董慧君；鲁菲；张哲
目的 建立毛细管电泳法检测Y群和W135群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量,并对方法进行验证及初步应用.方法 采用胶束电动毛细管电泳法测定TT含量,使用内径50 μm未涂层熔融石英毛细管柱(有效柱长为104 cm),以40 mmol/L硼酸盐-SDS缓冲液(pH 9.30)为电泳介质,电压为30 kV,在200 nm紫外波长条件下进行检测.对方法的专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、准确性、定量限进行验证,并用建立的方法检测Y群和W135群脑膜炎球菌结合物原液各3批样品中的游离蛋白TT含量.结果 该方法专属性、精密度、重复性、稳定性、准确性良好,TT在10 ～ 35 μg/ml范围内与色谱峰相对内标峰面积比值呈良好的线性关系,r2=0.995,游离蛋白的定量限为7μg/ml.用建立的方法检测Y群和W135群脑膜炎球菌结合物原液各3批样品中的游离蛋白TT含量均小于10 μg/ml.结论 建立的毛细管电泳法操作简便、准确,可用于检测Y群和W135群脑膜炎球菌多糖结合物原液中的游离蛋白含量.
作者：李茂光；武琳琳；米健秋；毛琦琦；李亚南；杨英；李健峰；叶强 刊期： 2016年第07期
目的 获得具有生长激素(growth hormone,GH)和催乳素(prolactin,PRL)分泌功能的奶牛腺垂体细胞(dairy cow anterior pituitary cells,DCAPCs),并对其进行鉴定和特征分析.方法 采用免疫组织化学方法对奶牛腺垂体中GH和PRL分泌细胞进行定位,利用酶消化法对其所在部位进行消化,获得的细胞经分离培养后,用形态学方法和免疫组织化学方法进行鉴定,并分析其传代性能;采用实时荧光定量PCR及ELISA方法对其GH和PRL合成和分泌特征进行分析.结果 GH分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区下缘,而PRL分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区上缘.获得的DCAPCs接种培养2d后,可见形状规则的铺路石样上皮细胞,经免疫组织化学法鉴定,可分泌GH和PRL,经多次传代后仍可表达GH和PRL,但表达水平随代次增加而降低.结论 成功建立了DCAPCs分离培养方法,可用于体外研究奶牛GH和PRL合成及分泌的调控机制.
作者：王建发；薛琳琳；吴建民；吴殿君；翁春玲；孙东波；张旭；武瑞 刊期： 2016年第07期
目的 了解无锡市成人接种麻疹风疹联合疫苗后麻疹抗体的变化趋势,加速实现消除麻疹的目标.方法 随机选择两个麻疹高发地区20～29岁、30～39岁、40～ 49岁3组的192名无锡市常住人口,分别于接种麻疹风疹联合疫苗前及接种后1个月、1年、2年采集静脉血清,分离血清.采用ELISA试剂盒检测麻疹IgG抗体水平,计算抗体阳性率及几何平均浓度(GMC).结果 不同年龄组相同观察时间的麻疹抗体阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),不同观察时间麻疹抗体总阳性率差异也无统计学意义(P＞0.05).相同年龄组不同观察时间麻疹抗体GMC差异有统计学意义(P＜0.01),不同观察时间各年龄组麻疹抗体GMC两两比较差异有统计学意义(P＜0.01),不同年龄组同一观察时间抗体GMC差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单次接种疫苗后抗体水平会迅速上升,但维持时间不超过1年,建议通过定期加强免疫来保持较高的麻疹抗体水平.
作者：王旭雯；修仕信；蒋静凤；吕莉；史丽敏；孙凤妹；谭文文；周建刚 刊期： 2016年第07期
目的 研制第6套丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体诊断试剂国家参考品.方法 从我国10省市血站及生物制品企业的供血员中筛选候选参考品血浆样本304份,采用国内外27种检测试剂进行HCV Ag、HCV Ab及HCV RNA检测后,应用CHIRON公司的RIBA HCV 3.0 SIA及MP公司HCV BLOT 3.0试剂进行确证检测;利用Abbott RealTime HCV GenotypeⅡ试剂,对HCV RNA阳性样本进行HCV基因型别检测,并以核苷酸序列测定方法对分型样本进行确认.通过分析上述检测数据,从中拟选出协作标定样本,邀请国内外生产或市场使用占较大份额的11个实验室参加该套参考品标定.取低检出限参考品4份,分别于4、25和-20℃放置1、3、5、7、9和11d,或置-70℃反复冻融1～6次,进行稳定性试验.结果 选出65份样品组成第6套HCV抗体诊断试剂国家参考品,其中包括阴性参考品30份,阳性参考品30份,低检出限参考品4份,精密性参考品1份.应用11家的16种HCV抗体试剂分别平行3次标定检测,阴、阳性参考品符合率均≥29/30;低检出限参考品检测L1 ～ L3均为阳性,L4为阴性;精密性参考品检测CV在1％ ～11％之间.不同温度保存11d及-70℃保存反复冻融6次的检测结果均符合要求(P＞0.05).结论 建立了应用于血液筛查丙型肝炎病毒抗体试剂质量控制的第6套HCV抗体国家参考品.
作者：谷金莲；于洋；梁争论 刊期： 2016年第07期
目的 评价吉林省2006和2014年调查人群乙型肝炎病毒感染标志物的流行情况及乙型肝炎疫苗纳入计划免疫后的免疫效果,为制定全省乙型肝炎防治措施提供科学依据.方法 采用多阶段随机抽样方法,对吉林省4个地级市中5个县(市、区),于2006年抽取1～59岁人群2 239人,2014年抽取1 ～ 29岁人群650人,进行乙型肝炎流行病学调查,并采集血液样本,ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(hepatitis core antibody,HBcAb);用EPIData3.1建立数据库,SPSS 13.0软件进行数据统计学分析.结果 2006和2014年调查人群各年龄组接种率及全程接种率差异有统计学意义(P＜0.016 7).2006年15 ～ 59岁组人群HBsAg携带率和乙型肝炎病毒感染率均高于其他两组(P＜0.016 7);HBsAb阳性率随年龄组升高而降低.2014年各年龄组人群HBsAg、HBsAb携带率及乙型肝炎病毒感染率差异无统计学意义(P＞0.05).2006年调查人群HBsAg携带率及乙型肝炎病毒感染率均低于1992年而高于2014年,HBsAb阳性率高于1992年而低于2014年,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 接种乙型肝炎疫苗可有效控制乙型肝炎病毒的感染;免费接种可提高乙型肝炎疫苗接种率,降低HBsAg携带率及HBV感染率,在青少年、成年及老年人中进行有效接种,可降低易感人群的感染风险.
作者：曹凤瑞；付思美；田鑫；程涛；陈超；吕淑梅；李大强；林琳；周剑惠 刊期： 2016年第07期
目的 原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 根据GenBank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot分析.将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性.结果 经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒pET-28a-Bo-RV-VP6构建正确.重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95％以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应.制备的VP6蛋白多克隆抗体效价＞1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白.结论 原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础.
作者：冉旭华；曹思；刘阳阳；张玲玲；张峣；倪宏波；闻晓波 刊期： 2016年第07期
目的 建立重组人源单克隆抗体rhu IgG-04临床研究中免疫原性检测方法.方法 建立由筛选法(桥连ELISA法)和确证法(免疫清除法)组成的多重检验方法检测重组人源单克隆抗体rhuIgG-04临床研究中的免疫原性,并对方法进行优化,利用含有人IgG(Fc)的融合蛋白去除类风湿因子(rheumatoid factor,RF)的干扰;通过统计大量空白血清信号值及信号抑制率,确定筛选法和确证法的临界值.在筛选法中确定了归一化因子对不同批次的临界值进行归一化处理.分析检测法对血清中rhuIgG-04的耐受性.结果 筛选法中,样品佳稀释倍数为1/10,佳稀释液为PBS,二抗rhuIgG-04-HRP的适稀释度为1/10 000;在二抗中加入浓度为1 mg/ml Fc片段的融合蛋白能有效去除RF的干扰;归一化因子为0.006,批检测临界值为阴性对照品A值+归一化因子;血清中药物浓度达到1 200 ng/ ml时,对筛选法结果无影响.确证法中,向样品中加入rhuIgG-04的适宜浓度为100 μg/ml,确证法临界值为49％.结论 建立的免疫原性检测方法具有较高的检测灵敏度,抗药物干扰能力强,达到了抗体药物免疫原性检测方法的基本要求,为人源单抗rhuIgG-04免疫原性的检测提供了适宜的手段.
作者：刘艳玲；曹晨华；赵伟；刘晓志；段迎霞；高健 刊期： 2016年第07期
目的 分析ZD1839联合顺铂用药对人食管细胞HE-2增殖的影响.方法 在ZD1839和顺铂单独用药和联合用药情况下,采用MTT法检测不同浓度、不同作用时间的ZD1839与顺铂对人食管癌细胞HE-2增殖的抑制率;取各自48 h IC50值的半量为ZD1839与顺铂的药物浓度,流式细胞仪检测HE-2细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 ZD 1839和顺铂均可抑制HE-2细胞的增殖,抑制效果呈剂量和用药时间依赖性(P均＜0.05);顺铂将细胞生长阻滞在S期,而ZD1839将细胞生长阻滞在G0/G1期,ZD1839联合顺铂用药,将细胞生长阻滞在G0/G1和S期;ZD1839联合顺铂用药的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显高于单独用药(P均＜0.01).结论 ZD1839对食管癌细胞HE-2的增殖有抑制作用,且该抑制作用呈剂量和用药时间依赖性.同时,ZD1839可增强顺铂抑制食管癌细胞HE-2增殖的效应.
作者：赵飞；秦玉花；赵红卫；张伟；柴东燕；蔡维望 刊期： 2016年第07期
非编码RNA即一类不编码蛋白质的核苷酸分子的总称.肝癌高表达长链非编码RNA(long non-coding RNA highly up-regulated in liver cancer,lncRNA HULC)为lncRNA的一种,其水平与肝癌的发生、发展、治疗及预后有关.近年来研究发现,lncRNA HULC与其他疾病也有重要的联系.基于此,本文对lncRNA HULC的相关生物学功能及其与疾病的关系作一综述.
作者：梁勤东 刊期： 2016年第07期
目的 应用IFNγ释放试验评价水痘减毒活疫苗的细胞免疫效果.方法 利用IFNγELISA定量试剂盒检测不同灭活抗原(热灭活、紫外灭活、甲醛灭活)刺激、不同孵育时间(24、48、72 h)、不同个体(12人接种水痘减毒活疫苗前后)对IFNy释放水平的影响.结果 紫外灭活方式制备的刺激抗原及新鲜全血与刺激抗原共孵育48 h,IFNγ释放水平高;12人接种疫苗后全血中IFNγ释放水平均有不同程度提高,接种前后几何平均值(GMT)分别为6.13和234.75 pg/ml,增长倍数和GMT值在个体间均存在较大差异.结论 IFNγ释放试验操作简便、快速,可定量,适用于水痘疫苗细胞免疫效果的评价.
作者：杨萍；孙琦；孙世洋；宋月爽；白鹭；姜春来 刊期： 2016年第07期
目的 研究H7N9型流感疫苗生产用毒种NIBRG-267的传代稳定性,为制定毒种传代限定次数提供依据.方法 将VE2代原始毒种NIBRG-267接种鸡胚尿囊腔,并连续传10代(VE3 ～ VE12),参照《中国药典》三部(2010版)相关要求,对各代次毒种进行鉴别试验、支原体、无菌检查及血凝滴度、病毒滴度、外源因子检测,提取VE3、VE4、VE5、VE12代病毒总RNA,采用RT-PCR法扩增血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并进行测序,与GenBank中公布的A/Shanghai/02/2013(H7N9)基因序列进行比对分析.结果 VE2代病毒连续传10代至VE12代,血凝滴度均不低于1∶480,病毒滴度均不低于8.2LgEID50/ml,鉴别试验、支原体、无菌检查及外源因子检测结果均符合要求.VE3、VE4、VE5、VE12代病毒的HA和NA基因核苷酸和氨基酸序列均一致,与A/Shanghai/02/2013(H7N9)的HA(KF021597.1)、NA(KF021599.1)基因序列一致.结论 H7N9型流感疫苗生产用毒种NIBRG-267连续传10代,生物学和遗传稳定性均良好,为制定毒种传代限定次数提供了数据支持.
作者：陈美丽；贾重来；赵雪；陈宇；朱小宇；张弓；张劲峰；柯伟 刊期： 2016年第07期
目的 比较溶液沉淀法、离心柱法和磁珠法试剂盒提取血液基因组DNA的效果.方法 采集高血压患者的血液样本90份,随机分为3组,分别采用溶液沉淀法、离心柱法和磁珠法试剂盒提取血液样本基因组DNA.通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测及PCR扩增法对血液样本基因组DNA的提取效果进行比较.结果 溶液沉淀法提取的DNA浓度显著高于离心柱法和磁珠法(P＜0.05),离心柱法与磁珠法提取的DNA浓度差异无统计学意义(P＞0.05),3种方法提取血液样本基因组DNA的A260/A280值及A260/A230值的差异均无统计学意义(P＞0.05);3种方法提取的血液样本基因组DNA的大小基本相同,离心柱法提取的DNA点样孔处较干净,电泳条带单一,无拖尾;3种方法提取血液样本基因组DNA的PCR产物均可见单一且明亮的目的条带.结论 3种类型提取试剂盒各有优缺点,使用时应根据实际情况进行选择.
作者：吴婷；李南方；玛依拉；李瑜；周玲；张德莲；洪静 刊期： 2016年第07期
目的 观察2014 ～2015年吉林市内抗病毒治疗失败HIV-1感染者中HIV基因型耐药情况及其亚型分布.方法 收集吉林市2014 ～ 2015年HIV-1感染者中接受抗病毒治疗后HIV病毒载量≥1 000拷贝/ml的患者血浆样本,提取病毒RNA,进行POL基因区扩增及测序后,使用美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药位点分析,Mega 6.0软件Neighbor-joining tree方法构建系统进化树,进行亚型分布分析.结果 2014 ～ 2015年275份抗病毒治疗失败人群血浆样本全部扩增成功,共发现106份基因型耐药样本,耐药率为38.5％,其中7份对蛋白酶类药物耐药,82份对核苷类药物耐药,99份对非核苷类药物耐药,有80份同时对核苷类和非核苷类药物耐药.核苷类逆转录酶区耐药位点以M 184V/IV突变为主,非核苷类逆转录酶区耐药位点以G190G/A/S和V179D/E/G突变为主,2例蛋白酶类药物主要耐药突变位点分别为A71V/T和L10I/M/V.序列亚型以CRF01_AE为主(64.7％),主要流行簇以CRF01_AE第4、第5及CRF07 BC第1簇为主.结论 耐药位点的出现是影响吉林市HIV感染者抗病毒治疗效果的一个重要原因,应加强对治疗失败患者的耐药监测,及时发现耐药突变,尽早更换药物.
作者：周凤岩；李扬；左中宝；邢辉；乔建国 刊期： 2016年第07期
目的 建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法,并进行验证及初步应用.方法 针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的线性、特异性、精密性、灵敏度及可行性.采用新建立的荧光定量PCR法对16株流感疫苗主种子批毒种进行外源性EDSV检测.结果 该方法的佳线性范围为1×104～1 × 109 copies/μl,回归曲线为y=-3.385x+39.616,R2＞0.99;与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应;试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均＜2％;灵敏度为101 copies/μl;该方法检测P0代样品的低检测限为10-6掺入体积比例,血清学方法检测P0 ～ P3代样品的低检测限为10-2～ 10-3掺入体积比例.该方法检测16株流感毒种中外源性EDSV的结果均为阴性,与血清学方法检测结果一致.结论 成功建立了检测EDSV的荧光定量PCR法,提高了检测灵敏度和检测效率,更好地满足了流感疫苗应急检验中快检的要求.
作者：王淑菁；付瑞；李晓波；王吉；卫礼；贺争鸣；岳秉飞 刊期： 2016年第07期
鞭毛蛋白是细菌鞭毛的主要成分,通过聚合鞭毛蛋白单体形成鞭毛的丝状体.鞭毛蛋白的N-末端和C-末端区域相互靠拢形成功能区域,该区域处于鞭毛丝状体的内部;中间区域是序列变异区,暴露于鞭毛丝状体表面.沙门菌鞭毛蛋白具有特殊的抗原性,称为H抗原,是沙门菌分型的依据之一.作为Toll样受体5(Toll-like receptors 5,TLR5)等先天性免疫系统受体的配体,沙门菌鞭毛蛋白是一种强效的蛋白型佐剂,已广泛应用于细菌、病毒和寄生虫的疫苗研制.本文就沙门菌鞭毛蛋白作为载体蛋白在偶联疫苗的应用作一综述.
作者：钱锋 刊期： 2016年第07期
目的 验证S/D法及干热法对人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中猪伪狂犬病病毒(pesdorabies virus,PRV)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活效果.方法 以PRV和PPV为指示病毒,模拟FⅧ生产工艺中的S/D及干热病毒灭活工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测3批FⅧ半成品的残留病毒滴度.结果 批号为201203002、2012-04003、201204004 3批FⅧ半成品经(25±1)℃S/D灭活处理15 min后,PRV滴度分别下降≥6.5、≥6.8、≥6.8 lgTCID50/0.1 ml;经(100±2)℃干热灭活30 min后,PPV滴度分别下降4.00、3.92、3.94 lgTCID50/0.1ml.结论 S/D法及干热法分别对FⅧ制品中PRV和PPV具有良好的灭活效果,本实验为凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺的研究奠定了基础.
作者：邹浩勇；杨禅堂；李陶敬；彭焱；邹莉；杨邦玲 刊期： 2016年第07期
目的 制备冻干人血浆补体,并观察其在4种不同保存温度条件下的稳定性.方法 制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分别保存在-70、4、25和37℃条件下,采用补体50％溶血试验测定于-70和4℃条件下保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天以及于25和37℃条件下保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天的CH50;细胞增殖-毒性检测法测定补体对抗CD20抗体CDC活性检测的影响.结果 -70和4℃保存的3批冻干人血浆补体,1年内CH50平均下降了19.5％和36.3％,25和37℃保存的3批冻干人血浆补体,3个月CH50平均下降了53.4％和60.7％.与上市补体和CH50为30 U/ml的冻干人血浆补体相比,CH50为15 U/ml的冻干人血浆补体对抗CD20抗体CDC活性检测结果无影响.结论 在-70和4℃条件下保存的冻干人血浆补体的CH50相对较稳定,但随着保存温度的升高,CH50下降有加速的趋势.CH50大于15 U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测.
作者：秦海艳；熊颖；乔玉玲；陈继军；安晨；毛晓燕 刊期： 2016年第07期
目的 在毕赤酵母中分泌表达猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白.方法 将PCV2-Cap蛋白基因(GenBank登录号:KC620508.1)按毕赤酵母偏好密码子优化后,插入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,重组质粒pPICZαA-Cap经Sac Ⅰ线性化,通过电击转化整合至毕赤酵母GS115菌株的基因组中,构建pPICZαA-Cap-GS115重组酵母菌.经甲醇诱导表达重组Cap蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法进行鉴定.结果 重组表达质粒pPICZαA-Cap经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌pPICZαA-Cap-GS1 15经菌落PCR鉴定,可扩增出1 001 bp的目的基因片段;表达的重组Cap蛋白相对分子质量约49 000,可与猪圆环2型阳性血清和小鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应.结论 成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为PCV2亚单位疫苗和ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础.
作者：郑光来；卢晓冉；张静远；陈腾；王东方；严妍；张守峰；扈荣良 刊期： 2016年第07期
目的 探讨PTEN过表达对奶牛肝细胞脂肪酸氧化代谢的影响.方法 构建PTEN过表达的重组腺病毒载体,病毒扩增后,感染犊牛原代肝细胞,并设空白对照组(加入PBS)和阴性对照组(感染阴性对照腺病毒AD-GFP),感染48 h后,荧光定量PCR检测细胞中PTEN、脂肪酸氧化代谢转运主要基因CPT Ⅰ、CPTⅡmRNA的表达水平,WesternNot检测相应蛋白表达水平.结果 重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确.过表达PTEN基因后,可升高CPT Ⅰ和CPTⅡ基因mRNA和蛋白的表达量(P＜0.01).结论 PTEN通过调节脂肪酸氧化酶转录和翻译水平,对脂肪酸在肝细胞内的氧化代谢过程进行调节,其有望作为临床有效的生物调控药物,用于治疗奶牛脂肪肝.
作者：罗春海；张雷；刘健莹；刘瑶；邹晓；郑程远；付世新 刊期： 2016年第07期
肺炎球菌是全球范围肺部感染常见的致病菌,在需要住院的社区获得性肺炎病例中,肺炎球菌肺炎居第一位.随着老年人群免疫功能的衰退,老年肺炎球菌肺炎的发病率远高于青年人,且由于对药物的耐药性[1-2],老年人一旦发生肺炎球菌肺炎,不仅疗效差,不易痊愈,且常导致肺功能不全和心功能衰竭,甚至造成死亡,使该疾病成为导致老年人死亡的主要原因之一.接种肺炎疫苗是预防肺炎球菌疾病的有效手段[3],对提高老年人生活质量,节约医疗资源具有重要的社会意义[4].
作者：陆红梅；朱祺；沈金花；陈文花；顾士康 刊期： 2016年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
