高珺珊；吴威；宫鹏涛；李建华；杨举；李赫；张国才；张西臣
目的 通过生物信息学分析禽流感病毒WDK/ST/27 /03(H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列,进一步探讨影响禽流感病毒感染血液肿瘤细胞株K-562和HL-60的机制.方法 RT-PCR扩增WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA基因,经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,对纯化的PCR产物进行测序.在GenBank中选取登录的H3N2和H4N6序列,利用在线生物信息工具ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)对这些序列和WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列进行比对分析.结果 RT-PCR扩增产物的大小与预期相符.生物信息学分析显示,WDK/ST/27/03(H3N2) HA的裂解位点是QNR*GLFG,Dk/ST/472/03 (H4N6) HA的裂解位点是KAAR*GLFG,此位置的氨基酸无变化.HA的226位氨基酸为Gln(Q),228位氨基酸为Gly(G),具有禽流感病毒HA受体结合位点的特征,影响受体结合的位点98Y、136S、152W、183H,190E、194L、222W、225G、227S未见变异.NA活性位点及影响酶活的位点均无变异,但WDK/ST/27/03(H3N2) NA在接近N-末端的茎部61～79位缺失19个氨基酸,致使NA茎部变短,且丢失2个潜在的糖基化位点.结论 WDK/ST/27/03(H3N2)的NA茎部缺失突变可能是造成其吸附、繁殖和复制能力低于Dk/ST/472/03 (H4N6)的一个因素.
作者：张红梅；赵丹；吴玫；牟旭鹏；周伯平 刊期： 2013年第08期
目的 优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性.方法 基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件；采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性.结果 在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100 ～ 200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的“S”型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc).采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91％.结论 优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好.
作者：何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山 刊期： 2013年第08期
目的 探讨不同解吸附处理对肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量检测结果的影响.方法 将七价肺炎球菌结合疫苗分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附或未解吸附处理,十三价肺炎球菌结合疫苗(制品1和制品2)分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附(10、30、90 s)处理,应用免疫化学分析系统(IMMAGE 800)测定各型多糖含量.结果 除14型外,未经解吸附处理的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均显著低于经胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理后的多糖含量(P＜0.05)；除23F型多糖外,经胰蛋白酶解吸附处理后的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均低于经NaOH解吸附处理后的多糖含量.经胰蛋白酶解吸附处理后,制品1中的14型和制品2中的1型多糖含量低于经NaOH解吸附处理后的50％；随着NaOH解吸附处理时间的增加,制品1和制品2中19A型多糖含量急剧下降.结论 肺炎球菌结合疫苗进行各型多糖含量检测之前需进行解吸附处理,胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理对多糖含量检测结果均有影响.
作者：陈琼；石继春；王春娥；王珊珊；叶强 刊期： 2013年第08期
目的 筛选与白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)具有较强结合能力的功能小肽,并检测其对气道上皮细胞HBE16分泌黏蛋白(mucin,MUC)5AC的影响.方法 以重组人IL-13为靶蛋白,采用固相包被法对噬菌体随机展示十二肽库进行亲和筛选,并进行测序；将获得的与IL-13具有高亲和力的小肽偶联到嗜孔蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体上,制备KLH偶联肽K1、K3、K4,通过夹心ELISA法检测3种偶联肽对IL-13的封闭作用；通过细胞试验检测3种偶联肽对HBE16细胞分泌MUC5AC的影响.结果 经6轮亲和富集筛选,获得了3个与IL-13具有较高亲和力的噬菌体克隆,插入的十二肽编号依次为P1、P3、P4;3种偶联肽K1、K3、K4对IL-13均具有明显的封闭作用；经K1+IL-13、K3+IL-13和K4+ IL-13处理的HBE16细胞中MUC5AC基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显低于IL-13对照组(P＜0.01).结论 经偶联肽封闭后,可减少IL-13刺激的气道上皮细胞HBE16中MUC5AC的分泌,为慢性气道炎症黏液高分泌的防治提供了新的思路和手段.
作者：温建立；李琪；周向东；尤列·皮尔曼；维克·多克罗索夫；刘胜华 刊期： 2013年第08期
目的 在大肠埃希菌中高效表达重组犬干扰素α1(canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,并对其抗病毒活性进行初步研究.方法 根据大肠埃希菌密码子的偏嗜性,人工合成犬干扰素α1成熟蛋白编码基因,同时引入大肠埃希菌EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,将改造后合成的CaIFNα1核苷酸序列定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-CaIFNα1,并进行PCR及双酶切鉴定；将鉴定正确的重组表达质粒pET-CaIFNα1转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗VSV病毒活性.结果 重组表达质粒经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确；重组融合蛋白CaIFNα1相对分子质量约39 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的61.5％,可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗CaIFNα1多克隆抗体特异性识别,在MDCK细胞上呈现较高的抗病毒活性,为2.0× 106U/ml.结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在大肠埃希菌中实现了高效表达,表达产物具有较高的抗病毒活性.
作者：徐晓娟；王怡飞；王玉；米政实；黄永亮；郭霄峰 刊期： 2013年第08期
目的 采用双内参实时荧光定量PCR法检测肝癌中易洛魁族同源盒2(Iroquois homebox 2,IRX2)基因信使RNA(mRNA)的水平,探讨其对肝癌诊断及治疗的潜在意义.方法 采用荧光定量PCR法检测21份肝癌组织和21份癌旁组织中IRX2基因的表达水平,并以双内参β-actin和GAPDH为标准对照,计算每个样本IRX2基因的相对表达量,经Pfafl法进行相对定量,分析基因表达差异.结果 42份肝组织中均存在IRX2基因的表达,85.71％(18/21)的肝癌组织中IRX2基因表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.01).结论 肝癌组织中IRX2基因表达水平较低,表明IRX2基因在肝癌中出现异常表达,为从基因水平诊断及治疗肝癌提供了一个潜在靶点.
作者：余爽；王静；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第08期
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
作者：熊冬梅；姚雪；李林；舒静；陈俊霞 刊期： 2013年第08期
目的 建立测定重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的体积排阻高效液相色谱法(size exclusionhigh performance liquid chromatography,SE-HPLC),并进行验证.方法 应用SE-HPLC法测定重组人干扰素α2a对照品及供试品蛋白质含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性及准确性进行验证.采用建立的SE-HPLC法检测5家企业生产的24批样品中干扰素α2a蛋白含量,同时每批样品按《中国药典》三部(2010版)方法测定生物学活性,并计算比活性(IU/mg).结果 重组人干扰素α2a在0.3648～ 11.67μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 9).用建立的方法连续进样6次,检测对照品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.4％；同一批样品进样12次,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.8％；同一批样品取6份进样,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.1％；5家企业生产的24批样品,平均加标回收率为103.5％,平均比活性为1.65×108 IU/mg.结论 建立了测定重组人干扰素α2a蛋白含量的SE-HPLC法,该方法简便,精密度、稳定性、重复性及准确性好,可用于重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的测定及比活性评价.
作者：李永红；裴德宁；陶磊；韩春梅；饶春明 刊期： 2013年第08期
目的 对2011年吉林省肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)分离株全基因组进行序列分析.方法 将手足口病伴发重症脑炎患者的粪便样品接种至Vero细胞,分离EV71；采用RT-PCR法分8段扩增全基因组序列,进行双酶切及序列测定；应用Mega5软件构建EV71系统进化树；通过DNAMAN7和DNASTAR7软件进行EV71分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性比较；经RDP4软件对EV71分离株进行同源重组分析.结果 粪便样品接种至Vero细胞2d后,细胞出现圆缩、透亮、聚堆的病变现象；各PCR扩增产物经双酶切鉴定,均可见与预期大小一致的目的条带；经种系进化树分析显示,EV71分离株属C4a亚型,命名为EV71-JiLin-1 1-China;其与A、B和C亚型间核苷酸序列的平均同源性分别为22.44％、17.72％和11.96％,与A、B和C亚型间氨基酸序列的平均同源性分别为96.0％、97.2％和97.3％；全基因同源重组分析显示,EV71分离株的165 ～1 946和7 289 ～7 366核苷酸区有重组现象,分别源于分离自湖北的C4a-EV71-Hubei-09-China及马来西亚的B4-SB2864-SAR-00和C1-S18062-SAR-98.结论 2011年吉林地区流行的EV71为C4a基因型,为EV71基因特征及流行病学的研究提供了实验依据.
作者：罗永彬；曾韦锟；黄芬；井申荣 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性.方法 经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64 ～ 223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.应用ProBondTM Resin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与Al(OH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平.结果 两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确；表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合；纯化的两种重组蛋白纯度均在95％以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平.结论 成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础.
作者：魏晓曼；闻晓波；冉旭华；崔玉东 刊期： 2013年第08期
目的 分析狂犬病疫苗接种不良反应发生率及其影响因素.方法 收集2011年广西桂林市疾病预防控制中心接种门诊狂犬病疫苗接种记录和随访登记资料,采用描述性研究方法统计分析5剂免疫程序[分别于就诊时(0 d)、3、7、14、28 d,经上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]和2-1-1免疫程序[分别于就诊时(0 d)经左右上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,再于第7和21天各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]接种狂犬病疫苗的不良反应发生率,采用卡方检验和Logistic回归分析影响接种不良反应发生的因素.结果 接种狂犬病疫苗后不良反应发生率为2.10％(201/9 572),不良反应中以单纯发热(＞38℃)为主,占81.10％(163/201)；2-1-1免疫程序接种后不良反应发生率2.37％(128/5 398)明显高于5剂免疫程序[1.75％(73/4 174)](P＜0.05),5剂免疫程序接种后不良反应主要发生于前3针次,2-1-1免疫程序接种后不良反应均发生在第1针次；低年龄、受伤程度为Ⅱ级、被狗以外的动物致伤和按2-1-1免疫程序接种狂犬病疫苗后发生不良反应的风险高.结论 狂犬病疫苗接种后的不良反应较少且轻微.10岁以下儿童好采用5剂免疫程序,以减少接种不良反应的发生.
作者：黄少新；张振开；冯厚滨；潘海；任正洪 刊期： 2013年第08期
目的 探讨新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果.方法 采用二倍稀释法检测抗菌肽Temporine-La对临床主要致病菌的小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)；透射电镜观察Temporine-La对金黄色葡萄球菌的作用效果；复制金黄色葡萄球菌表皮感染小鼠模型,分别用4 U/ml青霉素和10μg/ml Temporin-La进行治疗,另设生理盐水对照组和空白对照组,感染后第4天,对各组小鼠进行白细胞计数、细菌计数、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测及病理组织切片观察.结果 Temporin-La对革兰阳性菌的抑菌活性高于革兰阴性菌,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用强；透射电镜观察显示,经100 μg/ml Temporin-La处理的金黄色葡萄球菌出现了质壁分离的现象,细胞壁缺失或发生裂解,金黄色葡萄球菌发生裂解而死亡；感染后第4天,青霉素组和Temporin-La组白细胞数及创面下肌肉组织细菌数均明显低于生理盐水对照组(P＜0.05或P＜0.01),Temporin-La组小鼠血清VEGF的表达水平明显高于青霉素组和空白对照组(P＜0.05),青霉素组和Temporin-La组小鼠的创口修复情况明显优于生理盐水对照组.结论 Temporin-La具有抗小鼠金黄色葡萄球菌感染的效果,为其临床应用提供了实验依据,也为抗感染治疗提供了新的思路.
作者：赵瑞利；韩文瑜；韩俊友；金天明；冯新；雷连成；孙长江；王选 刊期： 2013年第08期
目的 建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法.方法 将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态；MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响；对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性.结果 随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎；MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系；10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584 ～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58％ ～ 24.17％,批间变异系数15.08％ ～ 16.95％,总变异系数为15.81％,均符合细胞实验变异系数应小于30％的标准；PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109 ～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格.结论 建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究.
作者：石继春；朱洁；叶强 刊期： 2013年第08期
目的 探讨冻存H22肝癌细胞应用于卡介苗抑瘤小鼠模型的可行性.方法 制备冻存H22细胞,分别将冻存10和83 d的H22细胞复苏,计算细胞存活率；将高(7.5×106个/ml)、中(5.0×106个/ml)、低(2.5×106个/ml)剂量的新复苏的H22细胞与1 mg/ml治疗用卡介苗混合后经左侧背部皮下免疫BALB/c小鼠,0.1 ml/只,对照组只接种相应浓度的H22细胞,接种后30 d,称量小鼠皮下瘤体重量,并计算试验组的抑瘤率,试验重复2次.结果 冻存10和83 d的H22细胞复苏后的存活率分别为85.45％和82.25％.所有对照组小鼠接种H22细胞后均有肿瘤形成,成瘤率均为100％;同一次试验中,各试验组瘤体重量均明显小于同剂量对照组(P＜0.05)；同一次试验中,各试验组间瘤体重量差异无统计学意义(P＞0.05)；不同次试验中,同剂量对照组间瘤体重量差异均有统计学意义(P＜0.05)；各试验组的抑瘤率均大于60％.结论 冻存H22细胞可满足抑瘤试验需要,但试验稳定性仍需改进.
作者：王鹏；赵爱华；寇丽杰；乔来艳；李贤珍；岳婷婷；王国治 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Aurora-A高表达对食管鳞癌血管生成及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)表达的影响.方法 将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的Aurora-A全长表达质粒pEGFP-C 1-Aurora-A转染至食管鳞癌细胞KYSE 150,经G418筛选获得Aurora-A高表达的细胞株(Aurora-A高表达组),同时设空质粒pEGFP-C1转染组(阴性对照组)和未转染组作为对照.Western blot检测各组细胞中Aurora-A蛋白的表达；采用小管形成及鸡胚尿囊膜试验检测Aurora-A高表达对肿瘤血管生成的影响；免疫组化法检测Aurora-A高表达对裸鼠移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD)的影响；Western blot检测Aurora-A高表达对KYSE150细胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2(Tyr1059)表达的影响.结果 Aurora-A高表达组中总Aurora-A蛋白的表达量约为阴性对照组和未转染组的2.5倍,提示Aurora-A高表达细胞系构建成功；Aurora-A高表达组生成的血管数量、MVD值和p-VEGFR-2的表达水平均显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 Aurora-A高表达可促进食管鳞癌中的血管生成,其机制可能与活化VEGFR-2有关.
作者：路娜；赵艳；王康；覃秀桃；王晓霞 刊期： 2013年第08期
半纤维素分解微生物在自然界的物质循环过程中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一,而木聚糖则是半纤维素的主要成分.木聚糖酶(xylanase)可催化木聚糖的水解,在各种生物体内均发现木聚糖酶.在过去几十年中,已有上百种木聚糖酶基因被克隆至同源或异源宿主内来表达木聚糖酶,以期改变宿主特性并适于商业应用.本文综述了木聚糖酶基因的克隆和表达,并对基因工程技术在木聚糖酶上的应用前景进行了展望.
作者：王丹丹 刊期： 2013年第08期
目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1 (cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制.方法 采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平；免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用；ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平.结果 与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低；P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用.结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关.P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点.
作者：邓玮；易永芬；屈玉玲；闫田静；文雪 刊期： 2013年第08期
目的 评价注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)在恒河猴体内的安全性.方法 将恒河猴随机分为4组:低、中、高剂量RCT-18组和对照组,每组8只,低、中、高剂量RCT-18组分别经皮下注射4.6、16.1、57.5 mg/(kg·次)RCT-18,对照组经皮下注射0.7ml/(kg·次)0.9％氯化钠注射液,每3d上午同一时间给药1次,共给药91次.每天上午观察记录恒河猴的一般体征,每周常规监测体温1次,并在第1、2、3、13、14、15、28、29和30次给药前、给药后0.5、1、2、4和24h增加测量动物体温次数.给药0.5、1.5、3、4.5、6、7.5、9个月(停药次日)及停药48 d(恢复期结束),分别对心电图、眼科、血液学、血液生化学、尿常规、血清抗RCT-18抗体、外周血单个核细胞(PBMC)分类计数、血清免疫球蛋白水平(IgG、IgA和IgM)等各项指标进行检查.给药3、6、9个月和恢复期结束,每组各解剖2只猴,进行脏器大体观察,计算脏器系数,并进行组织病理学观察.结果 临床反应主要表现为给药后的体温升高；血液学指标出现具有一定剂量-反应关系的单核细胞(monocyte,MONO)数和网织红细胞(reticulocyte,RETIC)升高或网织红细胞平均体积(mean reticulocyte volume,MCVr)降低；3个剂量RCT-18组恒河猴的脏器重量和脏器系数与同期对照组相比,均无明显变化,且未见明显的脏器大体病变；3个剂量RCT-18组均出现无明显剂量相关但可逆的脾小结和淋巴滤泡萎缩；在整个试验期内未检测出血清中的抗RCT-18抗体；3个剂量组外周血淋巴细胞中IgD+细胞(成熟B淋巴细胞)比率均略有下降,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；血清IgG、IgA和IgM从给药0.5～1.5个月后开始明显下降,恢复期结束时,除了中剂量的IgA水平,其他3个剂量RCT-18组的IgG、IgA和IgM水平均出现不同程度的回升.结论 RCT-18对恒河猴具有明显的但可恢复的免疫抑制作用.
作者：陈智勤；陈云祥；卢觅佳；辛艳飞；陈浩；张丽丽；黄敏；王文祥；房健民 刊期： 2013年第08期
目的 探讨含RGD (Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响.方法 取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响；分别用0.3、0.6、1.2 mg/kg RWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化.结果 随着RWR剂量增加,血小板大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L.随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加.结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓.
作者：赵海霞；杨涛；杨利军 刊期： 2013年第08期
目的 探讨蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制.方法 取BALB/c雌性小鼠,采用心脏灌注排血、胶原酶和胰蛋白酶原位消化法及组织块细胞迁出培养法,分离培养小鼠肺泡上皮细胞,经刮除法及差相消化贴壁法纯化小鼠肺泡上皮细胞,通过兔抗鼠角蛋白单克隆抗体细胞爬片组化染色法对细胞进行纯度鉴定；经不同终浓度的蓖麻毒素(0、0.000 1、0.001、0.01、0.1、1、10、100 μg/ml)处理细胞进行毒性分析；倒置显微镜下观察0.05 μg/ml蓖麻毒素对细胞的毒性作用.结果 获得的小鼠肺泡上皮细胞纯度达90％以上；随着蓖麻毒素浓度的增加,细胞活力降低,蓖麻毒素浓度与肺泡上皮细胞增殖抑制呈正相关；0.05 μg/ml的蓖麻毒素即可引起细胞皱缩、空泡化变性.结论 蓖麻毒素可引起原代培养肺泡上皮细胞变性损伤,损伤程度随蓖麻毒素浓度增高而加重,为蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制提供了理论依据,同时为进一步探讨蓖麻毒素的毒理作用提供了新的思路.
作者：王蒙；钱军；穆成龙；赵思言；郑关雨；付莹莹；孙玉成；万家余；刘文森 刊期： 2013年第08期
中国生物制品学杂志
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