余爽；王静；董冰；鲍依稀
目的 在中国仓鼠卵巢细胞DG44中表达人血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-Fc,并检测其生物活性.方法 化学合成人VEGFR1的第2免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)基因和人VEGFR2的第3免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)基因,通过重叠PCR(Overlap PCR)将VEGFR1D2-VEGFR2D3和人IgG1Fc拼接形成VEGFR-Fc融合基因,插入真核表达载体pD2中,构建重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc,在FreeStyleTMMAX Reagent和OptiPROTM SFM介导下转染至DG44细胞中,MTX加压筛选稳定表达VEGFR-Fc蛋白的细胞株,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法检测细胞培养上清中VEGFR-Fc蛋白的表达.表达的VEGFR-Fc蛋白经HiTrapTM ProteinA FF柱纯化后,利用显微镜观察法和血管内皮细胞ECV304模型检测其生物活性.结果 VEGFR-Fc基因扩增产物大小为1 377 bp;重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc经双酶切和测序证明构建正确；质粒pD2-VEGFR-Fc转染的DG44细胞培养上清中含VEGFR-Fc蛋白,表达量为0.5 g/L；细胞培养上清经HiTrapTM ProteinA FF柱纯化后,杂蛋白去除效果较好；纯化的VEGFR-Fc能与VEGF特异性结合,抑制ECV304生长.结论 成功在DG44细胞中表达了具有生物活性的VEGFR-Fc,为进一步研究其在抑制血管生成和抗肿瘤中的作用奠定了基础.
作者：胡伟伟；范清林；尼钢钢；张玲；黄辉；宋礼华 刊期： 2013年第08期
目的 探讨蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制.方法 取BALB/c雌性小鼠,采用心脏灌注排血、胶原酶和胰蛋白酶原位消化法及组织块细胞迁出培养法,分离培养小鼠肺泡上皮细胞,经刮除法及差相消化贴壁法纯化小鼠肺泡上皮细胞,通过兔抗鼠角蛋白单克隆抗体细胞爬片组化染色法对细胞进行纯度鉴定；经不同终浓度的蓖麻毒素(0、0.000 1、0.001、0.01、0.1、1、10、100 μg/ml)处理细胞进行毒性分析；倒置显微镜下观察0.05 μg/ml蓖麻毒素对细胞的毒性作用.结果 获得的小鼠肺泡上皮细胞纯度达90％以上；随着蓖麻毒素浓度的增加,细胞活力降低,蓖麻毒素浓度与肺泡上皮细胞增殖抑制呈正相关；0.05 μg/ml的蓖麻毒素即可引起细胞皱缩、空泡化变性.结论 蓖麻毒素可引起原代培养肺泡上皮细胞变性损伤,损伤程度随蓖麻毒素浓度增高而加重,为蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制提供了理论依据,同时为进一步探讨蓖麻毒素的毒理作用提供了新的思路.
作者：王蒙；钱军；穆成龙；赵思言；郑关雨；付莹莹；孙玉成；万家余；刘文森 刊期： 2013年第08期
目的 探讨冻存H22肝癌细胞应用于卡介苗抑瘤小鼠模型的可行性.方法 制备冻存H22细胞,分别将冻存10和83 d的H22细胞复苏,计算细胞存活率；将高(7.5×106个/ml)、中(5.0×106个/ml)、低(2.5×106个/ml)剂量的新复苏的H22细胞与1 mg/ml治疗用卡介苗混合后经左侧背部皮下免疫BALB/c小鼠,0.1 ml/只,对照组只接种相应浓度的H22细胞,接种后30 d,称量小鼠皮下瘤体重量,并计算试验组的抑瘤率,试验重复2次.结果 冻存10和83 d的H22细胞复苏后的存活率分别为85.45％和82.25％.所有对照组小鼠接种H22细胞后均有肿瘤形成,成瘤率均为100％;同一次试验中,各试验组瘤体重量均明显小于同剂量对照组(P＜0.05)；同一次试验中,各试验组间瘤体重量差异无统计学意义(P＞0.05)；不同次试验中,同剂量对照组间瘤体重量差异均有统计学意义(P＜0.05)；各试验组的抑瘤率均大于60％.结论 冻存H22细胞可满足抑瘤试验需要,但试验稳定性仍需改进.
作者：王鹏；赵爱华；寇丽杰；乔来艳；李贤珍；岳婷婷；王国治 刊期： 2013年第08期
目的 分析狂犬病疫苗接种不良反应发生率及其影响因素.方法 收集2011年广西桂林市疾病预防控制中心接种门诊狂犬病疫苗接种记录和随访登记资料,采用描述性研究方法统计分析5剂免疫程序[分别于就诊时(0 d)、3、7、14、28 d,经上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]和2-1-1免疫程序[分别于就诊时(0 d)经左右上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,再于第7和21天各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]接种狂犬病疫苗的不良反应发生率,采用卡方检验和Logistic回归分析影响接种不良反应发生的因素.结果 接种狂犬病疫苗后不良反应发生率为2.10％(201/9 572),不良反应中以单纯发热(＞38℃)为主,占81.10％(163/201)；2-1-1免疫程序接种后不良反应发生率2.37％(128/5 398)明显高于5剂免疫程序[1.75％(73/4 174)](P＜0.05),5剂免疫程序接种后不良反应主要发生于前3针次,2-1-1免疫程序接种后不良反应均发生在第1针次；低年龄、受伤程度为Ⅱ级、被狗以外的动物致伤和按2-1-1免疫程序接种狂犬病疫苗后发生不良反应的风险高.结论 狂犬病疫苗接种后的不良反应较少且轻微.10岁以下儿童好采用5剂免疫程序,以减少接种不良反应的发生.
作者：黄少新；张振开；冯厚滨；潘海；任正洪 刊期： 2013年第08期
目的 对2011年吉林省肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)分离株全基因组进行序列分析.方法 将手足口病伴发重症脑炎患者的粪便样品接种至Vero细胞,分离EV71；采用RT-PCR法分8段扩增全基因组序列,进行双酶切及序列测定；应用Mega5软件构建EV71系统进化树；通过DNAMAN7和DNASTAR7软件进行EV71分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性比较；经RDP4软件对EV71分离株进行同源重组分析.结果 粪便样品接种至Vero细胞2d后,细胞出现圆缩、透亮、聚堆的病变现象；各PCR扩增产物经双酶切鉴定,均可见与预期大小一致的目的条带；经种系进化树分析显示,EV71分离株属C4a亚型,命名为EV71-JiLin-1 1-China;其与A、B和C亚型间核苷酸序列的平均同源性分别为22.44％、17.72％和11.96％,与A、B和C亚型间氨基酸序列的平均同源性分别为96.0％、97.2％和97.3％；全基因同源重组分析显示,EV71分离株的165 ～1 946和7 289 ～7 366核苷酸区有重组现象,分别源于分离自湖北的C4a-EV71-Hubei-09-China及马来西亚的B4-SB2864-SAR-00和C1-S18062-SAR-98.结论 2011年吉林地区流行的EV71为C4a基因型,为EV71基因特征及流行病学的研究提供了实验依据.
作者：罗永彬；曾韦锟；黄芬；井申荣 刊期： 2013年第08期
目的 筛选与白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)具有较强结合能力的功能小肽,并检测其对气道上皮细胞HBE16分泌黏蛋白(mucin,MUC)5AC的影响.方法 以重组人IL-13为靶蛋白,采用固相包被法对噬菌体随机展示十二肽库进行亲和筛选,并进行测序；将获得的与IL-13具有高亲和力的小肽偶联到嗜孔蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体上,制备KLH偶联肽K1、K3、K4,通过夹心ELISA法检测3种偶联肽对IL-13的封闭作用；通过细胞试验检测3种偶联肽对HBE16细胞分泌MUC5AC的影响.结果 经6轮亲和富集筛选,获得了3个与IL-13具有较高亲和力的噬菌体克隆,插入的十二肽编号依次为P1、P3、P4;3种偶联肽K1、K3、K4对IL-13均具有明显的封闭作用；经K1+IL-13、K3+IL-13和K4+ IL-13处理的HBE16细胞中MUC5AC基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显低于IL-13对照组(P＜0.01).结论 经偶联肽封闭后,可减少IL-13刺激的气道上皮细胞HBE16中MUC5AC的分泌,为慢性气道炎症黏液高分泌的防治提供了新的思路和手段.
作者：温建立；李琪；周向东；尤列·皮尔曼；维克·多克罗索夫；刘胜华 刊期： 2013年第08期
目的 探讨含RGD (Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响.方法 取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响；分别用0.3、0.6、1.2 mg/kg RWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化.结果 随着RWR剂量增加,血小板大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L.随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加.结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓.
作者：赵海霞；杨涛；杨利军 刊期： 2013年第08期
目的 评价注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)在恒河猴体内的安全性.方法 将恒河猴随机分为4组:低、中、高剂量RCT-18组和对照组,每组8只,低、中、高剂量RCT-18组分别经皮下注射4.6、16.1、57.5 mg/(kg·次)RCT-18,对照组经皮下注射0.7ml/(kg·次)0.9％氯化钠注射液,每3d上午同一时间给药1次,共给药91次.每天上午观察记录恒河猴的一般体征,每周常规监测体温1次,并在第1、2、3、13、14、15、28、29和30次给药前、给药后0.5、1、2、4和24h增加测量动物体温次数.给药0.5、1.5、3、4.5、6、7.5、9个月(停药次日)及停药48 d(恢复期结束),分别对心电图、眼科、血液学、血液生化学、尿常规、血清抗RCT-18抗体、外周血单个核细胞(PBMC)分类计数、血清免疫球蛋白水平(IgG、IgA和IgM)等各项指标进行检查.给药3、6、9个月和恢复期结束,每组各解剖2只猴,进行脏器大体观察,计算脏器系数,并进行组织病理学观察.结果 临床反应主要表现为给药后的体温升高；血液学指标出现具有一定剂量-反应关系的单核细胞(monocyte,MONO)数和网织红细胞(reticulocyte,RETIC)升高或网织红细胞平均体积(mean reticulocyte volume,MCVr)降低；3个剂量RCT-18组恒河猴的脏器重量和脏器系数与同期对照组相比,均无明显变化,且未见明显的脏器大体病变；3个剂量RCT-18组均出现无明显剂量相关但可逆的脾小结和淋巴滤泡萎缩；在整个试验期内未检测出血清中的抗RCT-18抗体；3个剂量组外周血淋巴细胞中IgD+细胞(成熟B淋巴细胞)比率均略有下降,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；血清IgG、IgA和IgM从给药0.5～1.5个月后开始明显下降,恢复期结束时,除了中剂量的IgA水平,其他3个剂量RCT-18组的IgG、IgA和IgM水平均出现不同程度的回升.结论 RCT-18对恒河猴具有明显的但可恢复的免疫抑制作用.
作者：陈智勤；陈云祥；卢觅佳；辛艳飞；陈浩；张丽丽；黄敏；王文祥；房健民 刊期： 2013年第08期
目的 建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法.方法 将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态；MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响；对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性.结果 随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎；MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系；10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584 ～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58％ ～ 24.17％,批间变异系数15.08％ ～ 16.95％,总变异系数为15.81％,均符合细胞实验变异系数应小于30％的标准；PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109 ～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格.结论 建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究.
作者：石继春；朱洁；叶强 刊期： 2013年第08期
目的 采用新型层析介质对无细胞百日咳疫苗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamen-tous hemagglutinin,FHA)和黏附素(pertactin,PRN)3组分进行分离纯化.方法 调整PT和FHA发酵液上清的pH值和电导后,PT经Capto SP ImpRes和Capto MMC进行两步层析,FHA经Capto SP ImpRes进行一步层析；PRN热处理原液经Capto Adhere和Capto SP ImpRes进行两步层析.纯化产物经4％～12％ NuPAGE进行鉴定,ImageQ分析纯度；LC-MASS(Thermo LTQ Velas)进行蛋白质的质谱检测；PT和FHA经BiaCore T200进行定量分析,并计算各步回收率.结果 纯化后,无细胞百日咳疫苗3组分纯度均达95％以上；PT和FHA的总回收率均在30％左右；电泳图谱上的各组分条带经LC-MASS鉴定,均与Uniprot Bordetella pertussis数据库数据高度同源.结论 采用新型层析介质有效纯化了无细胞百日咳疫苗PT、FHA和PRN,提高了抗原纯度,大大缩短了生产时间.
作者：田阳；史秋明；隋礼丽 刊期： 2013年第08期
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
作者：熊冬梅；姚雪；李林；舒静；陈俊霞 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用.方法 采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘Notch信号分子mRNA的表达情况,筛选调控脊椎正常生长发育的重要信号分子,并采用免疫组化法进行验证.用重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在髓核(nucleus pulposus,NP)细胞中过表达,RT-PCR检测软骨细胞特征性标志物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞基质分泌情况.结果 小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子mRNA的表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著；Dll-1和Jag-1广泛表达于软骨细胞胞膜,随着小鼠年龄的增大,二者在椎间盘中的表达显著下降；BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,ACAN和COL2A1表达升高,甲苯胺蓝染色增强；Dll-1、Jag-1过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应.结论 Notch信号分子,尤其是Dll-1、Jag-1对正常脊椎生长及椎间盘软骨细胞的成熟分化具有明显的负性调节作用.
作者：曹光彪；李明；何通川；毕杨；罗庆；罗聪；何昀；宿玉玺；杨琼 刊期： 2013年第08期
目的 在大肠埃希菌中高效表达重组犬干扰素α1(canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,并对其抗病毒活性进行初步研究.方法 根据大肠埃希菌密码子的偏嗜性,人工合成犬干扰素α1成熟蛋白编码基因,同时引入大肠埃希菌EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,将改造后合成的CaIFNα1核苷酸序列定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-CaIFNα1,并进行PCR及双酶切鉴定；将鉴定正确的重组表达质粒pET-CaIFNα1转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗VSV病毒活性.结果 重组表达质粒经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确；重组融合蛋白CaIFNα1相对分子质量约39 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的61.5％,可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗CaIFNα1多克隆抗体特异性识别,在MDCK细胞上呈现较高的抗病毒活性,为2.0× 106U/ml.结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在大肠埃希菌中实现了高效表达,表达产物具有较高的抗病毒活性.
作者：徐晓娟；王怡飞；王玉；米政实；黄永亮；郭霄峰 刊期： 2013年第08期
目的 优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性.方法 基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件；采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性.结果 在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100 ～ 200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的“S”型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc).采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91％.结论 优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好.
作者：何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山 刊期： 2013年第08期
目的 探讨miR-451对肾小球系膜细胞Ywhaz基因表达的靶向调控.方法 应用生物信息学技术对miR-451的靶基因进行预测,PCR法扩增靶基因3'UTR全长片段,插入荧光素酶报告载体pmiR-RB-REPORTTM vector中,构建荧光素酶报告质粒pmiR-Ywhaz-3'UTR.将miR-451 mimics和NC mimics分别转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,将miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,采用Real-time RT-PCR和Western blot法检测miR-451和Ywhaz的表达水平；将miR-451 mimics和NC mimics分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,检测各组细胞荧光素酶活性.结果 Ywhaz基因3'UTR区有11个碱基与miR-451种子序列匹配,其中7个碱基呈高度保守性；荧光素酶报告质粒经测序鉴定构建正确；miR-451在miR-451 mimics组呈高表达,在miR-451 inhibitor组表达降低；miR-451可抑制Ywhaz的蛋白表达；荧光素酶活性检测发现,miR-451可通过与Ywhaz3'UTR的结合,抑制Ywhaz的表达.结论 miR-451可直接靶向糖尿病相关基因Ywhaz,抑制其蛋白表达,为进一步研究miR-451调控早期糖尿病肾病发生发展的机制提供了依据.
作者：查何；彭惠民；马晶；周吉；王瑞敏；尹频；文利；张政 刊期： 2013年第08期
目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1 (cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制.方法 采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平；免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用；ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平.结果 与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低；P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用.结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关.P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点.
作者：邓玮；易永芬；屈玉玲；闫田静；文雪 刊期： 2013年第08期
目的 建立一种安全、快速、经济的新型狂犬病病毒中和抗体的检测方法.方法 在狂犬病病毒弱毒株HEP-Flury基因组Ψ区插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein eGFP)基因,利用反向遗传技术,拯救重组病毒rHEP-eGFP,分别采用荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定及电镜观察等方法对rHEP-eGFP病毒进行鉴定；分别绘制rHEP-eGFP和亲本毒株HEP-Flury的生长动力学曲线；将rHEP-eGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,测定各代次rHEP-eGFP的滴度,荧光显微镜下观察eGFP的表达；采用TCID50法检测狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11和rHEP-eGFP的毒力；以rHEP-eGFP病毒为抗原,建立新型荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization,FAVN)-eGFP,对25份犬血清的抗体效价进行测定,并与标准FAVN检测结果进行比较.结果 经荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定和电镜观察表明,成功拯救出rHEP-eGFP病毒；重组病毒rHEP-eGFP与亲本病毒HEP-Flury的生长特性相似；rHEP-eGFP连续传代9次,均能稳定表达eGFP; CVS-11的毒力为l08 TCID50/ml,rHEP-eGFP的毒力为107.3 TCID50/ml；FAVN-eGFP与FAVN测定25份犬血清抗体效价的结果具有良好的一致性.结论 建立的新型狂犬病病毒中和抗体检测方法(FAVN-eGFP)准确度高,特异性好.
作者：薛向红；郑学星；盖微微；李岭；马金柱；冯娜；王铁成；黄耕；赵永坤 刊期： 2013年第08期
目的 构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签的环氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)基因shRNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响.方法 将前期构建的真核表达质粒pGenesil-1-COX-2-shRNA及阴性对照质粒pGenesil-1-HK的表达启动子U6及shRNA序列亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP,酶切及测序鉴定正确后,经Pme Ⅰ线性化,转化感受态AdEasier,构建重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP,经Pac Ⅰ线性化,转染AD293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP,经3轮扩增后,测定滴度.RT-PCR和Western blot法检测感染细胞中COX-2基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTS法观察重组腺病毒对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP及重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP经酶切和测序鉴定均构建正确,并成功转染AD293细胞,经包装和3轮扩增后,重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP的滴度分别为1.4×1012和2.0×1012pfu/ml.重组腺病毒感染的SMMC-7721细胞中COX-2基因mRNA、蛋白相对表达量及细胞增殖能力均明显低于空白对照组及阴性对照组(P均＜0.05).结论 成功构建了COX-2基因shRNA重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP,且可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,为进一步研究COX-2作为肝癌基因治疗靶点及机制奠定了基础.
作者：董晋豫；王秦；梁勤东；李武县；马婷婷；熊海玉；李紫微；涂植光 刊期： 2013年第08期
目的 通过生物信息学分析禽流感病毒WDK/ST/27 /03(H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列,进一步探讨影响禽流感病毒感染血液肿瘤细胞株K-562和HL-60的机制.方法 RT-PCR扩增WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA基因,经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,对纯化的PCR产物进行测序.在GenBank中选取登录的H3N2和H4N6序列,利用在线生物信息工具ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)对这些序列和WDK/ST/27/03 (H3N2)和Dk/ST/472/03 (H4N6) HA、NA氨基酸序列进行比对分析.结果 RT-PCR扩增产物的大小与预期相符.生物信息学分析显示,WDK/ST/27/03(H3N2) HA的裂解位点是QNR*GLFG,Dk/ST/472/03 (H4N6) HA的裂解位点是KAAR*GLFG,此位置的氨基酸无变化.HA的226位氨基酸为Gln(Q),228位氨基酸为Gly(G),具有禽流感病毒HA受体结合位点的特征,影响受体结合的位点98Y、136S、152W、183H,190E、194L、222W、225G、227S未见变异.NA活性位点及影响酶活的位点均无变异,但WDK/ST/27/03(H3N2) NA在接近N-末端的茎部61～79位缺失19个氨基酸,致使NA茎部变短,且丢失2个潜在的糖基化位点.结论 WDK/ST/27/03(H3N2)的NA茎部缺失突变可能是造成其吸附、繁殖和复制能力低于Dk/ST/472/03 (H4N6)的一个因素.
作者：张红梅；赵丹；吴玫；牟旭鹏；周伯平 刊期： 2013年第08期
纳米乳是一种新型的载药系统,作为佐剂应用于流感疫苗的研究.本文主要介绍了纳米乳佐剂的结构特点,将其应用于流感疫苗研究的诸多优势,以及纳米乳佐剂的组成成分、主要制备方法和工艺等.在此基础上,对目前国际上和国内将纳米乳佐剂应用于流感疫苗的研究进展状况作一综述.
作者：刘洪卿 刊期： 2013年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
