磨娜；曹友德；蒋金；李静
目的 建立重组人干扰素β1a(Recomhimant human interferon beta1a,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法.方法 将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNβ1a生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线.对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较.结果 优化后的MTS/PMS法的佳反应条件为:细胞浓度1×105个/ml,细胞病变时间24～36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40 min；A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R2)均达0.99以上.不同检测板、相同加样位置的变异系数在6％～20％之间；相同检测板、不同加样位置的变异系数在13％～17％之间；检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86％～ 121％之间.该法检测rhIFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R2值高,且比结晶紫染色法更稳定.结论 已建立了rhIFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhIFNβ1a的生物学活性.
作者：张慧娟；王军；慕彩梅；王妍 刊期： 2012年第10期
目的 考察毕赤酵母表达的含前S抗原重组乙型肝炎疫苗原液和成品的稳定性.方法 将3批疫苗原液置4℃存放,分别于0、1、2、3、6个月时取样,测定其在各时间点的乙型肝炎表面抗原S、前S1 (PreS1)、前S2(PreS2)抗原滴度及HPLC纯度；将3批疫苗成品置25℃和4℃存放,进行加速稳定性和长期稳定性试验,分别于0、1、2、3、6个月和0、3、6、9、12、18、24个月时取样,进行小鼠效力、pH值、细菌内毒素和无菌测定.结果 3批疫苗原液于4℃保存6个月,表面抗原S、PreS1、PreS2抗原滴度及HPLC纯度均无明显变化；3批疫苗成品于25℃放置6个月和4℃放置24个月,各个时间点的小鼠效力均符合暂定规程的要求,pH值保持稳定,细菌内毒素和无菌试验均符合《中国药典》三部(2005和2010版)要求.结论 毕赤酵母表达的含前S抗原重组乙型肝炎疫苗原液及成品稳定性良好.
作者：胡波；袁进；谭昌耀；蒋丽明；金瓯；张雪艳 刊期： 2012年第10期
目的 原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体.方法 从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化E.coli M15,IPTG诱导表达.表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性.以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制各的单抗进行鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确；表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达；纯化的重组Prn蛋白的纯度达95％以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合.获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应.结论 原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料.
作者：徐颖华；张华捷；谭亚军；吴丽洁；王丽婵；侯启明；张庶民 刊期： 2012年第10期
肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因.非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制.2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关.一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染.本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述.
作者：罗永彬 刊期： 2012年第10期
目的 观察不同年龄人群接种人用狂犬病疫苗的接种反应及免疫应答.方法 选择身体健康、无犬伤史及狂犬病疫苗接种史的627名观察对象进行免疫原性检测,按生理发育状态分为5组:1～3岁组、4～6岁组、7～16岁组、17～40岁组和≥41岁组,分别于免疫前、首针免疫后14和45 d,抽取静脉血,分离血清,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescence focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒抗体效价,并计算抗体几何平均滴度(GMT).在所有免疫原性受试者中随机抽取225名,进行接种反应观察.结果 225名观察对象接种人用狂犬病疫苗后的局部总反应率为5.15％,全身总反应率为4.42％,反应程度均为弱、中反应,无高强度及严重不良反应的病例报告.免疫前所有样本血清抗体GMT均≤0.2 IU/ml,抗体均为阴性；首针接种人用狂犬病疫苗后14d,各年龄组人群抗体阳转率均达100％,但抗体GMT各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其中4～6岁组和7～16岁组较高,分别为9.42和9.01 IU/ml,1～3岁组和≥41组较低,分别为6.11和6.35 IU/ml,而4～6岁组与7～16岁组及1～3岁组与≥41岁比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)；首针接种人用狂犬病疫苗后45 d,各年龄组人群的抗体阳转率仍为100％,各年龄组平均GMT在14.8 ～ 16.40 IU/ml之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 不同年龄组人群接种人用狂犬病疫苗后临床反应轻微,免疫应答良好.但3岁以下婴幼儿及老年人抗体产生的时间有延迟的趋势,建议老年人及婴幼儿在接种人用狂犬病疫苗第1、2针时,应适当增加剂量,以提高血清抗体阳转率及免疫成功率.
作者：赵珍谊；余刚；郑艳微；陶航 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
目的 探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制.方法 采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化.结果 联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56 μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22 μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征；凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性；联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加.结论 联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关.
作者：王晓飞；张曦文；田文霞；陈婷梅；张彦 刊期： 2012年第10期
目的 原代培养人乳腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF),并检测其生物学特性.方法 采用胶原酶消化培养法对26份乳腺癌患者标本进行原代细胞分离培养,倒置显微镜下观察人乳腺癌CAF的形态学特性,免疫荧光染色法鉴定所分离培养的人乳腺癌CAF纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)和成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activated protein,FAP)的表达,并通过MTT法和细胞计数法绘制细胞生长曲线.结果 胶原酶消化法的适酶浓度为0.12％,适消化时间为10h.原代培养23份成功,3份失败.培养成功的细胞贴壁生长,形态完整,生长状态良好,背景清晰,有明显的对数生长期,并可传代培养.培养的细胞FN和FAP表达阳性,表明原代培养的CAF为乳腺癌CAF.结论 胶原酶消化培养法适合人乳腺癌CAF的原代培养,通过该方法可建立理想的人乳腺癌CAF体外实验模型.
作者：彭琼乐；孙艳；赵浏阳；王黎阳；柳满然；彭惠民 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16 Rb信号通路的相关性.方法 以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80 μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期；以佳浓度Rg1干预K562细胞佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力；衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率；透射电镜观察细胞的超微结构；Southern blot检测细胞的端粒长度；Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达.结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h；经20μmol/LRg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P＜0.05),集落形成能力明显减弱(P＜0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P＜0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P＜0.05),P16和RB蛋白表达上调(P＜0.05).结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关.
作者：蔡世忠；刘俊；周玥；刘典锋；杨斌；姜蓉；王亚平 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1 (Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用.方法 将人胚肺成纤维细胞(＜24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120 μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+ Rg1组(120 μmol/L BU+10 μmol/L Rg1)、Rg1预+BU组(10 μmol/L Rg1预处理后加入120 μmol/L BU)和Rg1预+BU+ Rg1组(10 μmol/L Rg1预处理后加入120 μmol/L BU,再加入10 μmol/L Rg1),通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,细胞增殖试验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期的分布；半乳糖苷酶(SA-β-ga1)染色法观察细胞衰老情况.结果 BU组细胞胞体扁平、宽大、不规则,出现空泡,而Rg1处理各组细胞的衰老表型出现一定程度的改善,以Rg1预+BU+Rg1组效果佳,但未完全恢复；BU组细胞增殖能力较空白对照组明显降低,Rg1处理组细胞增殖能力有所恢复,且随着时间的延长效果越明显,其中以Rg1预+BU+Rg1组佳；Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组G2/M期比例较BU组显著降低(P＜0.05),其中以Rg1预+BU+ Rg1组降低明显；Rg1预+BU组和Rg1预+BU+ Rg1组衰老细胞数较BU组显著降低(P＜0.05).结论 Rg1能有效对抗BU诱导的细胞早衰,其具体作用机制有待进一步深入研究.
作者：王红宁；闫玲玲；李春莉；官涛；姜蓉；左国伟；陈地龙；龙轩；王建伟 刊期： 2012年第10期
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用.将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+ TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10ng/ml TGF-β1).处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力；处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化；以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达.结果 低浓度姜黄素(≤10 μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用；姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P＜0.001)；姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.05)；姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P＜0.05)；PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响.结论 姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力.
作者：磨娜；曹友德；蒋金；李静 刊期： 2012年第10期
目的 构建Wistar大鼠热休克蛋白(Heat shock protein 70,HSP70)基因重组腺病毒质粒,并制备重组腺病毒.方法 利用RT-PCR技术从Wistar大鼠脾脏组织中扩增HSP70基因序列,并克隆至pMD18-T载体中,测序鉴定后,将克隆的HSP70基因编码阅读框亚克隆至穿梭载体pShuttle-CMV中,并利用Ⅰ-Ceu Ⅰ与Ⅰ-Sce Ⅰ将重组穿梭质粒上的HSP70基因的表达框切下,连接到携带腺病毒骨架载体pAdxsi上.重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,转染至293(R)细胞进行病毒的包装,获得重组腺病毒pAd-CMV-HSP70,收集病毒上清,感染BRL细胞,Western blot检测BRL细胞中HSP70的表达.病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,检测重组腺病毒纯度、颗粒滴度及感染性滴度.结果 克隆质粒、穿梭质粒经PCR及酶切鉴定,均可见2 269 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank登录的序列一致；XhoⅠ酶切结果显示,HSP70基因已正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒感染BRL细胞后,细胞中HSP70的表达量显著升高(P＜0.01)；重组腺病毒纯化后纯度为1.29,颗粒滴度为5.31×1012 VP/ml,感染性滴度达1×1011pfu/ml.结论 已成功构建Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒质粒,并制备出高滴度的重组腺病毒颗粒,为进一步研究HSP70的生物学活性及作用机制奠定了基础.
作者：郭景茹；臧琳；郭爽；王建发；计红；李士泽；薛琳琳；杨焕民 刊期： 2012年第10期
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 观察活性氧物质(Reactive oxygen species,ROS)在多柔比星(Doxorubicin,Dox)诱导的心肌细胞凋亡中的作用.方法 将大鼠胚胎期心肌细胞H9C2分为对照组、Dox 0.1μmol/L组和Dox 1.0μmol/L组,Dox作用24 h后,采用硫代巴比妥酸(Thibatituric acid,TBA)法检测丙二醛(Malondialchehyche,MDA)含量；血浆三价铁降低能力法(Ferric reducing ability of plasma,FRAP)检测总抗氧化能力(Total antioxidation capability,T-AOC)；DCFH-DA荧光探针染色法检测ROS含量；JC-1染色法检测线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,△Ψm)；TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI).结果 与对照组相比,DOX 1.0 μmol/L组MDA、ROS含量及AI显著上升(P＜0.05),T-AOC及△Ψm显著下降(P＜0.05).结论 Dox诱导心肌细胞凋亡过程中,ROS生成增加,超过了抗氧化体系的清除能力,氧化应激损伤机制发挥了重要作用.
作者：张赢予；耿学军；张国辉；姚勇伟；张馨木；芮涛 刊期： 2012年第10期
目的 建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,并进行初步应用.方法 将金黄色葡萄球菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法,通过L9(34)正交设计试验优化方法的反应条件；对建立的方法进行灵敏度和特异性验证；应用建立的方法检测200份食品样品,并与国家标准检测方法进行比较.结果 所建立的检测方法的佳反应条件为:多克隆抗体工作浓度为1∶100,生物素标记的二抗工作浓度为1∶1 000,链霉亲和素-藻红蛋白的工作浓度为2μg/ml,生物素标记的二抗与SA-PE的反应时间为40 min；建立的方法检测金黄色葡萄球菌的灵敏度可达103 CFU/ml,检测其他常见食源性致病菌无交叉反应；建立的方法与国家标准方法检测200份食品样品的结果基本相符.结论 已建立了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,能够应用于实际样品的检测.
作者：王亚丽；蔡阳；刘韬；宋战昀；王宁；王振国 刊期： 2012年第10期
目的 探讨靶向卡氏肺孢子菌(Pncumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白基因(Major surface glycoprotein gene,MSG)上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的microRNA重组质粒对大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的治疗作用.方法 将SD大鼠经腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠7周,制备大鼠PCP感染模型.将模型大鼠随机分为5组:microRNA重组质粒治疗组(M组)、磺胺药物治疗组(H组)、生理盐水对照组(C1组)、空载体质粒对照组(C2组)和模型对照组(C3组),其中M组和C1、C2组经尾静脉分别注射含microRNA重组质粒pPC-UCS、生理盐水和空载体,H组用磺胺药物灌胃治疗,C3组不做处理,每日1次,疗程为7d.1周后吉姆萨染色,油镜下计数大鼠肺组织液印片中PC包囊数；HE染色,光镜观察肺组织病理改变；ELISA法检测大鼠血清中IL-10和IFNγ的表达水平；RT-PCR法检测肺组织中PC MSG-UCSmRNA的表达水平；电镜观察PC的超微结构.结果 与C1、C2和C3组相比、M组和H组大鼠肺组织PC包囊数均明显减少(P＜0.05),肺组织炎症较轻,大鼠血清IL-10的表达水平均显著降低(P＜0.05),面IFNγ的表达水平显著升高(P＜0.05),大鼠肺组织PC MSG-UCS mRNA的表达水平均显著降低(P＜0.05)；电镜观察显示,M组和H组PC包囊表面均出现破损,C1、C2、C3组未发现破损.结论 microRNA重组质粒pPC-UCS对大鼠PCP有明显的治疗作用,为治疗PCP提供了新的思路.
作者：龚锐；姚云清；梅林；骆晓练；谭燕；李文桂；陈雅棠 刊期： 2012年第10期
目的 建立巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)IgG定量ELISA检测方法,并进行初步应用.方法 用CMVIgG(50 U/ml)标准品建立CMV IgG ELISA定量检测方法,确定该方法的佳线性范围；制备室内质控血清并进行标定.对该方法进行重复性、中间精密性、准确性、特异性验证,并与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒进行比较.用建立的ELISA法检测689人份健康献浆员血浆的CMV IgG抗体效价.结果 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法的佳线性范围为0.000 78～0.05U/ml;制备的室内质控血清的抗体效价为(5.67±0.55)U/ml;重复性试验检测结果的变异系数为4.6％～9.8％,中间精密性试验检测结果的变异系数为9.7％～10.6％;该方法检测3个浓度标准品的回收率为107.01％～112.97％；样品稀释液和血清中的其他一些干扰因素对检测结果影响较小；该方法与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒检测血浆样品的相关系数r=0.81.该方法检测689人份健康献浆员血浆样品的CMV IgG抗体效价≥10U/ml的占30.8％.结论 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法操作简便,精密性良好,特异性强,可用于人血浆中CMV IgG的定量检测.
作者：张佩；吴恩应；陈玉琴；黄倩云；郭采平 刊期： 2012年第10期
目的 研究人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factor,haFGF)和穿膜肽(Transcriptional activator protein,TAT)融合蛋白TAT-haFGF14-154在小鼠体内的急性毒性反应和免疫原性,初步评价其安全性.方法 取昆明小鼠,单次经尾静脉注射10 mg/kg TAT-haFGF14-154,观察并记录14d内小鼠的一般行为、中毒死亡情况和体重变化,各组织脏器中毒情况,HE染色观察各组小鼠大脑组织病理学变化.将900μg/kgTAT-haFGF14-154分别经静脉和鼻腔免疫昆明小鼠,每隔2d给药1次,分别于给药后的第1、2、3、4周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价；分别将高(300 μg/kg)、中(100 μg/kg)、低(35μg/kg)剂量的TAT-haFGF14-154经鼻腔免疫快速老化小鼠(SAM P8),每隔2d给药1次,30 d后处死小鼠,经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价.结果 在整个急性毒性试验过程中,小鼠无一例死亡,体重变化正常,大脑未见明显病理学改变；TAT-haFGF14-154对小鼠的大耐受剂量大于10mg/kg;昆明小鼠经鼻腔给予TAT-haFGF14-154后,第3周产生抗体,而静脉给药后第2周即有抗体产生；抗体产生的强度呈剂量依赖性.结论 TAT-haFGF14-154属于弱毒性药物,但具有免疫原性,静脉给药的免疫原性强于鼻腔给药.
作者：杨鹏辉；张齐好；许华；黄亚东；陈红霞；郑青 刊期： 2012年第10期
目的 构建携带FLAG-3NLS-FRB*融合基因的嵌合腺病毒,并检测其在AD-293细胞中的表达.方法 将FLAG标记的3段核定位信号(FLAG-3NLS)与突变修饰的雷帕霉素靶FRB结构域(FRB*)基因通过重叠PCR技术拼接成FLAG-3NLS-FRB*,定向克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,测序鉴定后,与腺病毒骨架质粒pAd5F35在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,感染AD-293细胞进行包装、扩增.采用基因转移单位(Gene transfer unit,GTU)法测定病毒滴度；RT-PCR及Western blot检测FLAG-3NLS-FRB*在AD-293细胞中的转录及表达.结果 腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FLAG-3NLS-FRB*经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确；FLAG-3NLS-FRB*正确克隆至腺病毒骨架质粒中；在AD-293细胞中包装、扩增获得了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,病毒滴度为2.0×1013 GTU/ml；嵌合腺病毒感染AD-293细胞后36 h,在细胞中可检测到FLAG-3NLS-FRB*基因的转录和蛋白的表达.结论 成功构建了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,并在AD-293细胞中成功表达了FLAG-3NLS-FRB*融合蛋白.
作者：高淼；黄峥兰；李千音；钟梁；冯文莉 刊期： 2012年第10期
目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.
作者：韩佳汕；郭德军；徐云明；厉保秋；柳增善；郑国君 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
