范圣第 刊期： 2016年第05期
目的 通过比较2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33及其covR基因突变株△covR蛋白表达谱差异,质谱鉴定差异表达蛋白,分析CovR在蛋白表达调控中的作用.方法 首先将05ZYH33和△covR在THB培养基中培养至对数期,然后裂解细菌制备蛋白样品.第一向等电聚焦电泳在pH3～10的IPG胶条上完成后进行SDS-PAGE电泳,电泳胶经扫描分析后选取蛋白点进行质谱鉴定.结果 05ZYH33和△covR全菌蛋白裂解液经二维电泳分别得到559和491个蛋白点,经比对发现两菌株蛋白表达量差异3倍以上蛋白点40个,经质谱鉴定出15个蛋白,主要涉及细胞代谢的酶类如谷氨酸脱氢酶、腺苷酸激酶、PTS系统成分等,以及分子伴侣蛋白如GroEL和Dnak等;电泳分离得到△covR特异蛋白点124个,质谱鉴定出15个,主要为参与细胞糖代谢过程中的酶,如磷酸甘油酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶等;质谱鉴定05ZYH33特异表达蛋白5个.结论 鉴定05ZYH33和△covR差异表达蛋白35个,部分蛋白涉及细菌毒力、宿主细胞粘附、细胞分裂等生命过程,同时蛋白分子伴侣在△covR中的表达变化说明CovR的调控可能发生在蛋白修饰水平,为研究CovR在调控细菌毒力中的作用和分子机制奠定基础.
作者：倪华；张剑；郑峰；胡丹；李先富；王长军；潘秀珍 刊期： 2016年第05期
目的 了解我国城市地区入芽囊原虫的流行病学特征和基因型分布,为人芽囊原虫的防治提供科学参考依据.方法 在云南省昆明市4家哨点医院收集腹泻病例粪便样本1121份,非腹泻人群粪便样本319份,使用结构化问卷收集研究对象基本信息,提取粪便基因组并采用PCR方法进行检查,对可疑阳性PCR产物进行测序,通过序列比对进行确诊,并通过进化树构建进行基因分型.结果 人芽囊原虫在全年龄组腹泻病例中检出率为4.2％;在女性腹泻人群中的检出率高于男性腹泻人群中的检出率(5.5％,2.9％;P=0.027,OR=1.98,95％CI=1.07-3.67);在不同年龄组腹泻人群中,人芽囊原虫的检出率没有差异(x2 =3.933,P=0.950);但具有明显季节分布特征(x2=11.8,P＜0.05);人芽囊原虫的检出率在城区、农村以及城乡结合部的腹泻人群中没有差异(x2 =2.427,P=0.297).在腹泻人群和非腹泻人群中,人芽囊原虫Ⅰ型基因型都占绝对优势.结论 人芽囊原虫依旧是西南城市地区感染人群的常见肠道寄生虫之一,感染主要以Ⅰ型基因型为主,其致病性和基因型分布需持续研究和探索.
作者：张顺先；田利光；卢艳；李兰花；陈家旭；周晓农 刊期： 2016年第05期
目的 建立敏感、特异、高效的检测田鼠巴贝虫FTA-环介导等温扩增技术(LAMP).方法 根据GenBank公布的田鼠巴贝虫基因序列,就细胞色素B基因保守序列设计了多套LAMP引物,利用LAMP RealTime Turbidimeter LA-320仪筛选佳引物、反应条件,建立LAMP检测方法,从保存有血液样本的FTA卡片中提取田鼠巴贝虫DNA进行LAMP,观察检测效果.结果 设计的4组引物做LAMP试验,其中以引物1,佳反应温度为64℃,恒温下作用,敏感性高,可在1h内完成,其检出限量为0.687 fg/μL,而PCR的低检测量为0.687 pg/μL,与间日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、冈地弓形虫、利什曼原虫、冈比亚锥虫均无交叉反应.以建立的FTA-LAMP法检测20份PCR检测阳性的田鼠巴贝虫感染者血样,其阳性符合率100％.结论 成功建立了检测田鼠巴贝虫特异性细胞色素B基因的FTA-LAMP方法,该法特异性强、灵敏度高、简便、快速、适于现场应用.
作者：吴芬；蔡玉春；秦志强；艾琳；卢艳；陈绍红；吴秀萍；陈家旭 刊期： 2016年第05期
目的 克隆鉴定猪带绦虫胰岛素受体TsIR-4810基因,并表达其LBD区.方法 设计猪带绦虫胰岛素受体TsIR-4810特异性引物,并分段进行RT-PCR扩增.TsIR-4810的完整ORF序列经BLAST同源比对,SMART预测其结构域,SWISS-MODEL同源建模,并用PhyML构建系统发育树.将TsIR-4810的LBD区克隆至pET-30a中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot鉴定.结果 获得的目的基因完整的ORF为4 920 bp,其编码蛋白的氨基酸序列与其他生物的胰岛素受体一样,具有相对保守的分泌信号肽、受体L1和L2结构域、FnⅢ结构域、跨膜区和受体酪氨酸激酶域.构建的LBD重组菌株诱导表达了63 ku的目的蛋白,与预期大小相符,且主要以包涵体形式存在.结论 TsIR-4810为猪带绦虫胰岛素受体基因,其LBD区的成功表达,将为开展基于胰岛素受体LBD区的新型疫苗和药物奠定基础.
作者：魏艳玲；郭爱疆；刘光学；杨锐；张少华；侯俊玲；骆学农 刊期： 2016年第05期
目的 从不同病情手足口病(HFMD)患儿中分离鉴定人肠道病毒71型(HEV71)并分析其VP1基因型及药物结合位点突变情况.方法 从2014年浙江省绍兴地区轻、重症各4例HFMD患儿标本中分离HEV71并用RT-PCR进行鉴定.采用RT-PCR扩增病毒分离株全长VP1基因并测序.采用专业生物信息学软件,对HEV71分离株进行VP1基因分型、确定VP1基因中药物结合位点突变情况及构建HEV71分离株系统进化树.结果 8例HFMD患儿标本中均分离出HEV71.HEV71分离株与文献报道的VP1-C4a基因亚型的核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达97.2％～98.8％和99.3％～99.7％.2例重症患儿HEV71分离株分别在VP1基因序列第179位药物结合位点发生V179L点突变.5株HEV71与安徽和湖南分离株、3株与上海和山东分离株亲缘关系较近.结论 本地区不同病情HFMD患儿分离的HEV71均为VP1-C4a基因亚型,重症患儿HEV71分离株VP1基因第179位药物结合位点突变可能与病情严重程度有关.
作者：蒋卓婧；何婷婷；陈金堃；严杰 刊期： 2016年第05期
猪链球菌(S.suis)是一种重要的人兽共患病原菌,可感染人并导致严重的脑膜炎、败血症,甚至引起死亡.自1968年国际首次发现了2型猪链球菌引起人类严重感染的病例以来,国内外又有诸多相关报道.人类在感染该菌的早期并无特异性表现,但病情进展迅速,若不及时诊断并予以干预,死亡率较高.2005年6月至8月在四川省资阳、内江等地区相继暴发人感染猪链球菌病疫情,广泛引起了国内外的关注.由于S.suis不仅给养猪业造成很大威胁,而且严重危害公共卫生安全,对该菌进行准确的早期诊断是控制猪链球菌病流行的关键.目前,针对该病原体的常见实验室检测方法包括微生物检测法、免疫学检测法、分子生物学检测法及动物实验法等.本文将就人感染S.suis的实验室诊断研究进展做一简要综述.
作者：刘海珠；袁晓明 刊期： 2016年第05期
卡氏肺孢子菌含有大量的蛋白,包括主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)、P55蛋白、A12蛋白、主要表面糖蛋白相关抗原(MSG-related,MSR)、PRT1蛋白、Meu10等.肺孢子菌是重要的机会性致病菌,可引起宿主严重的肺炎,卡氏肺孢子菌主要蛋白的研究为开发新疫苗和防控耶氏肺孢子菌肺炎具有重要意义.本文对卡氏肺孢子菌主要蛋白的研究进展进行简要的综述.
作者：龚锐；姚云清 刊期： 2016年第05期
化学发光技术是一种极其敏感的新型检测技术.本文阐述了化学发光技术的原理与类型,介绍了可应用于化学发光检测技术中的纳米、磁珠、生物传感器等相关新型技术,同时对当前该技术在人兽共患病、动物疫病诊断中的新应用做了报道,后提出了未来几年化学发光检测技术的发展前景.
作者：刘泽众；李扬帆；常惠芸 刊期： 2016年第05期
类圆线虫病是一种被忽视的寄生虫病,呈全球性分布,人和动物均可发生.该病严重危害人和动物的健康,尤其是粪类圆线虫在人体免疫力和抵抗力下降时大量繁殖,向全身各器官扩散,造成严重的后果.本文对类圆线虫的生物学和致病性等研究进展进行了综述,主要包括流行病学、致病性、分子生物学、诊断和防治等.
作者：林海；杨光友 刊期： 2016年第05期
目的 分析2013年1-7月份河南省2地市3家医院分离自婴幼儿患者粪便中的斯坦利(S.stanley)沙门菌的病原学特征及分子流行病学关联,为食源性疾病聚集性及暴发病例的调查及院感防控提供新的思路和模式.方法 采集河南省3家医院婴幼儿住院病例的腹泻粪便,SBG增菌,沙门菌科玛嘉选择性培养基分离培养,API20E肠杆菌科系统生化板条鉴定后使用丹麦SSI分型血清进行沙门菌O抗原及H1/2相鞭毛诱导血清凝集试验.根据PulseNet China病原体分子分型网络公布的沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作指南与美国临床实验室标准化协会(CLSI)沙门菌K-B法药敏测试方案,对其进行PFGE分子分型与聚类分析及17种抗生素药敏测试.结果 分离自15位婴幼儿住院病例粪便中的沙门菌经鉴定均为斯坦利沙门菌(S.stanley),药敏测试显示其对环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、四环素、亚胺培南等8种抗生素敏感,对氨苄西林、头孢噻肟、头孢吡肟、阿莫西林等9种抗生素耐药,其中12株菌耐药表型完全一致.15株斯坦利沙门菌经XbaⅠ与BlnⅠ限制性双酶切和PFGE电泳后分为STN1和STN2两种带型,其中STN1带型包含14株菌,与另1株(STN2)具有流行病学关联度的菌株带型差异度较大.STN1经“PulseNet China”数据库比对证实为斯坦利沙门菌河南省独有带型.结论 病原学诊断及PFGE分子分型结果证实了15例斯坦利沙门菌感染病例间可能存在高度的分子流行病学关联和聚集性,为进一步的追踪溯源和调查取证提供了技术支撑.
作者：赵嘉咏；郝宝林；谢志强；黄学勇；穆玉娇；夏胜利 刊期： 2016年第05期
目的 了解近年来从宁波口岸捕获的鼠类样品中分离的5个汉坦病毒株遗传学差异.方法 利用RT-PCR方法,对5个汉坦病毒株S基因全长进行扩增、克隆和测序,并将这5个毒株的S基因序列分别与GenBank登录的20个汉坦病毒感毒株进行比较分析.结果 DX1507株和DX1408株S基因核苷酸序列长度为1766 bp与汉城型(SEOV)病毒株Rn-DH27同源性为接近,LJ1112株S基因核苷酸序列长度为1772 bp与汉城型(SEOV)病毒株Cherwell同源性为接近,DX0903株和BL1402株S基因核苷酸序列长度为1725 bp与大别山型(DABV)病毒株Yongjia-Nc-95和Yongjia-Nc-38同源性为接近.结论 宁波口岸分离到的汉坦病毒株分别为汉城型和大别山型,对宁波口岸开展汉坦病毒传播防控有重要意义.
作者：胡群；邹春颖；马思杰；童淑梅；梅勇 刊期： 2016年第05期
