朱攀；井申荣；曾韦锟；黄芬
目前流感疫苗血凝素含量常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID).为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究.本文对近1 0年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述.
作者：刘朝阳；孟佳帆；程鹏飞 刊期： 2013年第04期
目的 探讨普洱茶发酵过程中咖啡因的存在形式及游离咖啡因含量的变化,为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供依据.方法 应用低pH沉淀结合高效液相色谱法(HPLC)检测普洱茶发酵全程中6个主要发酵阶段[一翻、二翻、三翻、四翻、五翻样品和出堆样品(熟茶)]样品的游离咖啡因和结合咖啡因含量.结果 普洱茶发酵过程中,游离咖啡因含量逐渐降低,从一翻样品的(2.555±0.104)％降至出堆样品的(1.878±0.049)％,超过1/4的咖啡因与茶中的其他组分相结合,形成结合咖啡因.结合咖啡因的含量不断增加,四～五翻期间增幅大,从0.084％增至0.647％;出堆样品中结合咖啡因的含量高,为0.703％.结论 发酵过程中,普洱茶中的游离咖啡因含量逐渐降低.本实验为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供了依据.
作者：王腾飞；王宣军；黄业伟；方崇业；朱强强；杨军；盛军；郝淑美 刊期： 2013年第04期
目的 构建抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,并对表达产物进行鉴定.方法 采用脂质体法将抗人CD4嵌合抗体质粒pHDC4稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压筛选抗人CD4嵌合抗体稳定表达株,经细胞工厂扩大培养.收集培养上清,经Protein A亲和层析纯化目的抗体,激光共聚焦显微镜观察抗体基因在细胞内的表达,并分别进行质谱分析、蛋白质N-末端测序和平衡解离常数(KD)的测定.结果 构建的抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株的抗体表达水平为4.29 ～ 10.52 μg/ml;BCA测得纯化回收后的抗体表达水平为12.68 mg/L;激光共聚焦检测显示,抗CD4嵌合抗体稳定表达细胞株可稳定表达人的恒定区和鼠的可变区；质谱分析表明,其含有鼠源性和人源性成分；蛋白质N-末端氨基酸测序表明,其轻链与亲本抗体N-末端氨基酸序列完全一致；其KD为2.67×10-9M.结论 成功构建了抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,其表达的抗人CD4嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合特异性和亲和力.
作者：胡迪超；张爱华；杨晓明 刊期： 2013年第04期
目的 观察鼠疫噬菌体对感染鼠疫小鼠的治疗作用,以寻找治疗鼠疫感染的新方法.方法 小鼠经皮下感染141株鼠疫菌建立鼠疫感染模型后,用效价为10-11的鼠疫噬菌体对短期治疗组在感染后3、6、12和24 h给予100μl/次的注射治疗,对长期治疗组在感染后1 ～7d连续注射鼠疫噬菌体,100 μl/次,1次/d.同时,设阴性对照组(不感染,只治疗,观察噬菌体对小鼠的毒性)和阳性对照组(仅感染,不治疗).结果 阴性对照组小鼠治疗14d后全部存活,处死后剖检未检出鼠疫菌.各治疗组小鼠在治疗第5天存活率为100％,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；长期腹腔治疗组效果明显,鼠疫噬菌体在小鼠体内存活时间长,效价不降低.结论 鼠疫噬菌体对感染小鼠急性感染期的治疗有一定效果,长期腹腔注射治疗效果较好,为其进一步应用于抗感染治疗提供了实验依据.
作者：张珊瑚；祁芝珍；张青雯；赵海红；辛有全；金泳；仇杰 刊期： 2013年第04期
目的 观察链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的雄性大鼠高血糖对子代生长发育及代谢的影响.方法 将健康雄性SD大鼠随机分为对照组(CON)和STZ组,STZ组经腹腔注射STZ(35 mg/kg)建立雄性大鼠糖尿病模型,CON组经腹腔注射pH4.2的枸橼酸钠缓冲溶液.两组雄鼠分别与健康SD雌鼠按1:2比例交配.雌鼠分娩后,称量两组子代出生体重,并连续监测体重变化和进食量；采用自动血糖仪和血糖试纸检测空腹血糖水平；18和22周时进行葡萄糖耐量试验(Glucose tolerance test,CTT)和胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test,ITT)；计算肝重/体重指数；全自动生化分析仪检测血脂水平.结果 STZ组子代出生体重和后期体重及每日进食量均始终显著低于CON组(P＜0.05或P＜0.01)；第18周,STZ组与CON组子代葡萄糖耐量及胰岛素耐量差异均无统计学意义(P＞0.05)；第22周时,STZ组子代葡萄糖耐量在第15、30、60 min显著高于CON组(P＜0.05),胰岛素耐量在各检测时间点均显著高于CON组(P＜0.05)；STZ组与CON组子代肝重/体重指数差异无统计学意义(P＞0.05)；STZ组子代血清中甘油三酯含量明显低于CON组(P＜0.05).结论 父代高血糖对子代的出生体重和生长趋势有显著影响,且能显著改善子代的胰岛素耐量.
作者：李靖娜；宋勇；李继斌；刘治国；陈笑宜；张琪娟；肖晓秋 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达重组EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)Zta蛋白,并进行纯化.方法 PCR扩增EBV B95-8株BZLF1n氨基端基因,分别插入pThioHisA和pcDNA3.1载体中,构建重组表达质粒pThioHisA-BZLF1n和pcDNA3.1-BZLF1n.用pcDNA3.1-BZLF1n质粒免疫ICR小鼠,制备抗血清.将质粒pThioHisA-BZLF1n转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化诱导表达条件.表达产物经亲和层析后,用肠激酶切割,再经离子交换层析,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约为32 000; IPTG终浓度为0.1 mmol/L,37℃诱导6h,目的蛋白的表达量高,占菌体总蛋白的30％以上；重组蛋白以包涵体和可溶性两种形式表达.纯化的重组蛋白相对分子质量约为18 000,纯度大于95％,可与制备的小鼠抗血清发生特异性反应.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组EBV Zta蛋白,纯化的重组蛋白纯度较高,特异性良好,为EBV相关疾病的早期诊断筛查奠定了基础.
作者：孙静；傅晶晶；蔡泓志；施建东；石怀生；胡云章；胡凝珠 刊期： 2013年第04期
目的 在大肠杆菌中融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)TB10.4蛋白与呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白.方法 从MTB标准菌株H37Rv全基因组中扩增TB10.4(N/X)和TB10.4(N/B)基因,分别插入原核表达载体pET-28a和pET-30a中,构建重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4(N/B)/pET-30a;从F/18T/DH5α菌株中扩增F1(B/X)基因,与TB10.4(N/B)/pET-30a质粒连接,构建重组表达质粒TB10.4-F1/pET-30a;将质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a分别转化感受态E.coliBL21 (DE3),IPTG诱导表达；表达的重组蛋白进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组TB10.4和TB10.4-F1蛋白相对分子质量约为13 000和59 000,可与鼠抗His单抗特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达了重组融合蛋白TB10.4-F1,为进一步研究其免疫原性及保护性奠定了基础.
作者：王瑞博；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+ LPS组.AP+ LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3d,第3天注射后2h,LPS组和AP+ LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10％甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化；免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达；Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB (Phospho-inhibitor of κB,p-IκBα)和p-NF-κB (P65)蛋白的表达.结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应；AP+ LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少.与LPS组相比,AP+ LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制；p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P＜0.05).结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化.
作者：管弦；朱涛；王导新 刊期： 2013年第04期
《中国药典》三部是对生物制品质量标准和检定方法的技术规范,是生物制品生产、供应、使用和监管共同遵守的法定依据.《中国药典》三部的前身是《中国生物制品规程》,自第一部生物制品国家标准《生物制品法规》(1952年版)颁布以来,历经《生物制品制造及检定规程》(1959年版),《生物制品规程》(1979年版),《中国生物制品规程》(1990年版、1995年版、2000年版),2002年10月,第八届药典委员会成立后,《中国生物制品规程》并入药典,设为药典三部.
作者：王晓娟；曹琰；郭中平 刊期： 2013年第04期
目的 观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制.方法 分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P＜0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响.结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用.
作者：李化光；刘华；孙洁；刘肃；张林西；王文；郭佳；赵琛；赵增虎 刊期： 2013年第04期
目的 评价近年重组人粒细胞集落刺激因子(Recombinant human grenulocyte colony-stimulatiny factor,rhG-CSF)的生物学活性及其检测方法的应用情况.方法 采用mNFS-60细胞/MTT比色法对41批不同来源的rhG-CSF进行生物学活性检测,对中国食品药品检定研究院与各生产企业的检测结果进行比较,评价中国食品药品检定研究院检测rhG-CSF生物学活性结果的可信性.结果 37批国产rhG-CSF的生物学活性检测结果均符合《中国药典》三部(2010版)质量要求,4批进口rhG-CSF的生物学活性均符合进口拟定质量标准(JS20070016)要求.中国食品药品检定研究院与各企业的rhG-CSF生物学活性检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 近年上市的rhG-CSF生物学活性达到《中国药典》三部(2010版)质量要求；该制品的生物学活性检测方法在全国范围内应用情况良好.
作者：刘兰；史新昌；饶春明 刊期： 2013年第04期
目的 观察柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因核酸疫苗对E.tenella感染雏鸡的免疫保护效果.方法 取14日龄雏鸡,随机分为7组:pVAX 1-Serpin高剂量组(100 μg/只)、pVAX1-Serpin中剂量组(50 μg/只)、pVAX1-Serpin低剂量组(25μg/只)、pVAX1组(50μg/只)、E.tenella卵囊组(15日龄时,口服5 000个卵囊/只,不加强免疫)、未免疫攻虫对照组(0.1 ml PBS)和未免疫未攻虫对照组(0.1 ml PBS),除E.tenella卵囊组外,均经胸肌注射免疫,21日龄时加强免疫1次,28日龄时,除未免疫未攻虫对照组外,均经口感染1×104个E.tenella孢子化卵囊.攻虫后第8天剖杀,计算各组的存活率、平均增重、相对增重率、盲肠病变减少率、卵囊减少率及抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI).结果 未免疫攻虫对照组和pVAX1组的存活率分别为75％和70％,其余各组的存活率均为100％.pVAX1-Serpin高、中剂量组、E.tenella卵囊组和未免疫未攻虫对照组的平均增重2均较未免疫攻虫对照组显著增加(P＜0.05),其中pVAX1-Serpin高剂量组相对增重率2达95.26％;E.tenella卵囊组、pVAX1-Serpin高、中剂量组的盲肠病变记分明显低于pVAX1组和未免疫攻虫对照组(P＜0.05),前两组病变减少率较高；各免疫组卵囊产量均较未免疫攻虫对照组显著下降(P＜0.05),pVAX1-Serpin高剂量组卵囊减少率达67.04％;各免疫攻虫组ACI值均高于未免疫攻虫对照组,其中E.tenella卵囊组高(181.23),pVAX1-Serpin高剂量组次之(166.26),而pVAX1-Serpin中、低剂量组和pVAX1组均小于160.结论 高剂量pVAX1-Serpin对鸡E.tenella感染具有一定的免疫保护作用.
作者：李文超；顾有方；杜玲；宫鹏涛；李建华；张西臣 刊期： 2013年第04期
目的 了解重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2010年8～11月就诊的5岁以内腹泻患儿的粪便标本共500份,采用胶体金法检测A组轮状病毒(Rotavirus,RV),RT-PCR法检测B、C组RV、诺如病毒(Norovirus,NV)G Ⅰ和GⅡ、肠道腺病毒(Adenovirus,ADV)、札如病毒(Sapovirus,SLV)和星状病毒(Astrovirus,ASV),取NV和SLV阳性PCR产物测序,并对病毒基因进行分型.采用MEGA 5.05软件构建进化树,Kimura's two-parameter法计算遗传距离,邻接法(Neighbor-joining)boot-strap重复检验1 000次.结果 500份标本中,检测到A组RV阳性标本134份,阳性率为26.8％; NV GⅡ型阳性标本132份,阳性率为26.4％; ADV阳性标本31份,阳性率为6.2％; SLV阳性标本9份,阳性率为1.8％;ASV阳性标本1份,阳性率为0.2％；未检测到B、C组RV和NV GⅠ型.随机选择22份NV阳性标本进行测序及基因分型,其中GⅡ/4占绝对优势,其次为GⅡ/6、GⅡ/2、GⅡ/3和GⅡ/7.SLV可分为4个基因亚型,其中GⅠ/1为优势株,其次为GⅠ/2、GⅡ/1和GⅠV1.结论 重庆地区5岁以下儿童腹泻以病毒感染为主,RV是主要的病原体,其次为NV、ADV、SLV和ASV.
作者：任增志；孔元梅；王倩倩；黄爱龙；钟晓妮；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serum albumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性.方法 在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白；检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响.结果 重组表达质粒经测序证实构建正确；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵 获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力；酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平.结论 成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性.
作者：李俊毅；彭林；唐存多；邬敏辰；金坚 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达并纯化牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2蛋白.方法 采用PCR法从牛Ⅱ型链球菌基因组DNA中扩增van B2基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-van B2,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 PCR扩增获得597 bp的van B2基因片段；重组表达质粒pET-28a-van B2经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组van B2蛋白相对分子质量约为29 000,主要以可溶性形式表达；纯化的重组蛋白纯度为70％,可被小鼠抗牛链球菌血清Ⅱ型多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白,为van B2基因的耐药性研究奠定了物质基础.
作者：刘燕；布日额；李艳军；白靓；锡林高娃；郭闯 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58型截短型L1 (Truncated L1,tL1)蛋白与结核分枝杆菌早期分泌型抗原靶蛋白-6(Early secreted antigenic target-6,ESAT-6)融合蛋白,并制备其抗血清.方法 利用PCR技术分别从HPV基因组DNA和ESAT-6-18T质粒DNA中扩增tL1和ESAT-6基因,构建重组原核表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a,分别转化E.coli BL21(DE3)和Rosetta,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白ESAT-6-tL1经镍离子亲和层析柱纯化后免疫昆明小鼠,ELISA检测血清抗体效价.结果 PCR扩增出750 bp的tL1基因片段和320 bp的ESAT-6基因片段,测序结果与GenBank登录的序列一致；重组表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a经双酶切鉴定,构建正确；表达的ESAT-6-tL1融合蛋白相对分子质量约40 000,在E.coli Rosetta中的表达形式为包涵体,纯化后纯度为85％,免疫小鼠血清抗体效价为1:4 000.结论 成功表达了ESAT-6-tL1融合蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研制检测HPV58的抗体奠定了基础.
作者：朱攀；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用.方法 多糖蛋白结合物原液的混合液经HC1水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测.筛选样品的水解条件；对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用.结果 确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1h.载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰；重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5％；准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90％ ～ 110％之间.HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当；成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4 μg/剂).结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定.
作者：李冶珊；刘梅影；陈敬；林海涛；王平 刊期： 2013年第04期
目的 构建仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,并进行初步筛选.方法 用仙台病毒Tianjin株免疫小鼠,制备脾细胞悬液,提取小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR扩增鼠抗体轻链(κ链)和重链Fd基因,将轻链基因和噬菌粒p3MH经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后纯化回收,经T4 DNA连接酶连接,电转化E.coli XL1-Blue,构建轻链库；将重链Fd段基因和轻链库p3MH-κ经Spe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,纯化回收并连接,电转化E.coli XL1-Blue,获得噬菌体抗体库,计算重组率和抗体库滴度.以仙台病毒Tianjin株重组蛋白HN2为抗原进行初步筛选,制备噬菌体抗体,并进行测序.结果 构建的免疫噬菌体抗体库库容为1.18×107,重组率为90％,制备的噬菌体抗体滴度为1011 pfu/ml；经初步筛选,噬菌体富集了约63.6倍,获得2株与重组蛋白HN2有结合活性的阳性克隆,经NCBIBLAST进行同源性分析,显示为鼠源性抗体,经IMGT分析,显示轻链基因与VK9亚群基因的同源性为94.87％,重链基因与VH7亚群基因的同源性为97.85％.结论 成功构建了仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,为该病毒株的诊断、疾病治疗及致病机制等研究奠定了基础.
作者：李霞；李晓绵；石立莹；李梅 刊期： 2013年第04期
目的 探讨神经肽P物质(Substance P,SP)对高氧损伤早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)氧化/抗氧化状态的影响.方法 将分离培养的原代早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气组(将细胞置5％ CO2、21％O2的孵箱中)、高氧组(将细胞置5％ CO2、95％ O2的密闭氧仓中)、高氧SP组(细胞培养液中预先加入5×10-8 mol/L的SP,再置高氧中)和高氧SP受体拮抗剂组(细胞培养液中预先加入5×10-8 mol/L的SP和5×10-7 mol/L的L703.606,再置高氧中),各组细胞培养24 h后,镜下观察细胞形态的变化；MTT法检测细胞的增殖活力；流式细胞术检测细胞周期；JC-1探针法检测细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化；化学比色法检测细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(Total antioxidative capacity,TAOC)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的活力.结果 与空气组比较,高氧组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显下降(P＜0.01),MDA含量明显升高(P＜0.01)；与高氧组比较,高氧SP组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显升高(P＜0.01),而MDA含量明显下降(P＜0.01),SP受体拮抗剂可阻断该效应.结论 SP可明显减轻高氧导致的早产大鼠AECⅡ的氧化损伤,增强细胞的抗氧化能力,进而起到促进细胞增殖的作用.
作者：董欣鑫；姚兰；方芳；许峰 刊期： 2013年第04期
目的 构建胰岛素诱导基因-2(Insulin induced gene-2,Insig-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其转录活性.方法 从人基因组DNA中扩增Insig-2基因转录起始位点上游1 389 bp的启动子片段,插入pGL3-basic质粒中,构建重组质粒pGL3-Insig-2,将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染HEK293、HepG2和3T3-L1细胞,采用双荧光素酶法检测Insig-2启动子活性.结果 重组质粒pGL3-Insig-2经双酶切和DNA测序,证实构建正确；pGL3-Insig-2质粒在HEK293、HepG2和3T3-L1细胞中均具有启动子活性,分别为阴性对照组(pGL3-basic空载体)的28、40和214倍、阳性对照组(pGL3-SV40)的2.6、5.5和30倍,呈现出强启动子活性.结论 成功构建了Insig-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,为后续Insig-2基因的深入研究奠定了基础.
作者：杨发建；张琴；何芸；周龙洋；卜友泉；孙文娟；何百成；杨俊霞 刊期： 2013年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
