王琦；隋海娟；屈文慧；郁盛雪；金迎新；刘卓；金英
目的 探讨PI3K/Akt信号通路是否通过调节线粒体缝隙连接蛋白Cx43而在硫化氢(H2S)后处理中减轻离体大鼠心脏缺血/再灌注(I/R)损伤.方法 56只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为4组(n=14):缺血/再灌注组 (I/R组),PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002组(LY组),硫化氢后处理组(NP组),硫化氢后处理+PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002组(N+L组).采用离体心脏 Langendorff灌注模型,平衡灌注 20 min后停灌 30 min复灌 60 min.记录平衡末及灌注结束时的心率 (HR)、左室舒张末期压 (LVEDP)、左室发展压 (LVDP)、左室内压上升大速率 (+dp/dtmax)、左室内压下降大速率(-dp/dtmax);灌注结束时,TTC法染色心肌切片并计算心肌梗死面积百分比;TUNEL法检测心肌细胞凋亡,计算凋亡指数 (AI);Western blot半定量线粒体总的Cx43(total connexin 43,tCx43)和磷酸化Cx43(phosphorylated connexin 43,pCx43)表达水平.结果 平衡灌注末各组间心功能指标差异无统计学意义.再灌注后,与I/R组比较,NP组心功能的各项指标明显改善(P<0.05);心肌梗死面积减少(26.5±4.2)% vs (44.5±5.3)% (P<0.05);凋亡指数降低(25.9±3.0)% vs (43.1±1.9)% (P<0.05);线粒体tCx43和pCx43蛋白表达水平明显升高.LY294002逆转了H2S后处理产生的心肌保护效应,使N+L组心功能指标及线粒体中tCx43和pCx43的表达水平降低(P<0.05),心肌梗死面积及凋亡指数均增加(P<0.05).结论 PI3K/Akt信号通路通过上调线粒体缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达而在硫化氢(H2S)后处理中减轻离体大鼠I/R损伤.
作者：张可璇；毛洪雅；孟雪；惠夏；张邓新；季永 刊期： 2013年第02期
目的 观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用.MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平.结果 与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg·L-1)及槲皮素组(30 mg·L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg·L-1)及槲皮素组(30 mg·L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01).结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关.
作者：高蒙蒙；孙桂波；斯建勇；秦蒙；罗云；孟祥宝；王敏；孙晓波 刊期： 2013年第02期
代谢组学是20世纪90年代中期发展起来的对某一生物或细胞所有低相对分子质量代谢产物进行定性、定量分析的一门新学科.在中药复方研究中,代谢组学方法和技术的应用具有广阔的发展前景,尤其是在中药复方多靶点作用机制、中药复方配伍规律及安全性研究等方面具有重要理论意义和应用价值.代谢组学为中药复方的现代研究提供了强力的技术支撑,将有助于系统、深刻地揭示中药复方的科学内涵,指导中药复方新药研发,更好地传承和发展中医药理论.
作者：周红光；陈海彬；王瑞平；张玉；吴勉华 刊期： 2013年第02期
类风湿性关节炎(RA)是一种主要以持续关节组织滑膜增生、软骨侵蚀、关节损坏为主要特征的累及多关节的系统性疾病,发病机制不明.滑膜衬里层成纤维样滑膜细胞(FLS)在RA发病机制中起关键作用.Wnt通路广泛参与细胞癌变和肿瘤细胞的侵袭、转移等,在肿瘤的发病机制中发挥重要调控作用.Wnt通路同样调控了RA的发生发展,下调RA Wnt和Fz表达能够抑制FLS活化、增殖,提示Wnt通路Wnt蛋白可能是潜在的RA治疗靶点.
作者：缪成贵；黄成；黄艳；李小枫；李俊 刊期： 2013年第02期
目的 研究去甲肾上腺素(NE)和酚妥拉明对吗啡依赖大鼠伏核(NAc)内痛兴奋神经元(PENs)和痛抑制神经元(PINs)生物电活动的影响.方法 采用NAc内给药的方法,以电脉冲刺激右侧的坐骨神经作为伤害性刺激,用玻璃微电极记录吗啡依赖大鼠NAc内PENs或PINs的电变化.结果 NAc内微量注入NE(4 g · L-1,0.5 μl)可使吗啡依赖大鼠NAc中PEN对伤害性刺激反应的痛诱发放电频率减少,潜伏期延长,但PIN痛诱发放电频率增加,抑制时程(ID)缩短,呈现出NE的镇痛效应.NAc内注入酚妥拉明(4 g · L-1,0.5 μl)产生相反反应,表明酚妥拉明可阻断内源性NE的作用.结论 NE和α-肾上腺素能受体均参与吗啡依赖大鼠NAc内伤害性信息的调控.NAc是调制吗啡依赖大鼠中枢痛觉的重要核团之一.
作者：石铁锋；杨春晓；杨东晓；闫彬彬；许艳；张辉；张颖；徐满英 刊期： 2013年第02期
目的 观察慢性吗啡(Mor)处理对大鼠交感神经节-颈上神经节(SCG)环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)磷酸化和mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分成4 组(正常对照组、吗啡急性给药组、吗啡依赖组、吗啡戒断组),免疫组织化学方法及RT-PCR法分别检测磷酸化的CREB(phosphorylated CREB,pCREB)和CREB mRNA在SCG中的表达.结果 (1) 与正常对照组相比,吗啡急性给药组大鼠SCG中pCREB含量明显降低 (P<0.05);(2) 吗啡依赖组大鼠SCG中pCREB含量回到正常对照组水平,并有增高趋势 (与正常对照组比较,P>0.05;与吗啡急性给药组比较,P<0.01);(3) 吗啡戒断组大鼠SCG中pCREB含量明显高于正常对照组(P<0.01);(4) 各组大鼠SCG的CREBmRNA表达无差异(P>0.05).结论慢性吗啡处理大鼠交感神经节CREB磷酸化水平存在适应性上调现象.
作者：何萍；陈家欢；黄晓亮；于洪波；莫宁 刊期： 2013年第02期
脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)是构成血脑屏障的主要成分,与脑水肿、脑缺血以及脑肿瘤等脑血管疾病的发生、发展密切相关.BMECs原代培养模型已被广泛应用于血脑屏障、脑血管疾病的病理、生理及分子生物学研究.该文对近年来国内外有关BMECs原代培养的方法进行综述,为脑血管疾病的研究提供基础.
作者：王艳；汪宁；林辰雨 刊期： 2013年第02期
中药现代化研究的重要任务之一即明确中药(方剂)复杂药效物质基础及其配伍机制,但几十年来大部分中药的确切机制仍没有被阐明.原因一,中药的靶点不是西方人所理解的病的靶点,而是证的靶点.证强调疾病表型之间的关联,故中药的靶点是联系的靶点,组合的靶点;原因二,中药药效的物质基础不是一种有效单体,而是多种成分的有效组方.方是在证的基础上进行合理配伍和加减而建立的,是有规律和规则的,相应的中药不是孤立地作用于病的靶点而是系统地作用于证的靶点.西医有可以治疗该疾病相应靶点的药物,那么中医就有该证相应组合靶点的复方.目前认为,中药配伍的意义在于通过由特定活性物质群介导的多靶点、多途径整合作用发挥方证对应的终末效应.同时将中药配伍筛选为有效组分配伍,利用有效组分配伍阐明中药整合作用已成为近年来的普遍研究模式.而在传统的实验药理上,融合数学、生物信息学等多学科的定量药理学、逆向药理学、多向药理或网络药理学有助于理解中医药在治疗复杂性疾病中体现的整体性、系统性特点.
作者：陶丽；范方田；刘玉萍；沈存思；王爱云；陈文星；陆茵 刊期： 2013年第02期
目的 建立关附甲素的LC-MS测定法,研究其在Caco-2细胞上的摄取特性.方法采用ShimadzuVP–ODS,C8柱,(250mm×2.1 mm,5 μm),流动相:乙腈∶水=30:70(V/V),用0.2%冰乙酸溶液,加入二乙胺适量调pH至4.0左右,流速:0.2 ml·min-1,电喷雾离子化(ES1)方式,采用选择性离子检测法,检测离子为正离子,关附甲素的选择性离子:[M+H],m/z 430.考察温度、药物浓度、时间和pH值对关附甲素在Caco-2细胞上摄取的影响.结果关附甲素在0.2～50.0 μmol·L-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9988),低定量限0.2 μmol·L-1.关附甲素在Caeo-2细胞上的摄取具有一定的浓度、时间和pH值依赖性,其摄取表现为被动扩散.结论 该法灵敏、简单,专属性强,关附甲素在Caco-2细胞上具有良好的摄取.
作者：李晓天；王素军；王广基 刊期： 2013年第02期
目的 研究地塞米松(DXM)对哮喘大鼠肺组织IL-8 mRNA及蛋白表达的影响.方法以1%卵蛋白(OVA)致敏并激发,建立大鼠哮喘模型.30只♂ SD大鼠随机分为正常组,哮喘组,DXM干预组.在末次激发后24 h,将肺组织经脱水透明、石蜡包埋等处理后制作成肺标本切片.观察各组大鼠肺组织病理学改变.RT-PCR方法对肺组织IL-8 mRNA表达检测,免疫组织化学方法技术测定大鼠肺组织标本IL-8表达.结果哮喘组肺组织IL-8 mRNA及蛋白的表达水平明显高于正常组(P<0.01),DXM组IL-8 mRNA及蛋白的表达与哮喘组相比明显减少(P<0.01).结论 哮喘大鼠肺组织IL-8水平增高,并且DXM可通过抑制IL-8的表达,减弱其对炎性细胞的趋化与激活,是激素减轻气道炎症重要机制之一.
作者：范晓云；汪浩；徐轲；唐伟；陆兆双 刊期： 2013年第02期
目的 探讨银杏内酯B对氧化型低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞保护作用的分子机制.方法分别用银杏内酯B 0.2、0.4、0.6 g·L-1预孵育内皮细胞1 h,再加入ox-LDL(0.1 g·L-1)刺激细胞.用Western blot 检测Lectin-like oxidized LDL receptor-1 (LOX-1)、PI3K、Nrf2、SIRT1表达及Akt磷酸化.结果 1.ox-LDL刺激内皮细胞LOX-1表达增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了LOX-1表达.2.银杏内酯B有效地抑制了ox-LDL刺激的Akt磷酸化,但对PI3K的表达无影响.3.ox-LDL刺激内皮细胞SIRT1表达降低,银杏内酯B有意义地增加了细胞SIRT1表达.4.ox-LDL刺激细胞抗氧化应激蛋白Nrf2表达明显增加,银杏内酯B下调了Nrf2的表达.结论 银杏内酯B对内皮细胞保护作用与抑制LOX-1表达、Akt磷酸化,启动细胞内源性保护机制相关.
作者：马丽娜；陈北冬；赵艳阳；鲍利；吴伟；李兴广；齐若梅 刊期： 2013年第02期
目的 在中医理论指导下建立SD大鼠寒积里实证动物模型并对其进行评价.方法 应用先冰水后高岭土灌胃方法制作寒积里实证动物模型.观察模型动物的一般生物学特征变化,进行模型动物的排便和尾部温度测量实验,检测模型动物的肠神经递质、胃肠激素、cAMP和cGMP等客观指标.结果 造模后,模型动物的一般生物学特征表现为:披毛蓬松、好聚集饲养笼一端、大便干燥,摄食量降低;与空白对照组比较,模型组动物的6 h排便粒数明显减少,尾部温度明显降低,胃动素、血管活性肠肽、P物质分泌紊乱,cAMP/cGMP降低,经大黄附子汤治疗后,上述症状和指标改善.结论 应用先冰水后高岭土灌胃方法能复制出稳定的SD大鼠寒积里实证模型.
作者：李嬛；吴丽；李杰；郭辉；刘晓；蔡皓；蔡宝昌 刊期： 2013年第02期
目的 研究紫草素(Shikonin)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响及其作用机制.方法 CCK-8法检测紫草素处理人乳腺癌MCF-7细胞24、48 h细胞的存活率,Western blot方法检测紫草素处理24 h和48 h时LC3、p62、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平.结果 1 μmol·L-1紫草素处理细胞48 h以及2.5、5 μmol·L-1紫草素处理MCF-7细胞24 h和48 h时,MCF-7细胞的活力受到明显抑制,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值增加,p62表达减少,总PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt均减少.结论 紫草素促进乳腺癌MCF-7细胞自噬,其作用机制可能与PI3K/Akt通路受到抑制有关.
作者：陈菊英；刘朝纯；曾智；黄文东；杨永飞；朱邦豪 刊期： 2013年第02期
目的 研究糖脉交泰胶囊对高糖高脂糖尿病大鼠糖脂代谢及肝脏葡萄糖激酶(GCK)、低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白表达的影响.方法 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg-1)联合诱导制备高糖高脂糖尿病大鼠模型,并随机分组为正常对照组、模型组、糖脉交泰组和吡格列酮组,每组8只,给予相应的药物治疗4周.实验结束后比较各组空腹血糖值(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及肝糖原等指标;Western blot 法检测肝脏组织中GCK和LDLR蛋白表达.结果 与模型组比较,糖脉交泰胶囊能明显降低大鼠FBG、HbA1c、GSP水平,明显改善TC、TG、LDL-C等指标(P<0.05);肝脏肝糖原含量及LDLR和GCK的蛋白表达均明显增加(P<0.05).结论 糖脉交泰胶囊具有明显的调节糖脂代谢的作用,其作用机制与其提高肝糖原的含量,增加肝脏GCK和 LDLR蛋白表达相关联.
作者：常秀亭；李婕；谢曦；黄凯鹏；黄河清 刊期： 2013年第02期
目的 以毛茛有效部位D1为研究对象,研究其对人胃癌细胞MGC803血管生成拟态的作用.方法 采用细胞粘附实验检测毛茛有效部位D1对人胃癌细胞MGC803粘附作用的影响;采用细胞划痕实验观察D1对MGC803细胞迁移能力的影响;采用Matrigel肿瘤细胞类血管生成模型观察D1对MGC803体外类血管生成的影响;采用半定量RT-PCR方法检测D1对MGC803血管生成拟态相关基因的作用.结果 毛茛有效部位D1可有效地抑制人胃癌细胞MGC803细胞粘附、细胞迁移和人胃癌细胞MGC803介导的血管生成拟态并呈剂量依赖性.半定量RT-PCR实验结果显示,D1能明显抑制MGC803血管生成拟态相关基因Sema 4D、VE-Cadherin、MMP2和Integrin β5的表达.结论毛茛有效部位D1通过抑制血管生成拟态相关基因Sema 4D、VE-Cadherin、MMP2和Integrin β5的表达来抑制人胃癌细胞MGC803细胞粘附、细胞迁移和血管生成拟态,提示毛茛有效部位D1是一个抗胃癌血管生成拟态的候选药物.
作者：虞迪；朱峰妍；曹志飞；王薇丹；鲍美美；顾振纶；周泉生 刊期： 2013年第02期
目的 观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用.方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验.倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变; Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平.结果 形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、大分支级数明显减少及胞体面积缩小.SAR (10、30、100 μmol·L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖.MTT和Hoechst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比.SAR(10、30、100 μmol·L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加.Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平.SAR (10、30、100 μmol·L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加.结论 知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用.
作者：王琦；隋海娟；屈文慧；郁盛雪；金迎新；刘卓；金英 刊期： 2013年第02期
华法林是临床使用广泛的口服抗凝药,其治疗窗窄,剂量个体差异大,容易发生出血或栓塞的风险.CYP2C9和VKORC1基因多态性明显影响华法林剂量.其他参与维生素摄入和循环,华法林转运的基因变异,以及microRNA也可能影响华法林剂量.该文结合国内外各种华法林稳定剂量预测模型研究,总结影响华法林剂量相关基因的新研究进展,旨在为华法林个体化治疗提供参考和指导依据.
作者：彭娟；谭胜蓝；周宏灏；李智 刊期： 2013年第02期
目的 探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用.方法 Western blot 法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8 比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率.结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50~400 μmol·L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用.NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600 μmol·L-1 CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低.而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用.结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤.
作者：孟金兰；陈雅嘉；陈红；董艳芬；邢德刚；梁燕玲；兰爱平；冯鉴强 刊期： 2013年第02期
目的 观察细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)在依达拉奉作用于刀豆蛋白A(Con A)致小鼠免疫性肝损伤模型中的变化.方法 先期给予依达拉奉,之后用Con A腹腔注射致敏小鼠产生急性免疫性肝损伤,观察肝脏病理变化,分光光度法测血清AST和ALT浓度,肝匀浆中SOD、MDA、GSH含量,RT-PCR技术检测肝脏组织CYP 2E1 mRNA水平,Western blot技术检测肝脏组织CYP 2E1蛋白表达水平.结果 与模型组比较,依达拉奉能降低免疫性肝损伤小鼠血清中升高的ALT、AST含量;降低肝匀浆中的MDA水平,升高其降低的SOD、GSH水平;CYP 2E1 mRNA水平明显降低,CYP 2E1蛋白表达水平明显下调.结论依达拉奉对小鼠急性免疫性肝损伤具有一定的保护作用,这可能与它降低CYP 2E1的表达,清除自由基,增强机体抗脂质过氧化能力有关.
作者：陈方军；李俊 刊期： 2013年第02期
目的 旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制.方法 原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1 mg·L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响.以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞 IκBα 的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α 的含量.结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性.结论 黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关.
作者：孙雪芳；王洪新；梁灵君；鲁美丽；顾洁莹；何海洋 刊期： 2013年第02期
中国药理学通报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国药理学会
