查何；彭惠民；马晶；周吉；王瑞敏；尹频；文利；张政
目的 评价注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)在恒河猴体内的安全性.方法 将恒河猴随机分为4组:低、中、高剂量RCT-18组和对照组,每组8只,低、中、高剂量RCT-18组分别经皮下注射4.6、16.1、57.5 mg/(kg·次)RCT-18,对照组经皮下注射0.7ml/(kg·次)0.9％氯化钠注射液,每3d上午同一时间给药1次,共给药91次.每天上午观察记录恒河猴的一般体征,每周常规监测体温1次,并在第1、2、3、13、14、15、28、29和30次给药前、给药后0.5、1、2、4和24h增加测量动物体温次数.给药0.5、1.5、3、4.5、6、7.5、9个月(停药次日)及停药48 d(恢复期结束),分别对心电图、眼科、血液学、血液生化学、尿常规、血清抗RCT-18抗体、外周血单个核细胞(PBMC)分类计数、血清免疫球蛋白水平(IgG、IgA和IgM)等各项指标进行检查.给药3、6、9个月和恢复期结束,每组各解剖2只猴,进行脏器大体观察,计算脏器系数,并进行组织病理学观察.结果 临床反应主要表现为给药后的体温升高；血液学指标出现具有一定剂量-反应关系的单核细胞(monocyte,MONO)数和网织红细胞(reticulocyte,RETIC)升高或网织红细胞平均体积(mean reticulocyte volume,MCVr)降低；3个剂量RCT-18组恒河猴的脏器重量和脏器系数与同期对照组相比,均无明显变化,且未见明显的脏器大体病变；3个剂量RCT-18组均出现无明显剂量相关但可逆的脾小结和淋巴滤泡萎缩；在整个试验期内未检测出血清中的抗RCT-18抗体；3个剂量组外周血淋巴细胞中IgD+细胞(成熟B淋巴细胞)比率均略有下降,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；血清IgG、IgA和IgM从给药0.5～1.5个月后开始明显下降,恢复期结束时,除了中剂量的IgA水平,其他3个剂量RCT-18组的IgG、IgA和IgM水平均出现不同程度的回升.结论 RCT-18对恒河猴具有明显的但可恢复的免疫抑制作用.
作者：陈智勤；陈云祥；卢觅佳；辛艳飞；陈浩；张丽丽；黄敏；王文祥；房健民 刊期： 2013年第08期
目的 调查一起学校水痘暴发的流行因素,探讨水痘疫苗的保护效率.方法 采用1:1频数匹配病例对照研究方法,即以病例作为病例组,随机选择同班级、同性别,且无水痘患病史的相同数量未发病的健康学生作为对照组.使用自行设计的水痘危险因素调查表,对病例和对照进行问卷调查.结果 此次疫情共报告32例水痘病例,总罹患率为0.80％.波及深圳市龙岗区某学校4个班级,其中二年级23例,五年级9例,各班罹患率差异有统计学意义(P＜0.05)；接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间5d)比未接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间10 d)短；经常与其他年级或班级学生玩耍感染水痘的危险性是未与其他年级或班级学生玩耍的10.71倍,接触班里水痘病例的危险性是未接触的41.89倍；水痘疫苗的保护效率为6.76％,95％CI:10.00％～83.51％.接种进口水痘疫苗的罹患率远低于接种国产疫苗的罹患率(P＜0.05).结论 这是一起发生在某小学的水痘暴发疫情,经常与其他班级或年级的学生玩耍以及水痘疫苗保护效率欠佳,是此次疫情暴发的危险因素.
作者：罗念慈；李刚；李苑 刊期： 2013年第08期
目的 在Vero细胞中表达牛干扰素γ基因,并对其抗病毒活性进行鉴定.方法 将牛干扰素γ全基因克隆至pcDNA3.1(+)载体,构建重组表达质粒,经PCR及双酶切鉴定,将鉴定正确的阳性质粒通过脂质体法转染Vero细胞,分别采用间接免疫荧光和Western blot法检测细胞转染效率和干扰素γ蛋白的表达,采用细胞病变抑制试验检测其抗病毒活性.结果 间接免疫荧光显示绿色荧光,表明牛干扰素γ蛋白在Vero细胞中得到表达,转染效率约为50％;Western blot检测可见相对分子质量约为22 000的目的条带,进一步验证了该蛋白的表达；细胞病变抑制试验显示细胞病变明显减少,表明表达的干扰素γ蛋白具有明显的抗病毒活性.结论 成功在Vero细胞中表达了牛干扰素γ蛋白,其具有明显的抗病毒作用.
作者：宋佰芬；冯振月；孙虎男；马金柱；曹宏伟；崔玉东 刊期： 2013年第08期
目的 通过生物信息学分析禽流感病毒WDK/ST/27 /03(H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列,进一步探讨影响禽流感病毒感染血液肿瘤细胞株K-562和HL-60的机制.方法 RT-PCR扩增WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA基因,经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,对纯化的PCR产物进行测序.在GenBank中选取登录的H3N2和H4N6序列,利用在线生物信息工具ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)对这些序列和WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列进行比对分析.结果 RT-PCR扩增产物的大小与预期相符.生物信息学分析显示,WDK/ST/27/03(H3N2) HA的裂解位点是QNR*GLFG,Dk/ST/472/03 (H4N6) HA的裂解位点是KAAR*GLFG,此位置的氨基酸无变化.HA的226位氨基酸为Gln(Q),228位氨基酸为Gly(G),具有禽流感病毒HA受体结合位点的特征,影响受体结合的位点98Y、136S、152W、183H,190E、194L、222W、225G、227S未见变异.NA活性位点及影响酶活的位点均无变异,但WDK/ST/27/03(H3N2) NA在接近N-末端的茎部61～79位缺失19个氨基酸,致使NA茎部变短,且丢失2个潜在的糖基化位点.结论 WDK/ST/27/03(H3N2)的NA茎部缺失突变可能是造成其吸附、繁殖和复制能力低于Dk/ST/472/03 (H4N6)的一个因素.
作者：张红梅；赵丹；吴玫；牟旭鹏；周伯平 刊期： 2013年第08期
目的 优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性.方法 基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件；采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性.结果 在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100 ～ 200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的“S”型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc).采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91％.结论 优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好.
作者：何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山 刊期： 2013年第08期
目的 采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异.方法 采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称“Roche试剂”)及国产(简称“国产试剂”)乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性.结果 两种试剂定性结果阳性符合率为60.6％(134/221),阴性符合率为100％(94/94),总符合率为72.4％,检测结果差异有统计学意义(P＜0.01)；无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均＜0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因；定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性.结论 不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高.
作者：吴星；周诚；黄维金；蓝海云；辜文洁；梁争论 刊期： 2013年第08期
目的 采用双内参实时荧光定量PCR法检测肝癌中易洛魁族同源盒2(Iroquois homebox 2,IRX2)基因信使RNA(mRNA)的水平,探讨其对肝癌诊断及治疗的潜在意义.方法 采用荧光定量PCR法检测21份肝癌组织和21份癌旁组织中IRX2基因的表达水平,并以双内参β-actin和GAPDH为标准对照,计算每个样本IRX2基因的相对表达量,经Pfafl法进行相对定量,分析基因表达差异.结果 42份肝组织中均存在IRX2基因的表达,85.71％(18/21)的肝癌组织中IRX2基因表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.01).结论 肝癌组织中IRX2基因表达水平较低,表明IRX2基因在肝癌中出现异常表达,为从基因水平诊断及治疗肝癌提供了一个潜在靶点.
作者：余爽；王静；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第08期
目的 体外构建HBsAg缺失型乙型肝炎病毒(HBV)复制细胞模型,并探讨HBsAg对HBV复制的影响.方法 定点突变pch9质粒上HBV 1.1倍体基因S蛋白表达区,构建HBV1.1倍体HBsAg突变质粒,并进行测序鉴定；将鉴定正确的突变质粒瞬时转染HepG2细胞,设未突变pch9质粒转染细胞作为对照,采用ELISA法检测转染72 h的细胞培养上清中HBsAg的表达；Southern blot及Real-time PCR法检测转染72 h的细胞内HBV DNA的复制水平.结果 定点突变质粒经测序证实构建正确；突变质粒转染72 h的细胞培养上清中HBsAg A450值为(0.06±0.003),表达呈阴性,对照细胞A450值为(1.82±0.010),表达呈阳性,转染突变质粒72 h的细胞内HBV DNA条带浓度明显高于转染未突变质粒的细胞；转染突变质粒的细胞内HBV DNA绝对拷贝数分别为9.33×106、5.26×106,约为转染未突变质粒(6.91×105)的7.6～ 13.5倍.结论 已成功构建了HBsAg缺失型HBV复制细胞模型,为HBV DNA复制及相关研究提供了实验依据；推测HBsAg是HBV DNA形成的自限性因素,能够负调控HBVDNA复制.
作者：潘万龙；方岩；许舸；罗强；黄媛；陶颖；黄爱龙；胡接力 刊期： 2013年第08期
目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1 (cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制.方法 采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平；免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用；ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平.结果 与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低；P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用.结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关.P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点.
作者：邓玮；易永芬；屈玉玲；闫田静；文雪 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella) VirB 12蛋白.方法 利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB 12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 重组表达质粒pETV12经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约22 000,纯化的重组蛋白纯度达94％,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛种布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB 12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础.
作者：唐峰；闫广谋；唐雨顺；刘永华；李冰 刊期： 2013年第08期
目的 采用新型层析介质对无细胞百日咳疫苗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamen-tous hemagglutinin,FHA)和黏附素(pertactin,PRN)3组分进行分离纯化.方法 调整PT和FHA发酵液上清的pH值和电导后,PT经Capto SP ImpRes和Capto MMC进行两步层析,FHA经Capto SP ImpRes进行一步层析；PRN热处理原液经Capto Adhere和Capto SP ImpRes进行两步层析.纯化产物经4％～12％ NuPAGE进行鉴定,ImageQ分析纯度；LC-MASS(Thermo LTQ Velas)进行蛋白质的质谱检测；PT和FHA经BiaCore T200进行定量分析,并计算各步回收率.结果 纯化后,无细胞百日咳疫苗3组分纯度均达95％以上；PT和FHA的总回收率均在30％左右；电泳图谱上的各组分条带经LC-MASS鉴定,均与Uniprot Bordetella pertussis数据库数据高度同源.结论 采用新型层析介质有效纯化了无细胞百日咳疫苗PT、FHA和PRN,提高了抗原纯度,大大缩短了生产时间.
作者：田阳；史秋明；隋礼丽 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Aurora-A高表达对食管鳞癌血管生成及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)表达的影响.方法 将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的Aurora-A全长表达质粒pEGFP-C 1-Aurora-A转染至食管鳞癌细胞KYSE 150,经G418筛选获得Aurora-A高表达的细胞株(Aurora-A高表达组),同时设空质粒pEGFP-C1转染组(阴性对照组)和未转染组作为对照.Western blot检测各组细胞中Aurora-A蛋白的表达；采用小管形成及鸡胚尿囊膜试验检测Aurora-A高表达对肿瘤血管生成的影响；免疫组化法检测Aurora-A高表达对裸鼠移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD)的影响；Western blot检测Aurora-A高表达对KYSE150细胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2(Tyr1059)表达的影响.结果 Aurora-A高表达组中总Aurora-A蛋白的表达量约为阴性对照组和未转染组的2.5倍,提示Aurora-A高表达细胞系构建成功；Aurora-A高表达组生成的血管数量、MVD值和p-VEGFR-2的表达水平均显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 Aurora-A高表达可促进食管鳞癌中的血管生成,其机制可能与活化VEGFR-2有关.
作者：路娜；赵艳；王康；覃秀桃；王晓霞 刊期： 2013年第08期
目的 探讨含RGD (Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响.方法 取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响；分别用0.3、0.6、1.2 mg/kg RWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化.结果 随着RWR剂量增加,血小板大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L.随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加.结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓.
作者：赵海霞；杨涛；杨利军 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用.方法 采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘Notch信号分子mRNA的表达情况,筛选调控脊椎正常生长发育的重要信号分子,并采用免疫组化法进行验证.用重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在髓核(nucleus pulposus,NP)细胞中过表达,RT-PCR检测软骨细胞特征性标志物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞基质分泌情况.结果 小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子mRNA的表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著；Dll-1和Jag-1广泛表达于软骨细胞胞膜,随着小鼠年龄的增大,二者在椎间盘中的表达显著下降；BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,ACAN和COL2A1表达升高,甲苯胺蓝染色增强；Dll-1、Jag-1过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应.结论 Notch信号分子,尤其是Dll-1、Jag-1对正常脊椎生长及椎间盘软骨细胞的成熟分化具有明显的负性调节作用.
作者：曹光彪；李明；何通川；毕杨；罗庆；罗聪；何昀；宿玉玺；杨琼 刊期： 2013年第08期
目的 探讨冻存H22肝癌细胞应用于卡介苗抑瘤小鼠模型的可行性.方法 制备冻存H22细胞,分别将冻存10和83 d的H22细胞复苏,计算细胞存活率；将高(7.5×106个/ml)、中(5.0×106个/ml)、低(2.5×106个/ml)剂量的新复苏的H22细胞与1 mg/ml治疗用卡介苗混合后经左侧背部皮下免疫BALB/c小鼠,0.1 ml/只,对照组只接种相应浓度的H22细胞,接种后30 d,称量小鼠皮下瘤体重量,并计算试验组的抑瘤率,试验重复2次.结果 冻存10和83 d的H22细胞复苏后的存活率分别为85.45％和82.25％.所有对照组小鼠接种H22细胞后均有肿瘤形成,成瘤率均为100％;同一次试验中,各试验组瘤体重量均明显小于同剂量对照组(P＜0.05)；同一次试验中,各试验组间瘤体重量差异无统计学意义(P＞0.05)；不同次试验中,同剂量对照组间瘤体重量差异均有统计学意义(P＜0.05)；各试验组的抑瘤率均大于60％.结论 冻存H22细胞可满足抑瘤试验需要,但试验稳定性仍需改进.
作者：王鹏；赵爱华；寇丽杰；乔来艳；李贤珍；岳婷婷；王国治 刊期： 2013年第08期
目的 建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法.方法 将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态；MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响；对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性.结果 随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎；MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系；10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584 ～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58％ ～ 24.17％,批间变异系数15.08％ ～ 16.95％,总变异系数为15.81％,均符合细胞实验变异系数应小于30％的标准；PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109 ～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格.结论 建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究.
作者：石继春；朱洁；叶强 刊期： 2013年第08期
水痘是由水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)引起的儿童期常见急性呼吸道传染病.水痘为该病毒原发感染的表现,主要侵染儿童,以皮肤和黏膜上出现疱疹为特征,症状较轻,但传染性强[1].水痘减毒活疫苗是由VZV传代毒株制备而成,是预防VZV感染的有效手段[2].水痘疫苗的免疫持久性、普遍的耐受性和良好的安全性均已被广泛证实[3].在美国水痘疫苗接种实施后,水痘的发病率和死亡率有明显的降低[4-5].
作者：陈震；邱平；赵慧；王剑锋；袁力勇；方捍华；李长贵 刊期： 2013年第08期
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
作者：熊冬梅；姚雪；李林；舒静；陈俊霞 刊期： 2013年第08期
半纤维素分解微生物在自然界的物质循环过程中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一,而木聚糖则是半纤维素的主要成分.木聚糖酶(xylanase)可催化木聚糖的水解,在各种生物体内均发现木聚糖酶.在过去几十年中,已有上百种木聚糖酶基因被克隆至同源或异源宿主内来表达木聚糖酶,以期改变宿主特性并适于商业应用.本文综述了木聚糖酶基因的克隆和表达,并对基因工程技术在木聚糖酶上的应用前景进行了展望.
作者：王丹丹 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性.方法 经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64 ～ 223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.应用ProBondTM Resin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与Al(OH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平.结果 两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确；表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合；纯化的两种重组蛋白纯度均在95％以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平.结论 成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础.
作者：魏晓曼；闻晓波；冉旭华；崔玉东 刊期： 2013年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
