任莉莉；李富荣；刘冬周；齐晖；欧阳志斌
甘丙肽受体2(Galanin receptor 2,GalR2)是一种G蛋白偶联受体,其mRNA集中分布于下丘脑、海马、杏仁核、皮质部分区域和背根神经节.甘丙肽(Galanin)与GaIR2结合,参与调节机体摄食、认知、学习与记忆、痛觉、情绪反应、炎症、肿瘤等多种生理病理过程.GaIR2是治疗阿尔茨海默病、抑郁和焦虑、疼痛、代谢综合征及肿瘤等疾病潜在药物作用的靶点.本文就GaIR2受体的结构、分布及其与疾病的相关性作一简要综述.
作者：张丹 刊期： 2012年第01期
目的 原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应.方法 从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性.经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性.结果 重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18000,诱导5h表达量高,约占菌体总蛋白的15％,主要以包涵体形式表达；重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合；纯化的重组蛋白纯度约为90％,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应.结论 成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础.
作者：郑毅；陈全；蒋攀；刘革力；张路瑜 刊期： 2012年第01期
目的 探讨氢氧化锌与低分子量透明质酸(Low molecular weight hyaluronic acid,LHA)复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 在甲肝乙肝联合抗原中加入不同配比的Zn(OH)2与LHA复合佐剂,经皮下免疫ICR小鼠,并设铝佐剂组、生理盐水对照组和单纯抗原组.分别于免疫后4、8、12和16周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清抗-HAV IgG和抗-HBsAg IgG水平.结果 除对照组小鼠血清检测不到抗-HAV IgG抗体外,其余各组小鼠血清抗-HAV IgG水平在12周时达峰值,抗-HBsAg IgG水平在8周时达峰值,以后逐渐下降；免疫后4、8、12和16周,多数复合佐剂组抗-HAVIgG和抗-HBsAg IgG水平与抗原组和铝佐剂组相比,显著增强(P＜0.05).且抗体水平持续时间较长.结论 适当剂量配比的氢氧化锌与LHA复合佐剂能增强甲肝乙肝联合抗原诱导的体液免疫应答.
作者：施建东；胡凝珠；赵蕊蕊；沈霏；段志青；胡云章 刊期： 2012年第01期
目的 研究Skp2基因表达下调对HepG2细胞生物学特性及p27和SP1蛋白表达的影响.方法 构建Skp2基因干扰慢病毒质粒,包装后感染HepG2细胞.48 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况；侵袭小室试验检测细胞侵袭能力；Western blot检测Skp2基因下调后p27和SP1蛋白的表达情况.结果 与正常HepG2细胞组相比,Skp2干扰慢病毒组细胞Skp2蛋白的表达明显下调,p27蛋白表达大幅增加,细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加近两倍,G0/G1期细胞增多；SP1蛋白表达减少,浸润、迁移的细胞数减少约50％(P＜0.05).结论 Skp2蛋白表达下调抑制了HepG2细胞的增殖,促进HepG2细胞的凋亡,造成细胞侵袭能力减弱.Skp2蛋白表达下调导致p27蛋白表达上调、SP1蛋白表达下调,在上述生物学特性变化中可能发挥了重要作用,为深入探讨肝癌的病理机制奠定了基础.
作者：唐卫军；张幸平；邹洪元；彭春芳 刊期： 2012年第01期
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)培养过程中即时监测细胞浓度的可行性.方法 将6～8周龄的SD大鼠处死,分离MSCs,在24孔板上半连续灌注培养和自制的生物反应器上连续灌注培养,通过实时检测培养过程中的葡萄糖消耗率(Glucose consumption rate,GCR)、乳酸累积率(Lactic acid production rate,LPR)及相应的干细胞浓度,并计算葡萄糖的比细胞得率( qGlu)及乳酸累积比细胞得率(qLac),分析其稳定性及细胞浓度与GCR和LPR之间的关系.结果 所分离培养的MSCs形态均一,轮廓鲜明,呈典型的短小梭形.在24孔板上半连续灌注培养的qGlu和qLac分别为1.84和1.74 mg/(106个·d)；生物反应器连续灌注培养的qGlu和qLac分别为1.66和1.61 mg/(106个·d),二者比细胞得率均为恒值.结论 MSCs培养过程中,GCR、LPR与细胞浓度具有良好的线性关系,通过对葡萄糖浓度和乳酸浓度的测定,可以实时监测MSCs的浓度.
作者：郑琛；孙海英；齐念民 刊期： 2012年第01期
目的 探讨乌司他丁( Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及胰岛素样生长因子受体1(Insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、血小板衍生因子A(Platelet-derived growth factor A,PDGFA)和血小板活化因子受体(Platelet-activating factor receptor.PAFR)表达的影响.方法 将原代培养的乳腺癌细胞分为4组:UTI组(800 IU/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+ TXT组和培养液对照组,MTT法检测细胞的增殖活力；Transwell小室法检测细胞的侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；RT-PCR和Western blot检测细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 UTI和TXT均可显著抑制人原代乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,下调细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且UTI与TXT联合使用时效果更为明显.结论 UTI能够增强TXT对人原代乳腺癌细胞的抑制作用,二者具有协同效应,这种机制可能与UTI影响IGF-1R、PDGFA和PAFR的表达有关.
作者：王宏；孙治君；钟彪 刊期： 2012年第01期
目的 建立脑心肌炎病毒( Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测.方法 采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法；用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较；采用所建立的方法对1 475份人血清和l 309份猪血清进行检测.结果 建立的双抗原夹心ELISA法的佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为l0％马血清或2％鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1:400.该方法的批内和批间变异系数均小于10％；热稳定性较好；与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5％.应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8％和63.4％.结论 已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段.
作者：樊得英；冯若飞；李向茸；张海霞；凡静静；沈心亮；马忠仁 刊期： 2012年第01期
目的 探讨氢氧化锌[Zn(OH)2]对IPV-HBV联合疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将ICR小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Zn(OH)2(0.5 mg)组、IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Al(OH)3(0.5 mg)组和IPV-HBV组,经大腿肌肉内侧免疫2次,间隔4周.分别于初次免疫后第4、8、12、16、20和24周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中各抗原的特异性IgG抗体水平.结果 各实验组相对于对照组,在初次免疫后4周时均产生针对各抗原的特异性IgG抗体；8周时达高,并能持续较长时间.IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Zn(OH)2组产生的特异性IgG抗体水平均显著高于其他各组(P＜0.05或P＜0.01).结论 Zn(OH)2能明显增强IPV-HBV联合疫苗诱导的小鼠体液免疫应答,其免疫佐剂效应优于Al(OH)3佐剂.
作者：张晶；刘国超；乌美妮；王海漩；胡云章；胡凝珠 刊期： 2012年第01期
目的 观察大鼠局灶脑缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)后脑实质生长抑制与DNA损伤修复相关基因β(Growth arrest and DNA-damage inducible gene β,Gadd45β)的表达变化,探讨其神经保护作用及机制.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑I/R对照组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组和脑I/R对照组均在缺血再灌注后经腹腔注射生理盐水,PDTC组经腹腔注射等剂量的PDTC( 100 mg/kg).采用Zea Longa评分法对患肢运动功能进行评分,免疫组化法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达,RT-PCR法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45β mRNA的表达.结果 脑I/R对照组和PDTC组大鼠在各时间点神经功能缺损评分呈相同变化趋势,PDTC组大鼠在72 h神经功能缺损评分显著高于脑I/R对照组(P＜0.05).脑I/R对照组大鼠缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达在缺血再灌注后6h开始增高,24h达高峰,之后开始下降,但仍高于假手术组(P＜0.05);PDTC组大鼠Gadd45β蛋白的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P＜0.05)；脑I/R对照组大鼠Gadd45β基因mRNA在12 h的表达明显高于假手术组,24h达高峰,之后开始下降,但72 h仍高于假手术组(P＜0.05)；PDTC组大鼠Gadd45β基因mRNA的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P＜0.05).结论 PDTC可抑制大鼠脑缺血灶周边脑组织中Gadd45β的表达,Gadd45β可能具有神经保护作用.
作者：李建瑞；李长清；刘迎梅；刘彬 刊期： 2012年第01期
目的 探讨雪胆甲素( CucurbitacinⅡa)对人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC )A549细胞增殖的影响.方法 以不同浓度的雪胆甲素作用于A549细胞和小鼠原代培养的脾细胞,采用MTT法检测雪胆甲素对两种细胞增殖的影响；流式细胞术及Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒检测雪胆甲素对A549细胞细胞周期及凋亡的影响.结果 雪胆甲素对A549细胞和小鼠原代脾细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性,25～100 μmol/L的雪胆甲素对A549细胞的增殖抑制率明显高于脾细胞；雪胆甲素可将大部分A549细胞阻滞于G0/G1和S期,少部分细胞阻于G2和M期,并可促进细胞凋亡.结论 雪胆甲素可明显抑制A549细胞增殖,在NSCLC高效低毒的治疗药物的开发中具有重要价值.
作者：高申；于孟可；魏佳慧；刘百歌 刊期： 2012年第01期
目的 了解重庆地区不同类型乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型的分布特点及其临床意义.方法 应用荧光定量分型PCR(GQ-PCR)法检测207例HBV感染者的HBV基因型,并用直接测序法验证其基因分型结果的准确性.结果 GQ-PCR成功分型204份临床样本,3例(1.45％)未能检出,其中,B型127例,占61.35％;C型29例,占14.01％;B/C混合型48例,占23.19％.C基因型的病毒载量明显高于B基因型及B/C混合基因型(P＜0.05),B基因型与B/C混合基因型的病毒载量差异无统计学意义(P＞0.05).随机选取的90份血清样本经GQ-PCR和直接测序法检测其基因型,两种方法的检测结果一致性较好(Kappa=0.834,P＜0.05).结论 重庆地区HBV感染者以B型为主要基因型,其次为B/C混合型,混合感染率高于以往研究结果.C基因型患者HBV-DNA水平高于B基因型及B/C混合基因型,可能与C基因型HBV感染导致肝脏损害较重有关.
作者：张秀瑜；赵耀；张文露；胡源；黄爱龙 刊期： 2012年第01期
目的 分析2010年吉林省麻疹减毒活疫苗(简称MV)强化免疫及2009～ 2010年麻疹类减毒活疫苗常规免疫疑似预防接种异常反应(Adverse events following immunization,AEFI)发生特征,探讨MV强化免疫及MV类常规免疫的安全性以及减少预防接种异常反应的措施.方法 通过全省AEFI报告信息管理系统,收集MV强化免疫和MV类常规免疫AEFI报告的个案数据,采用描述性统计方法对相关指标进行流行病学分析.结果 吉林省2010年MV强化免疫AEFI报告发生率为287.68/100万剂次；接种后≤3d,AEFI报告333例,占总数的87.17％；2009～ 2010年MV类常规免疫报告AEFI发生率为62.35/100万剂次；接种后≤3 d,AEFI报告30例,占总数的58.82％.两种接种形式的AEFI报告中,男性均多于女性；临床损害均以过敏性反应多见,绝大多数病例预后良好.结论 MV类常规免疫较MV强化免疫AEFI报告发生率低,各地区的AEFI报告发生率存在一定差异,需进一步加强培训和技术指导,提高AEFI监测系统的敏感性和及时性；接种MV后≤3d是监测的重点,应加强对受种儿童的访视,做好AEFI的主动监测,对出现的异常反应给予及时有效的治疗.
作者：陈超；周剑惠；李大强；刘影；付思美；曹凤瑞；田鑫；林琳；侯祥 刊期： 2012年第01期
目的 探讨姜黄素( Curcumin)对脓毒血症诱导的心肌功能障碍(Sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD)小鼠转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta-1,TGF-β1)表达的影响.方法 将SD小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒血症组(Sep组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和姜黄素组(Cur组),Sep、DMSO和Cur组采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)复制SIMD模型,造模24h后,Cur组经腹腔注射200mg/(kg·d)姜黄素,Sham和Sep组经腹腔注射等量生理盐水,DMSO组经腹腔注射等量DMSO.造模成功后0、6和12 h,各组小鼠经从右颈动脉插管使用BL-410多功能监护仪监测左心室收缩压(Left ventricular systolic pressure,LVSP)、左心室舒张末期压(Left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左室内压力变化大上升和下降速率(Maximum rate of left ventricular pressure development and decay,LV±dp/dt-max)；HE染色观察心肌组织病理变化；Western blot检测心肌组织中TGF-β1蛋白的表达.结果 Cur组小鼠24和72 h存活率均高于Sep组；心脏血流动力学指标(LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max)在各时间点与Sep组比较,均明显上升(P＜0.05或P＜0.01)；各种心肌损害的病理学改变与Sep组相比,从6h开始明显减轻；心肌组织中TGF-β1蛋白的表达量较Sep组明显下降(P＜0.05).各指标DMSO组与Sep组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).心肌病理学改变、心脏血流动力学变化及TGF-β1蛋白表达变化在各时相点存在一致性.结论 姜黄素对SIMD小鼠的心肌保护作用与抑制TGF-β1蛋白的表达有关.
作者：林时辉；徐昉；刘琼 刊期： 2012年第01期
目的 探讨血清HE4、CA125和T淋巴细胞亚群联合检测在卵巢癌早期诊断中的应用.方法 采用酶联免疫分析(EIA)和电化学发光免疫分析(ECL IA)法分别检测卵巢恶性肿瘤患者85人、卵巢良性肿瘤患者120人和健康对照者150人血清中HE4和CA125的水平,应用流式细胞术检测各组外周血T淋巴细胞亚群的变化.结果 卵巢恶性肿瘤组与健康对照组及良性肿瘤组比较,血清HE4和CA125水平均显著升高(P＜0.01)；外周血T淋巴细胞CD4亚群下降,CD8亚群上升,CD4/CD8比值显著下降(P＜0.05);HE4、CA125和T淋巴细胞亚群联合检测的敏感性为93.7％,特异性为98.6％;Ⅰ ～Ⅱ期患者外周血T淋巴细胞亚群阳性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者,C D4/CD8比值显著高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P＜0.05).结论 HE4、CA125与T淋巴细胞亚群联合检测可提高对卵巢恶性肿瘤的诊断水平,具有很好的临床应用价值.
作者：李凯；余杨；何利珍；张佳佳；李楠 刊期： 2012年第01期
目的 制备脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)Ⅰ型D抗原单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测方法.方法 采用Vero细胞培养脊髓灰质炎病毒Ⅰ型,柱层析纯化病毒抗原,SDS-PAGE鉴定病毒蛋白,HPLC分析抗原纯度,Western blot分析抗原的反应原性.以纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,筛选可分泌脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株.单克隆抗体经纯化后,采用间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价、单抗的特异性及相对亲和力.分别以纯化的单抗作为捕获抗体和酶标抗体,进行配对试验,建立用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原检测的双抗体夹心ELISA方法,确定方法的佳线性范围,并验证方法的特异性.结果 纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原经SDS-PAGE分析,共显示4条蛋白条带,相对分子质量分别为约40 000、35 000、32 000和28 000;经HLPC分析,纯度达99％；小鼠免疫血清可与相对分子质量约为35 000的VP1蛋白发生特异性反应.共筛选出5株可稳定分泌脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化的单抗仅与D抗原发生反应；2H1和3B5株单抗的效价分别为2× 107和2× 106,且亲和力高于其他3株单抗.采用2H1和3B5株单抗配对,可以特异性检测D抗原,而与C抗原不反应；D抗原佳线性范围为4.300～0.071 DU/ml,R2为0.994 6.该法仅可检出脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原,而与脊髓灰质炎病毒Ⅱ型、Ⅲ型D抗原和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型C抗原、EV71抗原、Vero细胞培养上清不发生交叉反应.结论 制备了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体,建立了可用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原特异性检测的双抗体夹心ELISA方法.
作者：张中洋；郭会杰；赵敏；杨永娟；郝春生；李懿；马淑花；刘宇；宁海京；张晨；陈明；田龙；李秀玲 刊期： 2012年第01期
目的 分析系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者早期生长效应因子1(Early growth response l,EGR1)基因的表达,探讨SLE发病的分子机制.方法 挑选位于SLE染色体连锁位点上的EGR1基因,利用实时荧光定量PCR技术,检测SLE活动期及相对静止期患者与健康对照组外周血单核细胞与T、B淋巴细胞亚群中EGR1的表达.结果 SLE患者外周血单核细胞和T淋巴细胞亚群中,EGR1基因的△Ct值显著高于健康对照组(P＜0.01),其表达明显下调；在B淋巴细胞亚群中,EGR1基因的△Ct值略微升高,表达也呈下降趋势.在SLE患者外周血T淋巴细胞亚群中,EGR1基因的表达在活动期与相对静止期差异有统计学意义(P＜0.05),活动期患者基因表达量下调趋势更为明显,SLEDAI积分与基因表达水平之间具有一定的相关性.结论 EGR1基因可能是位于5q31.1区段的一个SLE致病候选基因,且与疾病的活动性具有一定的相关性.
作者：任莉莉；李富荣；刘冬周；齐晖；欧阳志斌 刊期： 2012年第01期
目的 建立一种用于促红细胞生成素( Erythropoietin,EPO)糖基化分析的更灵敏、更稳定的检测方法.方法 比较固相pH梯度与载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳在灵敏度及EPO糖基化分析上的差异,并考察固相pH梯度等电聚焦电泳条带分布与唾液酸含量的关系.结果 固相pH梯度等电聚焦电泳的灵敏度和分辨率明显高于载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳,可以更为客观地反映EPO的糖基化不均一性.周相pH梯度等电聚焦电泳的条带分布与唾液酸含量的测定结果基本一致.结论 固相pH梯度等电聚焦电泳是一种更为理想的糖基化分析方法,可以有效分析EPO及其他重组蛋白药物的糖基化程度.
作者：潘婷琪；易小萍；孙祥明；张元兴 刊期： 2012年第01期
目的 观察姜黄素( Curcumin)对人骨肉瘤MG63细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨姜黄素抑制MG63细胞生长的机制.方法 体外培养MG63细胞,用不同浓度的姜黄素处理细胞不同时间,MTT法检测MG63细胞的增殖活力；RT-PCR法检测细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平；Western blot检测β-catenin和CyclinD1蛋白的表达.结果 姜黄素可抑制MG63细胞的增殖,其抑制作用呈剂量-时间依赖性,当姜黄素浓度为20.00 μmol/L时,对细胞增殖的抑制作用明显；姜黄素可显著降低细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性.结论 姜黄素可抑制MG63细胞增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性实现的,这将为临床治疗骨肉瘤提供新的思路.
作者：何小进；曾德华；张雄 刊期： 2012年第01期
目的 构建转录因子AP2α( Activator protein 2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells.MSCs),并检测其表达.方法 从大鼠PC12细胞总RNA中PCR扩增AP2α基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtraceTOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-AP2α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达；Real-time PCR及Western blot检测AP2α的表达.结果 pAdtrace-AP2α质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1 400bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒pAd-AP2α在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×108 pfu/ml;感染MSCs 48 h可观察到60％以上的RFP阳性细胞,经Real-time PCR及Western blot鉴定,感染后72 h,MSCs中AP2α的表达显著增高(P＜0.01).结论 成功构建了携带转录因子AP2α的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs.增强MSCs中AP2α的表达.
作者：毕杨；龚敏；何昀；张赟；陈洁；李廷玉 刊期： 2012年第01期
目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响.方法 通过RT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞株LO2和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋白的表达水平；采用TRAF-6-siRNA沉默关键节点蛋白TRAF-6的表达,Western blot检测沉默效果,MTT法检测TRAF-6基因沉默后QGY细胞的增殖情况.结果 QGY细胞与LO2细胞相比,MAL和TRAF-6基因表达水平明显升高(P＜0.05),TRAM和TRIF基因表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；转染siRNA后QGY细胞TRAF-6蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05),细胞存活率明显下降(P＜0.05).结论 TLR信号转导通路中关键节点蛋白MAL和TRAF-6在肝癌细胞中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平；TRAF-6对肝癌细胞的增殖具有一定的促进作用,有望成为分子靶向治疗原发性肝癌新的作用靶点.
作者：徐灿；杨惠洁；余爽；陈楚；鲍依稀 刊期： 2012年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
