徐艳玲；刘令九；侯丽娟；岳立广；隋红；赵小琳；金立杰
目的 表达、纯化东方马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus,EEEV)E2蛋白,并检测其对小鼠的免疫原性.方法 利用IPTG诱导重组大肠埃希菌BL21-pET30-EEEV-E2,表达E2蛋白,用包涵体纯化试剂盒纯化重组E2蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot分析.将BALB/c小鼠随机分为4组∶PBS对照组、弗氏佐剂对照组(弗氏佐剂与PBS按体积比1∶1乳化)、E2蛋白组(E2蛋白与PBS按体积比1∶1混合)和E2蛋白+弗氏佐剂组(E2蛋白与弗氏佐剂按体积比1∶1乳化),每组10只,各组均经小鼠后肢肌肉免疫3次,两次免疫间隔时间均为14 d,免疫剂量均为100 μl/只.第2次免疫后第7天,采用流式细胞术检测小鼠体内CD4+和 CD8+T细胞比例；第2次免疫后第14天,采用细胞因子ELISA定量试剂盒检测小鼠血清中IL-2、IL-4和IFNγ的含量；第3次免疫后第7天,采用MrT法检测小鼠淋巴细胞增殖情况；每次免疫后第14天,采用EHSA法检测小鼠血清中IgG抗体效价.结果 表达的重组E2蛋白相对分子质量约为53 000,表达量为菌体总蛋白的26.3％；纯化的重组E2蛋白纯度达95％以上；表达和纯化的重组E2蛋白均可与鼠抗His标签单克隆抗体结合.与PBS对照组、弗氏佐剂对照组和E2蛋白组相比,E2蛋白+弗氏佐剂组小鼠体内CD4+与CD8+T细胞比值、血清中IL-2、IL-4和IFNγ浓度、体内淋巴细胞增殖指数均明显升高(P＜0.01)；小鼠初次免疫后即可产生E2蛋白IgG抗体,且随着免疫时间的延长,抗体效价逐渐上升,第3次免疫后第14天,抗体效价可达1∶320.结论 表达并纯化了重组E2蛋白,其能使小鼠产生较强的免疫反应,为新型EEEV疫苗的研制提供了参考.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；吴红霞；薛向红；王铁成；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第07期
目的 应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素.方法 应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应.结果 用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100％；应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符；用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应.结论 磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素.
作者：王玉华；王帆；陈露；刘佳；张金玲；时承娟 刊期： 2013年第07期
目的 建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法.方法 采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品；确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性；用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测.结果 建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上；检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线；检测高、中、低浓度的DNA标准品(105、103、101 pg/ml)的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围(50％ ～ 200％)内,批间变异系数分别为9.3％、21.8％、26.8％；检测100 pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6％,变异系数为20.4％；康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量.结论 已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法.
作者：牛冬云；连炜；何静；邬智刚；柯潇 刊期： 2013年第07期
柱层析法由于分辨率高,易控制,可自动化操作及有效保持生物分子活性而广泛应用于生物药物的下游纯化中.Whatman公司的纤维素基架填料亲水性好、载量高,因此常作为蛋白纯化的介质.但纤维素不耐受压力,即使高度铰链的纤维素,如CM52或DE52装填到柱子中,流速也很低,通常控制线性流速在25～40 cm/h之间,因此采用该介质的纯化周期过长,不利于提高样品的产量和稳定性.另外,纤维素基架填料会在不同盐浓度和pH值溶液中产生不同的膨胀系数,造成柱床体积的变化,操作压力也会因填料压缩而增大,致使操作流速经常变化.当样品黏度过高时,很难流过柱床.而纤维素介质也较难通过新版GMP的认证要求:一是介质不能进行在位清洗,清洗验证很难通过;二是对于过程中的关键参数,如流速、压力、柱效等不能进行很好的控制.
作者：刘静；解红艳；罗亮 刊期： 2013年第07期
目的 研究Quercetin对结肠癌LOVO细胞株TGF-β1/smad3/c-myc信号通路的影响,并探讨其抑制LOVO细胞增殖的可能机制.方法 采用5、10、20、40、80、160 μmol/L的Quercetin处理结肠癌LOVO细胞48 h,以未经Quercetin处理的LOVO细胞作为对照组,采用MTT法检测Quercetin对细胞增殖活力的影响.以5 ng/ml的TGF-Bl刺激l周的LOVO细胞为细胞模型,设对照组(c组)、TGF-β组(T组)、TGF-β1+Quercetin组(TQ组)、Quercetin组(Q组).c组为正常的LOVO细胞；T组为用5 ng/ml的TGF-β1刺激1周的LOVO细胞；TQ组为以5 ng/ml的TGF-β1刺激1周后,再经20 μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞；Q组为经20μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞.分别采用平板克隆试验、免疫组化SP法、RT-PCR法、Western blot法分析Quercetin和TGF-β1对LOVO细胞克隆形成能力、smad3及c-myc表达的影响.结果 与对照组相比,不同浓度Quercetin组可明显抑制LOVO细胞的增殖,且呈剂量依赖性,IC50值约为40 μmol/L.TGF-β1能明显促进LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P＜0.05)；Quercetin能明显抑制LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P＜0.05)；与Q组相比,TQ组细胞增殖能力及c-myc的表达明显降低(P＜0.05).结论 Quercetin通过抑制TGF-β1/smad3信号通路下调靶基因c-myc的表达,并具有抑制LOVO细胞增殖的作用.
作者：安昌勇；寇耀；赵林；邵新宏；张刘平；张才全 刊期： 2013年第07期
抗体药物是生物技术药物研发领域中公认的研究热点.在抗体药物研制过程中,免疫原性一直是限制其临床应用的重要因素,不但严重影响其安全性和有效性,有时还会导致严重的临床后果.本文主要分析了抗体药物本身引起免疫原性的多种因素以及针对这些因素的改进方法,即通过抗体的人源化、去免疫化、糖基化修饰、抗体分子小型化和多聚体问题的改善来降低抗体药物的免疫原性.
作者：陈雪静；刘晓志 刊期： 2013年第07期
目的 探讨沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响.方法 将ILK siRNA表达质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染人舌鳞癌Tb细胞,稳定表达细胞株分别命名为Tb siILK和Tb vector组,并设正常Tb细胞对照组(Tb组).Western blot法检测细胞中ILK蛋白的表达；细胞免疫荧光法检测细胞中ILK、p-Akt和p-GSK3β的表达；光镜和HE染色观察细胞的形态学变化；划痕试验检测细胞的迁移能力；Transwell法检测细胞的侵袭能力；流式细胞术检测细胞的细胞周期和凋亡情况；MTT法检测细胞的增殖活力；Westem blot法检测沉默ILK基因后细胞中p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3α/β、Snail的表达.结果 与Tb和Tb vector组相比,Tb siILK组细胞中ILK蛋白的表达水平显著降低(P＜0.01);ILK、p-Akt、p-GSK3β在胞质中的荧光信号明显减弱；大部分细胞的上皮形态特征更为明显；细胞的迁移距离和侵袭细胞数显著减少(P＜0.05)；G2-M期和G0-G1期细胞比例均显著增加(P＜0.01)；细胞的增殖活力显著减低；ILK基因沉默后,细胞中p-Akt、p-GSK3β和Snail蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).3组细胞的凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径显著抑制人舌鳞癌Tb细胞的生长、迁移和侵袭能力,ILK有望作为治疗人舌鳞癌的靶基因.
作者：幸宇；邓世雄；陈俊霞 刊期： 2013年第07期
目的 采用响应面法优化产低温脂肪酶工程菌C102的 发酵条件.方法 通过单因素试验考察培养基中酵母氮源含量、pH值、甘油含量和甲醇含量对酶活的影响,确定产酶的主要影响条件,在此基础上,根据Box-Benheken中心组合试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,综合考察各因子对低温脂肪酶酶活的影响,建立低温脂肪酶酶活的二次回归模型.结果 培养基中酵母氮源含量、pH值和甲醇含量对酶活的影响显著.适产低温脂肪酶条件为:酵母氮源含量7.3 g/L、pH6.0、甲醇含量9.1 g/L,在此条件下,低温脂肪酶酶活可达42.25 IU/ml,比优化前(28.0 IU/ml)提高了50.9％.结论 利用响应面法优化的发酵条件可显著提高工程菌的产酶能力,为规模化生产低温脂肪酶奠定了基础.
作者：秦新政；杨新平；付建红 刊期： 2013年第07期
目的 利用杆状病毒系统表达中蜂囊状幼虫病毒(chinese sacbroodvirus,CSBV)结构蛋白VP1基因.方法 提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫总RNA,RT-PCR法扩增VP1基因,克隆至载体pFastBacI中,构建重组转座质粒pFastBacI-VP1,转化至感受态大肠埃希菌DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-VP1,转染至昆虫细胞sf9中,获得第1代重组杆状病毒,经透射电镜观察杆状病毒粒子；病毒连续传代3次后,RT-PCR鉴定重组杆状病毒,SDS-PAGE检测VP1蛋白的表达情况,Western blot检测表达产物的反应原性.结果 重组杆粒经PCR鉴定构建正确；第1代重组杆状病毒经透射电镜观察,可见杆状病毒粒子；重组杆状病毒以M13通用引物和VP1基因特异引物进行PCR扩增,分别可见3 263和963 bp的片段,大小均与理论值一致；CSBV VP1基因能够在sf9细胞中表达,表达的重组VP1蛋白相对分子质量约3 1 000,可与兔抗CSBV-VP1阳性血清发生特异性反应.结论 成功利用杆状病毒表达系统表达了CSBV VP1基因,为深入研究CSBV的感染机制和蜜蜂的免疫机制以及中蜂囊状幼虫病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础.
作者：费东亮；马鸣潇；程健 刊期： 2013年第07期
目的 探讨激活素受体相互作用蛋白1(activin receptor-interaction protein 1,ARIP1)和ARIP2在小鼠脑神经细胞中的共表达.方法 RT-PCR法检测C57BL小鼠小脑、垂体、大脑、脾脏、心脏、肾脏、肝脏、胰腺组织中ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录；以融合蛋白GST-ARIP1C和MBP-ARIP2C作为抗原免疫新西兰白兔,制备抗ARIP1和ARIP2抗体,经A蛋白亲和层析柱纯化后,ELISA法检测抗体的交叉反应；用制备的抗体,采用免疫组织化学染色检测ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织中的表达；RT-PCR法检测小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中激活素ⅡA型受体(activin receptorⅡA,ActRⅡA)、ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录.结果 在小鼠大脑、小脑及垂体组织中可见ARIP1基因mRNA的转录,在小鼠各部位组织中均可见ARIP2基因mRNA的转录；制备的兔抗ARIP1和ARIP2抗体无交叉反应；ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织的海马和下丘脑同时表达；ActRIⅡA及ARIP1和ARIP2 mRNA在神经元样细胞系Neuro-2a细胞中共表达.结论 ARIP1和ARIP2可在小鼠脑神经细胞中共表达.
作者：谢佳男；齐妍；赵阳；王增艳；赵莉佩；崔雪玲；柳忠辉；王轶楠 刊期： 2013年第07期
目的 构建含NLS-RARα基因的重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并检测其在K562细胞中的表达.方法 以质粒pGBKT7-PML-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,与穿梭质粒dTrace-TO4连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TO4-NLS-RARα,经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒pAd-NLS-RARα,经Pac Ⅰ酶切线性化后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-NLS-RARα,经4轮扩增后,测定重组腺病毒滴度,并进行PCR及测序鉴定；将重组腺病毒感染K562细胞,采用流式细胞术测定感染效率,RT-PCR法和Western blot法检测NLS-RARα在K562细胞中的转录及表达水平.结果 重组腺病毒Ad-NLS-RARα经4轮扩增后,滴度可达6.9×lO8 pfu/ml,PCR及测序鉴定证明构建正确,对K562细胞的感染效率可达70％左右；重组腺病毒Ad-NLS-RARα携带的NLS-RARα基因可在K562细胞中高效表达.结论 已成功构建了重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并在K562细胞中高效表达了NLS-RARα基因.
作者：胡秀秀；刘北忠；钟梁；高远梅；张曦；吴秀娟；王慧；朱新瑜 刊期： 2013年第07期
目的 以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RDl区特异性培养滤液蛋白10(culture filtrate pro-tein 10,CFPl0)与戊糖-5-磷酸-3-差异构象酶68(pentose-5-phosphate-3-epimerase68,PPE68)的融合蛋白CFP10-PPE68作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB抗体的间接EHSA法.方法 采用亲和层析法纯化重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白；分别以3种蛋白作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB特异性抗体的间接EHSA法；采用方阵滴定法对建立的间接EHSA法的条件进行优化；并以临床诊断为金标准,对间接ELISA法的特异性、敏感性和准确性进行验证.结果 纯化的重组CFPl0-PPE68融合蛋白纯度约为70％.分别以重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白作为包被抗原的佳包被浓度分别为2、4、4μg/ml,血清佳稀释度均为1∶1 000,酶标二抗佳稀释度均为1:5000.3种蛋白对肺外结核的诊断效果均优于肺结核,且重组CFP10-PPE68融合蛋白检测肺外结核的特异性、敏感性及准确性均佳；3种蛋白诊断结核病的特异性较高,而敏感性相对较低.结论 以重组CFP10-PPE68融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法诊断MTB感染具有较高的敏感性和特异性,特别是对难以诊断的肺外结核病的诊断有一定的参考价值.
作者：董志玲；杨春；徐蕾；何永林；冯鑫；王静娴；张壮苗；杨晓燕 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性.方法 采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性.结果 重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达.纯化的目的蛋白纯度可达90％,浓度为1.7 mg/ml.纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L.结论 已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础.
作者：杜茜；吴志鹃；蔡雪飞；袁作为；张君；郑建 刊期： 2013年第07期
目的 探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定.方法 吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物再经阴离子交换层析,分析纯化产物的分子表面带电性质,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和远紫外圆二色谱(far ultra-violet circular dichroism spectrometry,Far-UV CD)法分析纯化产物的肽段序列及二级结构的差异,并检测成熟酶N-末端氨基酸序列.结果 经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化获得TGases的两种成熟酶TGases A和TGases B,均具有酶活性；TGase A和TGase B成熟酶分子具有不同的表面带电性质,酶活分别为(28.33±1.45)U/mg和(22.54±1.77)U/mg; TGases A和TGases B在质荷比(m/z)4 536.481和4 873.393处两个低丰度肽段有差异,但N-末端6个氨基酸序列完全相同；两者二级结构均以α-螺旋为主,但二级结构存在一定差异.结论 吸水链霉菌TGases A和TGases B是由同一种酶原活化产生的同源异形体,两者的表面电荷性质、肽段序列及分子二级结构均有差异.
作者：崔文璟；杜坤；周丽；刘中美；丁旭；周哲敏 刊期： 2013年第07期
目的 观察凋亡抑制蛋白Survivin基因干扰和过表达对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 将Survivin基因shRNA干扰质粒和过表达质粒pcDNA3.1-GFP-Survivin在脂质体介导下转染MCF-7细胞,并设空白对照组和脂质体对照组,转染后48 h,荧光显微镜下观察转染效率；荧光定量RT-PCR法检测转染细胞中Survivin基因mRNA的转录水平；MTT法检测转染细胞的凋亡率.结果 转染MCF-7细胞后48 h,Survivin基因RNAi质粒和过表达质粒的转染效率为50％ ～ 60％；shRNA质粒转染组MCF-7细胞中Survivin基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显高于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05)；shRNA质粒转染组MCF-7细胞的凋亡率明显高于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显低于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05).结论 Survivin基因对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有一定的抑制作用,可作为人乳腺癌生物治疗的候选基因.
作者：李鹏 刊期： 2013年第07期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(high performance anion exchange chromatography withpulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗的多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP)多糖含量.方法 用终浓度为0.3N的NaOH溶液将待测疫苗中的PRP多糖或分离得到的游离多糖在室温下振荡水解(16±8)h,采用CarboPac@PA-10阴离子交换柱在NaOH/醋酸钠溶液梯度洗脱条件下分离水解产物,用脉冲安培检测器检测信号,根据样品的峰面积计算得到待测疫苗中的PRP多糖含量及游离多糖含量,样品均重复检测2次,计算2次检测结果的相对标准偏差(RSD).同时采用《中国药典》三部(2010版)附录ⅧJ中的地衣酚法测定相同批次样品的PRP多糖含量及游离多糖含量,并对两种方法得到的结果进行比较.结果 相同样品重复检测2次,结果间的差异非常小,RSD不超过4.6％.HPAEC-PAD法测得的总PRP结果与地衣酚法测得的结果接近,前者测得的S01～S03样品的PRP浓度值分别为后者的105％、104％和106％; HPAEC-PAD法测得的游离PRP结果与地衣酚法测得的结果差别较大,前者测得的S01～S03样品的游离PRP浓度值分别为后者的126％、109％和115％.结论 HPAEC-PAD法测定Hib结合疫苗的PRP多糖含量灵敏度高,重复性和分离效果好,样品不需要衍生处理,可同时测定多组分,可作为传统地衣酚法的替代方法用于Hib结合疫苗中多糖含量的测定.
作者：贺鹏飞；唐静；李亚南；李茂光；叶强 刊期： 2013年第07期
目的 探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常对照组、MMF对照组、BLM模型组、MMF低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量干预组,每组6只.BLM模型组和MMF 3个干预组经气管注入BLM(6 mg/kg),正常对照组和MMF对照组注入等量无菌生理盐水；次日按MMF对照组和MMF干预低、中、高剂量组小鼠体重计算MMF给药量,灌胃小鼠,每日1次,连续14d,正常对照组和BLM模型组用等体积的双蒸水灌胃.灌胃第16天采集小鼠肺脏标本,经HE、Masson染色,从组织形态学上观察肺组织纤维化情况并进行Aschcroft评分；RT-PCR法检测小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平；Western blot法检测小鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达水平.结果 BLM诱导的小鼠肺纤维化改变显著,Ashcroft评分较正常对照组显著增高(P＜0.01),表明小鼠肺纤维化模型构建成功；MMF高剂量干预组肺组织损伤减轻,炎细胞浸润及胶原沉积减少,Ashcroft评分显著降低(P=0.000).MMF高剂量干预组与BLM模型组比较,TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；而MMF低、中剂量干预组与BLM模型组之间、MMF对照组与正常对照组之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高剂量的MMF(100 mg/kg)可抑制BLM诱导的肺纤维化小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平,有望成为治疗肺纤维化的理想药物.
作者：曹姝；李少林；吴府容；康强强；李芳；王颖 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达并纯化深黄被孢霉△5-脱饱和酶.方法 采用RT-PCR技术扩增深黄被孢霉△5-脱饱和酶基因,插入表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-D5D,转化人大肠埃希菌(E coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET-D5D经双酶切(NotⅠ/SalⅠ)和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,诱导6h表达量较高,主要以包涵体形式表达；纯化的重组蛋白可与兔抗△5-脱饱和酶多克隆抗体特异性结合.结论 成功在E.coli中表达了深黄被孢霉△5-脱饱和酶,纯化后的重组蛋白反应原性良好,为进一步研究A5-脱饱和酶的功能奠定了基础.
作者：朱祺；于长青；姚笛 刊期： 2013年第07期
近年来,随着研究的深入,特异性细胞免疫在百日咳感染和疫苗诱导的免疫保护等方面的作用越来越引起人们的重视.本文就百日咳杆菌主要毒力因子在诱导细胞免疫及免疫调节中的作用、百日咳感染及疫苗免疫接种后诱导产生的细胞免疫应答等方面的研究进展作一综述.
作者：张平；徐颖华 刊期： 2013年第07期
目的 探讨干扰素α2a(interferonα 2a,IFNα2a)与白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)联合作用对体外肝癌细胞HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响.方法 用不同浓度的IFNα2a(5 000、10 000、15 000 IU/ml)和IL-2(2 500、5 000、10 000 IU/ml)单独及联合作用HepG2.2.15细胞96 h后,采用WST-1法检测细胞增殖情况,倒置相差显微镜观察联合作用组细胞形态学变化,ELISA法检测联合作用组细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达,斑点杂交法检测联合作用组细胞HBV-DNA的复制情况.结果 与不同浓度的IFNα2a和IL-2单独作用相比,二者联合作用对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.05);IFNα2a与IL-2联合作用组HepG2.2.15细胞显微镜下可见细胞逐渐变圆,胞浆中颗粒增多,增殖变慢,细胞间接触不紧密,细胞周围碎片增多；联合作用组细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的表达明显受到抑制(P＜0.05)；5 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2、10 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2和15 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制有抑制作用.结论 IFNα2a与IL-2联合作用对HepG 2.2.15细胞增殖及HBV-DNA复制均有抑制作用.本实验为后续体内动物实验及筛选合适的疫苗佐剂奠定了基础,也为新型乙型肝炎疫苗及治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了参考.
作者：徐艳玲；刘令九；侯丽娟；岳立广；隋红；赵小琳；金立杰 刊期： 2013年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
