张平；徐颖华
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因启动子区CpG岛甲基化及甲基化位点与儿童白血病临床特征的相关性.方法 收集儿童白血病患者173例(Leu组),根据白血病亚型不同分为:急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)94例、急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML)52例、慢性粒细胞白血病(chronic granulocytic leukemia,CML)19例及复发难治的白血病(acute leukemia,AL)8例(ALL 5例,AML 3例),以非恶性血液病(NL组)42例作为对照.分离患者外周血单核细胞,提取基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,采用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MS-PCR)法分别检测Leu组、NL组患者外周血标本单个核细胞中hTERT基因启动子区两个CpG岛不同位点甲基化情况,并分析其与儿童白血病临床特征的相关性.结果 hTERT基因启动子区CpG岛在NL组呈完全非甲基化,在复发难治的白血病组呈甲基化状态.NL组外周血中hTERT基因启动子区2号CpG岛(-2016 ～-1532和-1415 ～-1151)呈完全非甲基化状态,而Leu组呈甲基化状态,且甲基化更易发生在1号和2号(-2016～-1532)位点,但hTERT基因启动子区l号CpG岛甲基化在NL组和Leu组中差异无统计学意义(P＞0.05).hTERT基因启动子区甲基化与患者年龄、外周血白细胞数、免疫分型、细胞遗传标志及危险分级相关(P＜0.05),与患者性别、融合基因无关(P＞0.05).结论 儿童白血病患者hTERT基因启动子区CpG岛易发生甲基化,与甲基化位点分布相关,对儿童白血病的诊断具有重要意义.
作者：李康；祁新坤；张鹏辉；邹琳 刊期： 2013年第07期
目的 建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法.方法 采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品；确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性；用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测.结果 建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上；检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线；检测高、中、低浓度的DNA标准品(105、103、101 pg/ml)的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围(50％ ～ 200％)内,批间变异系数分别为9.3％、21.8％、26.8％；检测100 pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6％,变异系数为20.4％；康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量.结论 已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法.
作者：牛冬云；连炜；何静；邬智刚；柯潇 刊期： 2013年第07期
目的 在毕赤酵母中表达重组人血管内皮生长因子(recombinant human vascular endothelial growth factor,rhVEGF) 165b(rhVEGF-165b),并进行纯化.方法 PCR扩增hVEGF165b基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9k,构建重组表达质粒pPIC9k-VEGF165b,Sal Ⅰ酶切线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达.表达产物经Ni-NTA sephrose镍柱纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pPIC9k-VEGF165b经双酶切和测序,证明构建正确；表达的rhVEGF165b蛋白相对分子质量约为23 000,纯化后纯度达90％以上,具有人VEGF的抗原性.结论 成功在毕赤酵母中表达了rhVEGF165b蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
作者：戴惠云；朱瑞宇；雷楗勇；侯颖；陈蕴；金坚 刊期： 2013年第07期
目的 建立重组人组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plasminogen activator,tPA)改构体(TNK-tPA)的质控方法.方法 采用气泡法测定TNK-tPA原液的生物学活性,非还原SDS-PAGE和RP-HPLC法测定其纯度,还原型SDS-PAGE确定其相对分子质量,HPLC-SEC法测定其单链含量,胰酶裂解法分析其肽图,Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列,毛细管等电聚焦电泳法测定其等电点,Lowrry法测定其蛋白质含量,地高辛法测定其外源DNA残留量.按《中国药典》三部(2005版)要求,对TNK-tPA成品进行鉴别试验及外观、pH值、水分含量、无菌、装量、异常毒性等检测.结果 3批TNK-tPA原液的生物学活性为(2.09～2.16)×106 U/ml,比活性均大于3.5×1o5U/mg,因此确定TNK-tPA原液的比活性不得低于3.0×105 U/mg.3批TNK-tPA原液的非还原型SDS-PAGE纯度均大于98.0％,RP-HPLC纯度均大于97.0％；经还原型SDS-PAGE分析可见两条带,相对分子质量分别为68 000和35 000；样品原液的单链含量为75.7％；3批TNK-tPA原液的肽图酶切图谱与理化参考品一致；TNK-tPA原液的N-末端氨基酸序列、等电点、蛋白质含量、外源DNA残留量及成品的鉴别试验结果、外观、pH值、水分含量、无菌、装量、异常毒性等均符合《中国药典》三部(2005版)要求.结论 建立的质控方法可保证产品安全、有效、质量可控,可用于TNK-tPA产品的常规检定.
作者：丁有学；韩春梅；刘兰；陶磊；毕华；王兰；饶春明 刊期： 2013年第07期
目的 构建携带PML(NLS-)基因的重组腺病毒,并观察其对白血病K562细胞增殖的影响.方法 以质粒pCMV-HA-PML(NLS-)为模板,PCR扩增PML(NLS-)基因,与穿梭质粒pAdTrace-TO4连接,构建重组穿梭载体pAdTrace-TO4-PML(NLS-),经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化人感受态BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-),经Pac Ⅰ酶切后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-PML(NLS-),经4轮扩增后,检测其滴度.采用RT-PCR法和Western blot法分别检测重组腺病毒中PML(NLS-)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；将重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖活力的影响.结果 重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-)经PCR和单酶切鉴定,证明构建正确；经4轮扩增,重组腺病毒的滴度为l×1010 pfu/ml;Ad-PML(NLS-)携带的PML(NLS-)能够在AD293细胞中稳定表达；与未感染组和空载病毒感染组相比,重组腺病毒Ad-PML(NLS-)感染的K562细胞的增殖活力明显增强(P＜0.05).结论 成功构建了重组腺病毒Ad-PML(NLS-),其可促进K562细胞的增殖,表明PML(NLS-)可能具有促癌基因的作用.
作者：高远梅；刘北忠；张曦；胡秀秀；钟梁 刊期： 2013年第07期
目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)已酯(Di-2-ethylhexy1 phthalate,DEHP)作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中Notchl的表达及其在隐睾所致不育症中可能发挥的作用.方法 将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分为正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只.玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组SD孕鼠自妊娠第12.5～19.5天,分别每日灌胃玉米油(2ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药.取各组出生后第20天的雄性幼鼠,镜下观察睾丸位置,并统计隐睾发生情况.采用RT-PCR及Western blot法检测各组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正常对照组和玉米油对照组相比,DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠的隐睾发生率明显上升(P＜0.05);DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常对照组和玉米油对照组(P＜0.05).结论 孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,隐睾子代睾丸组织中Notch1表达有改变,并可能与隐睾导致的不育有关.
作者：刘东尧；吴盛德；华燚；何文飞；何昀；陈柏林；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第07期
目的 评价诺华公司生产的b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗的安全性及免疫原性.方法 采用随机、对照、双盲方法,将320名2～5月龄健康婴幼儿按照1:1的比例分为实验组和对照组,实验组接种3剂诺华公司生产的Hib结合疫苗,对照组接种3剂某进口Hib结合疫苗,每剂间隔1个月,接种部位和途径均为上臂三角肌肌肉注射.每剂接种后30 min、6h、24 h、48 h、72 h,对观察对象进行主动安全性观察；每剂接种后4～28d,观察对象主动报告接种疫苗后的不良反应及不良事件发生情况.分别于接种前和全程免疫后28 d采集指血,ELISA法测定Hib-PRP抗体水平,评价疫苗的免疫原性.结果 实验组3针总局部反应发生率为12.67％,对照组3针总局部反应发生率为14.69％,两组差异无统计学意义(P＞0.05)；实验组第1针局部反应发生率明显低于对照组,而第2、3针局部反应发生率高于对照组.实验组3针总全身反应发生率为19.33％,对照组3针总全身反应发生率为22.38％,两组差异无统计学意义(P＞0.05)；实验组与对照组各针次全身反应发生率差异均无统计学意义(P＞0.05).实验组和对照组接种疫苗后,Hib-PRP抗体水平≥1.0 μg/ml的比例分别为97.33％和95.80％,二者差异无统计学意义(P＞0.05)；Hib-PRP抗体水平≥0.15 μg/ml的比例均为100％.实验组和对照组接种疫苗后,Hib-PRP抗体水平分别为(3.82±39.76)和(5.22±43.22)μg/ml.结论 未观察到诺华公司Hib结合疫苗与某进口Hib结合疫苗的安全性和免疫原性存在差别.
作者：罗凤基；李丽；张国辉；张政；王朝云；杨立清；艾星；白云骅；芦强 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性.方法 采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性.结果 重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达.纯化的目的蛋白纯度可达90％,浓度为1.7 mg/ml.纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L.结论 已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础.
作者：杜茜；吴志鹃；蔡雪飞；袁作为；张君；郑建 刊期： 2013年第07期
目的 观察不同剂量重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(recombinated human rabies immunoglobin,rhRIG)注射液人体单次给药的安全性.方法 采用随机、单盲、安慰剂平行对照的方法,对成功筛选的48名健康受试者按照随机数字表进行分组,共分低、中、高3个rhRIG单次给药组(10、20、40 IU/kg),每组12人,每个剂量组均按3∶1设1个安慰剂(rhRIG的赋形剂)平行对照组,每组4人,依次经上臂三角肌(≤2 ml)、臀大肌(≤10 ml)和大腿外侧肌肉(剩余药液)进行肌肉注射.分别在筛选期(入组用药前14 d内)、用药后7、14和42 d记录不良事件(adverseevent,AE)、严重不良事件(serious adverse events,SAE)、局部反应、全身反应的发生情况,并进行生命体征、实验室(血常规、尿常规、血生化)、心电图、胸片、腹部B超检查.结果 不同剂量rhRIG组中共发生7例次AE,分别为谷氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶升高、血白细胞下降、上呼吸道感染、宫外孕,其中宫外孕判断为SAE.上述AE均判断与试验药物无关或可能无关.对照组未发生任何AE/SAE.所有受试者用药后生命体征均未见异常改变.结论 受试者单次肌肉注射10 ～ 40 IU/kg rhRIG后耐受性良好.
作者：王美霞；贾敏；金铭；韩靖；段瑾；王立清；金荣华；李宁；姚家琳 刊期： 2013年第07期
目的 构建含NLS-RARα基因的重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并检测其在K562细胞中的表达.方法 以质粒pGBKT7-PML-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,与穿梭质粒dTrace-TO4连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TO4-NLS-RARα,经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒pAd-NLS-RARα,经Pac Ⅰ酶切线性化后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-NLS-RARα,经4轮扩增后,测定重组腺病毒滴度,并进行PCR及测序鉴定；将重组腺病毒感染K562细胞,采用流式细胞术测定感染效率,RT-PCR法和Western blot法检测NLS-RARα在K562细胞中的转录及表达水平.结果 重组腺病毒Ad-NLS-RARα经4轮扩增后,滴度可达6.9×lO8 pfu/ml,PCR及测序鉴定证明构建正确,对K562细胞的感染效率可达70％左右；重组腺病毒Ad-NLS-RARα携带的NLS-RARα基因可在K562细胞中高效表达.结论 已成功构建了重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并在K562细胞中高效表达了NLS-RARα基因.
作者：胡秀秀；刘北忠；钟梁；高远梅；张曦；吴秀娟；王慧；朱新瑜 刊期： 2013年第07期
目的 采用响应面法优化产低温脂肪酶工程菌C102的 发酵条件.方法 通过单因素试验考察培养基中酵母氮源含量、pH值、甘油含量和甲醇含量对酶活的影响,确定产酶的主要影响条件,在此基础上,根据Box-Benheken中心组合试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,综合考察各因子对低温脂肪酶酶活的影响,建立低温脂肪酶酶活的二次回归模型.结果 培养基中酵母氮源含量、pH值和甲醇含量对酶活的影响显著.适产低温脂肪酶条件为:酵母氮源含量7.3 g/L、pH6.0、甲醇含量9.1 g/L,在此条件下,低温脂肪酶酶活可达42.25 IU/ml,比优化前(28.0 IU/ml)提高了50.9％.结论 利用响应面法优化的发酵条件可显著提高工程菌的产酶能力,为规模化生产低温脂肪酶奠定了基础.
作者：秦新政；杨新平；付建红 刊期： 2013年第07期
目的 应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素.方法 应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应.结果 用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100％；应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应.结论 磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素.
作者：王玉华；王帆；陈露；刘佳；张金玲；时承娟 刊期： 2013年第07期
近年来,随着研究的深入,特异性细胞免疫在百日咳感染和疫苗诱导的免疫保护等方面的作用越来越引起人们的重视.本文就百日咳杆菌主要毒力因子在诱导细胞免疫及免疫调节中的作用、百日咳感染及疫苗免疫接种后诱导产生的细胞免疫应答等方面的研究进展作一综述.
作者：张平；徐颖华 刊期： 2013年第07期
目的 探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定.方法 吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物再经阴离子交换层析,分析纯化产物的分子表面带电性质,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和远紫外圆二色谱(far ultra-violet circular dichroism spectrometry,Far-UV CD)法分析纯化产物的肽段序列及二级结构的差异,并检测成熟酶N-末端氨基酸序列.结果 经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化获得TGases的两种成熟酶TGases A和TGases B,均具有酶活性；TGase A和TGase B成熟酶分子具有不同的表面带电性质,酶活分别为(28.33±1.45)U/mg和(22.54±1.77)U/mg; TGases A和TGases B在质荷比(m/z)4 536.481和4 873.393处两个低丰度肽段有差异,但N-末端6个氨基酸序列完全相同；两者二级结构均以α-螺旋为主,但二级结构存在一定差异.结论 吸水链霉菌TGases A和TGases B是由同一种酶原活化产生的同源异形体,两者的表面电荷性质、肽段序列及分子二级结构均有差异.
作者：崔文璟；杜坤；周丽；刘中美；丁旭；周哲敏 刊期： 2013年第07期
目的 以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RDl区特异性培养滤液蛋白10(culture filtrate pro-tein 10,CFPl0)与戊糖-5-磷酸-3-差异构象酶68(pentose-5-phosphate-3-epimerase68,PPE68)的融合蛋白CFP10-PPE68作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB抗体的间接EHSA法.方法 采用亲和层析法纯化重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白；分别以3种蛋白作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB特异性抗体的间接EHSA法；采用方阵滴定法对建立的间接EHSA法的条件进行优化；并以临床诊断为金标准,对间接ELISA法的特异性、敏感性和准确性进行验证.结果 纯化的重组CFPl0-PPE68融合蛋白纯度约为70％.分别以重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白作为包被抗原的佳包被浓度分别为2、4、4μg/ml,血清佳稀释度均为1∶1 000,酶标二抗佳稀释度均为1:5000.3种蛋白对肺外结核的诊断效果均优于肺结核,且重组CFP10-PPE68融合蛋白检测肺外结核的特异性、敏感性及准确性均佳；3种蛋白诊断结核病的特异性较高,而敏感性相对较低.结论 以重组CFP10-PPE68融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法诊断MTB感染具有较高的敏感性和特异性,特别是对难以诊断的肺外结核病的诊断有一定的参考价值.
作者：董志玲；杨春；徐蕾；何永林；冯鑫；王静娴；张壮苗；杨晓燕 刊期： 2013年第07期
目的 观察凋亡抑制蛋白Survivin基因干扰和过表达对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 将Survivin基因shRNA干扰质粒和过表达质粒pcDNA3.1-GFP-Survivin在脂质体介导下转染MCF-7细胞,并设空白对照组和脂质体对照组,转染后48 h,荧光显微镜下观察转染效率；荧光定量RT-PCR法检测转染细胞中Survivin基因mRNA的转录水平；MTT法检测转染细胞的凋亡率.结果 转染MCF-7细胞后48 h,Survivin基因RNAi质粒和过表达质粒的转染效率为50％ ～ 60％；shRNA质粒转染组MCF-7细胞中Survivin基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显高于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05)；shRNA质粒转染组MCF-7细胞的凋亡率明显高于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显低于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05).结论 Survivin基因对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有一定的抑制作用,可作为人乳腺癌生物治疗的候选基因.
作者：李鹏 刊期： 2013年第07期
目的 探讨激活素受体相互作用蛋白1(activin receptor-interaction protein 1,ARIP1)和ARIP2在小鼠脑神经细胞中的共表达.方法 RT-PCR法检测C57BL小鼠小脑、垂体、大脑、脾脏、心脏、肾脏、肝脏、胰腺组织中ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录；以融合蛋白GST-ARIP1C和MBP-ARIP2C作为抗原免疫新西兰白兔,制备抗ARIP1和ARIP2抗体,经A蛋白亲和层析柱纯化后,ELISA法检测抗体的交叉反应；用制备的抗体,采用免疫组织化学染色检测ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织中的表达；RT-PCR法检测小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中激活素ⅡA型受体(activin receptorⅡA,ActRⅡA)、ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录.结果 在小鼠大脑、小脑及垂体组织中可见ARIP1基因mRNA的转录,在小鼠各部位组织中均可见ARIP2基因mRNA的转录；制备的兔抗ARIP1和ARIP2抗体无交叉反应；ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织的海马和下丘脑同时表达；ActRIⅡA及ARIP1和ARIP2 mRNA在神经元样细胞系Neuro-2a细胞中共表达.结论 ARIP1和ARIP2可在小鼠脑神经细胞中共表达.
作者：谢佳男；齐妍；赵阳；王增艳；赵莉佩；崔雪玲；柳忠辉；王轶楠 刊期： 2013年第07期
目的 对奶牛乳房炎致病大肠埃希菌(E.coli)进行分型及外膜蛋白酶T(outer membrane protease,OmpT)的抗原性验证.方法 采用凝集试验测定黑龙江省分离的84株致病E.coli的O血清型,PCR扩增种系分类群标记基因法对84株Ecoli进行分型；经BLAST比对筛选ompT基因后,PCR验证ompT基因的普遍性；克隆A、B1、D群代表株ompT基因,测序后进行同源性比对；构建B1群E coli 2002-1株ompT基因重组表达质粒pET-32a-ompT,转化E.coliRosetta,IPTG诱导表达；表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,Westem blot法鉴定重组蛋白的抗原性.结果 84株奶牛乳房炎致病E.coli中共鉴定出血清型51株,覆盖42个O血清型,归属A种系进化群10株,占11.90 ％;B1种系进化群74株,占88.10％；无肠外强致病的B2和D群.各型E.coli均可扩增出ompT基因.4亚群代表株ompT基因具有高度保守性,同源性达97％以上.重组表达质粒pET-32a-ompT经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约55 000,诱导4h,目的蛋白的表达量高,约占菌体总蛋白的29.8％.纯化的重组OmpT蛋白纯度为87.6％,与4亚群E.coli免疫血清均可发生特异性反应.结论 种系进化是对奶牛乳房炎致病E.coli分型的理想方法,外膜蛋白酶OmpT在E.coli各种系进化群中抗原性良好,可作为研制E.coli蛋白亚单位疫苗的候选抗原.
作者：佟春玉；李润婷；呼瑞；马金柱；宋佰芬；朱战波；崔玉东 刊期： 2013年第07期
目的 评价重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗免疫原性2种检测方法的相关性.方法 应用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和假病毒中和(pseudovirion-based neutralization assay,PBNS)法对26份阴性血清样本、34份自然感染HPV16或HPV18的血清样本及30份接种HPV16/18型双价疫苗后7个月的血清样本进行抗体滴度检测,并采用Pearman进行相关性分析.结果 3组样本的抗HPV16型和HPV18型抗体滴度的2次检测结果比值显示,试验室内重复性较好；2种方法检测血清样本抗HPV16型抗体滴度的总体相关系数为0.826,抗HPV18型为0.921；自然感染HPV的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.519,抗HPV18型为0.613；接种HPV16/18型双价疫苗后的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.671,抗HPV18型为0.879.结论 间接ELISA法和PBNS法在检测血清样本中抗HPV16/18型抗体滴度时均具有较好的重复性和相关性,其中以接种疫苗后的血清样本中抗体滴度相关性佳,为HPV疫苗免疫原性的检测及剂量探索试验提供了参考依据.
作者：赵慧；李娟；潘晖榕；林玉香；李少伟；李长贵 刊期： 2013年第07期
抗体药物是生物技术药物研发领域中公认的研究热点.在抗体药物研制过程中,免疫原性一直是限制其临床应用的重要因素,不但严重影响其安全性和有效性,有时还会导致严重的临床后果.本文主要分析了抗体药物本身引起免疫原性的多种因素以及针对这些因素的改进方法,即通过抗体的人源化、去免疫化、糖基化修饰、抗体分子小型化和多聚体问题的改善来降低抗体药物的免疫原性.
作者：陈雪静；刘晓志 刊期： 2013年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
