曹姝；李少林；吴府容；康强强；李芳；王颖
目的 探讨干扰素α2a(interferonα 2a,IFNα2a)与白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)联合作用对体外肝癌细胞HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响.方法 用不同浓度的IFNα2a(5 000、10 000、15 000 IU/ml)和IL-2(2 500、5 000、10 000 IU/ml)单独及联合作用HepG2.2.15细胞96 h后,采用WST-1法检测细胞增殖情况,倒置相差显微镜观察联合作用组细胞形态学变化,ELISA法检测联合作用组细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达,斑点杂交法检测联合作用组细胞HBV-DNA的复制情况.结果 与不同浓度的IFNα2a和IL-2单独作用相比,二者联合作用对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.05);IFNα2a与IL-2联合作用组HepG2.2.15细胞显微镜下可见细胞逐渐变圆,胞浆中颗粒增多,增殖变慢,细胞间接触不紧密,细胞周围碎片增多；联合作用组细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的表达明显受到抑制(P＜0.05)；5 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2、10 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2和15 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制有抑制作用.结论 IFNα2a与IL-2联合作用对HepG 2.2.15细胞增殖及HBV-DNA复制均有抑制作用.本实验为后续体内动物实验及筛选合适的疫苗佐剂奠定了基础,也为新型乙型肝炎疫苗及治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了参考.
作者：徐艳玲；刘令九；侯丽娟；岳立广；隋红；赵小琳；金立杰 刊期： 2013年第07期
目的 探讨激活素受体相互作用蛋白1(activin receptor-interaction protein 1,ARIP1)和ARIP2在小鼠脑神经细胞中的共表达.方法 RT-PCR法检测C57BL小鼠小脑、垂体、大脑、脾脏、心脏、肾脏、肝脏、胰腺组织中ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录；以融合蛋白GST-ARIP1C和MBP-ARIP2C作为抗原免疫新西兰白兔,制备抗ARIP1和ARIP2抗体,经A蛋白亲和层析柱纯化后,ELISA法检测抗体的交叉反应；用制备的抗体,采用免疫组织化学染色检测ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织中的表达；RT-PCR法检测小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中激活素ⅡA型受体(activin receptorⅡA,ActRⅡA)、ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录.结果 在小鼠大脑、小脑及垂体组织中可见ARIP1基因mRNA的转录,在小鼠各部位组织中均可见ARIP2基因mRNA的转录；制备的兔抗ARIP1和ARIP2抗体无交叉反应；ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织的海马和下丘脑同时表达；ActRIⅡA及ARIP1和ARIP2 mRNA在神经元样细胞系Neuro-2a细胞中共表达.结论 ARIP1和ARIP2可在小鼠脑神经细胞中共表达.
作者：谢佳男；齐妍；赵阳；王增艳；赵莉佩；崔雪玲；柳忠辉；王轶楠 刊期： 2013年第07期
目的 研究Quercetin对结肠癌LOVO细胞株TGF-β1/smad3/c-myc信号通路的影响,并探讨其抑制LOVO细胞增殖的可能机制.方法 采用5、10、20、40、80、160 μmol/L的Quercetin处理结肠癌LOVO细胞48 h,以未经Quercetin处理的LOVO细胞作为对照组,采用MTT法检测Quercetin对细胞增殖活力的影响.以5 ng/ml的TGF-Bl刺激l周的LOVO细胞为细胞模型,设对照组(c组)、TGF-β组(T组)、TGF-β1+Quercetin组(TQ组)、Quercetin组(Q组).c组为正常的LOVO细胞；T组为用5 ng/ml的TGF-β1刺激1周的LOVO细胞；TQ组为以5 ng/ml的TGF-β1刺激1周后,再经20 μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞；Q组为经20μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞.分别采用平板克隆试验、免疫组化SP法、RT-PCR法、Western blot法分析Quercetin和TGF-β1对LOVO细胞克隆形成能力、smad3及c-myc表达的影响.结果 与对照组相比,不同浓度Quercetin组可明显抑制LOVO细胞的增殖,且呈剂量依赖性,IC50值约为40 μmol/L.TGF-β1能明显促进LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P＜0.05)；Quercetin能明显抑制LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P＜0.05)；与Q组相比,TQ组细胞增殖能力及c-myc的表达明显降低(P＜0.05).结论 Quercetin通过抑制TGF-β1/smad3信号通路下调靶基因c-myc的表达,并具有抑制LOVO细胞增殖的作用.
作者：安昌勇；寇耀；赵林；邵新宏；张刘平；张才全 刊期： 2013年第07期
目的 观察不同剂量重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(recombinated human rabies immunoglobin,rhRIG)注射液人体单次给药的安全性.方法 采用随机、单盲、安慰剂平行对照的方法,对成功筛选的48名健康受试者按照随机数字表进行分组,共分低、中、高3个rhRIG单次给药组(10、20、40 IU/kg),每组12人,每个剂量组均按3∶1设1个安慰剂(rhRIG的赋形剂)平行对照组,每组4人,依次经上臂三角肌(≤2 ml)、臀大肌(≤10 ml)和大腿外侧肌肉(剩余药液)进行肌肉注射.分别在筛选期(入组用药前14 d内)、用药后7、14和42 d记录不良事件(adverseevent,AE)、严重不良事件(serious adverse events,SAE)、局部反应、全身反应的发生情况,并进行生命体征、实验室(血常规、尿常规、血生化)、心电图、胸片、腹部B超检查.结果 不同剂量rhRIG组中共发生7例次AE,分别为谷氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶升高、血白细胞下降、上呼吸道感染、宫外孕,其中宫外孕判断为SAE.上述AE均判断与试验药物无关或可能无关.对照组未发生任何AE/SAE.所有受试者用药后生命体征均未见异常改变.结论 受试者单次肌肉注射10 ～ 40 IU/kg rhRIG后耐受性良好.
作者：王美霞；贾敏；金铭；韩靖；段瑾；王立清；金荣华；李宁；姚家琳 刊期： 2013年第07期
目的 构建携带PML(NLS-)基因的重组腺病毒,并观察其对白血病K562细胞增殖的影响.方法 以质粒pCMV-HA-PML(NLS-)为模板,PCR扩增PML(NLS-)基因,与穿梭质粒pAdTrace-TO4连接,构建重组穿梭载体pAdTrace-TO4-PML(NLS-),经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化人感受态BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-),经Pac Ⅰ酶切后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-PML(NLS-),经4轮扩增后,检测其滴度.采用RT-PCR法和Western blot法分别检测重组腺病毒中PML(NLS-)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；将重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖活力的影响.结果 重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-)经PCR和单酶切鉴定,证明构建正确；经4轮扩增,重组腺病毒的滴度为l×1010 pfu/ml;Ad-PML(NLS-)携带的PML(NLS-)能够在AD293细胞中稳定表达；与未感染组和空载病毒感染组相比,重组腺病毒Ad-PML(NLS-)感染的K562细胞的增殖活力明显增强(P＜0.05).结论 成功构建了重组腺病毒Ad-PML(NLS-),其可促进K562细胞的增殖,表明PML(NLS-)可能具有促癌基因的作用.
作者：高远梅；刘北忠；张曦；胡秀秀；钟梁 刊期： 2013年第07期
目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)已酯(Di-2-ethylhexy1 phthalate,DEHP)作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中Notchl的表达及其在隐睾所致不育症中可能发挥的作用.方法 将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分为正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只.玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组SD孕鼠自妊娠第12.5～19.5天,分别每日灌胃玉米油(2ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药.取各组出生后第20天的雄性幼鼠,镜下观察睾丸位置,并统计隐睾发生情况.采用RT-PCR及Western blot法检测各组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正常对照组和玉米油对照组相比,DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠的隐睾发生率明显上升(P＜0.05);DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常对照组和玉米油对照组(P＜0.05).结论 孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,隐睾子代睾丸组织中Notch1表达有改变,并可能与隐睾导致的不育有关.
作者：刘东尧；吴盛德；华燚；何文飞；何昀；陈柏林；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第07期
目的 评价重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗免疫原性2种检测方法的相关性.方法 应用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和假病毒中和(pseudovirion-based neutralization assay,PBNS)法对26份阴性血清样本、34份自然感染HPV16或HPV18的血清样本及30份接种HPV16/18型双价疫苗后7个月的血清样本进行抗体滴度检测,并采用Pearman进行相关性分析.结果 3组样本的抗HPV16型和HPV18型抗体滴度的2次检测结果比值显示,试验室内重复性较好；2种方法检测血清样本抗HPV16型抗体滴度的总体相关系数为0.826,抗HPV18型为0.921；自然感染HPV的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.519,抗HPV18型为0.613；接种HPV16/18型双价疫苗后的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.671,抗HPV18型为0.879.结论 间接ELISA法和PBNS法在检测血清样本中抗HPV16/18型抗体滴度时均具有较好的重复性和相关性,其中以接种疫苗后的血清样本中抗体滴度相关性佳,为HPV疫苗免疫原性的检测及剂量探索试验提供了参考依据.
作者：赵慧；李娟；潘晖榕；林玉香；李少伟；李长贵 刊期： 2013年第07期
目的 采用响应面法优化产低温脂肪酶工程菌C102的 发酵条件.方法 通过单因素试验考察培养基中酵母氮源含量、pH值、甘油含量和甲醇含量对酶活的影响,确定产酶的主要影响条件,在此基础上,根据Box-Benheken中心组合试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,综合考察各因子对低温脂肪酶酶活的影响,建立低温脂肪酶酶活的二次回归模型.结果 培养基中酵母氮源含量、pH值和甲醇含量对酶活的影响显著.适产低温脂肪酶条件为:酵母氮源含量7.3 g/L、pH6.0、甲醇含量9.1 g/L,在此条件下,低温脂肪酶酶活可达42.25 IU/ml,比优化前(28.0 IU/ml)提高了50.9％.结论 利用响应面法优化的发酵条件可显著提高工程菌的产酶能力,为规模化生产低温脂肪酶奠定了基础.
作者：秦新政；杨新平；付建红 刊期： 2013年第07期
目的 应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素.方法 应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应.结果 用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100％；应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应.结论 磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素.
作者：王玉华；王帆；陈露；刘佳；张金玲；时承娟 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB).方法 分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性.结果 重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确；表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57％,主要以包涵体形式存在；纯化的CK-MB蛋白纯度大于90％,可与兔抗CK-B、CK-M多克隆抗体特异性结合.结论 成功原核表达并纯化了重组CK-MB蛋白,为其大量生产奠定了基础.
作者：李子颖；贾娟娟；刘一兵；韩世泉 刊期： 2013年第07期
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因启动子区CpG岛甲基化及甲基化位点与儿童白血病临床特征的相关性.方法 收集儿童白血病患者173例(Leu组),根据白血病亚型不同分为:急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)94例、急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML)52例、慢性粒细胞白血病(chronic granulocytic leukemia,CML)19例及复发难治的白血病(acute leukemia,AL)8例(ALL 5例,AML 3例),以非恶性血液病(NL组)42例作为对照.分离患者外周血单核细胞,提取基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,采用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MS-PCR)法分别检测Leu组、NL组患者外周血标本单个核细胞中hTERT基因启动子区两个CpG岛不同位点甲基化情况,并分析其与儿童白血病临床特征的相关性.结果 hTERT基因启动子区CpG岛在NL组呈完全非甲基化,在复发难治的白血病组呈甲基化状态.NL组外周血中hTERT基因启动子区2号CpG岛(-2016 ～-1532和-1415 ～-1151)呈完全非甲基化状态,而Leu组呈甲基化状态,且甲基化更易发生在1号和2号(-2016～-1532)位点,但hTERT基因启动子区l号CpG岛甲基化在NL组和Leu组中差异无统计学意义(P＞0.05).hTERT基因启动子区甲基化与患者年龄、外周血白细胞数、免疫分型、细胞遗传标志及危险分级相关(P＜0.05),与患者性别、融合基因无关(P＞0.05).结论 儿童白血病患者hTERT基因启动子区CpG岛易发生甲基化,与甲基化位点分布相关,对儿童白血病的诊断具有重要意义.
作者：李康；祁新坤；张鹏辉；邹琳 刊期： 2013年第07期
抗体药物是生物技术药物研发领域中公认的研究热点.在抗体药物研制过程中,免疫原性一直是限制其临床应用的重要因素,不但严重影响其安全性和有效性,有时还会导致严重的临床后果.本文主要分析了抗体药物本身引起免疫原性的多种因素以及针对这些因素的改进方法,即通过抗体的人源化、去免疫化、糖基化修饰、抗体分子小型化和多聚体问题的改善来降低抗体药物的免疫原性.
作者：陈雪静；刘晓志 刊期： 2013年第07期
细菌多糖蛋白结合疫苗(b型流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌多糖结合疫苗)普遍用于2岁以下婴幼儿免疫.目前该类疫苗广泛使用的蛋白载体有破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、CRM197(白喉毒素的一种突变体)和未分型流感嗜血杆菌蛋白D(nontypeable haemophilus influenzae protein D,PD).本文就目前这类疫苗免疫接种中载体特异的T辅助细胞刺激作用、载体诱导的表位抑制作用(carrier-inducedepitopic suppression,CIES)和旁观者干扰效应进行初步探讨.
作者：陈琼 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达并纯化深黄被孢霉△5-脱饱和酶.方法 采用RT-PCR技术扩增深黄被孢霉△5-脱饱和酶基因,插入表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-D5D,转化人大肠埃希菌(E coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET-D5D经双酶切(NotⅠ/SalⅠ)和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,诱导6h表达量较高,主要以包涵体形式表达；纯化的重组蛋白可与兔抗△5-脱饱和酶多克隆抗体特异性结合.结论 成功在E.coli中表达了深黄被孢霉△5-脱饱和酶,纯化后的重组蛋白反应原性良好,为进一步研究A5-脱饱和酶的功能奠定了基础.
作者：朱祺；于长青；姚笛 刊期： 2013年第07期
目的 探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常对照组、MMF对照组、BLM模型组、MMF低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量干预组,每组6只.BLM模型组和MMF 3个干预组经气管注入BLM(6 mg/kg),正常对照组和MMF对照组注入等量无菌生理盐水；次日按MMF对照组和MMF干预低、中、高剂量组小鼠体重计算MMF给药量,灌胃小鼠,每日1次,连续14d,正常对照组和BLM模型组用等体积的双蒸水灌胃.灌胃第16天采集小鼠肺脏标本,经HE、Masson染色,从组织形态学上观察肺组织纤维化情况并进行Aschcroft评分；RT-PCR法检测小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平；Western blot法检测小鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达水平.结果 BLM诱导的小鼠肺纤维化改变显著,Ashcroft评分较正常对照组显著增高(P＜0.01),表明小鼠肺纤维化模型构建成功；MMF高剂量干预组肺组织损伤减轻,炎细胞浸润及胶原沉积减少,Ashcroft评分显著降低(P=0.000).MMF高剂量干预组与BLM模型组比较,TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；而MMF低、中剂量干预组与BLM模型组之间、MMF对照组与正常对照组之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高剂量的MMF(100 mg/kg)可抑制BLM诱导的肺纤维化小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平,有望成为治疗肺纤维化的理想药物.
作者：曹姝；李少林；吴府容；康强强；李芳；王颖 刊期： 2013年第07期
近年来,随着研究的深入,特异性细胞免疫在百日咳感染和疫苗诱导的免疫保护等方面的作用越来越引起人们的重视.本文就百日咳杆菌主要毒力因子在诱导细胞免疫及免疫调节中的作用、百日咳感染及疫苗免疫接种后诱导产生的细胞免疫应答等方面的研究进展作一综述.
作者：张平；徐颖华 刊期： 2013年第07期
柱层析法由于分辨率高,易控制,可自动化操作及有效保持生物分子活性而广泛应用于生物药物的下游纯化中.Whatman公司的纤维素基架填料亲水性好、载量高,因此常作为蛋白纯化的介质.但纤维素不耐受压力,即使高度铰链的纤维素,如CM52或DE52装填到柱子中,流速也很低,通常控制线性流速在25～40 cm/h之间,因此采用该介质的纯化周期过长,不利于提高样品的产量和稳定性.另外,纤维素基架填料会在不同盐浓度和pH值溶液中产生不同的膨胀系数,造成柱床体积的变化,操作压力也会因填料压缩而增大,致使操作流速经常变化.当样品黏度过高时,很难流过柱床.而纤维素介质也较难通过新版GMP的认证要求:一是介质不能进行在位清洗,清洗验证很难通过;二是对于过程中的关键参数,如流速、压力、柱效等不能进行很好的控制.
作者：刘静；解红艳；罗亮 刊期： 2013年第07期
目的 探讨沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响.方法 将ILK siRNA表达质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染人舌鳞癌Tb细胞,稳定表达细胞株分别命名为Tb siILK和Tb vector组,并设正常Tb细胞对照组(Tb组).Western blot法检测细胞中ILK蛋白的表达；细胞免疫荧光法检测细胞中ILK、p-Akt和p-GSK3β的表达；光镜和HE染色观察细胞的形态学变化；划痕试验检测细胞的迁移能力；Transwell法检测细胞的侵袭能力；流式细胞术检测细胞的细胞周期和凋亡情况；MTT法检测细胞的增殖活力；Westem blot法检测沉默ILK基因后细胞中p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3α/β、Snail的表达.结果 与Tb和Tb vector组相比,Tb siILK组细胞中ILK蛋白的表达水平显著降低(P＜0.01);ILK、p-Akt、p-GSK3β在胞质中的荧光信号明显减弱；大部分细胞的上皮形态特征更为明显；细胞的迁移距离和侵袭细胞数显著减少(P＜0.05)；G2-M期和G0-G1期细胞比例均显著增加(P＜0.01)；细胞的增殖活力显著减低；ILK基因沉默后,细胞中p-Akt、p-GSK3β和Snail蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).3组细胞的凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径显著抑制人舌鳞癌Tb细胞的生长、迁移和侵袭能力,ILK有望作为治疗人舌鳞癌的靶基因.
作者：幸宇；邓世雄；陈俊霞 刊期： 2013年第07期
目的 采用高效液相色谱质谱联用的方法鉴别口服疫苗中硫柳汞的降解产物.方法 采用C18色谱柱,甲醇-醋酸铵缓冲溶液(pH 4.5)梯度洗脱,以紫外和质谱检测器进行检测,对某口服疫苗中的未知色谱峰进行鉴别.结果 疫苗样品中两个色谱峰的保留时间及其一级二级质谱图与硫柳汞的降解产物硫代水杨酸以及2,2’-二硫代二苯甲酸基本一致.结论 高效液相色谱质谱联用可鉴别口服疫苗中的硫柳汞降解产物.
作者：李茂光；石继春；朱实惠；陈琼；叶强 刊期： 2013年第07期
目的 表达、纯化东方马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus,EEEV)E2蛋白,并检测其对小鼠的免疫原性.方法 利用IPTG诱导重组大肠埃希菌BL21-pET30-EEEV-E2,表达E2蛋白,用包涵体纯化试剂盒纯化重组E2蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot分析.将BALB/c小鼠随机分为4组∶PBS对照组、弗氏佐剂对照组(弗氏佐剂与PBS按体积比1∶1乳化)、E2蛋白组(E2蛋白与PBS按体积比1∶1混合)和E2蛋白+弗氏佐剂组(E2蛋白与弗氏佐剂按体积比1∶1乳化),每组10只,各组均经小鼠后肢肌肉免疫3次,两次免疫间隔时间均为14 d,免疫剂量均为100 μl/只.第2次免疫后第7天,采用流式细胞术检测小鼠体内CD4+和 CD8+T细胞比例；第2次免疫后第14天,采用细胞因子ELISA定量试剂盒检测小鼠血清中IL-2、IL-4和IFNγ的含量；第3次免疫后第7天,采用MrT法检测小鼠淋巴细胞增殖情况；每次免疫后第14天,采用EHSA法检测小鼠血清中IgG抗体效价.结果 表达的重组E2蛋白相对分子质量约为53 000,表达量为菌体总蛋白的26.3％；纯化的重组E2蛋白纯度达95％以上；表达和纯化的重组E2蛋白均可与鼠抗His标签单克隆抗体结合.与PBS对照组、弗氏佐剂对照组和E2蛋白组相比,E2蛋白+弗氏佐剂组小鼠体内CD4+与CD8+T细胞比值、血清中IL-2、IL-4和IFNγ浓度、体内淋巴细胞增殖指数均明显升高(P＜0.01)；小鼠初次免疫后即可产生E2蛋白IgG抗体,且随着免疫时间的延长,抗体效价逐渐上升,第3次免疫后第14天,抗体效价可达1∶320.结论 表达并纯化了重组E2蛋白,其能使小鼠产生较强的免疫反应,为新型EEEV疫苗的研制提供了参考.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；吴红霞；薛向红；王铁成；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
