目的:观察慢性轻度不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)诱导的抑郁模型大鼠血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和抗环瓜氨酸肽(anti-citrullinated peptide,anti-CCP)抗体浓度的变化,探讨抑郁症的免疫机制及其与自身免疫的关系.方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为2大组,每组30只,每大组再分为正常对照组、模型组和氟西汀(fluoxetine,FIx)治疗组3个亚组.以CUMS结合孤养建立抑郁大鼠模型,造模完成后,第一大组大鼠用于旷场试验、糖水消耗试验和强迫游泳试验；第二大组大鼠心脏穿刺采血后,以循环酶法测定血清Hcy水平,ELISA法测定血清anti-CCP抗体浓度.结果:与对照组和氟西汀组比较,模型组大鼠自发活动显著减少；糖水消耗量、糖水偏爱百分比显著降低；强迫游泳不动时间明显延长；血清Hcy和anti-CCP抗体水平明显升高.结论:CUMS抑郁模型大鼠体内存在免疫炎症和自身免疫反应,氟西汀治疗可改善上述免疫反应.
作者：唐亚梅；刘勇；秦立新；张仁生；陈若虹 刊期： 2012年第08期
目的:了解慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者群中维生素D缺乏的患病率,并探讨维生素D缺乏对COPD患者生活质量的影响.方法:收集2011年12月至2012年3月在长沙市第三医院呼吸内科住院的COPD急性加重期患者36例(COPD急性加重组)和同期同院门诊随诊的COPD稳定期患者38例(COPD稳定组),同时选择在同院体检中心健康体检者30例(对照组).采用ELISA法测定3组受试者血清25-(OH)D水平.计算和比较3组中维生素D缺乏的患病率.分别对COPD急性加重组和稳定组患者进行COPD评估测试(COPDassessment test,CAT)评分,比较维生素D缺乏对两组COPD患者CAT评分的影响.结果:1)3组研究对象的血清25-(OH)D水平比较,COPD急性加重组和COPD稳定组分别低于对照组,COPD急性加重组低于COPD稳定组,差异均有统计学意义(P＜0.05).2)维生素D缺乏的患病率在COPD急性加重组为52.78％,COPD稳定组为39.47％,对照组为16.67％; COPD组维生素D缺乏的总患病率为45.95％.3组的维生素D缺乏患病率总体分布差异有统计学意义(P＜0.05).3)3组维生素D缺乏的患病率比较,COPD急性加重组高于对照组(P＜0.01),COPD稳定组高于对照组(P＜0.05),COPD急性加重组与COPD稳定组比较差异无统计学意义(P＞0.05).4)COPD急性加重组和COPD稳定组患者的CAT评分差异有统计学意义(P＜0.01).5)COPD急性加重组25-(OH)D水平与CAT评分呈负相关(r=-0.603,P＜0.01),COPD稳定组25-(OH)D水平与CAT评分呈负相关(r=-0.549,P＜0.01).结论:维生素D缺乏在COPD患者中有较高的患病率；维生素D缺乏可能对COPD患者的生活质量有负面影响.
作者：张平；罗红；朱应群 刊期： 2012年第08期
目的:研究DNA甲基化对NOR1基因启动子活性和表达的影响.方法:采用SssI甲基转移酶处理NOR1基因启动子报告载体,经重亚硫酸钠修饰后测序检测报告载体甲基化水平.未经SssI处理和经SssI处理的NOR1基因启动子报告载体分别转染细胞,检测荧光素酶活性或GFP表达.采用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理白血病细胞系HL60细胞,抽提RNA,Real-time RT-PCR检测NOR1 mRNA表达水平.结果:重亚硫酸钠测序表明SssI甲基转移酶体外处理导致NOR1启动子CpG岛CG位点完全甲基化.体外甲基化的NOR1启动子活性完全丧失.去甲基化药物5-氮杂-2' -脱氧胞苷连续处理3d后,白血病细胞系HL60细胞中内源性NOR1 mRNA表达水平显著增加.结论:SssI甲基转移酶可用于体外甲基化修饰NOR1基因启动子报告载体.甲基化修饰导致NOR1启动子活性丧失.去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理恢复NOR1 mRNA表达.
作者：向波；李文娟；易梅；王卫；李小玲；李桂源 刊期： 2012年第08期
目的:探讨宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)的临床病理特点与宫颈锥切手术方式的合理选择.方法:回顾性总结2005年8月至2010年12月在湖南省妇幼保健院院行治疗的383例CINⅢ患者,随机行冷刀宫颈锥切术治疗213例,行普通电刀宫颈锥切术治疗170例,比较临床病理资料和预后随访资料.结果:电刀锥切组和冷刀锥切组两种手术方式在所切下宫颈锥体的直径及锥高方面的差异均无统计学意义(P＞0.05).术中出血量分别为(13.1±5.2) mL和(25.5±17.2)mL,电刀锥切组的出血量比冷刀锥切组减少50％,差异有统计学意义(P＜0.01).383例锥切术后病理检查,350例没有病理升级,33例出现了病理升级,被确诊为Ⅰ a1期宫颈浸润癌21例,Ⅰ a2期宫颈浸润癌7例,Ⅰ b1期宫颈浸润癌5例.Ⅰ a1期宫颈癌中,3例(14.3％)有生育要求且切缘阴性的患者宫颈锥切术后接受严密随诊,1例(4.8％)切缘阳性但有生育要求的患者进行了再次锥切,其余17例(80.9％)实施筋膜外全子宫(或加双附件)切除.Ⅰ a2期和Ⅰb1期宫颈癌中12例全部进行了根治性切除术.随诊383例患者未见有肿瘤的复发.结论:CINⅢ患者常规依据病理诊断结果和个体化要求,有选择性地实施单纯宫颈锥切术或全子宫切除手术方式安全可行.
作者：吴湘；崔毅；龚颖萍；许海南；蒋丹；孟胜君 刊期： 2012年第08期
目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法.方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer,ADPC)细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer,AIPC)细胞株PC-3膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC和AIPC患者的血清各3例交叉孵育,行Western印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证.结果:共获得1 1个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor,Claudin-4等)；细胞免疫荧光结果显示Claudin-4在LNCaP和PC-3细胞存在明显差异,在ADPC组织中阳性表达率(34.3％)低于AIPC组织中阳性表达率(72.4％,P＜0.05).结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性；Claudin-4可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用.
作者：张晓波；唐正严；齐琳；陈合群；罗启占 刊期： 2012年第08期
目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响.方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+ PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+ PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11 μg,注射药物容量均为20 μL.对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9％的生理盐水20 μL.在模型制作前1d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达.结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P＜0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P＜0.01).与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P＜0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P＜0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达.
作者：王懿春；郭曲练；王明德；王锷；邹望远；赵江洪 刊期： 2012年第08期
目的:研究高选择性过氧化物酶增殖体激活型受体γ(PPAR γ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对糖尿病大鼠血清载脂蛋白M(apoM)水平和肝、肾、脂肪组织apoM mRNA表达的影响.方法:雄性SD大鼠分为对照组(Con组,n=7)、高脂组(HF组,n=8)、糖尿病组(DM组,n=7)和糖尿病RSG干预组(RSG组,n=7)4组.实验模型建立前采血检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC).糖尿病大鼠模型的建立参照周氏等方法,给予高脂高糖饲料喂养、腹腔注射链脲佐菌素.应用RSG对糖尿病大鼠干预治疗8周.全部动物于实验第15周结束时集中处死,搜集血标本和肝、肾、脂肪组织标本.检测各组大鼠的血FBG,FINS,TG,TC浓度.ELISA检测各组大鼠的血apoM水平,并与血FBG,FINS,TG,TC水平进行相关分析.RT-PCR测定各组大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达.结果:与Con组和HF组比较,DM组大鼠血清apoM水平明显降低(P＜0.05),RSG组大鼠的血清apoM水平较DM组明显升高(P＜0.05).各组大鼠以肝组织apoM mRNA的表达高,肾组织次之,脂肪组织的表达低.与Con组比较,HF组、DM组和RSG组的大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达明显减少(P＜0.05),RSG组大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达较DM组均有明显增加(p＜0.05).大鼠血清apoM水平与血清TG (r=-0.466,P=0.011),TC (r=-0.568,P=0.001),FBG (r=-0.371,P＜0.001),FINS (r=-0.768,P=0.048)水平均呈显著负相关.结论:ApoM在血糖和血脂的代谢中起着重要作用并受PPARγ激动剂调节的影响.
作者：屈晓冰；赵水平；高洁；胡敏；董莉妮；张湘瑜 刊期： 2012年第08期
目的:探索山茱萸总皂苷对糖尿病大鼠肠系膜动脉收缩及舒张功能的影响.方法:于SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素,28 d后造成糖尿病.分别给予糖尿病大鼠口服山茱萸总皂苷60 mg/kg和120 mg/kg两个剂量.测定血清中葡萄糖和胰岛素,并检测肠系膜动脉环的反应性.结果:两个剂量的山茱萸总皂苷均能降低糖尿病大鼠由苯肾上腺素诱导的收缩反应,但增加乙酰胆碱的反应性.120 mg/kg的山茱萸总皂苷显著改善肠系膜动脉一氧化氮的基础释放,但对一氧化氮的诱导释放作用不显著.罗格列酮对肠系膜动脉功能的作用比山茱萸总皂苷弱,尽管它能有效地降低血糖.结论:山茱萸总皂苷对糖尿病大鼠肠系膜动脉的作用可能是通过降低血糖和改善内皮中一氧化氮的释放而实现的,其作用呈剂量依赖性.
作者：刘英姿；刘浩然；张坚松 刊期： 2012年第08期
目的:探讨脐尿管病变的多层螺旋CT(MSCT)影像学征象及其临床诊断价值.方法:对中南大学湘雅二医院2007年10月至2011年5月经手术及病理证实的脐尿管病变26例进行回顾性分析,包括病灶大小、部位、形态、Retzius间隙影像变化及增强后的影像学特征.结果:单纯性脐尿管囊肿12例,MSCT表现为长条、椭圆形或囊状包块,囊壁薄、光滑；脐尿管囊肿并感染5例,囊壁明显增厚,灶周Retzius间隙内可见絮状或条索状密度增高影；脐尿管窦道并感染2例；脐尿管漏并感染3例；脐尿管癌4例,均位于膀胱顶壁区中线处,呈不规则囊实性软组织肿块影,增强后明显强化,2例伴有钙化,4例均侵犯膀胱前壁或顶壁,1例累及回肠及直肠、子宫附件并腹膜后淋巴结广泛转移.结论:脐尿管病变MSCT影像学表现有一定的特征性,MSCT能够明确病变的部位、形态、范围及其与邻近组织结构的关系,可提高对脐尿管病变的诊断和鉴别诊断的能力.
作者：杨卉；周顺科；谭长连；张斌；司徒卫军 刊期： 2012年第08期
目的:研究日本血吸虫中国大陆株23 kD膜蛋白-热休克蛋白(SjC23-Hsp70)DNA疫苗联合佐剂白细胞介素12(IL-12)质粒DNA对水牛的免疫保护作用.方法:将血吸虫病非流行区8～10月龄健康水牛45头随机分为A组(SjC23-Hsp70+IL-12)、B组(SjC23+IL- 12)和C组(pVAX+IL-12),每组15头.每头牛经肩部肌注免疫3次,每次间隔28 d.末次免疫后28 d,每头牛感染日本血吸虫尾蚴1000条.解剖前2天及当天分别收集粪便1次,用定量法检测虫卵和毛蚴数.攻击感染后56天解剖所有水牛,经胸主动脉灌冲法收集成虫,计数成虫数,检测每克肝组织虫卵数.结果:A,B组与C组相比,分别获得45.70％和26.61％的减雌率,44.51％和25.84％的减虫率,41.10％和31.63％的减粪卵率,48.11％和38.07％的减毛蚴率及43.39％和31.95％的减肝卵率.A组的5个率均比B组高(P＜0.05).结论:用SjC23-Hsp70 DNA疫苗和IL-12联合免疫水牛可获得明显的免疫保护作用.
作者：胡平成；夏大；崔虹艳；张苹芳；何永康；喻鑫玲；孙振球 刊期： 2012年第08期
目的:探讨长沙市中小学生心理健康问题,为进一步干预提供参考依据.方法:采用长处与困难问卷(父母版)对737名长沙市6～17岁中小学生进行调查评估.结果:困难问题检出率为14.11％；男生品行因子、多动因子和影响因子分高于女生；女生亲社会因子、情绪因子分高于男生；11～13岁、14～17岁年龄组困难总分、同伴因子和情绪因子分高于6～10岁年龄组.与中国常模对照,困难总分、同伴因子分高于常模,其余相似；与其他各国常模对照,得分差异较大.结论:不同性别、年龄学生存在不同困难.应建立特定长处与困难问卷常模,并采取针对性措施.
作者：黄韵如；晏强；李远艺；刘娇；姚慧卿；颜艳 刊期： 2012年第08期
目的:探讨不同静脉补铁方式对维持性血透(MHD)患者贫血和氧化应激的影响.方法:选择MHD患者58例,随机分为3组,小剂量多频次静脉补铁组(蔗糖铁25 mg,每周2次,共8周,n=19)、常规剂量少频次静脉补铁组(蔗糖铁100 mg,每两周1次,共8周,n=19)及不补铁组(n=20),另设健康对照组(n=20).观察各组用药前后血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)、血清铁蛋白(SF)、转铁蛋白饱和度(TAST)等疗效指标以及血清丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)等氧化应激指标的变化.结果:静脉补铁组患者Hb,HCT,SF,TSAT水平均比用药前升高(P＞0.01),但两组间差异无统计学意义(P＞0.05).与不补铁组比较,静脉补铁组单次血透后血清MDA,MPO值明显增高(p＜0.01),SOD值明显降低(P＜0.01)；常规剂量少频次补铁组较小剂量多频次补铁组单次血透后MDA[(6.37±1.67) nmol/mL vs (5.37±0.73) nmol/mL]和MPO[(96.75±16.97) U/L vs (81.41±7.60) U/L]值增高更明显(p＜0.01),SOD[(68.23±4.90) U/mL vs (84.77±14.02) U/mL]值降低更显著(P＜0.01).治疗8周后,静脉补铁组间MDA,MPO,SOD值比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:小剂量多频次静脉补铁可有效改善MHD患者贫血,增加铁储备,单次诱导的急性氧化应激水平低于常规剂量静脉铁剂,是一种相对安全有效的静脉补铁方式.
作者：尹莉；陈星；陈俊香；成梅初；彭佑铭；杨丽君 刊期： 2012年第08期
目的:探讨微通道和标准通道经皮肾镜碎石术(PCNL)在治疗肾铸型结石方面的临床效果.方法:收集肾铸型结石且进行了PCNL治疗的122例患者临床资料进行回顾性分析,根据不同工作通道分为微通道PCNL组和标准通道PCNL组,比较两组间术中术后情况包括手术时间、术后结石清除率、并发症等,并进行统计分析.结果:微通道PCNL组56例,标准通道组66例,微通道PCNL组手术时间长于标准通道PCNL组[(126±24.5) min vs (98±18.9) min],两组间在住院天数[(5.7±1.3)d vs(5.3±1.1)d]、出院前结石清除率(91.1％ vs 89.4％)、血红蛋白下降值[(9.5±3.2)g/L vs (10.5±3.3) g/L]及手术相关并发症等方面差别并无统计学意义(p＞0.05).结论:微通道与标准通道PCNL在处理肾铸型结石的临床疗效与安全性方面无明显差别.
作者：徐冉；李菘；赵洪清；董志韬；蒋宏毅；赵晓昆；刘任；侯轶 刊期： 2012年第08期
目的:探索长效抗凝血灭鼠剂致隐匿性中毒的特点及其诊断与治疗.方法:对2008年7月至2011年4月在外院误诊后转人中南大学湘雅医院的抗凝血灭鼠剂隐匿性中毒12例患者临床表现、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、首诊医院误诊情况及我院诊治效果进行回顾性分析.结果:抗凝血灭鼠剂中毒临床表现隐匿,可表现为皮肤瘀斑、血尿、阴道流血、消化道出血等；实验室检查显示PT和APTT明显延长；每日补充维生素K1治疗,止血效果明显.治疗前后PT和APTT差异均有统计学意义(p＜0.01).结论:长效抗凝血灭鼠剂中毒患者为获得性维生素K依赖的凝血因子减少导致的凝血功能异常,由于病史隐匿,中毒症状推后出现,并累及多个器官,容易导致误诊并危及生命.因此,详细的病史收集,全面体查,可提高诊断准确性.一旦确诊为抗凝血灭鼠剂中毒,维生素K1应尽早使用.
作者：曹晓霞；李丽；郑悦平 刊期： 2012年第08期
目的:探讨miR-155在重症肌无力发病中的作用及地塞米松(dexamethasone,DXM)对miR-155的影响.方法:采用qPCR检测全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)患者组和健康对照组B细胞,以及DXM干预后miR-155的相对表达量.用MTT法检测B细胞的增殖反应,流式细胞术检测DXM和PBS干预组B细胞表面CD80和CD86的表达,ELISA检测两组细胞上清液中抗AChR-IgG及其亚型IgG1,IgG2,IgG3的水平.结果:GMG外周血B细胞中miR-155的相对表达量高于健康对照组.DXM组B细胞中miR-155相对表达量低于PBS组；但两组之间B细胞的增殖及CD80和CD86的表达均无明显差异；DXM组培养上清中抗AChR-IgG1的水平低于PBS组,而抗AChR-IgG及其亚型IgG2,IgG3的水平无明显差异.结论:miR-155高表达可能参与重症肌无力的发病；糖皮质激素抑制miR-155的表达,可能通过调节B细胞的抗体类别转换发挥其治疗作用.
作者：陈晓莉；陈毓茜；王玉忠；颜梅；张俊美；刘群；杨欢；李静 刊期： 2012年第08期
目的:通过观察自发性高血压大鼠(SHR)去肾交感神经手术前后血压、肾胺酶浓度、肾脏酪氨酸羟化酶(TH)与肾胺酶表达水平的变化,探讨去肾交感神经术降低血压的可能机制.方法:将SHR大鼠(n=48)随机分为基线组、手术组、假手术组和对照组,同批同周龄WKY大鼠(n=12)作为基线对照组,同条件喂养至12周龄测各组血压,首批处死SHR基线组、WKY组,采血、取肾脏组织送检；手术组、假手术组与对照组继续监测血压,于去肾交感神经术后1,6周时分批处死每组大鼠各6只,分别采血、取肾脏组织送检.采用ELISA方法测定血浆肾胺酶浓度,Western印迹测定肾脏TH、肾胺酶蛋白表达水平.结果:与WKY组大鼠比较,SHR基线组大鼠血压、肾脏TH蛋白表达水平明显升高(p＜0.05),血浆肾胺酶浓度及蛋白表达水平明显下降(P＜0.05)；术后1周,手术组大鼠平均动脉压与TH蛋白表达水平较基线组明显降低且明显低于假手术组及对照组(P＜0.05),手术组肾胺酶水平较基线组明显增高并明显高于假手术组及对照组(P＜0.05)；术后6周,手术组平均动脉压与TH水平较术后1周上升而肾胺酶浓度及水平较术后1周降低,较基线组、假手术组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05)；假手术组与对照组较基线组各项指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论:去肾交感神经术降低血压的作用可能与其抑制交感神经,升高肾胺酶浓度及其蛋白表达水平有关.
作者：郭运忠；李禄洪；谭丽华；唐晓鸿；杨琼；蒋卫红 刊期： 2012年第08期
目的:筛选识别急性髓系白血病M2型(acute myeloblastic leukemia M2 subtype,AML-M2) CD33+/CD34-细胞的核酸适体(aptamers).方法:以AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34-细胞为反筛选细胞,采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment,C-SELEX)技术,体外反复筛选单链DNA( single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库的适体,经聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增产生次级文库.然后将终轮次的次级ssDNA文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级结构.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示:每轮筛选出来的次级ssDNA文库PCR扩增产物均可见到清晰的DNA条带.经过13轮的反复筛选,次级ssDNA文库与细胞结合的荧光强度从2.14％上升到51.12％,至第13轮趋于稳定状态.对30个克隆子序列测定结果显示:22个适体一级结构分别含有AAGTA,TATCT,AGATG和AAATT 4个保守序列,另8个适体无此保守序列.二级结构模拟结果显示:30个适体含有4种不同的茎环、凸环模拟结构.结论:C-SELEX技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选,筛选到的AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞适体有望用于白血病的诊断与治疗.
作者：朱平；王光平；张书芹；徐雅静；彭敏源；银辉；陈焱；谭三勤；陈方平 刊期： 2012年第08期
目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1 (glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响.方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计3条表达载体(shRNA255,shRNA554,shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo.经酶切和测序鉴定,筛选转染率高基因沉默效果好的shRNA作RNA干扰.DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组.转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)组及紫杉醇(paclitaxel,PA)组,并按作用浓度(FU:30,60,120,240 μg/mL; PA:0.2,2,10,20μg/mL)分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组.四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果.结果:3条表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593)的转染率分别为(63.3±1.04)％,(76.2±0.68)％,(72.7±0.33)％,shRNA554转染率高,三者之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分另为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均低,三者比较差异有统计学意义(P＜0.01).MTT检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240 μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率分别为(95.60±2.11)％,(90.20±0.86)％,(83.10±3.12)％和(74.60±1.32)％；转染后存活率为(91.30±1.43)％,(84.6±2.13)％,(73.2±1.52)％和(65.5±0.94)％.TUNEL检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240.μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(5.50±0.88)％,(10.20±1.64)％,(15.20±2.39)％和(25.10±2.59)％；转染后凋亡率(10.80±0.62)％,(15.70±1.32)％,(20.40±1.89)％和(34.90±2.54)％.转染后相同FU浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(p＜0.01).MTT检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20 μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率为(98.50±2.34)％,(95.20±1.32)％,(89.40±0.68)％和(82.70±1.73)％；转染后存活率为(94.2±0.78)％,(86.5±2.13)％,(78.7±1.34)％和(70.1±0.76)％.TUNEL检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20 μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(2.4±1.07)％,(5.2±1.33)％,(10.5±2.41)％和(20.7±1.92)％；转染后凋亡率(5.46±2.13)％,(13.8±1.24)％,(21.2±2.39)％和(29.2±2.21)％.转染后相同PA浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论:shRNA介导的GSTP1基因沉默可抑制雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞增殖活性,诱导凋亡,并且其作用呈现时间依赖性,可提高其对于化学治疗的药物敏感性.
作者：金鹏；谢晋良；朱向荣；周成；丁翔；杨罗艳 刊期： 2012年第08期
