目的 为探究ToxoDB# 17型弓形虫对昆明小鼠的致病特点.方法 分别选择＜1个,1个,101个,102个,10 3个,104个,105个,106个ToxoDB# 17型弓形虫卵囊灌胃小鼠,观察小鼠的临床症状,采用改良凝集试验、HE和IHC方法研究弓形虫的感染率,小鼠生存率及其大脑内的包囊数量.结果 ≥104个卵囊组小鼠在攻虫后出现一过性的精神沉郁,弓背,被毛逆立现象,其余组精神状态正常;≥102个卵囊可引起小鼠100％感染,感染小鼠的成囊率为2.38％(1/42),感染小鼠生存率为85.71％(36/42),存活时间≥360 DPI.结论 ToxoDB# 17型弓形虫对昆明小鼠的致病力弱,包囊形成率低.
作者：王凯；冯永杰；付晓莹；陆瑶瑶；梁宏德；杨玉荣 刊期： 2017年第01期
目的 检测下呼吸道感染患者分离的铜绿假单胞菌毒力基因exoS、exoU表达及与氟喹诺酮耐药性的相关性.方法 收集2015年10月至2016年3月住院患者痰标本中分离的铜绿假单胞菌,以液体稀释法测定药物敏感性;PCR法扩增exoS、exoU基因.结果 检出铜绿假单胞菌46株,exoS、exoU基因阳性率分别为86.96％(40 /46)和69.57％(32/46),检出率高的基因型是exoS+/exoU+(60.87％,28/46).其中36.96％(17/46)为多重耐药菌(MDR).氟喹诺酮不敏感(FQ-NS)菌株78.95％(15/19)为MDR,89.47％(17/19)表达exoU基因,明显高于氟喹诺酮敏感(FQ-S)菌株(P＜0.05).与FQ-S菌株相比,FQ-NS菌株耐药严重,对氨曲南和头孢吡肟耐药率高达70％以上,对美罗培南和亚胺培南耐药率高于50％.耐药率较低的药物有多黏菌素B(10.53％,2/19)、阿米卡星(10.53％,2/19)、头孢他啶(15.79％,3/19)和庆大霉素(21.05％,4/19).结论 下呼吸道感染铜绿假单胞菌毒力基因exoS、exoU阳性率较高,以exoS+ /exoU+基因型为主.与FQ-S比较,FQ-NS菌株耐药性更为严重,exoU阳性率更高,提示临床应加强毒力基因及耐药性监测.
作者：鞠晓红；李瑶；王月华；赵蓬波 刊期： 2017年第01期
目的 了解环境污水监测对肠道病毒(Enterovirus,EV)相关疾病防控的意义和作用.方法 选择福州祥板和洋里两个污水处理厂作为监测点,每月采集进口污水各1份,应用阴离子膜进行污水浓缩,接种RD、L20B和HEp-2进行病毒分离,微量血清中和试验及RT-PCR确定其血清型,VP1测序遗传特征分析.结果 2013-2014年采集的48份污水标本中44份(91.67％)病毒分离阳性,分离到268株病毒,已鉴定涵盖22个血清型;病毒分离高峰期为2-7月,较监测病例高峰早约2个月.2013年埃坷病毒(Echovirus,Echo)7型为优势血清型(43.61％),2014年转变为Ech06占绝对优势(62.96％);遗传特征分析显示:Ech06和Ech07污水分离株较同时期病例分离株更为多样;病例株与污水株具高度同源性,在遗传进化树图位于同一个分支.结论 环境污水应用于肠道病毒监测,较现有的病例监测更为敏感.
作者：杨秀惠；朱旺峰；蔡少健；周勇；严延生 刊期： 2017年第01期
目的 在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价.方法 将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21 (DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白,用镍柱对重组蛋白纯化,并用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物.以融合蛋白为抗原,用间接ELISA检测登革热病人血清IgM抗体.结果 重组表达载体pET28a-rE构建成功,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达.融合蛋白主要以包涵体形式存在,用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符,建立的间接ELISA具有较高的准确性.结论 原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检测价值.
作者：易方浩；张俊爱；黎四平；贾岩；陈晨；余诗炎；王鑫；代友超；庄泽岗；郑碧英；徐军发 刊期： 2017年第01期
目的 调查了解一起不明原因群体性肺部感染的病原菌.方法 通过流行病学分析,运用荧光定量PCR、ELISA、胶体金、VITEK2生化鉴定以及MALDI-TOF-MS飞行时间质谱技术对可疑菌进行鉴定,并将分离到的可疑菌与病例血清进行凝集试验.结果 从环境标本中分离到2株浅白隐球菌,并与病例血清发生特异性凝集.结论 此次肺部感染可能与浅白色隐球菌感染有关.
作者：石一；张义；张铮；史伟；马国柱；刘长宏；雷金娥；马琳；曹磊；张志成；刘峰；刘东立 刊期： 2017年第01期
目的 非O1/O139群霍乱弧菌能够引起人类急性腹泻性疾病,但与O1群和O139群相比,人们往往容易忽视其危害性.因此,我们对分离于云南省的31株非O1/O139群霍乱弧菌开展了分子特征分析.方法 采用纸片法(K-B)开展抗生素敏感试验;多聚酶链反应(PCR)扩增检测毒力基因;同时,我们对菌株进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)分子分型研究.结果 药敏实验结果显示,67.74％的菌株对利福平耐药,对萘啶酸和复方新诺明的耐药率为29.03％,所有的菌株对庆大霉素和环丙沙星敏感;PCR结果显示,所有菌株的ompW基因为阳性,87.10％的菌株hly基因为阳性,25.81％的菌株rstREl tor为阳性,16.13％的菌株rstRClassical和tcpAEl tor为阳性,而CT、rfbo1和r厂6O139基因全为阴性;PFGE结果显示,31株非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的离散趋势,几乎没有相同带型的菌株出现;在MLST结果分析中,发现了1个gyrB新的等位基因,mdh基因发现了4个新的等位基因,metE基因发现了6个新的等位基因,pntA中发现了2个新的等位基因,purM中发现了3个新等位基因,pyrC中发现了4个新等位基因.经过排列组合后,共发现了17个新的霍乱弧菌ST型别(ST273-ST289).结论 非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的多样性特征,同时,云南省的非O1/O139群霍乱弧菌具有一定的地域特点,丰富了现有的霍乱弧菌分子分型数据库.
作者：廖凤；古文鹏；徐闻；伏晓庆 刊期： 2017年第01期
目的 评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果.方法 利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能.另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性.结果 在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌.其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1％.以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1％,异烟肼的耐药性的符合率为94.5％.与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6％和99.8％.结论 基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测.
作者：许榕青；李丹；林银霞；黄明翔；陈新朝 刊期： 2017年第01期
目的 调查医院临床标本中阴沟肠杆菌基因群的构成比例,并建立TaqMan荧光定量PCR方法对阴沟肠杆菌进行特异、灵敏、快速检测.方法 通过hsp60基因分型分析临床标本中基因群的构成,并以外膜蛋白基因(ompⅩ)为靶基因设计引物及FAM探针,建立TaqMan荧光定量PCR方法对阴沟肠杆菌基因群检测,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性.结果 237株临床标本共归为10个基因群.其中群Ⅲ,Ⅵ和Ⅷ菌株数量多,占总菌株数的71％;群Ⅰ占11％;其他6个群总共占18％.无基因群Ⅶ,Ⅹ和Ⅻ.TaqMan荧光定量PCR方法能对阴沟肠杆菌不同基因群进行特异检测:对十个基因群和群Ⅰ的质粒标准品的检测下限分别为36拷贝/μL和21拷贝/μL,对粪便模拟标本的检测下限为104个菌落形成单位/μL;TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;结论 医院临床标本中可以检测到十个基因群,具有遗传多样性的特征.本研究建立的TaqMan荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于阴沟肠杆菌的快速检测.
作者：王怡倩；刘凯；李培京；熊衍文；叶长芸 刊期： 2017年第01期
目的 了解鸭肉生产链中弯曲菌的污染情况及其耐药性和毒力基因分布情况.方法 根据GB 4789.9-2014,从肉鸭屠宰链中分离疑似弯曲菌,采用三重PCR方法,对疑似菌株进行准确鉴定;采用微量肉汤稀释法,对弯曲菌分离菌株进行8种抗菌药物敏感性试验,参考NARMS标准判定药敏试验结果;利用PCR检测与弯曲菌致病相关的4个毒力基因.结果 根据形态特征、生化指标及PCR鉴定结果,从489份样品中,鉴定出空肠弯曲菌100株、结肠弯曲菌79株,其他弯曲菌8株,弯曲菌的总体分离率为38.24％,肉鸭屠宰前、脱毛环节、掏膛环节、屠宰后样品弯曲菌分离率分别为76.33％、5.62％、24.00％、0％;药敏试验结果表明弯曲菌对TET(95.72％)、CLI(90.91％)的耐药率较高,对AZI(63.64％)耐药率居中,对CIP(31.02％)、GEN(34.76％)、NAL(37.43％)、ERY(41.18％)、CHL(41.18％)的耐药率相对较低,所分离菌株多重耐药现象较为普遍,多重耐药率达72.19％.弯曲菌分离株对黏附相关基因cadF、鞭毛基因flaA、侵袭蛋白基因iamA、毒素调节基因cdtB的携带率分别为100％、80.75％、71.12％、94.65％.结论 肉鸭屠宰过程中存在不同程度的弯曲菌污染,且其耐药情况较为严重,毒力相关基因广泛存在于弯曲菌中,应该加强卫生管理和抗菌药物使用监督.
作者：曾杭；彭峻烽；黄静；严唯玮；陈朋；周康；邹立扣；黄勇；韩新锋；刘书亮 刊期： 2017年第01期
目的 鉴定鸡胚成纤维(CEF)细胞膜禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)受体.方法 用膜蛋白提取试剂盒制备CEF细胞的膜蛋白,通过SDS-PAGE和配体印迹检测CEF细胞膜蛋白中的OmpH受体,采用MALDI-TOF质谱技术鉴定蛋白种类,并用配体印迹、ELISA和免疫荧光技术检测OmpH受体在不同宿主食管黏膜细胞表面的分布情况.结果 在转印CEF细胞膜蛋白的NC膜上有一条明显的疑似受体条带,分子量约为49 kDa.MALDI-TOF质谱鉴定结果表明该受体蛋白是ATP合成酶β亚基.在转印鸡和兔食管黏膜细胞膜蛋白的NC膜上检测到能够与OmpH结合的蛋白条带,但在牛和猪食管黏膜细胞膜蛋白中未见任何印迹条带,而OmpH与鸡和兔食管黏膜细胞膜蛋白的结合力高于猪和牛食管黏膜细胞膜蛋白.结论 禽多杀性巴氏杆菌OmpH受体可能是CEF细胞膜表面的ATP合成酶β亚基.
作者：吾鲁木汗·那孜尔别克；韦东；恩特马克·布拉提白；肖迪 刊期： 2017年第01期
目的 构建并鉴定弓形虫RH株rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷虫株.方法 利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株.运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1∷Cas9-U6∷sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒.此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段.pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株.PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株.吉姆萨染色分别比较RH株和RH△rop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵.并比较RH株和RH△roop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率.结果 经测序比对,成功构建了pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒.PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RH△rop16株有Rop16Ⅰ/Ⅲ蛋白表达.吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RH△rop16虫株.毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10 d均全部死亡,两组间无统计学差异.结论 利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷的弓形虫RH虫株,rop16Ⅰ/Ⅲ基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响.
作者：王聪；程维晟；刘芳；张焰；Faustina Pappoe；罗庆礼；闻慧琴；邓芳；徐元宏；沈继龙 刊期： 2017年第01期
本文介绍了白念珠菌及其所致疾病的特点,阐述了白念珠菌致病机制的复杂性和转录组测序(RNA-Seq)技术的优势,回顾了RNA-Seq技术在白念珠菌致病机理研究中的应用情况,分析了以往研究中存在的不足,展望了此类研究未来的可能发展趋势.总之,RNA-Seq技术的不断改进并用于白念珠菌致病机理的深入研究将会带来令人瞩目的成就.
作者：刘建钗；柳焕章；刘彦威；闫金坤；张鹤平；苏敬良 刊期： 2017年第01期
包膜蛋白prM-E是黄病毒的主要结构蛋白,含有许多病毒的表面抗原,与病毒的致病力和宿主嗜惶有关,但目前对寨卡病毒的prM-E蛋白研究很少,作者利用生物信息学方法对寨卡病毒的E蛋白进行了预测,重点阐述了prM-E蛋白在黄病毒形成病毒样颗粒过程中的应用,并对寨卡病毒病毒样颗粒的应用进行了展望.
作者：卢昌；李娜；薛璞；李楠；陈平 刊期： 2017年第01期
目前,用于预防结核病的疫苗仍然是卡介苗(BCG),免疫效果不理想,原因颇为复杂;随着结核耐药菌株的出现,加上艾滋病感染与发病的增加,导致结核病发病人数逐年增多,所以研制新型结核病疫苗迫在眉睫.本文对近几年结核活载体疫苗的研究成果进行总结,为后续研究提供参考.
作者：陈敬蕊；周步丹；刘磊；姜秀云 刊期： 2017年第01期
疱疹病毒US10基因位于其基因组的短独特区,是病毒复制的非必需基因,编码病毒的磷酸化衣壳-皮层蛋白或Ⅰ型跨膜糖蛋白,可通过特异性识别非经典MHC Ⅰ型分子的HLA-G胞质尾区,来下调HLA-G的表达量并阻断宿主NK细胞对病毒的杀伤,从而参与病毒的免疫逃逸;该蛋白通过与宿主蛋白相互作用而发挥致病作用,也能调节其它病毒蛋白如糖蛋白E(gE)等的表达.对US10结合RNA的能力及在病毒转录后调控、病毒毒力中的作用有待于深入研究.
作者：张代熙；程安春；汪铭书 刊期： 2017年第01期
目的 分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征.方法 从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对.结果 从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33％),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.lb亚分支.HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295S aa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征.结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测.
作者：张如胜；孙边成；姚栋；叶文；陈静芳；黄政；刘晓蕾；欧新华；陈发明 刊期： 2017年第01期
目的 分析湖北省首例人感染H5N6禽流感病例的实验室检测结果,为更好地检测人禽流感疑似病例标本提供参考.方法对患者的不同病程、不同种类的标本进行实验室检测并进行分析.结果 我省首例人感染H5N6禽流感确诊病例只有前期的痰液标本检测到H5N6核酸,其它时间未检测到.结论 疑似人感染H5N6禽流感病例标本采集一定多样化,而且一定采集到初期的痰液标本.
作者：王喜云；侯敏；梅玉发；汪倩；郑向梅；易卫兵 刊期： 2017年第01期
