夏德菊；潘殊男；杨云凯；周第；金萧；王珣；张萍；肖詹蓉
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是常见的神经退行性疾病.AD已经造成了严重的社会负担,而且目前仍无有效的方法可以治疗.近年来,使用静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIg)治疗AD被认为是一种有潜力的疗法.本文对AD、Aβ级联假说、IVIg治疗AD的作用机制以及临床试验等作一综述,并对未来IVIg治疗AD的研究进行了展望.
作者：辛叶；曹海军 刊期： 2014年第12期
目的 制备人α1微球蛋白(alpha l-mieroglobulin,α1-MG)ELISA定量检测试剂盒,并初步应用于临床标本的检测.方法 用重组人α1-MG蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,对单抗的特性进行鉴定后,采用双抗体夹心ELISA方法制备α1-MG试剂盒,并进行线性范围、灵敏度、准确性、精密性验证.应用制备的试剂盒检测100份健康人血清中的α1-MG含量,计算正常参考值;分别应用试剂盒及放射性免疫分析法(radioactive immunoassay, RIA)检测87份人血清标本,分析试剂盒与RIA法检测结果的相关性.结果 经间接ELISA法筛选及克隆化培养,共获得4株稳定分泌抗α1-MG单抗的杂交瘤细胞株;制备的试剂盒佳线性范围为0.5～60 mg/L,灵敏度为0.03 mg/L,检测不同浓度α1-MG的回收率在92.7％～97.1％之间,批内、批间变异系数(CV)分别为4.78％ ～8.57％和4.30％～6.84％;该试剂盒检测健康人血清样本中α1-MG含量正常参考值为15 ～ 32 mg/L,与RIA法的检测结果具有良好的相关性(r=0.958 6).结论 制备的人α1-MG ELISA检测试剂盒具有较高的准确性和灵敏度,且与RIA法具有良好的相关性,符合临床免疫分析的要求,适用于临床检测和科研应用.
作者：魏雁虹；何巍；耿辉；宋帅；刁斌斌；杨广民 刊期： 2014年第12期
目的 分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库.方法 将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代(P3V1 ～ P3V20),采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度.优化JEV静置培养条件(维持液pH值、培养温度、MOI)及接种方式(单层接种法、混合接种法),并进行培养规模的放大.采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V 1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析.建立JEV毒种库,并进行全面检定.结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lgLD5o/ml.适培养条件为:病毒维持液pH值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;佳接种方式为:单层接种法.在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平.P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100％,传代稳定性良好.建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求.结论 已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础.
作者：刘岩；苑志刚；韩轼奇；谢伟；周长军；李春艳；闫峰；杨屹 刊期： 2014年第12期
目的 分析插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫治疗,开发用于结核病治疗用的新制剂.方法 将结核分枝杆菌H37Rv株直接接种至9只中国恒河猴的肺脏,建立猴感染模型,随机分为3组,其中2组经猴背部脊柱周围皮内分别注射重组MVA-Ag85a(A组)和MVA-Ag85a-ESAT6(AE组)进行治疗,另1组作为未免疫对照组.经过20周定期观察,计算生存率,检测病变组织病理评分和细菌载量;采集猴外周血,分离血清,进行抗原特异性IFNγ分泌水平检测及临床症状监测.结果 在实验终点,未免疫组仅存活1只猴,而A和AE组存活率为100％,与未免疫组相比具有明显的治疗作用.AE组组织病理总评分和细菌载量与未免疫组相比,显示较低的水平(P＞0.05),而A组未表现出同样的优势.抗原特异性IFNy分泌水平变化复杂,但差异无统计学意义(P＞0.05).食欲、咳嗽、体重等指征以及炎症反应蛋白、血沉的变化与抗结核免疫治疗之间无显著的相关性.结论 用重组MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6对结核分枝杆菌感染猴模型进行免疫治疗,取得一定的治疗效果,重组MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6或可作为结核感染的免疫治疗用候选分子.
作者：张群；朱琳；唐志佼；张晶；楼觉人 刊期： 2014年第12期
目的 建立氢氧化铝佐剂的内控质量标准.方法 参照《欧洲药典》7.0对氢氧化铝佐剂进行吸附能力、沉降率、细菌内毒素、无机盐及金属离子的检测,并对30批氢氧化铝佐剂的pH值、氢氧化铝含量、残留氨含量进行趋势分析,建立氢氧化铝佐剂的内控质量标准.结果 建立了氢氧化铝佐剂的内控质量标准13项(1.5mg铝完全吸附1、2、3 mg/ml BSA溶液中的蛋白,5、8和10 mg/ml BSA的溶液中有残留蛋白,且残留的蛋白呈一定的浓度梯度;铝含量为1 mg/ml时,上清液小于20 ml;内毒素含量每毫克铝＜5 IU;氯化物≤0.33％;硝酸盐≤100 ppm;硫酸盐≤0.5％;铵盐≤50 ppm;砷盐≤1 ppm;铁盐≤15 ppm;重金属≤20 ppm;pH值4.19～5.25;氢氧化铝含量6.87～12.78 mg/ml;残留氨含量＜0.04％),涵盖了《欧洲药典》要求的所有项目.结论 建立了氢氧化铝佐剂的质量评价体系,填补了国内氢氧化铝佐剂质量评价方面的空白,为全面、客观评价氢氧化铝佐剂的质量提供了依据.
作者：唐朝辉；张莉；罗勇；张华；胡高翔；耿其秀；秦敏 刊期： 2014年第12期
目的 制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体IgG含量和调理吞噬滴度进行定值.方法 用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS.在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室(University of Alabama at Birmingham,UAB)和兰州生物制品研究所有限责任公司(Lanzhou Institute of Biological Products,MBP)实验室,采用WHO推荐的Pn PSELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证.同时以调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay,OPA)测定针对13个血清型的调理吞噬滴度.结果 制备了5 000支(0.5 ml/支)冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3％.确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P＜0.05);以09CS为标准检测的89SF的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均＜20％.确立了09CS中13价PCV血清型调理吞噬滴度.结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度.
作者：赵志强；王欣茹；石继春；王浩；刘方蕾；乔瑞洁；吴兵；王弢；何彦林 刊期： 2014年第12期
目的 在大肠埃希菌中表达登革病毒(Dengue virus,DENV)1型(DENV-1)E蛋白第三结构域(EⅢ),并分析重组蛋白的免疫原性.方法 利用PCR技术从质粒pMD-D1 prM/E中扩增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-D 1EⅢ,转化至E coli Rosetta2(DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备多克隆抗体,采用Western blot法检测抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体滴度,蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测中和抗体效价.用纯化的重组蛋白免疫经腹部皮下多点注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1(Hawaii株)经脑内攻击,分析重组蛋白对小鼠的免疫保护力.结果 重组原核表达质粒pET-D1EⅢ经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,主要以可溶性形式表达,占重组菌裂解上清蛋白量的52.37％;纯化的纯度可达90％以上,浓度达2 mg/ml;制备的多克隆抗体特异性强,效价高;重组蛋白能保护57.1％的小鼠免受致死剂量DENV的攻击.结论 成功在E.coli Rossetta2(DE3)中高效表达了DENV-1 EⅢ蛋白,纯化的重组蛋白免疫家兔获得的多克隆抗体具有较强的特异性和较高的效价,且在小鼠免疫保护试验中显示出较好的保护力.本实验为进一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的开发奠定了基础.
作者：汪伟；李竹石；谭帅；赵宇；刘莉娜；刘俐；蔡峰；曾献武；杨会强 刊期： 2014年第12期
目的 建立检测无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)中百日咳毒素(pertussistoxin,PT)活性的胎球蛋白结合试验ELISA方法.方法 优化APV中PT残余含量的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法,分析不同抗原稀释液对该方法的影响,并对该方法进行线性、精密度、灵敏度、特异性验证.分析丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)、百日咳黏着素(pertactin,Prn)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT),破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)在成品疫苗剂量时(即50 μg/ml、16 μg/ml、25 Lf/ml、7Lf/ml)对PT与胎球蛋白结合的影响,确定疫苗解吸附条件,并对不同厂家的8批吸附无细胞百白破联合疫苗进行解析附后,检测PT含量,计算CV.结果 在胎球蛋白包被浓度为5 μg/ml时,使用pH8.5含1％胎牛血清白蛋白(BSA)Tris缓冲液对样品进行稀释后,直接用酶标抗PT抗体进行检测,建立的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法的剂量反应曲线线性良好(r均＞0.99);试验内CV为13.74％ ～5.85％,试验间CV为2.75％～10.39％,灵敏度可达4 ng/ml,精密度好,灵敏度高;降低了PTd的干扰作用,特异性较好.FHA、Prn、DT、TT在成品疫苗剂量时对PT与胎球蛋白的结合无影响;确定疫苗解吸附条件为Tris-柠檬酸钠溶液(4％,w/v)(pH 8.5);各批疫苗3次检测结果的CV值均符合要求,重复性较好.结论 优化后的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法可用于APV中残余PT含量的检测.
作者：夏德菊；潘殊男；杨云凯；周第；金萧；王珣；张萍；肖詹蓉 刊期： 2014年第12期
目的 采用汉逊酵母系统表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)31和33型L1蛋白类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs),纯化后检测其免疫原性.方法 将表达HPV31和HPV33 L1蛋白的重组汉逊酵母工程菌经高密度发酵,收集菌体,进行高压均质破碎后,采用亲和层析法纯化HPV31和HPV33 L1 VLPs,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,透射电镜观察VLPs形态,动态光散射仪分析VLPs粒径大小及分布情况.将BALB/c小鼠随机分为3组:HPV31 L1 VLP组(蛋白含量0.5 μg,铝含量0.24 mg)、HPV33 L1 VLP组(蛋白含量0.5μg,铝含量0.24 mg)和佐剂对照组(铝含量0.24 mg),分别于0、1、3周经腹腔注射免疫小鼠,于每次免疫后1周经眼球采血,分离血清,采用假病毒中和试验检测血清中和抗体滴度.结果 纯化的HPV31和HPV33 L1重组蛋白相对分子质量约为56 000,可与HPV L1通用型单克隆抗体发生特异性结合.经透射电镜及动态光散射观察,可见VLPs形成,但部分L1蛋白以五聚体的壳粒形式存在,未包装成颗粒.HPV31和33 L1 VLPs初次免疫后1周,即能诱导BALB/c小鼠产生较高滴度的血清中和抗体,且明显高于佐剂对照组(P＜0.05),随着免疫次数的增加,HPV31L1 VLP组和HPV33 L1 VLP组免疫小鼠血清中和抗体滴度也相应增加.结论 应用汉逊酵母可高效表达HPV31和HPV33 L1重组蛋白,并形成VLPS.用含铝佐剂的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,具有较好的免疫原性,可作为多价重组HPV疫苗的组分抗原.
作者：高波；张靖；张学峰；王立莉；梁宇；李启明 刊期： 2014年第12期
目的 分析乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性.方法 按照《中国药典》三部(2010版)及武汉生物制品研究所有限责任公司《乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠返祖传代试验及小鼠脑内致病力试验SOP》,对随机抽取的28批乙型脑炎减毒活疫苗进行乳鼠返祖传代试验的脑内致病力检测,同时测定发病乳鼠脑组织悬液的病毒滴度,并应用SPSS 13.0软件对28批疫苗病毒滴度、发病乳鼠脑组织上清病毒滴度及发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力检测结果进行Kendall相关性分析.结果 28批乙脑减毒活疫苗病毒滴度为6.0～7.1 LgPFU/ml,发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力(LD50)均低于3.0 LgLD50/0.03 ml,发病乳鼠脑组织上清病毒滴度为5.8～ 7.0 LgPFU/ml.发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力与疫苗滴度及发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间不存在相关性,而疫苗滴度与发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间低度相关.结论 乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定,乳鼠传代返祖试验及其判定标准科学严谨,用于疫苗的质量控制是可行的,进一步表明SA14-14-2株遗传稳定性良好.
作者：杨邦玲；王洪强；王凯；王晓丹；李玉华 刊期： 2014年第12期
目的 分析吸附无细胞百白破联合疫苗(adsorbed diphtheria-tetanus-acellular pertussis combined vaccine, DTaP)细菌内毒素检查方法的可行性.方法 确定供试品大有效稀释倍数(maximumvalid dilution,MVD),并将两个厂家的鲎试剂(λ=0.25 EU/ml)进行灵敏度复核试验后,按照《中国药典》三部(2010版)附录ⅫE细菌内毒素检查法要求,采用稀释法进行供试品干扰试验,确定无干扰稀释倍数;采用凝胶限量试验对13批DTaP进行细菌内毒素检测,并采用动态显色法定量检测其中6批DTaP细菌内毒素含量.结果 供试品MVD为800倍;两个厂家鲎试剂灵敏度均在0.125～0.5(0.5～2λ)范围内,符合《中国药典》三部(2010版)规定的标准.将DTaP稀释400倍可排除干扰.13批DTaP凝胶限量试验结果均＜12EU/剂,其中6批DTaP动态显色法结果均＜2.5EU/剂,相同6批疫苗两种检测方法的结果趋势一致.结论 凝胶限量试验与动态显色法均可用于DTaP细菌内毒素检查,但凝胶限量试验更经济,操作更简便,适用范围更广.
作者：刘晓凤；唐朝晖；邓杰；周晓舟；张飞伟；秦敏 刊期： 2014年第12期
目的 观察国产冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞微载体)的接种反应和免疫原性.方法 在山东省高密市按临床方案的入选标准选取年龄在10～60岁,身体健康,无犬伤史、狂犬病疫苗接种史及该疫苗接种禁忌证的志愿者,分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期进行临床试验,按照免疫程序,接种国产冻干人用狂犬病疫苗,Ⅱ期临床试验以进口同类疫苗作为对照,进行接种反应和免疫原性观察.结果 试验组疫苗接种后,不良反应发生率低,以人数计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期不良反应发生率分别为6.1％、7.8％和7.7％,未见中、强反应,反应均为注射部位疼痛,不伴有局部红肿和硬结,为局部弱反应,未出现体温升高等全身反应,72 h时疼痛消失.Ⅱ、Ⅲ期临床免疫后,血清抗体阳转率14和45 d均为100％.试验组与对照组不良反应发生率和免疫后血清抗体阳转率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 国产冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞微载体)接种反应轻微,且具有良好的免疫原性.
作者：吴金妍；王琰；储艳；柴文清；毛树宝 刊期： 2014年第12期
目的 研究腺苷A2B受体激动剂Bay60-6583对脓毒症模型小鼠的治疗作用.方法 采用腹腔注射活金葡菌(108 CFU)制备小鼠脓毒症模型,观察Bay60-6583(2 mg/kg)、头孢曲松钠(25 mg/kg)单独或Bay60-6583与头孢曲松钠(2 mg/kg+25 mg/kg)联合给药对脓毒症模型小鼠的治疗效果,设正常对照组和感染组.采用ELISA试剂盒检测给药后小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,并使用血球计数板计数小鼠腹腔灌洗液中白细胞数.结果 Bay60-6583和头孢曲松钠单独给药均降低脓毒症模型小鼠死亡率,但联合给药组几乎完全消除小鼠死亡,与感染组或单独给药组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Bay60-6583单独或联合给药均明显降低小鼠血清中炎性细胞因子含量(P＜0.05),但不改变小鼠腹腔灌洗液中白细胞数(P＞0.05),而头孢曲松钠单独用药则略微降低血清中TNF-α 、IL-1β和IL-6的含量(P＞0.05).结论 Bay60-6583通过抑制脓毒症小鼠炎性细胞因子表达发挥其治疗作用,与头孢曲松钠联合用药是合理的脓毒症治疗策略.
作者：王慧；李晓鸥；张晓伟；王志武 刊期： 2014年第12期
目的 使用无血清培养基体外分离培养人牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC),并分析其生物学特性.方法 分别用有血清培养体系(SCM:含10％胎牛血清的DMEM)和无血清培养体系(SFM:化学成分明确的、无动物源成分的市售培养基MesenCult-XF medium)培养人DPSC,倒置显微镜下观察细胞生长、增殖情况及形态特征.细胞传至5代后,检测两种培养基培养的细胞的增殖能力、免疫表型和分化能力.结果 SFM与SCM培养的细胞形态相似,但SFM培养的细胞外形显得纤细、细长,立体感更强;SFM与SCM培养的人DPSC有相似的增殖能力、细胞表型和分化能力,且SFM培养的人DPSC成骨和成软骨分化能力更强.结论 本实验表明,SFM能够在体外培养扩增人DPSC,并维持其干细胞特性,包括自我更新能力(集落形成能力)和多向分化潜能,可取代FBS用于细胞治疗及生物医学研究.
作者：钟萌；赵奎君；马致洁 刊期： 2014年第12期
目的 制备富铁亚硝基猪血红素肽.方法 以新鲜猪血为原料制备血红蛋白,分别取胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶及碱性蛋白酶,在各自适温度和pH条件下水解,有限酶解成较长的多肽链,分析水解效果,选择适酶进行酶解条件确定试验.取酶解后的产物,合成富铁亚硝基血红素肽,定性检测合成肽产物.结果 综合螯合物颜色和铁螯合活性,确定佳酶解用酶为胰蛋白酶.佳酶解条件为:底物浓度10％,加酶量5 000 U/g,反应时间4h,在此条件下,水解产物与亚硝酸钠反应生成亚硝基血红素肽,且螯合铁的效果好.定性检测显示,产物中生成了亚铁血红素肽及亚硝基血红素肽.结论 成功制备了富铁亚硝基猪血红素肽.
作者：潘风光；陈艳；赵静；王占博；杨巍；朱丹 刊期： 2014年第12期
目的 探讨重组戊型肝炎疫苗对大鼠的生殖毒性.方法 将Wistar雌性大鼠分为4组:低剂量组(每只20 μgHEV)、高剂量组(每只40 μg HEV)、生理盐水对照组及佐剂对照组,每组30只.雌鼠于交配前给药2次,初次给药后2周进行2次给药,2次给药后1周,进行雌雄鼠合笼交配,于妊娠7和14d进行3、4次给药.每天观察雌鼠一般临床症状;交配前每周称雌鼠体重1次,交配后每周称体重2次,每周定期测定1次摄食量;于妊娠21 d安乐死孕鼠,分离出胎仔,检测疫苗对雌鼠生殖能力、胎仔发育、胎仔骨化程度、胎仔内脏畸形的影响,取孕鼠和胎仔血液,分离血清,ELISA法检测抗HEV IgG抗体水平.结果 各组大鼠精神状态未见异常,皮毛光亮,灵敏,大小便色正成形,注射局部未见充血、肿胀、溃烂、硬结等;疫苗对孕鼠体重、摄食量均无明显影响(P＜0.05);各剂量组窝平均着床数、窝平均黄体数、窝平均活胎数、受孕率、活胎率、吸收胎率、死胎率、畸胎率与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05);各剂量组胎仔身长、尾长、体重、胎盘重和性别比与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05);各剂量组胎仔上枕骨的骨化程度均在0级和Ⅰ级正常范围以内,胸骨骨化不全率与生理盐水及佐剂对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);各组胎仔内脏均未见畸形;孕鼠及胎仔血清中均检测到抗HEV IgG抗体.结论 重组戊型肝炎疫苗对孕鼠及胎仔安全、有效.
作者：王甲男；曹玉锋；陈子杨；李雨桐；刘玉林 刊期： 2014年第12期
目的 分析北京市朝阳区部分婴幼儿肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染率及手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)发病情况.方法 选择北京市朝阳区小红门、酒仙桥社区6～ 35月龄健康婴幼儿为观察对象,共采集血清414份,检测中和抗体水平,并采集符合“可疑肠道病毒病”入选标准患者的咽拭子和肛拭子标本,应用RT-PCR法进行其他肠道病毒EV-G、柯萨奇病毒A16型(Coxsackie virus type A16,CA16)、EV71特异性核酸筛查.同时对观察对象进行1年随访,调查HFMD发病情况.将观察对象分为6～11月、12～ 17月、18 ～ 23月、24 ～ 29月、30～35月5个月龄组.结果 414名观察对象中,EV71中和抗体阳性39人,阳性率为9.42％,随着月龄的增加,阳性率呈递增趋势(P＜0.001);男性婴幼儿EV71中和抗体阳性率为8.90％ (17/191),女性为9.87％ (22/223),二者差异无统计学意义(P＞0.05).414名观察对象中,29例肠道病毒阳性,其中女性14例,男性15例,男女发病比例为1.07:1;CA16感染率为31.03％(9/29),EV71感染率为17.24％(5/29),其他肠道病毒感染率为51.72％(15/29).尚不能认为男女性别间肠道病毒感染及EV71和CA16感染的构成比有差别,也不能认为EV71中和抗体情况对肠道病毒感染率和EV71发病率有影响;随着年龄的增长,EV71感染人数呈递增趋势,而CA16则保持不变;小红门社区EV71中和抗体阳性率(12.25％)与酒仙桥社区(4.45％)差异有统计学意义(P＜0.05).结论 月龄越大,婴幼儿血清EV71抗体阳性率越高;小红门和酒仙桥地区检测到的HFMD患儿主要病原体为CA16和EV71,且CA16感染率高于EV71感染率.
作者：郑东旖；刘兆秋；艾星；韩慧霞；傒佶；白云骅；李丽；时念民 刊期： 2014年第12期
目的 制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定.方法 用重组蛋白pGEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类.采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度.结果 终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于IgG1和IgG2b亚类.纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×104和1.024×105,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应.结论 制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础.
作者：田来明；杨滨僮；张桐嘉；宫鹏涛；李建华；王全楷；杨举；李赫；王伟丽 刊期： 2014年第12期
目的 探讨NaHCO3缓冲体系的动态变化对培养法支原体检查的干扰作用,确保生产过程中支原体污染检查的准确性.方法 用NaHCO3缓冲液和NaOH分别调整狂犬病病毒收获液及不含病毒样本的病毒稀释液pH至6.92、7.51、7.65、7.85、8.04和8.48,分别接种于支原体半流体培养基和精氨酸支原体肉汤培养基,进行培养法支原体检查,检测结果为阳性的样品分别用指示细胞法(DNA染色法)和实时荧光PCR法进行复检.结果 用NaHCO3缓冲液调整狂犬病病毒收获液pH值至7.85以上时,培养法支原体检查结果为阳性,但指示细胞法(DNA染色法)和实时荧光PCR法复检结果均为阴性,排除样品污染支原体的可能性.结论 用NaHCO3调整病毒培养物等生物样品pH值达7.85以上时,对培养法支原体检测结果产生干扰作用.
作者：刘辉；李婷婷；邱璐；张波；崔越；戴长河；林洪娟；夏青娟；惠琦 刊期： 2014年第12期
目的 比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性.方法 以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测.结果 经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85％左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95％以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45％以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性.结论 经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性.本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质.
作者：吴兵；范锋锋；刘方蕾；于旭博；王欣茹；罗树权；方红春；李燕婷；陈作江 刊期： 2014年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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