目的:观察人脐血干细胞对大鼠外伤性视神经病变闪光视觉诱发电位(flash visual evoked potentials,F-VEP)的影响.方法:将48只SD大鼠左眼制成外伤性视神经病变模型,A组不治疗,B,C和D组分别予以玻璃体腔内注射神经营养因子、人脐血干细胞、人脐血干细胞+神经营养因子混合液.记录多个时间点F-VEP的波幅及峰潜时,并进行统计分析.结果:损伤组与正常对照眼、治疗组之间相同时间点的比较,波幅和峰潜时的差异有统计学意义(除损伤后1 h的峰潜时);各治疗组相同时间点之间的比较,D组与B组之间的波幅与峰潜时的差异均有统计学意义(P＜0.05),其余各组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:人脐血干细胞和神经营养因子的混合液对大鼠外伤性视神经病变后F-VEP的恢复有一定的促进作用.
作者：朱兴华；江冰；张谱；周丹 刊期： 2011年第05期
目的:研究不明原因不孕患者的精子功能,并进一步探讨不明原因不孕患者体外受精(in vitro fertilization,IVF)方式对临床结局的影响.方法:选择2009年7月至2010年1月在中南大学湘雅医院生殖医学中心行IVF治疗的55例患者,根据不孕的原因将患者分为不明原因不孕组(A组)和单纯女方输卵管因素组(B组).将不明原因不孕组25例患者通过超排卵获取的成熟卵母细胞随机分为2组,分别行常规IVF(A1组)和卵胞质内单精子注射术(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精(A2组);单纯女方输卵管因素组(B组)采用常规IVF.将2组男方的精子利用废卵分别进行精-卵结合实验和透明带诱发精子顶体反应实验.观察A组与B组平均精卵结合数和透明带诱发精子顶体反应情况,分析透明带诱发精子顶体反应率与受精率的关系.比较不明原因不孕组通过2种方式受精后的受精率、优胚率及妊娠率.结果:A组平均精卵结合数(78.29±16.31)和透明带诱发精子顶体反应率[(55.87±27.69)%]明显低于B组的平均精卵结合数(94.63±6.72)及透明带诱发精子顶体反应率[(82.53±17.99)%],差异具有统计学意义(P＜0.01);A1组的受精率(49.32%)明显低于B组(64.42%)和A2组(71.33%),差异具有统计学意义(P＜0.01);而A1组的优胚率(44.44%),与A2组(56.86%)及B组的优胚率(53.81%)相比,差异无统计学意义(P＞0.05);A2组的受精率及优胚率与B组比较,差异也无统计学意义(P＞0.05);A组的妊娠率(36%)与B组(40%)相比,差异无统计学意义(P＞0.05);A1组的受精率与透明带诱发精子顶体反应率具有明显的相关性,有统计学意义(r=0.932,P＜0.01).结论:对于不明原因不孕患者,精卵结合及透明带诱发精子顶体反应是有重要意义的精子功能检测实验.不明原因不孕患者的卵子采用half-ICSI,可有效地避免受精完全失败导致的无胚胎移植,从而获得较理想的妊娠结局.
作者：刘能辉；张振辉；李艳萍；刘冬娥；陈仙花；姚仲元 刊期： 2011年第05期
目的:探讨肝素联合肝干细胞(WB-F344细胞)经脾移植对大鼠急性肝损伤的治疗作用.方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,体外培养、扩增WB-F344细胞,携带GFP基因的慢病毒转染WB-F344细胞.通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立大鼠急性肝损伤模型,造模后24 h分别将1 mL含2×107个肝干细胞和8 μL肝素的悬液经脾注入大鼠体内.移植术后1 d获取肝脏和脾脏标本进行荧光检测,分别于术后3,7,14和28 d尾静脉抽血送肝功能检测,获取肝脏组织行病理学检测.结果:经慢病毒转染3 d后,WB-F344细胞表达GFP;GFP阳性细胞经脾移植1 d后到达肝脏;实验组大鼠的肝功能和肝脏损伤修复明显优于对照组(P＜0.05).结论:经脾联合肝素和WB-F344细胞移植对CCl4所导致的大鼠急性肝损伤有明显的治疗作用.
作者：黄增辉；曾珊；欧阳淼；董娟娟；Yuewen Gong；申竑 刊期： 2011年第05期
目的:研究神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对脊髓C7-T5背根节感觉神经元细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和P物质表达的影响及干扰素调节因子-1(interferon regulatory factor-1,IRF-1)的调控作用,阐明气道神经源性炎症的机制.方法:体外原代培养C7-T5脊髓背根神经节感觉神经元(DRGn)细胞,然后给予NGF或 NGF+IFN-γ刺激.采用实时荧光定量 PCR法检测经不同处理后细胞内P物质和iNOS的mRNA表达水平;再采用慢病毒GFP-IRF-1-shRNA转染DRGn细胞,观察阻断IRF-1表达后iNOS和P物质表达的变化.结果:与对照组相比,经NGF刺激后的各组细胞内P物质及iNOS mRNA水平明显升高(P＜0.01);与单纯NGF刺激组相比,NGF+IFN-γ刺激组细胞内P物质 mRNA水平无明显变化,而iNOS mRNA水平明显升高(P＜0.01);经慢病毒GFP-IRF-1-vshRNA阻断IRF-1表达后,细胞内P物质及iNOS的表达水平明显降低(P＜0.01).结论:NGF通过IRF-1调控气道感觉神经元细胞内P物质及iNOS的合成参与气道神源性炎症,IRF-1可能成为气道神经源性炎症的治疗靶点.
作者：潘频华；黄四云；胡成平 刊期： 2011年第05期
目的:了解中小学生及其家长对受艾滋病影响儿童的态度,并分析其影响因素.方法:采用分层整群抽样方法的横断面调查研究,抽取小学、初中、高中学生及其家长为研究对象进行问卷调查,调查内容包括学生及其家长的基本情况、艾滋病相关知识及对受艾滋病影响儿童态度,采用t检验和方差分析及多水平模型分析数据.结果:共回收学生及家长有效调查问卷各732份,学生和家长知识知晓率分别为77.56%(95%CI:63.08%～92.05%)和81.76%(95%CI:72.33%～91.20%),正向态度比例低的态度问题均为隔离受艾滋病影响儿童和不与其同班学习.学生性别(b=-1.15,P=0.016)、学生知识(b=1.26,P＜0.001)及家长态度(b=0.40,P＜0.001)成为学生态度的影响因素,而家长知识(b=0.93,P＜0.001)为家长态度的影响因素.结论:学生和家长中存在一定程度的歧视心理,加强学生及家长艾滋病相关知识教育可促进关爱与支持受艾滋病影响儿童态度的形成.
作者：单旭征；杨土保 刊期： 2011年第05期
目的:构建Gadd45a表达质粒,并诱导该质粒在人类T细胞中的表达.方法:采用反转录PCR法从人胚胎干细胞中扩增Gadd45a的蛋白质编码框,将之克隆至pcDNA3.1载体后,利用电穿孔方法将构建好的表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a和空白质粒pcDNA3.1分别转染至Jurkat细胞或正常人CD4+T细胞,分别用荧光定量RT-PCR和Western blot的方法检测转染后细胞Gadd45a mRNA和蛋白的表达.结果:成功构建Gadd45a表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a,转染该质粒的Jurkat和正常人CD4+T细胞均显示Gadd45a过表达.结论:Gadd45a表达质粒的构建及诱导其在人T细胞中的过表达为进一步研究Gadd45a在表观遗传学机制中的作用提供了研究基础.
作者：李亚萍；赵明；陆前进 刊期： 2011年第05期
目的:研究半乳糖化壳聚糖-低分子聚乙烯亚胺(galactosylated chitosan-graft-polyethyleneimine,GC-PEI)/DNA复合物在体内外的肝靶向性.方法:GC-PEI与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP) 质粒(pEGFP-Cl)在0.01 mol/L PBS,150 mmol/L NaCl,5%葡萄糖溶液中自组装成3种不同溶媒介导的GC-PEI/ DNA复合物,检测复合物粒径大小与形态,Zeta 电位以及结合和保护DNA 的能力;并进一步测定GC-PEI聚合物的毒性,研究复合物的肝靶向转染效率.结果:在GC-PEI与DNA质量比为1∶1～2.5∶1时,GC-PEI聚合物能有效地结合和保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解.复合物粒子呈规则的球形,有明显的核壳结构.GC-PEI聚合物在检测细胞中未显示出明显毒性;动物体内急性毒性实验显示:通过尾静脉注射50～300 μg的GC-PEI聚合物入小鼠后,实验小鼠2周内无急性毒性反应和死亡发生.荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEI/DNA复合物在肝细胞系(QSG7701/core,L02)中的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达明显高于非肝细胞系(SGC-7901,HBE)细胞.体内实验表明转染48 h后,小鼠肝组织在荧光显微镜下可以检测到明显的绿色荧光,而其他主要脏器未见明显荧光.结论:GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因或DNA导入肝细胞,具有良好的肝靶向性.
作者：谭平萍；李曼；王颖；冯德云 刊期： 2011年第05期
目的:探讨神经系统富亮氨酸重复蛋白3(neuronal leucine rich repeat 3,LRRN3)蛋白对大鼠小脑出生后发育的影响及可能机制.方法:新生大鼠随机分为实验组和对照组,各组分别设3个不同时间点亚组.采用行为学实验、HE染色和免疫组织化学等方法观察抗体注射对大鼠小脑发育的影响.结果:实验组动物平衡能力较对照组差,相同时间点两组动物静态平衡时间(balance latency,BL)差异具有统计学意义(P＜0.05);HE染色显示2组动物从第7天到第21天皮质逐渐增厚,结构出现动态改变;囊泡膜谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1)在对照组和实验组大鼠出生后第7天、第14天和第21天的小脑中均有表达,从出生后第7天到第21天VGluT1阳性分子层随发育进行而不断增厚;对照组和实验组VGluT1阳性分子层厚度在出生后第7天差异无统计学意义(P＞0.05);在出生后第14天和第21天,对照组明显厚于实验组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:LRRN3蛋白对小脑出生后发育过程有重要作用,腹腔注射抗LRRN3抗体能降低小脑VGluT1的表达,减少分子层突触形成,降低分子层厚度,从而抑制小脑皮层的生长和功能性神经回路的形成.
作者：杨静；李芳；邱力；罗学港；黄河 刊期： 2011年第05期
目的:探讨带部分松质骨的小牛皮质骨材料作为组织工程材料的可能,为该材料的临床应用提供实验依据.方法:分离兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs);BMSCs与带部分松质骨的小牛皮质骨复合培养,测定细胞黏附率及细胞毒性,应用电镜观察细胞在骨材料表面生长情况.并饲养3月龄新西兰大白兔60只,随机分为3组(n=20),即BMSCs/异种骨组、单纯异种骨组和自体髂骨组,在髂骨翼分别植入BMSCs成骨诱导后复合的异种骨、单纯异种骨和自体髂骨.术后4,8,12,24周取材并应用RT-PCR检测骨形态诱导蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)mRNA.结果:BMSCs对小牛骨黏附率良好,材料毒性评级0-1级.电镜观察细胞均在小牛骨表面生长,并可延入材料孔隙之中,有基质分泌.在各时间点,单纯异种骨组BMP-2 mRNA的表达低于BMSCs/异种骨组和自体髂骨组(P＜0.05),BMSCs/异种骨组低于自体髂骨组(P＜0.05).结论:复合兔BMSCs的带部分松质骨的小牛皮质骨在新西兰大白兔体内具有良好的成骨能力.
作者：刘傥；张湘生；雷霆；禹晓东；熊光仲；黄辉 刊期： 2011年第05期
目的:总结直视下瓣膜成形术或人工瓣膜置换术后再次行瓣膜手术的临床资料和外科经验.方法:收集1996年1月至2010年10月的155例瓣膜直视手术后再次行瓣膜手术患者,包括各种瓣膜的再次单瓣置换术,双瓣置换术和三尖瓣成形术,以及瓣周漏修补术等.再次手术间隔1～266(94.82±85.37)月.手术均在中低温体外循环下,采用灌注冷晶体或含血停搏液下完成.结果:再次瓣膜手术住院死亡率为5.81%,其中2005年至2010年的住院死亡率为2.75%.再次手术后左室舒张末期容积,房室内径显著缩小.术后常见的并发症为室性心律失常和低心排.结论:掌握再次瓣膜手术特殊的临床特点,采取针对性的诊疗策略,可以提高再次瓣膜手术的成功率.
作者：尹倪；周康；胡建国；周新民；刘锋；李建明；尹邦良 刊期： 2011年第05期
目的:观察携带人IL-10基因的慢病毒(LV-hIL-10)对激活的星形胶质细胞的干预作用.方法:确定脂多糖(LPS)诱导DI TNC1细胞的佳浓度和时间,利用表达白介素-10(IL-10)的慢病毒感染DI TNC1细胞,使用RT-PCR和ELISA法检测LPS诱导下DI TNC1细胞促炎因子TNF-α,IL-1β的表达改变.结果:LPS激活的DI TNC1细胞中,TNF-α和IL-1β的表达增加.LV-hIL-10感染DI TNC1细胞后,IL-10表达明显上调,LV-hIL-10感染LPS诱导的DI TNC1细胞后,明显抑制TNF-α,IL-1β mRNA的表达及其蛋白分泌.结论:LPS能激活星形胶质细胞产生免疫细胞样作用分泌TNF-α,IL-1β,而LV-hIL-10能抑制其分泌作用.
作者：贺正华；肖目张；郭曲练 刊期： 2011年第05期
目的:探讨后腹腔镜下离断式肾盂成形术治疗小儿肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)的临床应用价值.方法:85例小儿UPJO患者中,男 56例,女29例,年龄 2.5～11岁,平均4.6岁.B超检查示:肾盂扩张积水<15 mm(轻度)15例,15～30 mm(中度)59例,>30 mm(重度)11例.静脉肾盂造影(intravenous urography,IVU)检查示:30 min内显影良好55例,30～120 min淡显影27例,120 min未显影3例.85例患者均行后腹腔镜下离断式肾盂成形术,术中采用传统顺行法或改良顺行法置入D-J管.结果:85例手术均获成功,无中转开放手术.平均手术时间146(125～240) min,平均出血量68(55～112) mL,术后平均住院时间7(6～8) d.1例术后发生尿漏,保持伤口引流通畅,1周后尿漏消失.85例患者均随访 3～24月,平均11月.IVU显示肾盂输尿管连接部吻合口无狭窄,30 min内显影良好75例,30～120 min淡显影10例.肾积水明显减轻,肾盂扩张积水消失51例,轻度积水25例,中度积水9例.结论:小儿后腹腔镜下离断式肾盂成形术安全、有效、微创,术后恢复快,可以作为治疗小儿UPJO的有效手术方法.
作者：陈志；陈湘；齐琳；陈亮；罗延诚；何垚；李南南；谢超群 刊期： 2011年第05期
目的:探讨MAGI1基因在肝癌侵袭转移中的作用及分子机制.方法:将MAGI1过表达载体,稳定转染HepG2细胞(HepG2MAGI1),应用划痕愈合实验和基质胶侵袭实验检测HepG2MAGI1 和对照组细胞(HepG2)在细胞运动侵袭能力上的差别.采用Western印迹方法检测MAGI1和PTEN的表达,并分析其相关性.结果:HepG2MAGI1 细胞的划痕愈合能力明显弱于HepG2 细胞[(90±10)% vs.(50±15)%,P＜0.05],HepG2MAGI1 细胞穿过基质胶的细胞数亦明显少于HepG2细胞(68±18 vs.150±30,P＜0.05).HepG2MAGI1 细胞中PTEN的蛋白表达水平明显高于HepG2细胞(1.40±0.32 vs.0.28±0.15,P＜0.05).相关分析显示MAGI1和PTEN存在高度正相关(r=0.913,P＜0.01).结论:MAGI1可能通过调节PTEN蛋白表达抑制肝癌的侵袭运动能力.
作者：张鸽文；王志明 刊期： 2011年第05期
DNA混合分析技术的广泛使用,能够明显降低研究的工作量和成本,然而仍然有其自身局限,例如损失了大量个体遗传信息、测量误差较大等.为了尽量克服DNA混合分析技术的自身问题,其检测和分析方法在不断发展与完善.在单体型频率估计方面,基于大期望(expectation-maximization,EM)算法的新方法不断涌现,如HaploPool算法和PoooL算法,其准确性、实用性均增强.
作者：何柳；唐迅；胡永华 刊期： 2011年第05期
