张慧娟；王军；慕彩梅；王妍
目的 探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用.方法 将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸培养.采用RT-PCR法检测LO2细胞中人FⅧ基因mRNA的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(FⅧ:C),Western blot检测24、48 h时相点LO2细胞中人FⅧ蛋白的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察L-精氨酸作用48 h后LO2细胞中人FⅧ的表达.结果 加入L-精氨酸培养36、48、60 h后,LO2细胞中有人FⅧ基因mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧ基因mRNA的转录；各时相点两组细胞培养上清液中人FⅧ:C的水平差异均无统计学意义(P＞0.05)；Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48 h后LO2细胞中出现人FⅧ的表达,而对照组细胞中均无人FⅧ的表达.结论 L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源FⅧ的表达.
作者：朱重阳；李鑫；温泉；张军 刊期： 2012年第10期
目的 建立中试制备重组人血清白蛋白-干扰素β(Recombinant human serum albumin-interferon β,rHSA-IFNβ)融合蛋白的纯化工艺及质控方法.方法 采用50L发酵罐诱导表达rHSA-IFNβ融合蛋白,发酵液经超滤浓缩及脱盐后,再经Rlue Sepharose FF亲和层析、G25凝胶过滤层析和SP Sepharose FF阳离子交换层析纯化.SDS-PAGE(银染法)和HPLC测定融合蛋白纯度,Western blot分析反应原性,质谱法测定相对分子质量,Edman降解法测定N-末端氨基酸序列,等电聚焦电泳法测定等电点,细胞病变抑制法测定rHSA-IFNβ融合蛋白的生物学活性,其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)要求进行.结果 纯化的3批融合蛋白纯度可达96％以上,具有人血清白蛋白和人干扰素β的双重反应原性,相对分子质量分别为89 070、89 035和88 669,N-末端氨基酸序列为:NH2-D-A-H-K-S,等电点为6.34,比活性分别为1.9× 106、1.5×106和1.1×106IU/mg,其余各项指标均符合要求.结论 已成功建立了中试制备rHSA-IFNβ融合蛋白的纯化工艺及质控方法.
作者：李芝芹；邱爽；雷楗勇；陈蕴；金坚 刊期： 2012年第10期
目的 建立巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)IgG定量ELISA检测方法,并进行初步应用.方法 用CMVIgG(50 U/ml)标准品建立CMV IgG ELISA定量检测方法,确定该方法的佳线性范围；制备室内质控血清并进行标定.对该方法进行重复性、中间精密性、准确性、特异性验证,并与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒进行比较.用建立的ELISA法检测689人份健康献浆员血浆的CMV IgG抗体效价.结果 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法的佳线性范围为0.000 78～0.05U/ml;制备的室内质控血清的抗体效价为(5.67±0.55)U/ml;重复性试验检测结果的变异系数为4.6％～9.8％,中间精密性试验检测结果的变异系数为9.7％～10.6％;该方法检测3个浓度标准品的回收率为107.01％～112.97％；样品稀释液和血清中的其他一些干扰因素对检测结果影响较小；该方法与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒检测血浆样品的相关系数r=0.81.该方法检测689人份健康献浆员血浆样品的CMV IgG抗体效价≥10U/ml的占30.8％.结论 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法操作简便,精密性良好,特异性强,可用于人血浆中CMV IgG的定量检测.
作者：张佩；吴恩应；陈玉琴；黄倩云；郭采平 刊期： 2012年第10期
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 构建人肺癌整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)基因siRNA重组表达质粒,并检测其对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 人工合成靶向ILK基因的siRNA干拢序列,克隆至载体pGenesil-1中,构建重组表达质粒pGenesil-1-ILK,利用脂质体转染A549细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR和Western blot检测细胞中ILK基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖活力.结果 重组表达质粒pGenesil-1-ILK经Sal Ⅰ单酶切及测序证明构建正确,其转染A549细胞后,细胞ILK基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.05),且细胞的增殖能力也显著降低(P＜0.05).结论 成功构建了人ILK基因siRNA重组表达质粒,ILK基因沉默可显著抑制A549细胞增殖,为肺癌靶向基因治疗的研究提供了新的思路.
作者：陈炎；胡海燕；刘革力；张璐渝；陈全 刊期： 2012年第10期
目的 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法.方法 用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性.结果 霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关.结论 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础.
作者：陈翠萍；董思国；朱卫华 刊期： 2012年第10期
目的 制备壳聚糖复合纳米基因载体,并探讨其理化性质、细胞毒性、稳定性及体外转染效率.方法 采用复凝聚法制备包封聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)/DNA复合物的壳聚糖复合纳米基因载体,用纳米粒度分析仪测定其粒径和Zeta电位；透射电镜观察其形态；MTT法检测其细胞毒性；在PBS溶液(pH7.4)及含10％小牛血清的RPMI1640培养基中,于37℃条件下放置0、1、3、5d,1％琼脂糖凝胶电泳检测其稳定性；体外转染CNE细胞,评价其转染活性.结果 当N(PEI的氨基)/P(DNA的磷酸根)≥6时,能够形成稳定的壳聚糖复合纳米粒,平均粒径约为300 nm,表面电荷约为30 mV；壳聚糖复合纳米基因载体呈球形,圆整且分散性好；复合纳米基因载体的细胞毒性较低；1％琼脂糖凝胶电泳分析显示,DNA被完全包裹在复合纳米载体中,且5d内无游离DNA释放；体外转染活性与壳聚糖/DNA复合物相比,提高了约1 000倍,且转染能力不受血清的干扰.结论 制备的壳聚糖复合纳米基因载体是一种高效、低毒的非病毒载体,具有作为体内基因治疗载体的应用潜力.
作者：马士淇；刘林霞；张勇；赵兴红；孟祥玉；查晓；陈妍；张喜珍 刊期： 2012年第10期
目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.
作者：韩佳汕；郭德军；徐云明；厉保秋；柳增善；郑国君 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16 Rb信号通路的相关性.方法 以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80 μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期；以佳浓度Rg1干预K562细胞佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力；衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率；透射电镜观察细胞的超微结构；Southern blot检测细胞的端粒长度；Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达.结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h；经20μmol/LRg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P＜0.05),集落形成能力明显减弱(P＜0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P＜0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P＜0.05),P16和RB蛋白表达上调(P＜0.05).结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关.
作者：蔡世忠；刘俊；周玥；刘典锋；杨斌；姜蓉；王亚平 刊期： 2012年第10期
目的 制备A群膜炎球菌多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)-白喉毒素无毒变异体CRM197(Cross-reactive material 197)结合物,并分析其理化性质及免疫学特性.方法 白喉棒状杆菌C7 M1菌株经发酵培养表达CRM197,表达产物经DEAE-4FF层析柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定.用溴化氰(CNBr)活化GAMP,己二酰肼(ADH)为连接剂,在碳二亚胺(EDAC)催化下将GAMP与CRM197共价结合,制备GAMP-ADH-CRM197结合物,经Sepharose 4FF层析柱纯化后,进行各项生化检测,采用免疫双扩散检测结合物的抗原性,将结合物皮下注射ICR小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP的抗体滴度,分析其免疫原性.结果 发酵培养20 h时,菌液上清中的CRM197蛋白表达量高；CRM197以分泌形式表达,纯化后纯度达95％以上,可与白喉类毒素单抗发生特异性反应；GAMP-ADH-CRM 197结合物各项生化指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求,与A群流脑诊断血清形成明显的沉淀线,结合物诱生的多糖特异性抗体滴度显著高于多糖组和混合物组.结论 成功制备了GAMP-ADH-CRM197结合物,其具有良好的抗原性和免疫原性,为以CRM197为蛋白载体制备脑膜炎球菌结合疫苗奠定了基础.
作者：张营营；蔡路奎；姜博；毕研伟；高丹丹；闫铃梅；姬秋彦；李智华；徐维明 刊期： 2012年第10期
目的 构建转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响.方法 设计并合成2对靶向TGF-β1基因的RNA干扰序列和1对阴性对照序列,并构建重组表达质粒pshRNA-TGF-β1a、pshRNA-TGF-β1b和pshRNA-TGF-β1c(阴性对照),以脂质体介导转染SW480细胞,荧光显微镜观察转染情况；RT-PCR和Western blot检测转染细胞中TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；Transwell侵袭试验检测沉默TGF-β1基因表达对细胞侵袭能力的影响.结果 TGF-β1基因shRNA重组表达质粒经酶切鉴定和测序分析证明构建正确.与空白对照组相比,3种质粒转染的细胞均有较强的荧光表达；pshRNA-TGF-β1a和pshRNA-TGF-β1b组细胞TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；SW480细胞的侵袭能力也明显降低(P＜0.05).结论 成功构建了TGF-β1基因shRNA重组表达质粒,其能有效抑制结肠癌细胞SW480中TGF-β1基因的表达,并可显著降低细胞的侵袭能力,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路.
作者：于宏；姜政；仲琳；王丕龙 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
目的 克隆狂犬病病毒(Rabies virus,RV)4aG株G蛋白基因,并与其他疫苗毒株G蛋白基因序列进行比较,为我国狂犬病疫苗的研制提供理论依据.方法 从RV 4aG株中扩增G蛋白基因,并进行序列测定,利用生物信息学软件绘制系统进化树,预测G蛋白功能位点、二级结构和B细胞抗原表位,并与其他疫苗毒株进行比较.结果 克隆的4aG株G蛋白基因序列与GenBank中登录的序列一致.进化树分析显示,4aG株与CVS株的进化关系较远；4aG、4aGV18、CVS、PV及RC-HL毒株跨膜区域在第460 ～ 479氨基酸之间,其他毒株在459 ～ 478氨基酸之间；PV株有5个糖基化位点,RV-97株有3个糖基化位点,其他毒株均有4个糖基化位点；G蛋白抗原表位位于氨基酸100 ～ 300及480 ～ 520之间；不同毒株G蛋白抗原位点区域有所不同,与CVS株比较,PV株抗原表位与其为接近,4aG、4aGV18、CTN-1-31及Flury-HEP株与其抗原表位较为接近.结论 4aG株G蛋白功能位点和抗原表位与CVS株相差较大,但其在Vero细胞上传代稳定,可用于制备Vero细胞纯化疫苗.
作者：李建强；孙燕；孙振鹏；范秀娟；陈军；李薇 刊期： 2012年第10期
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用.将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+ TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10ng/ml TGF-β1).处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力；处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化；以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达.结果 低浓度姜黄素(≤10 μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用；姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P＜0.001)；姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.05)；姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P＜0.05)；PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响.结论 姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力.
作者：磨娜；曹友德；蒋金；李静 刊期： 2012年第10期
肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因.非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制.2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关.一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染.本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述.
作者：罗永彬 刊期： 2012年第10期
目的 建立重组人干扰素β1a(Recomhimant human interferon beta1a,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法.方法 将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNβ1a生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线.对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较.结果 优化后的MTS/PMS法的佳反应条件为:细胞浓度1×105个/ml,细胞病变时间24～36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40 min；A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R2)均达0.99以上.不同检测板、相同加样位置的变异系数在6％～20％之间；相同检测板、不同加样位置的变异系数在13％～17％之间；检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86％～ 121％之间.该法检测rhIFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R2值高,且比结晶紫染色法更稳定.结论 已建立了rhIFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhIFNβ1a的生物学活性.
作者：张慧娟；王军；慕彩梅；王妍 刊期： 2012年第10期
目的 研究人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factor,haFGF)和穿膜肽(Transcriptional activator protein,TAT)融合蛋白TAT-haFGF14-154在小鼠体内的急性毒性反应和免疫原性,初步评价其安全性.方法 取昆明小鼠,单次经尾静脉注射10 mg/kg TAT-haFGF14-154,观察并记录14d内小鼠的一般行为、中毒死亡情况和体重变化,各组织脏器中毒情况,HE染色观察各组小鼠大脑组织病理学变化.将900μg/kgTAT-haFGF14-154分别经静脉和鼻腔免疫昆明小鼠,每隔2d给药1次,分别于给药后的第1、2、3、4周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价；分别将高(300 μg/kg)、中(100 μg/kg)、低(35μg/kg)剂量的TAT-haFGF14-154经鼻腔免疫快速老化小鼠(SAM P8),每隔2d给药1次,30 d后处死小鼠,经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价.结果 在整个急性毒性试验过程中,小鼠无一例死亡,体重变化正常,大脑未见明显病理学改变；TAT-haFGF14-154对小鼠的大耐受剂量大于10mg/kg;昆明小鼠经鼻腔给予TAT-haFGF14-154后,第3周产生抗体,而静脉给药后第2周即有抗体产生；抗体产生的强度呈剂量依赖性.结论 TAT-haFGF14-154属于弱毒性药物,但具有免疫原性,静脉给药的免疫原性强于鼻腔给药.
作者：杨鹏辉；张齐好；许华；黄亚东；陈红霞；郑青 刊期： 2012年第10期
目的 研制一种安全有效的无明胶保护剂,并应用于麻疹风疹联合减毒活疫苗的制备.方法 制备麻疹风疹联合减毒活疫苗原液,取同一批麻疹病毒原液,分别加入不同成分和配比的无明胶保护剂,制成成品,以含明胶保护剂作对照,检测成品外观、病毒滴度及水分,确定保护剂的成分,再确定保护剂的配比.将麻疹与风疹病毒原液混合,加入筛选出的无明胶保护剂,制备麻疹风疹联合减毒活疫苗(共3批),同时制备3批含明胶保护剂对照疫苗.按《中国药典》三部(2010版)要求对联合疫苗原液、半成品、成品进行检定；分别将制备的联合疫苗于2～8℃放置3和6个月,检测疫苗外观、病毒滴度及水分的变化,于37℃放置1、2、3、4周,检测病毒滴度的变化；按《中国药典》二部(2010版)要求进行过敏试验.结果 含海藻糖和右旋糖酐成分的保护剂为首选保护剂.制备的无明胶保护剂联合疫苗原液、半成品及成品的各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求；无明胶保护剂联合疫苗成品于2～8℃放置6个月的水分和病毒滴度及37℃放置4周的病毒滴度与对照组疫苗相比,差异均无统计学意义(P＞0.05)；注射了无明胶保护剂联合疫苗的豚鼠在试验期内均未发生过敏反应,符合《中国药典》二部(2010版)的要求.结论 无明胶保护剂对麻疹和风疹病毒具有较好的保护作用.
作者：石金辉；刘兴文；单宝龙；彭健；张华超；朱芮波；公殿力；郑海发 刊期： 2012年第10期
目的 采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量.方法 利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验；分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测；验证Al(OH)3佐剂吸附抗原的完全性；将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性；对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证.结果 鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性；用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry 法检测结果的误差均在±20％以内；4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明Al(OH)3佐剂吸附抗原完全；4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定；3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加.结论 已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测.
作者：常娅莉；吴智远；魏东；韩少波；胡丽娜；焦磊；卜培英；王国治；王秉翔 刊期： 2012年第10期
目的 构建Wistar大鼠热休克蛋白(Heat shock protein 70,HSP70)基因重组腺病毒质粒,并制备重组腺病毒.方法 利用RT-PCR技术从Wistar大鼠脾脏组织中扩增HSP70基因序列,并克隆至pMD18-T载体中,测序鉴定后,将克隆的HSP70基因编码阅读框亚克隆至穿梭载体pShuttle-CMV中,并利用Ⅰ-Ceu Ⅰ与Ⅰ-Sce Ⅰ将重组穿梭质粒上的HSP70基因的表达框切下,连接到携带腺病毒骨架载体pAdxsi上.重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,转染至293(R)细胞进行病毒的包装,获得重组腺病毒pAd-CMV-HSP70,收集病毒上清,感染BRL细胞,Western blot检测BRL细胞中HSP70的表达.病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,检测重组腺病毒纯度、颗粒滴度及感染性滴度.结果 克隆质粒、穿梭质粒经PCR及酶切鉴定,均可见2 269 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank登录的序列一致；XhoⅠ酶切结果显示,HSP70基因已正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒感染BRL细胞后,细胞中HSP70的表达量显著升高(P＜0.01)；重组腺病毒纯化后纯度为1.29,颗粒滴度为5.31×1012 VP/ml,感染性滴度达1×1011pfu/ml.结论 已成功构建Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒质粒,并制备出高滴度的重组腺病毒颗粒,为进一步研究HSP70的生物学活性及作用机制奠定了基础.
作者：郭景茹；臧琳；郭爽；王建发；计红；李士泽；薛琳琳；杨焕民 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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