刘姗；周晓燕；秦茹；舒逸；邹琳
目的 评价基于汉逊酵母系统的重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型L1蛋白类病毒颗粒(virus-like particles,VLP)的免疫效果.方法 将HPV58 L1重组汉逊酵母工程菌转种于3.7L发酵罐中,经甲醇诱导15h,收集菌体,高压均质破碎菌体后,采用亲和层析法纯化重组HPV58 L1蛋白,纯化后的HPV58 L1经重构后,经透射电镜观察VLP形态,动态光散射仪分析比较重构与未重构VLP粒径大小及分布情况.将HPV58 L1蛋白(1 μg/ml)及HPV58 L1蛋白+佐剂(蛋白含量1μg/ml,铝含量0.41 mg/ml)分别免疫BALB/c小鼠,免疫后4周采血分离血清,假病毒中和试验比较铝佐剂吸附与未吸附免疫效果;将HPV58 L1蛋白+佐剂(蛋白含量1μg/ml,铝含量0.41 mg/ml)免疫5组BALB/c小鼠,每组免疫时间均为0、1、3、5、7周,于初次免疫后第1、2、4、6、8周采血,分离血清,假病毒中和试验检测HPV58 L1免疫效果.结果 纯化后的重组HPV58 L1蛋白纯度约90％,可与小鼠抗HPV58 L1单克隆抗体发生特异性结合,在相对分子质量约56 000处,可见特异性条带.重构的HPV58 L1VLP直径约为50 nm,界限清晰,颗粒均一度较高,更接近天然病毒的颗粒形态;流体力学直径与天然病毒颗粒更接近,颗粒大小分布更均一,无较小半径的单体或五聚体.HPV58 L1蛋白+佐剂免疫小鼠血清中和抗体滴度明显高于HPV58 L1蛋白免疫组,差异有统计学意义(P＜0.05);5组小鼠血清中和抗体滴度在初次免疫后1周即开始升高,第6周达到高,重构的重组HPV58 L1蛋白可诱导小鼠产生较高水平的中和抗体.结论 应用含铝佐剂的HPV58 L1 VLP免疫小鼠,具有较好的免疫学活性,可作为多价HPV疫苗的组分抗原.
作者：靳玉琴；侯俊伟；张靖；陈实；李启明 刊期： 2013年第12期
目的 利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定.方法 根据大肠埃希菌密码子偏好性对hIGF-1天然基因序列进行同义突变,并人工合成,PCR扩增后,克隆至pET48b(+)载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白Trx A-hIGF-1经Ni2+亲和层析进行纯化,纯化产物经肠激酶酶切后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET48b-Trx A-hIGF-1经菌落PCR及测序证实构建正确;表达融合蛋白相对分子质量约为26 000,表达量约为菌体总蛋白的40％,主要以可溶形式存在于菌体裂解上清中,可溶性蛋白占总目的蛋白的比例不低于90％,纯化后纯度不低于90％,蛋白浓度为0.5 mg/ml;纯化的Trx A-hIGF-1融合蛋白可被肠激酶切割为相对分子质量约为8 000的hIGF-1蛋白和18 000的Trx A蛋白,hIGF-1蛋白可与兔抗hIGF-1多克隆抗体特异性结合.结论 成功表达了hIGF-1融合蛋白,为其生物学活性的研究及规模化生产奠定了基础.
作者：曹玉锋；李霄培；陈子杨；王健；常东英；贾媛；张健锋；吴菲；王伟善 刊期： 2013年第12期
杆状病毒-昆虫细胞表达系统是生物领域四大表达系统之一.近年,随着Cervarix(R)、Provenge(R)和FluBlok(R)的批准上市,杆状病毒-昆虫细胞表达系统的发展也取得了里程碑式的重大突破.同时,随着技术的快速发展,杆状病毒-昆虫细胞技术平台在疫苗研发和生产中的应用日益广泛而深入.本文拟对杆状病毒-昆虫细胞技术的起源、发展及其在人用重组蛋白疫苗生产中的应用作一综述.
作者：王伟善；吴浩飞 刊期： 2013年第12期
目的 分析流感病毒裂解疫苗生产用H1N1、H3N2和B型流感病毒毒株主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液的传代稳定性.方法 对制备的H1N1、H3N2和B型流感病毒毒株主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液进行全面的生物学特性检定;采用RT-PCR法从3个型别流感疫苗生产用毒株主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液中扩增血凝素(hemagglutinin,HA)及神经氨酸酶(neuramidinase,NA)基因片段,进行全基因序列测定分析.结果 制备的3个型别流感病毒毒株主种子批、工作种子批和疫苗病毒收获液的抗原性与WHO推荐毒株相一致,生物学特性均符合《中国药典》三部(2010版)标准;HA及NA基因核苷酸序列、氨基酸序列均一致,除H3N2型毒株的NA基因序列外,均与GenBank中登录的相应毒种基因序列同源性为100％.结论 本公司流感病毒裂解疫苗毒种制备及疫苗生产工艺,能够保持生产用毒株传代生物学特性的一致性及遗传性状的稳定性.
作者：程鹏飞；马雷钧；王瑜新；杨菲茹 刊期： 2013年第12期
目的 构建信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)β基因重组腺病毒质粒,并在小鼠乳腺癌4T1细胞中进行表达.方法 用HindⅢ和Xba Ⅰ双酶切质粒pcDNA-Zeo-STAT3β-C4 flag,获得目的基因STAT3β,克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,将构建正确的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-STAT3β经Pme Ⅰ酶切线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌(E.coli)BJ5183中,获得重组腺病毒质粒pAd-STAT3β,转染HEK293A细胞,包装出重组腺病毒,经扩增、CsCl梯度离心纯化后,检测病毒滴度.收集病毒,以50 MOI感染小鼠乳腺癌4T1细胞,RT-PCR及Western blot法检测STAT3β水平.结果 重组穿梭质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组腺病毒质粒经单酶切鉴定,证明构建正确;扩增、纯化后重组腺病毒滴度可达1.1×1013 pfu/ml.重组腺病毒Ad-STAT3β感染的小鼠乳腺癌4T1细胞,在转录和蛋白水平上均有STAT3β基因的表达.结论 成功构建了重组腺病毒质粒pAd-STAT3β,并在小鼠乳腺癌4T1细胞中表达目的基因STAT3β,为进一步研究乳腺癌的治疗奠定了基础.
作者：唐浩；党微旗；曹红；王林；陈婷梅 刊期： 2013年第12期
目的 评价甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在动物体内的安全性和免疫原性.方法 按《中国药典》三部(2005版)方法进行异常毒性试验.将小鼠随机分为7组,每组10只,实验组小鼠分别经小鼠后腿胫前肌肌肉注射不同血凝素含量(15、30、45 μg/0.5 ml)的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗,同时设疫苗对照组(相应规格的季节性H1N1流感病毒裂解疫苗)及阴性对照组(PBS),注射剂量均为0.1ml/只,间隔21d加强免疫1次,分别于初免后0、21、28、35及42d采集眼静脉血,分离血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体水平.结果 异常毒性试验结果符合《中国药典》三部(2005版)判定标准.与阴性对照组比较,初免后21、28、35、42d,各剂量实验组小鼠血清抗体水平均明显升高,21 d即上升到较高水平,28 d达到峰值(P均＜0.01);初免后0、21、28、35、42d,除35 d外,均高于相应剂量疫苗对照组(P均＞0.05).初免后21d,15、30、45 μg/0.5 ml剂量实验组小鼠血清中HI抗体阳转率分别为80％、90％和90％,HI抗体保护率分别为100％、90％和90％,与相应剂量疫苗对照组相比,差异均无统计学意义(P均＞0.05);初免后28、35、42d,15、45 μg/0.5 ml剂量实验组HI抗体阳转率维持在80％以上,30μg/0.5ml剂量实验组HI抗体阳转率略低,而各剂量实验组HI抗体保护率均在90％～100％之间.结论 甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在昆明小鼠中具有良好的安全性和免疫原性.
作者：赵大鹏；李晓波；任琦；王亚军；支百惠；李晓辕；吴业红；郭雪；张雪梅 刊期： 2013年第12期
目的 探讨过表达脑红蛋白(neuroglobin,NGB)对水溶性β-淀粉样蛋白片段1-42(beta-amyloid l-42,Aβ1-42)诱导的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用及其机制.方法 将质粒pEGFP-NGB转染经Aβ1-42诱导损伤的SH-SY5Y细胞,MTT法检测NGB对损伤细胞存活率的影响;JC-1染色法检测NGB对损伤细胞线粒体膜电位的影响;免疫细胞化学法及Western blot法分别检测损伤细胞中细胞色素C(cytochrome C,cytoC)和caspase-3、caspase-9的表达水平.结果 过表达NGB可明显提高Aβ1-42诱导损伤的SH-SY5Y细胞的存活率(P＜0.05),抑制损伤细胞线粒体膜电位的降低(P＜0.01),使损伤细胞内cytoC和caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 NGB可通过抑制与细胞凋亡密切相关的cytoC、caspase-3和caspase-9等蛋白的表达而发挥其神经保护作用.本实验为阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的治疗提供了实验依据.
作者：张雄；孙洁芸；高敏娜；李昱 刊期： 2013年第12期
目的 探讨不同种类与剂量乙型肝炎疫苗在青年中的免疫效果及安全性.方法 在江西省上饶市卫生学校抽取乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阴性、健康状况良好的15～20岁学生910名,随机分为A、B、C3组,按照0、1、6月免疫程序,分别经上臂外侧三角肌全程接种3针10 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)、20 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)和10 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(酵母),全程免疫后1个月采集接种者静脉血,分离血清,采用放射免疫法检测抗-HBs水平,并进行安全性观察.结果 全程免疫后1个月,A组与C组抗体阳转率、抗-HBs GMC水平和分布相近,差异均无统计学意义(P＞0.05);B组的抗体阳转率、抗-HBs GMC水平和≥500 mIU/ml的分布均明显高于A组和C组(P均＜0.01),抗-HBs GMC＜ 10和10～ 499 mlU/ml的分布显著低于A组和C组(P＜0.01或＜0.001).有1名接种者在接种后0.5h有局部疼痛症状,第2天疼痛消失,未见其他局部及全身不良反应.结论 接种高剂量乙肝疫苗的抗-HBs阳转率和抗-HBs GMC水平均高于低剂量乙肝疫苗,提示青年应接种高剂量乙肝疫苗,以建立有效的防御乙肝的免疫屏障.
作者：郑俐敏；黄素玲；孙志坚 刊期： 2013年第12期
目的 建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)荧光定量PCR检测方法,并进行验证及初步应用.方法 根据GenBank中登录的PPV NADL-2株序列,针对VP2区设计引物,以提取的PPV核酸为模板,进行荧光定量PCR扩增;优化反应体系及反应条件,并进行专属性、重复性和敏感性验证.用建立的荧光定量PCR法检测辛酸沉淀及L、P、S公司生产的纳米膜过滤器去除制品中PPV的效果.结果 优化后的荧光定量PCR反应体系:Eva Green预混液7.5μl,上下游引物各0.5μl,模板DNA 1μl,补加dH2O至15 μl;反应条件:95 ℃ 3 min,95℃10s和60℃10s,共40个循环;模板浓度的对数值与循环数的相关性较好(R2=0.999),扩增效率为102.5％.该方法可特异性扩增PPV,而对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、牛细小病毒(bovine parvovirus,BPV)、鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)及猪肾细胞PK-15无扩增反应;试验内CV为0.79％～2.81％,试验间CV为1.23％ ～2.21％,均＜5％,低检测限为102 copies/μl.辛酸沉淀可使样品中PPV浓度下降5 Logs;不同公司生产的20 nm膜滤器过滤量及过滤效果均有明显差异,其中S公司生产的滤器效果好,可使样品中的PPV滴度下降4Logs.结论 已成功建立了PPV荧光定量PCR检测方法,为快速、准确的检测病毒去除工艺对PPV的去除效果奠定了基础.
作者：郑朝共；许锬；容新宗；黄琰 刊期： 2013年第12期
目的 建立重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准.方法 分别采用分子筛高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)、反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)和还原毛细管电泳(reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,rCE-SDS) 测定3批重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白成品的纯度;采用AlphaScreen组氨酸检测试剂盒进行重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白受体配体结合试验测定效价;采用ELISA法进行鉴别试验;蛋白含量、pH值、渗透压摩尔浓度、Tween-20、不溶性微粒、外观、澄清度、生物学活性、水分、内毒素、无菌试验、异常毒性、渗透压等项目的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行.结果 SE-HPLC、RP-HPLC及rCE-SDS测定3批供试品的纯度分别为＞98％、＞80％和＞99％;重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白对血管生成素(angiopoietin,Ang)与酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains,Tie)结合的抑制作用呈剂量依赖性,3批供试品与标准品的剂量反应曲线相同,呈典型的倒S型,R2均＞0.98,结合效价均在平均值的正负25％区间内;3批供试品的S/N值均＞1.60;其他项目检测结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定.结论 建立的质控方法具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.
作者：范文红；韩春梅；李响；毕华；丁有学；刘兰；饶春明；王军志 刊期： 2013年第12期
目的 采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定钩端螺旋体疫苗中的苯酚含量.方法 色谱条件:色谱柱:Novo-Pak C-18层析柱(3.9mm× 150mm,4μm),流动相:甲醇-超纯水(40∶60,v∶v),流速:1.0 ml/min,检测波长:270 nm,柱温:30℃,进样量:10μl.对建立的方法进行线性范围、精密性、重现性、准确性验证及初步应用.结果 苯酚浓度在18.552 ～ 129.864 μg/ml范围内,色谱峰面积与苯酚浓度呈良好的线性关系(r=0.999 7);苯酚对照品溶液连续进样6次,主峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.25％,保留时间的RSD为0.10％;用建立的方法检测6份钩端螺旋体疫苗样品中苯酚含量的RSD为0.5％;准确性试验的总平均回收率为100.6％,RSD为1.0％; HPLC法和溴量滴定法测定4批钩端螺旋体疫苗样品中苯酚含量的结果基本一致.结论 HPLC法可以更准确地测定苯酚含量,且该方法操作简便、快速,精密性高,重现性好,无干扰,适用于钩端螺旋体疫苗成品中苯酚含量的检测.
作者：张瑾；王瑾；杨英超；张影；薄淑英；王国柱；辛晓芳 刊期： 2013年第12期
目的 探讨肿瘤抗原MUC1抑制骨髓来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)产生的机制.方法 分离C57BL/6小鼠股骨骨髓细胞,分别与稳定表达含22个串联重复序列的全长人MUC1 cDNA片段的B16细胞(B16-MUC1)和空质粒对照B16细胞(B16-neo)培养上清共培养,流式细胞术分析MUC1对MDSC产生及MDSC表达MUC1蛋白的影响;瑞氏姬姆萨染色观察MUC1对骨髓细胞生长形态的影响;流式细胞术检测共培养的骨髓细胞中单核细胞和巨噬细胞标志物CD14和F4/80的表达及成熟单核-巨噬细胞标志物CD11b和CD68的表达.结果 正常C57BL/6小鼠骨髓细胞分别与B16-neo和B16-MUC1细胞培养上清共培养24和48 h后,BM+ B16-MUC1组骨髓细胞中CD11b+Gr-1+ MDSC数量较BM+ B16-neo组均明显减少(P＜0.05),共培养48 h后,BM+ B16-MUC1组的CD1 1b+Gr-1+ MDSC中MUC1蛋白的表达较BM+ B16-neo组明显增多(P＜0.01);BM+ B16-MUC1组骨髓细胞中单核-巨噬细胞数量增多;与BM+ B16-neo组相比,BM+ B16-MUC1组CD14+、F4/80+和CD68+细胞表达数量明显增高(分别为P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05),CD1 1b+平均荧光强度明显增高(P＜0.01).结论 MUC1通过诱导骨髓细胞向单核-巨噬细胞分化,从而抑制MDSC的产生.
作者：马吉春；姚冬明；杨静；陈芹；邓兆群；钱炜；钱军；陈星星；安翠 刊期： 2013年第12期
目的 原核表达并纯化钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD).方法 利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻sod基因,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-sod,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白SOD-GST利用蛋白纯化树脂Glutathione SepharoseTM 4 Fast Flow纯化后,采用改进的邻苯三酚自氧化法测定重组SOD的活性.结果 重组表达质粒pGEX-4T-sod经双酶切和测序证实构建正确;表达的融合蛋白SOD-GST的相对分子质量约为49 000,表达量占菌体总蛋白的30.2％,在重组菌裂解上清和沉淀中均有融合蛋白的表达;纯化的融合蛋白纯度为82.4％,浓度为2.8 mg/ml,从可溶性表达产物中纯化的酶的比活性为1 440U/mg.结论 在大肠埃希菌中成功表达并纯化了具有生物学活性的钝顶螺旋藻SOD,为其产业化生产奠定了基础.
作者：赫慧琛；姜晓杰；高金亮；徐萌杰；王英；王文杰；李炜；祁美荣 刊期： 2013年第12期
目的 研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证.方法 用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品.对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证.结果 鼠疫菌F1抗原的佳包被浓度为0.6 μg/ml,HRP标记的F1抗原的佳工作浓度为1∶7000.制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5％,板间变异系数为7.1％;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95％ ～ 112％之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100％;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年.结论 成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断.
作者：常娅莉；席仲兴；吴智远；徐秉臣；张正雷；韩少波；热娜；雷刚；彭林锋 刊期： 2013年第12期
目的 观察武汉生物制品研究所有限责任公司(以下简称武汉公司)吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTaP)的免疫原性和免疫持久性.方法 于2007年9月在成都地区选择670名未接种过百白破联合疫苗,无百日咳、白喉、破伤风疾病史的足月出生的健康婴儿,按2∶1比例随机接种3剂观察疫苗(武汉公司生产的DTaP)和对照疫苗(某厂家生产的DTaP),进行基础免疫,每剂间隔1个月,2009年3月进行加强免疫,接种剂量均为0.5ml/(剂·人).基础免疫接种前和全程接种后30～ 50 d、加强免疫前和加强免疫后1个月、1、2、3年分别采集静脉血,分离血清,经ELISA法测定百日咳毒素抗体(pertussis toxin antibody,PT-Ab)、丝状凝集素抗体(filamentous hemagglutinin antibody,FHA-Ab)、白喉抗体(diphtheria antibody,D-Ab)、破伤风抗体(tetanus antibody,T-Ab)GMT,若免疫前抗体为阳性,则计算4倍增长率.结果 基础免疫试验组351例、对照组193例完成了全程接种,即544例受种者符合方案要求.DTaP基础免疫后,试验组与对照组的4种抗体阳转率及抗体4倍增长率差异均无统计学意义(P＞0.05);试验组FHA-Ab GMT明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).加强免疫前,试验组与对照组4种抗体阳转率差异无统计学意义(P＞0.05);加强免疫后1个月,试验组FHA-Ab阳转率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);加强免疫后1、2、3年,试验组与对照组4种抗体阳转率和抗体GMT差异均无统计学意义(P＞0.05);加强免疫后1年,4种抗体GMT均高于有效保护水平,加强免疫后2年,PT-Ab和FHA-Ab GMT已降至保护水平以下,加强免疫后3年,D-Ab、T-Ab GMT仍高于保护水平.结论 武汉公司生产的DTaP具有较好的免疫原性和免疫持久性.
作者：邹光荣；兰红；项美娟；杨汝沛；杨晓明；侯启明；张量智；王丽蝉；李军 刊期： 2013年第12期
目的 比较不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒(rabies virus,RV)的效果.方法 将RV固定毒3aG-V株按0.01 MOI比例接种至Vero细胞中,制备RV原液,分别用截留分子量100 KD和300 KD的膜包超滤浓缩60倍,B-丙内酯灭活后,验证病毒液浓缩过程膜下液的病毒灭活效果;采用Sepharose 4FF凝胶层析纯化灭活的病毒浓缩液,Lowry法测定病毒浓缩液和纯化液中的蛋白质含量;酶联免疫法测定病毒浓缩过程膜下液、浓缩液和纯化液中的RV抗原含量.结果 100 KD和300 KD的超滤膜包均能有效截流RV,3次试验膜下液RV抗原含量均为0 IU/ml,观察期内小鼠均健存.300 KD膜包超滤的浓缩液和纯化液比100 KD超滤膜包超滤的浓缩液和纯化液中杂蛋白含量低,抗原含量高.结论 截留分子量300 KD的膜包比100 KD的膜包更适用于RV的浓缩.
作者：赵永强；杨丽；白春杰；刘瑞 刊期： 2013年第12期
目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-451对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 在Lipofectamine 2000介导下,将miR-451模拟物(miR-451 mimics)及mimics对照分别转染高糖培养的肾小球系膜细胞,另设高糖未转染组和低糖未转染组,实时荧光RT-PCR法检测各组细胞中miR-451的表达水平;MTT法检测miR-451对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响;Western blot法检测靶蛋白Ywhaz、p-p38 MAPK和p-MKK3的表达水平.结果 miR-451组细胞中miR-451的表达水平较mimics对照组明显升高(P＜0.01);miR-451组第2、3、4天的细胞增殖能力明显低于高糖未转染组(P均＜0.05),第3、4天明显低于mimics对照组(P均＜0.05);与mimics对照组和高糖未转染组比较,miR-451组细胞中Ywhaz、p-p38 MAPK和p-MKK3的表达水平均明显下降(P均＜0.05).结论 miR-451可抑制Ywhaz蛋白的表达,降低p38MAPK信号途径中p-p38 MAPK和p-MKK3蛋白的表达,从而降低高糖诱导的肾小球系膜的增殖.本实验为研究糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发病机制提供了新的思路.
作者：尹频；贺勇；查何；周吉；文利；彭惠民；张政 刊期： 2013年第12期
目的 采用多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞残留DNA.方法 采用滤芯(滤板)澄清、鱼精蛋白处理、核酸酶处理、Sepharose 4FF层析纯化或澄清、核酸酶、Sepharose 4FF层析纯化结合的方法去除Vero细胞培养的狂犬病病毒液中的Vero细胞DNA,检测Vero细胞DNA残留量、抗原含量、核酸酶残留量及疫苗效价.结果 0.45 μm UB玻璃纤维澄清病毒液,抗原损失率较小;鱼精蛋白去除Vero细胞DNA,抗原损失量较大;核酸酶处理后,病毒液中Vero细胞DNA残留量仍高于1 ng/ml;经Sepharose 4FF层析纯化,能有效去除浓缩后经核酸酶处理的病毒液中的核酸酶及一定量的Vero细胞DNA;采用多种方法结合去除病毒液中Vero细胞残留DNA,DNA残留量＜100 pg/ml,疫苗效价≥4.0 IU/ml,均达到《中国药典》三部(2010版)要求.结论 多种方法结合能有效去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量,且疫苗效力达到《中国药典》三部(2010版)要求.
作者：刘杰；刘辉；杨会强；康庄；孙艳；毛川成；何敏；李玉华 刊期： 2013年第12期
目的 原核表达、纯化猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),并检测其生物学活性.方法 以提取的猪外周血淋巴细胞基因组RNA为模板,PCR扩增猪IL-2基因,插入原核表达载体pBV220,构建重组表达质粒pBV220/IL-2.将重组表达质粒转化感受态大肠埃希菌DH5α,经含Amp的LB平板筛选后,将重组菌于LB培养液中培养,分别于不同培养时间进行活菌计数,绘制重组菌的生长曲线;42℃诱导表达重组蛋白,经尿素纯化后,采用CTLL细胞/MTT比色法检测其生物学活性.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;重组菌的佳开始诱导时间为重组菌发酵培养10 h;重组蛋白相对分子质量约17 400,表达量占菌体总蛋白的19％,纯化后纯度达95％;重组蛋白的生物学活性可达3×105 IU/ml.结论 原核表达并纯化了具有生物学活性的重组猪IL-2蛋白,为其进一步研究和产业化生产奠定了基础.
作者：李凤华；朱战波；江国托 刊期： 2013年第12期
目的 探讨癌基因c-myc对食管癌有丝分裂检查点效应蛋白BubR1的调控作用.方法 将Bub1b基因启动子亚克隆至载体pSEAP2-Basic中,构建重组质粒pSEAP2-Bub1b-P2000,在Lipofectamine 2000的介导下,分别转染过表达c-myc的HEK-293细胞(经Ad-c-myc感染)和ECA-109细胞;转染6h后,经c-myc抑制剂10058-F4作用ECA-109细胞.SEAP化学发光法检测各组细胞的ALP活性;采用RT-PCR和Western blot法分别检测抑制c-myc表达的ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平.结果 重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定构建正确;重组质粒转染过表达c-myc的HEK-293细胞和抑制c-myc表达ECA-109细胞的ALP活性明显升高(P＜0.000 1);抑制c-myc表达可明显下调ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平(P＜0.05).结论 癌基因c-myc对食管癌细胞中BubR1的表达有正调控作用,为进一步研究BubR1在食管癌中发挥的作用奠定了基础.
作者：宋培培；胡敏；湛晓琴；章帆；施琼；翁亚光 刊期： 2013年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
