学术投稿

Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法

张丹;赵敏迪;高友鹤

关键词:生长因子受体结合蛋白质7, SH2结构域, 谷胱甘肽巯基转移酶, 基因表达, 纯化
摘要:目的:探讨Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法.方法:将Grb7蛋白SH2结构域编码基因与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签编码基因构建为融合基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点EcoRⅠ与XhoⅠ之间,挑选测序正确的质粒将其转染至BL 21感受态细胞内,感受态细胞于37 ℃摇培至其OD值达到0.6~0.8后,经0.2 mmol/L IPTG 25 ℃过夜诱导表达融合蛋白,MALDI-TOF质谱检测蛋白纯化产物,SPR生物传感器(Biacore 3000) 检测纯化蛋白与天然配体磷酸化肽段的相互作用.结果:GST-Grb7 SH2 结构域融合蛋白在裂解菌液的上清液中存在,500 ml LB/Amp菌液可纯化得到415 μg GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,MALDI-TOF质谱图上可见明显目的蛋白峰,Biacore 3000检测到纯化蛋白可结合不同浓度的磷酸化肽段配体.结论:运用改进的GST融合蛋白纯化方法可得到具有一定纯度及生物学活性的GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,为该蛋白结构域后续功能研究奠定了基础.
蚌埠医学院学报杂志相关文献
  • 64排螺旋CT血管造影在冠心病诊断中的临床应用

    目的:探讨64排螺旋CT血管造影(CTA)对冠心病的诊断价值.方法:以选择性冠状动脉(冠脉)造影(SCA)结果为金标准,采用64排螺旋CTA对50例拟诊冠心病患者的冠脉主干及主要分支进行重建和分析,评价其诊断冠心病的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)及准确性.结果:64排螺旋CTA诊断冠心病的敏感性80.35%,特异性96.53%,PPV 90.00%,NPV 92.67%.64排螺旋CTA阳性与SCA阳性间呈正相关关系(r=0.797,P<0.01).64排螺旋CTA检查发现钙化病变180支,SCA仅发现钙化病变80支.结论:64排螺旋CTA对冠心病诊断有较高的准确性,且对钙化病变诊断率优于冠脉造影,可以作为冠心病高危人群无创性筛选检查.

    作者:张先林;王岳松;章萍;郭向阳;邵旭武;董学滨;梁明明 刊期: 2012年第04期

  • 极低出生体重儿22例的临床治疗

    目的:探讨极低出生体重儿的临床治疗方法.方法:对22例极低出生体重儿的临床表现进行分析,并采取恒温箱保暖复温、监护呼吸、控制血糖、维持电解质酸碱平衡等综合治疗,对有高胆红素血症患儿给予蓝光治疗及营养管理.结果:平均住院32 d,存活出院18例,死亡2例,自动出院2例.结论:极低出生体重儿的治疗应着重加强保暖,严密监护呼吸,给予合理的喂养及静脉营养,积极治疗各种并发症.

    作者:戴玉腾 刊期: 2012年第04期

  • 酮康唑引发缺血性结肠炎1例内镜观察并文献复习

    目的:探讨缺血性结肠炎的少见病因、临床特点、鉴别诊断、内镜下表现及治疗方法.方法:对1例以腹泻、腹痛伴血便为主要症状的住院患者在抗感染、支持对症治疗的同时在48 h内完善实验室检查及相关辅助检查,明确诊断后给予特异性治疗并积极寻找可能的病因.结果:患者发病前有明确的服用酮康唑病史,血白细胞增高,大便RBC 4+,WBC +,OB+,结肠镜检查提示缺血性结肠炎.抗生素联合低分子右旋糖酐、罂粟碱治疗10 d后复查结肠镜提示完全治愈.结论:服用酮康唑可能是引起缺血性结肠炎的少见病因,结肠镜检查是诊断缺血性结肠炎的可靠手段,低分子右旋糖酐联用罂粟碱对治疗缺血性结肠炎具有很好疗效.

    作者:杨清峰;张旭;江泳;周磊;关玉龙;张毅 刊期: 2012年第04期

  • 阴道镜下定位活检在子宫颈病变早期诊断中的应用价值

    目的:评价电子阴道镜下定位活检在子宫颈病变诊断中的价值和临床意义.方法:对736例阴道镜下活检进行回顾性分析.结果:确诊子宫颈上皮内瘤变(CIN)1 124例,CIN 2 34例,CIN 3 13例,子宫颈癌37例,人类乳头瘤病毒感染28例.结论:阴道镜下定位活检对早期发现子宫颈癌、CIN及感染有重要的诊断价值.

    作者:黄丽丽;周洪燕;李志敏 刊期: 2012年第04期

  • 崇明地区新生儿血清及尿液中15种金属元素的含量分布探讨

    目的:观察崇明地区新生儿血、尿金属元素的含量分布情况,为动态研究本地区儿童体内血、尿金属元素的变化及金属元素代谢情况奠定基础.方法:采用电感耦合等离子体质谱法测定血清、尿液中15种金属元素的含量,运用K-S检验统计分析金属元素的分布情况.结果:新生儿血清中钒、铬、钴、铜和硒元素呈正态分布(P<0.05);铁和锌元素取自然对数后呈正态分布(P<0.05).新生儿尿液中,钒、铬和铜元素呈正态分布(P<0.05);锌和钼元素取自然对数后呈正态分布(P<0.05).结论:新生儿血清及尿液中的金属元素的含量具有地域及年龄特点,部分金属元素呈正态分布,可以作为进一步研究的基础.

    作者:郁燕;倪俊毅;徐决平;丁焘;刘晓青 刊期: 2012年第04期

  • 急性氨气吸入性肺损伤32例临床诊治分析

    目的:探讨急性氨气吸入性肺损伤的临床特点、规范化诊断与治疗措施,为该病的病情评估、预后估计及疾病随访提供帮助.方法:对32例急性氨气吸入性肺损伤患者均给予氧气吸入,保持呼吸道通畅,喉梗阻窒息3例急诊气管切开.急性期采用糖皮质激素治疗,预防感染,加强营养支持及对症治疗.结果:32例均救治成功,随访6个月,8例并发轻微肺间质纤维化.结论:急性氨气吸入性肺损伤患者的病情评估和预后估计应参考支气管镜检查结果.早期糖皮质激素应用、预防继发感染、充分雾化促进排痰和适时气管切开保持呼吸道通畅是保证治疗成功的关键.

    作者:赵凤德;韩明峰;孙伟;冉献贵 刊期: 2012年第04期

  • 有创-无创序贯式治疗慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭临床应用探讨

    目的:探讨有创-无创序贯式治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并呼吸衰竭中的临床效果.方法:选择COPD合并呼吸衰竭患者64例,临床出现肺部感染控制窗后,将患者随机分为2组:有创-无创序贯式治疗组(观察组)和常规治疗组(对照组).观察2组患者在出窗时间、有创通气时间、机械通气时间、住院时间、呼吸机相关性肺炎发生率、病死率等各项指标的差异.结果:观察组和对照组出窗时间分别为(6.5±2.0)d和(7.5±1.0)d,差异有统计学意义(P<0.01).2组患者出窗时和脱机时呼吸频率、心率、PaO2、PaCO2、pH值比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组有创通气时间、总机械通气时间、住院时间均短于对照组(P<0.01),VAP发生率少于对照组(P<0.05),病死率与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论:有创-无创序贯式机械通气治疗COPD合并呼吸衰竭的患者可有效缩短机械通气时间,降低呼吸机相关肺炎的发生率,使患者能够尽快痊愈出院,是一种较为有效的临床治疗方案.

    作者:荣峰 刊期: 2012年第04期

  • 临床护理路径在白内障复明工程中的应用

    目的:探讨临床护理路径在白内障复明工程中的应用效果.方法:对502例白内障患者运用临床护理路径制定护理程序,将护理人员分为筛查组、围手术期组和健康教育组,分别执行不同的护理任务,并观察效果.结果:患者护理工作进行有序,493例患者视力均有不同程度提高,未出现1例护理并发症,健康教育效果明显.结论:利用临床护理路径制定护理程序,提高了工作效率,可以满足在短期内需大量手术的白内障复明工程需要.

    作者:杨芳;王飞 刊期: 2012年第04期

  • 脂肪溶解液在乳腺癌腋淋巴结清扫术中的应用

    目的:探讨脂肪溶解液在乳腺癌腋淋巴结清扫术中应用的可行性.方法:对38例术前扪及腋淋巴结肿大的乳腺癌患者(观察组)行改良根治术,腋窝注射脂肪溶解液及脂肪抽吸后进行淋巴结清扫术,术中保留肋间臂神经、胸长神经及胸背神经.对照组20例采用传统方法清扫腋窝淋巴结.结果:观察组术中出血少,平均每例取出淋巴结15个,所有患者术后均无明显并发症,术后平均随访6个月,均无腋窝肿瘤复发、肩关节活动障碍、上肢水肿及麻痹等情况.观察组术后发生皮下积液及上肢疼痛、上肢水肿等低于对照组(P<0.01).结论:采用脂肪溶解液及脂肪抽吸方法的腋淋巴结清扫术,具有操作简单、省时及淋巴结清扫较彻底、神经血管损伤少等优势.

    作者:单宏杰;倪进斌 刊期: 2012年第04期

  • 重症监护治疗病房内气管插管180例临床分析

    目的:分析重症监护治疗病房(ICU)内患者气管插管的特点及并发症发生率,探讨适宜的插管时机和策略.方法:ICU内180例气管插管患者中,医生预先评估有插管指征并作插管准备者98例为计划插管组,因病情突变或意外拔管作紧急气管插管者82例为紧急插管组,总结2组插管成功次数、时间及插管并发症.结果:180例患者中1次插管成功率低(58.9%),插管并发症中低血氧者83例(46.1%).计划插管组低血氧发生率较紧急插管组显著减少(P<0.01),2次插管成功率高于紧急插管组(P<0.01).结论:医生预先评估ICU患者的病情进展趋势主动插管可提高紧急插管成功率,减少插管时间及并发症.

    作者:胡小明 刊期: 2012年第04期

  • 糖尿病患者膳食护理体会

    2型糖尿病是一种缓慢进展的疾病,其发病过程是正常糖耐量→糖调节受损→2型糖尿病,发病的中心环节是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷[1].随着人们生活水平的提高,膳食结构的改变和体力劳动的减少,糖尿病的发病率也在不断上升.全面有效控制糖尿病,延缓或减少并发症的发生,离不开膳食治疗.我院在糖尿病患者住院期间加强患者的膳食护理,给患者提供合理营养,控制患者病情发展,减少并发症,从而提高了患者的生活质量.现就糖尿病患者膳食护理体会作一报道.

    作者:白菊娥 刊期: 2012年第04期

  • 22547份血清标本艾滋病毒抗体检测结果分析

    目的:通过分析艾滋病(AIDS)筛查实验室检测情况及阳性病例分布,为下一步规划AIDS防治工作提供依据.方法:艾滋病毒抗体初筛检测1996~1999年采用乳胶凝集法,2000年至今使用ELISA方法;确证标本2008年3月前送安徽省疾病预防控制中心(疾控中心),2008年3月后由蚌埠市疾控中心艾滋确证实验室检测,采用West blot法.结果:共检测各类人群血清标本22 547份,其中初筛并经确证阳性标本262份,阳性率1.16%.确证阳性的标本中,流行病学分析,户籍在蚌埠地区(含五河、固镇、怀远)57份(21.76%),蚌埠地区之外205份(79.24%).结论:蚌埠市1996~2009年AIDS的发病处于相对较低水平,但有逐年增加趋势.

    作者:刘国洲;王明珠;孙莉;付广林 刊期: 2012年第04期

  • 池州地区乙型肝炎病毒B、C基因型分布及临床意义

    目的:了解池州地区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)B、C基因型的分布情况及其与临床指标的关系.方法:通过荧光定量PCR法测定116例乙型肝炎患者B、C基因型,并比较B、C基因型各项临床指标的关联性.结果:116例血清标本中,B基因型75例,C基因型39例,B/C混合型2例.不同基因型各临床指标差异无统计学意义(P>0.05).C基因型HBeAg阳性率为53.8%,B基因型为30.7%,差异有统计学意义(χ2=5.82,P<0.05).结论:池州地区HBV-DNA基因型分布以B型为主,C型次之;C基因型与较严重肝脏疾病的发生有关.

    作者:王细宏;何世荣;黄金保;胡义忠 刊期: 2012年第04期

  • Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达

    目的:检测Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达情况.方法:选取胚胎14.5 d、18.5 d和出生后当天、出生后3 d、7 d、2周、4周及成年的大鼠脊髓,采用免疫荧光法和RT-PCR检测Olig1在脊髓的表达.结果:从胚胎14.5 d到成年大鼠的脊髓中Olig1均有表达.结论:Olig1在少突胶质细胞不同发育时期均有表达.

    作者:齐琦;张玉心;赵保明;胡建国;吕合作;陈晓蓉 刊期: 2012年第04期

  • 剖宫产术后急性结肠假性肠梗阻1例护理体会

    急性结肠假性肠梗阻(ACPO)在产科术后并不多见,其主要特点为结肠急性广泛扩张,严重者可导致肠管坏死穿孔[1].2010年10月,我科发生1例剖宫产术后急性结肠假性肠梗阻患者,经早期诊断、保守治疗、精心护理,使患者避免了第二次手术,尽早恢复了健康.现将护理体会作一报道.

    作者:秦娟;孙华 刊期: 2012年第04期

  • 前列腺癌根治术后勃起功能障碍的预防及治疗研究进展

    前列腺癌(prostate cancer,PCa)是欧美男性发病率高的恶性肿瘤,病死率仅次于肺癌.近年来,随着人口老龄化比例的上升和饮食结构的改变,我国PCa的发病率呈现明显的上升趋势.前列腺癌根治术(radical prostatectomy,RP)己经成为临床上治疗局限性PCa的有效手段.但是由于前列腺与海绵体神经血管束(neurovascular bundles,NVB)在解剖学上紧密相连,早期RP后的患者几乎都会出现勃起功能障碍(erection dysfunction,ED).本文就RP后ED预防和治疗方面的研究作一综述.

    作者:樊松 刊期: 2012年第04期

  • 持续佩戴软性角膜接触镜治疗角膜上皮病变23例

    目的:研究持续配戴软性角膜接触镜治疗角膜上皮病变的有效性.方法:对角膜上皮病变患者23例(28眼),采用软性角膜接触镜镜片连续过夜配戴,同时局部给予1%玻璃酸钠滴眼剂及抗生素滴眼剂,定期检查疼痛缓解情况、眼部改变、镜片的配适状态、镜片沉淀物以及眼部并发症.结果:治疗观察时间5~60 d.眼部疼痛症状完全缓解16眼(57.14%),明显缓解10眼(35.72%),无效2眼(7.14%).角膜上皮完全愈合17眼(60.7%),部分愈合5眼(17.9%),无效6眼(21.4%).结论:持续配戴角膜接触镜对于角膜上皮病变具有促进角膜愈合和缓解疼痛刺激等作用.

    作者:刘钧 刊期: 2012年第04期

  • 共干扰Hpa、EP-CAM对人胆囊癌细胞株裸鼠模型的实验研究

    目的:研究miRNA转染乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)和上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EP-CAM)对胆囊癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤作用.方法:通过脂质体转染法将含Hpa、EP-CAM的真核表达质粒分别及共同转染至人胆囊癌细胞株GBC-SD,MTT法检测体外细胞增殖情况,筛选出干扰稳定表达细胞株后,采用裸鼠腋外侧皮下注射方法进行裸鼠体内成瘤实验,连续40 d观察裸鼠体表胆囊癌移植瘤生长情况.结果:单独及共同干扰组细胞生长受到明显抑制,而共同干扰组作用尤为突出.裸鼠体内实验提示Hpa miRNA组、EP-CAM miRNA组、共干扰组抑瘤率分别为69.06%、64.94%、85.67%.Hpa、EP-CAM基因蛋白在干扰组表达均明显低于正常胆囊癌细胞接种组(P<0.01).结论:采用RNAi法沉默Hpa和EP-CAM在胆囊癌细胞中的表达可有效抑制其在体内外的生长,并且以共同干扰效果尤为突出.

    作者:刘铮;刘会春;李三红 刊期: 2012年第04期

  • Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法

    目的:探讨Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法.方法:将Grb7蛋白SH2结构域编码基因与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签编码基因构建为融合基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点EcoRⅠ与XhoⅠ之间,挑选测序正确的质粒将其转染至BL 21感受态细胞内,感受态细胞于37 ℃摇培至其OD值达到0.6~0.8后,经0.2 mmol/L IPTG 25 ℃过夜诱导表达融合蛋白,MALDI-TOF质谱检测蛋白纯化产物,SPR生物传感器(Biacore 3000) 检测纯化蛋白与天然配体磷酸化肽段的相互作用.结果:GST-Grb7 SH2 结构域融合蛋白在裂解菌液的上清液中存在,500 ml LB/Amp菌液可纯化得到415 μg GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,MALDI-TOF质谱图上可见明显目的蛋白峰,Biacore 3000检测到纯化蛋白可结合不同浓度的磷酸化肽段配体.结论:运用改进的GST融合蛋白纯化方法可得到具有一定纯度及生物学活性的GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,为该蛋白结构域后续功能研究奠定了基础.

    作者:张丹;赵敏迪;高友鹤 刊期: 2012年第04期

  • 急性光气中毒患者23例临床分析

    目的:总结急性光气中毒的临床特点.方法:收集23例急性光气中毒患者的临床资料,对发病时间、初发临床表现、诊治结果进行综合分析.结果:重度组的潜伏期显著短于轻度组(P<0.01).光气中毒主要初发症状为咳嗽(82.61%)、胸闷(69.57%)等呼吸道症状.重度组呼吸频率、心率、外周血白细胞计数、中性粒细胞百分比、肌酸激酶及其同工酶、肌钙蛋白等实验室检查指标均高于轻、中度组(P<0.05~P<0.01).23例患者均存活.结论:急性光气中毒的临床表现主要集中在呼吸系统;根据病情轻重及早短程给予适当剂量糖皮质激素治疗,合理呼吸支持是防止病情恶化、保证抢救成功的关键.

    作者:刘成产;赵奎;刘如喜;褚明永;周杰;李敏;祝经韬;杜盼盼 刊期: 2012年第04期

蚌埠医学院学报杂志

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主管:安徽省教育厅

主办:蚌埠医学院