学术投稿

日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定

赵前峰;陈红霞;任翠平;刘淼;沈际佳

关键词:日本血吸虫, Nanos样蛋白, 原核表达
摘要:目的 获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA 序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用 ELISA 和 Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定.结果 该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码 223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性.结论 获得日本血吸虫Nanos 蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 308nm准分子激光治疗稳定期白癜风的临床分析

    目的 评估308 nm准分子激光局部照射治疗稳定期白癜风临床疗效及安全性.方法 采用准分子激光局部照射治疗125例共168处稳定期白癜风患者皮损,每周照射2~3次,治疗20次以上开始疗效评估,并记录不良反应.结果 125例共168处皮损白癜风患者经20次以上照射,显效率52.4%,有效率88.7%.面、颈项部和躯干部皮损起效比四肢末端快;准分子激光局部照射治疗主要不良反应为局部红斑,偶有瘙痒、水疱.结论 308 nm准分子激光局部照射治疗稳定期白癜风疗效好,不良反应少,其疗效与皮损部位、病程有关.

    作者:刘盛秀;杨春俊;杨森;唐明俊;李永江;王中影;骆娣凤 刊期: 2011年第11期

  • Th17细胞因子及炎症趋化因子在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达

    目的 观察日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肝脏Th17细胞因子及其相关炎症趋化因子动态变化和肝脏虫卵肉芽肿病变,探讨其在日本血吸虫虫卵肉芽肿病变形成中的作用.方法 建立日本血吸虫感染C57BL/6小鼠模型,感染后2、4、6、8、10和12周剖杀小鼠,用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏白介素17(IL-17)、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-23、炎症趋化因子(CXCL1、CXCL2和CCL11)mRNA水平;ELISA法检测肝脏IL-17、CXCL1、CXCL2和CCL11蛋白水平;肝脏石蜡切片,HE染色后动态观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小.结果 IL-17、IL-6、TNF-α、IL-23、CXCL1、CXCL2、CCL11 mRNA水平于感染后6、8周明显高于正常对照;且细胞因子IL-17及趋化因子CXCL1、CXCL2和CCL11蛋白分泌水平显著升高(P<0.05);HE染色显示感染第4周小鼠肝脏出现虫卵肉芽肿,第6周肉芽肿反应达高峰,第8、10周虫卵肉芽肿缩小,周围出现成纤维细胞,第12周时肉芽肿明显缩小,部分肝细胞变性、坏死、有炎症细胞浸润,虫卵周围可见到少量梭形的成纤维细胞及类上皮细胞.结论 IL-17在日本血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿病变过程中可能是一种具有重要作用的调节因子,参与肝脏肉芽肿形成.

    作者:谷玉清;张玉侠;黄大可;侯昕;刘淼;任翠平;沈际佳 刊期: 2011年第11期

  • DNA修复基因XRCC3多态性与结肠癌易感性的关系

    目的 研究DNA修复基因XRCC3多态性及其与结肠癌易感性的关系.方法 选择80例经病理证实的结肠癌患者为肿瘤组,80例同期经门诊肠镜检查无异常的健康体检者为对照组,采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(RFLP-PCR)法检测XRCC3基因C18607T的多态性分布,比较不同基因型与结肠癌易感性的关系.结果 XRCC3 C18607T基因型C/C(野生型纯合子)、C/T(杂合子)和T/T(突变型纯合子)在肿瘤组的分布频率为58.75%、38.75%、2.50%,在对照组的分布频率为76.25%、22.50%、1.25%.各基因型在肿瘤组和对照组中的分布频率符合Hardy-Weinberg平衡规律.与携带C/C的个体相比,携带T等位基因的变异基因型(C/T+T/T)的个体具有更高的结肠癌易感性.结论 XRCC3基因C18607T的多态性可能与结肠癌易感性相关.

    作者:张嘉炜;孟翔凌 刊期: 2011年第11期

  • 钙结合蛋白与帕金森病

    帕金森病(PD)是一种病因不清、机制未明的以中脑多巴胺能神经元减少为特征的退行性病变.神经细胞钙稳态失调在其发病中具有重要作用,而细胞内Ca2+浓度是由钙结合蛋白(CaBP)、Ca2+通道以及Ca2+泵共同维持.CaBP中的微清蛋白(PV)、维生素D依赖的钙结合蛋白28k(CB-D28k),和钙视网膜蛋白(CR)等缓冲蛋白具有缓冲Ca2+和神经保护作用.同时PD存在上述CaBP表达的减少,但它们之间究竟存在何种联系尚不清楚,现就近年来CaBP与PD关系的研究进展作以下综述.

    作者:宋先兵;邢君 刊期: 2011年第11期

  • 多发性大动脉炎的多层螺旋CT诊断

    目的 探讨多发性大动脉炎(TA)的CT检查方法及影像表现,以提高对TA的CT诊断水平.方法 回顾性分析16例TA患者的临床及CT影像资料,总结TA的CT影像学表现,并结合文献进行分析讨论.结果 CT诊断TA具有一定的特征性表现:增强扫描并结合三维重建可清晰显示血管管腔的改变,表现为管腔狭窄、闭塞及瘤样改变,病变活动期患者血管管壁厚度较非活动期患者明显增厚.结论 CT影像表现结合临床资料对诊断TA有重要价值,CT血管成像可作为TA无创性检查的首选方法.

    作者:余杨红;邓克学;许实成 刊期: 2011年第11期

  • 乳腺癌新辅助化疗不同方案近期疗效观察及化疗前后Ki-67的表达变化

    目的 比较多西他赛联合表柔比星(TE)与多西他赛联合表柔比星及环磷酰胺(TEC)方案在乳腺癌新辅助化疗(NAC)中的近期疗效,观察化疗前后Ki-67的表达变化,并分析其与化疗疗效的相关性及对化疗是否有预测作用.方法 63例Ⅱ~Ⅲ期乳腺癌患者随机分为两组,分别接受TE和TEC方案化疗,观察化疗后病理反应并评价两组的近期疗效和毒副反应.应用免疫组化法检测NAC前后Ki-67的表达,并分析表达改变原因和其与临床疗效的相关性.结果 TE组与TEC组的有效率分别为84.4%(27/32)、87.1%(27/31),差异无显著性.TEC组白细胞、血小板减少发生率均较TE组高(P<0.05),化疗前Ki-67的表达高于化疗后(P<0.01).Ki-67表达的改变与NAC的临床疗效有关(P<0.05).结论 TE与TEC方案在乳腺癌NAC中的疗效相似,但TE方案骨髓抑制较TEC方案轻,值得临床推广应用.Ki-67表达的改变与NAC的临床疗效有关,可能是预测化疗疗效的敏感因子.

    作者:桑果;王本忠 刊期: 2011年第11期

  • 汉族儿童异位性皮炎不同血清tIgE水平的临床特征差异

    目的 探讨儿童异位性皮炎(AD)临床特征与总IgE(tIgE)的关系.方法 收集1 030例儿童AD患者的临床资料,采用 AllergyScreen过敏原定量检测系统检测患者的血清tIgE.结果 tIgE水平升高患儿与tIgE水平正常的患儿相比,升高组的患儿发病年龄晚(P<0.01),合并哮喘和(或)过敏性鼻炎的AD患病率高(P<0.01),更易出现重度AD(P<0.01).Hanifin-Rajka诊断标准中的部分体征(如早年发病、出汗时瘙痒、鱼鳞病/毛周角化/掌纹症等)的发生率在tIgE升高组和tIgE正常组间差异有显著性(P<0.05).结论 tIgE升高组和正常组的AD患儿在临床特征上差异有显著性.

    作者:裴小平;姜新;邵莉梅;李存涛;叶文正;张丽君;黄菲;张成;李珊珊;肖风丽;孙良丹;杨森;张学军 刊期: 2011年第11期

  • ERAP1基因多态性与汉族人群寻常型银屑病表型的相关性研究

    目的 研究ERAP1基因多态性与汉族人群寻常型银屑病临床表型(发病年龄、家族史、临床类型)的相关性.方法 选取7 717例银屑病患者和11 831例正常对照的ERAP1基因多态性rs151823位点的基因分型资料(基因分型来自前期GWAS分型数据).采用χ2检验比较各组间基因型和等位基因频率的分布差异.结果 ERAP1基因多态性rs151823位点基因型和等位基因频率分布差异在病例组和对照组、早发患者和晚发患者间差异有显著性,在家族史阳性患者和家族史阴性患者、急性点滴型患者和慢性斑块型患者间的分布差异均无显著性.结论 ERAP1基因单核苷酸多态性rs151823位点与汉族人群寻常型银屑病易感性相关,尤与早发型银屑病相关,但与家族史及临床类型可能无相关性.

    作者:崔婧;张丽君;李珊珊;姜新;秦倩;王培光;左先波;肖风丽;孙良丹;杨森;张学军 刊期: 2011年第11期

  • 免疫调节肽对T淋巴细胞转化和巨噬细胞分泌的影响

    目的 研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对BALB/c鼠脾T淋巴细胞转化和骨髓巨噬细胞(BMMs)分泌的影响.方法 通过MTT法检测不同浓度PGPIPN对小鼠脾T淋巴细胞的转化作用,通过ELISA法检测在PGPIPN刺激下小鼠BMMs活化所释放的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量.结果 PGPIPN在体外与刀豆蛋白A(ConA)合用可明显促进ConA的丝裂原作用;体内实验表明各种剂量PGPIPN饲养的小鼠,其脾淋巴细胞在适当剂量的ConA的诱导下均具有明显的T淋巴细胞转化的能力;PGPIPN单独作用于BMMs不能刺激TNF-α和IL-6的释放,但与脂多糖(LPS)合用时则可以明显增加细胞因子的释放.结论 PGPIPN具有促进T淋巴细胞转化的作用,与LPS合用可促进BMMs的细胞因子释放的水平,提示PGPIPN可增加T淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能.

    作者:王巍;何晓光;郑欣;顾芳;秦宜德 刊期: 2011年第11期

  • miR-182在人乳腺癌中的表达及意义

    目的 探讨miR-182在人乳腺良恶性组织和细胞株中的表达及其意义.方法 采用实时荧光定量PCR法检测miR-182在2株正常人乳腺细胞、9株人乳腺癌细胞(包括5株低度恶性、4株高度恶性)、11例临床乳腺良性病变组织和22例乳腺癌组织中的表达.结果 乳腺癌细胞株miR-182表达显著低于正常乳腺上皮细胞株,而在高度恶性乳腺癌细胞株中,miR-182表达又显著低于低度恶性乳腺癌细胞株(P<0.001);在乳腺组织中,乳腺良性病变组织中miR-182的表达显著高于乳腺癌组织(P<0.001).结论 乳腺癌中miR-182表达下调,miR-182可能发挥着肿瘤抑制因子的作用.

    作者:王慧;杨雪晴;吴正升;吴强 刊期: 2011年第11期

  • β半乳糖凝集素-3在胚泡植入早期小鼠子宫内膜中的表达

    目的 探讨β半乳糖凝集素-3 (Galectin-3)在植入早期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义.方法 应用免疫组化SP法检测妊娠1~5 d小鼠子宫内膜Galectin-3的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照.结果 小鼠子宫内膜的所有组织中均有Galectin-3表达,主要表达于腺上皮、腔上皮和基质细胞中.随着小鼠妊娠天数的增加,Galectin-3的表达也逐渐增高,在植入窗口期(妊娠4~5 d)达高峰.结论 Galectin-3在妊娠1~5 d小鼠子宫内膜持续表达,提示在小鼠胚泡植入早期,Galectin-3参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要作用.

    作者:黄丽;陈晓蓉;张荣宜 刊期: 2011年第11期

  • 脂质体转染TRPM7siRNA对肝星状细胞增殖的影响

    目的 通过利用小干扰RNA(siRNA)下调瞬时受体电位通道7(TRPM7)基因的表达,研究TRPM7对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化、增殖的影响.方法 人工合成抑制TRPM7基因的siRNA片段,通过脂质体LipofectamineTM 2000转染到HSC-T6内,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及TRPM7的mRNA表达.结果 转染siRNA后的HSC-T6增殖受到显著抑制,Ⅰ型胶原、α-SMA及TRPM7 mRNA表达显著下降.结论 应用RNA干扰靶向抑制TRPM7基因可显著抑制HSC-T6的活化及增殖,下调TRPM7基因的表达可能是潜在的肝纤维化治疗方法.

    作者:贾丽莎;黄成;张磊;吕雄文;谢丹;李俊 刊期: 2011年第11期

  • 类风湿关节炎患者亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与甲氨蝶呤治疗的相关性研究

    目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因rs1801133C/T、rs1801131A/C、rs2274976A/G单核苷酸多态性(SNP)在RA患者和健康人群分布情况,以及与甲氨蝶呤(MTX)治疗的相关性.方法 收集皖籍汉族活动期RA患者110例,口服MTX 10~15 mg/周,评价疗效及不良反应.180例皖籍汉族健康人群作为正常对照.采用实时荧光定量PCR法检测基因型.结果 rs1801133C/T、rs1801131A/C、rs2274976A/G 3个位点多态性分布在皖籍汉族RA患者和正常对照组间差异无显著性.RA患者中MTX治疗有效组的rs1801131C等位基因频率高于治疗无效组(P<0.05).有不良反应组中rs1801133T及rs2274976A等位基因频率高于无不良反应组(P<0.05).结论 rs1801133C/T、rs1801131A/C、rs2274976A/G多态性分布在皖籍汉族RA患者与正常人群之间差异无显著性.rs1801131A/C多态性与MTX的疗效相关.rs1801133C/T及rs2274976A/G多态性与MTX不良反应相关.

    作者:肖会;徐建华;周小妹;张志华;申世华;李迎伟 刊期: 2011年第11期

  • 血浆睾酮水平变化对中老年男性高血压患者颈动脉内中膜厚度的影响

    目的 探讨血浆睾酮水平与中老年男性原发性高血压患者颈动脉粥样硬化程度的相关性.方法 65例中老年男性患者分为正常对照组(n=20)和原发性高血压组(n=45),后者又分为无斑块组(n=20)和有斑块组(n=25),分析各组血浆睾酮水平的变化与颈动脉硬化的相关性.结果 原发性高血压组血浆睾酮水平明显低于正常对照组(P<0.05),随着睾酮水平的下降,颈动脉内中膜厚度升高,动脉硬化的程度不断加重,但与斑块的发生无相关性.结论 中老年男性高血压患者血浆睾酮水平下降加速颈动脉粥样硬化程度,雄激素补充治疗可能为降低中老年男性动脉粥样硬化的发生提供新的方法.

    作者:顾朋颖;康冬梅;周剑;朱文静;王卫东;夏媛 刊期: 2011年第11期

  • 输卵管积水对体外受精-胚胎移植结局的影响

    目的 分析输卵管积水情况不同对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法 回顾性分析475例因输卵管因素进行IVF-ET的患者资料,除9例异位妊娠外,根据子宫输卵管造影(HSG)和阴道超声(TVS)诊断结果,将余466例分为4组,A组:HSG 及TVS均诊断为输卵管积水;B组:HSG诊断为输卵管积水,TVS未见双侧附件区积水;C组:HSG诊断为双侧输卵管梗阻,但未见扩张,而TVS诊断为输卵管积水;D组:HSG诊断为双侧输卵管梗阻,但未见扩张,而TVS未见双侧附件区积水.分析输卵管有无积水以及积水情况对IVF-ET结局的影响.结果 与D组比较,A组的临床妊娠率减少,差异有显著性(P<0.05);B、C组的临床妊娠率分别与D组比较,差异无显著性.结论 输卵管积水情况不同对IVF-ET结局的影响不同.HSG及TVS诊断均提示输卵管有积水可能会降低IVF-ET的临床妊娠率.

    作者:许孝凤;曹云霞;李泽莲;刘迎春 刊期: 2011年第11期

  • 中国南北方特应性皮炎患者临床特征地域性差异研究

    目的 探讨中国南北方特应性皮炎患者临床特征的差异.方法 采用回顾性调查表的形式收集患者资料,分析各临床特征的分布在南北方患者中的差异.结果 患者个人异位史、家族异位史、发病季节、疾病严重程度、15项次要症状及5项其他症状在南北方的发生情况有差异(P<0.05).结论 中国特应性皮炎患者临床特征分布具有显著地域性差异.

    作者:李存涛;邵莉梅;裴小平;左先波;唐先发;汤华阳;肖凤丽;孙良丹;张学军;杨森 刊期: 2011年第11期

  • 三氯乙烯染毒小鼠Th17细胞与肝功能损害的关系

    目的 检测三氯乙烯(TCE)染毒小鼠体内Th17细胞数量及其分泌的白介素17(IL-17)含量和肝功能的变化,探讨Th17细胞与TCE引起的肝功能损害的关系.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为TCE(2.5、5 mg/ml)组、空白对照组和溶剂对照组.染毒2、4、8、12周,采集外周血用全自动生化仪测定肝功能,处死动物取脾脏和肝脏,流式细胞仪检测脾脏Th17细胞数量,ELISA法检测肝组织匀浆中IL-17含量.结果 与对照组相比,TCE组小鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平明显升高,2周和4周时差异有显著性(P<0.05);肝组织匀浆中IL-17含量与对照组比较,TCE组也明显升高(P<0.05,P<0.01),4周时高;与对照组比较,TCE组小鼠脾脏Th17细胞数量明显升高,2、4、8、12周时差异均有显著性(P<0.05,P<0.01);相关分析显示肝功能与肝组织匀浆中IL-17含量和Th17细胞数量均呈正相关.结论 TCE引起的肝功能损害可能与Th17细胞有关.

    作者:王德骏;苏尧;赵文紧;王晓玮;马倩;刘猛;王进;沈彤 刊期: 2011年第11期

  • 荧光定量PCR法从母体血浆检测胎儿RhCcE血型

    目的 建立荧光定量PCR(FQ-PCR)法从母体血浆中检测胎儿RhCcE血型,用于胎儿和新生儿溶血病的产前诊断.方法 采集孕期8~20周的妇女血浆,采用QIAamp DNA Mini方法从母体外周血中提取游离胎儿DNA,用FQ-PCR法检测胎儿DNA的RhCcE基因型,预测胎儿血型.与胎儿脐带血标本检测的结果进行比较,评价采用FQ-PCR法从母体检测胎儿 RhCcE 血型的准确性.结果 46例RhE阴性母体血浆中检测出18例RhE血型阳性,与胎儿脐带血检测结果完全一致,准确率100%;36例Rhc阴性母体血浆中检测出24例Rhc血型阳性,与胎儿脐带血检测结果完全一致,准确率100%;从35例RhC阴性母体血浆中检测出10例RhC血型阳性,与胎儿脐带血检测结果相比漏检2例,准确率94%.结论 FQ-PCR法能够在孕早期检测出胎儿RhCcE血型,可以用于胎儿和新生儿溶血病的产前诊断.

    作者:李玲;刘忠;杨美霞;邓余翠;刘萍;姚余有 刊期: 2011年第11期

  • EDAG-1基因真核表达载体的构建及其对细胞恶性生物学行为的影响

    目的 构建胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)基因真核表达载体 pcDNA3.1(+)-EDAG-1,并检测其对细胞的恶性生物学行为的影响.方法 应用逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 法从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体 pcDNA3.1 (+)-EDAG-1.利用克隆 PCR、限制性内切酶消化进行验证.将重组 pcDNA3.1(+)-EDAG-1 真核表达载体和阴性对照的空载体 pcDNA3.1 分别转染到 NIH3T3 细胞和 Ba/F3 细胞中,应用软琼脂集落实验检测 NIH3T3 细胞转染前后的集落形成能力,流式细胞术检测 Ba/F3 细胞不依赖白介素-3(IL-3)抗凋亡能力以及其发生的机制.结果 ①扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与 GenBank 公布一致,克隆成功,且鉴定证实 pcDNA3.1 (+)-EDAG-1 真核表达载体构建成功.②转染真核表达载体 pcDNA3.1 (+)-EDAG-1 后的 NIH3T3 细胞集落形成能力明显增高,而对照组不能形成集落.转染后 Ba/F3 细胞的不依赖 IL-3 抗凋亡能力明显提高.③在Ba/F3-EDAG细胞中,核因子κB 的DNA结合活性明显高于对照细胞,而 Stat3 与 Stat5 的磷酸化未发生明显的变化.结论 成功构建真核表达载体 pcDNA3.1 (+)-EDAG-1,为进一步研究 EDAG-1 基因在白血病和甲状腺癌细胞中的功能奠定了基础.

    作者:郑贤芳;杨帆;储著朗;汪思应 刊期: 2011年第11期

  • 恶性淋巴瘤PRDM1基因突变的研究

    目的 探讨恶性淋巴瘤中肿瘤抑制基因PRDM1的突变类型及其与恶性淋巴瘤表型之间的关系.方法 采用PCR法结合DNA直接测序技术对166例淋巴瘤PRDM1基因的5'调控区及全部7个外显子核苷酸序列进行测序.结果 PRDM1第2、4、6、7外显子及5'调控区碱基发生变异,其中第2、4、7外显子中的碱基变异为SNP,第6外显子为新的突变位点,第2、4、6外显子碱基变异为错意突变;PRDM1基因突变/SNP在本组病例中发生率为23.5%,在非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤(HL)中,PRDM1基因突变率分别为26.3%、10.3%;在B细胞淋巴瘤中,PRDM1基因变异率为38.8%,在22例T细胞淋巴瘤中未检测到PRDM1基因突变.结论 PRDM1基因突变可能是淋巴瘤尤其是B细胞淋巴瘤发病的重要机制之一,PRDM1基因突变与B细胞淋巴瘤表型有关.

    作者:夏海龙;陈晓文;程歆;王庆义;鲁海燕;宋琴 刊期: 2011年第11期

安徽医科大学学报杂志

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