徐颖华；张华捷；谭亚军；吴丽洁；王丽婵；侯启明；张庶民
1.概述伤寒是由伤寒沙门菌感染引起的急性全身性传染病,通过粪-口途径传播,其临床特征为持续发热、神经系统中毒症状、肝脾肿大及白细胞减少等,少数可并发肠出血及肠穿孔.人群对伤寒沙门菌普遍易感,但儿童和青壮年发病率高.伤寒是发展中国家常见的肠道传染病,我国的伤寒发病率约在(10～100)/10万之间,南部沿海及西南省份发病率较高[1].
作者：王斌；梁昊宇；计国欣；曾明 刊期： 2012年第10期
目的 构建人肺癌整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)基因siRNA重组表达质粒,并检测其对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 人工合成靶向ILK基因的siRNA干拢序列,克隆至载体pGenesil-1中,构建重组表达质粒pGenesil-1-ILK,利用脂质体转染A549细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR和Western blot检测细胞中ILK基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖活力.结果 重组表达质粒pGenesil-1-ILK经Sal Ⅰ单酶切及测序证明构建正确,其转染A549细胞后,细胞ILK基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.05),且细胞的增殖能力也显著降低(P＜0.05).结论 成功构建了人ILK基因siRNA重组表达质粒,ILK基因沉默可显著抑制A549细胞增殖,为肺癌靶向基因治疗的研究提供了新的思路.
作者：陈炎；胡海燕；刘革力；张璐渝；陈全 刊期： 2012年第10期
目的 构建Wistar大鼠热休克蛋白(Heat shock protein 70,HSP70)基因重组腺病毒质粒,并制备重组腺病毒.方法 利用RT-PCR技术从Wistar大鼠脾脏组织中扩增HSP70基因序列,并克隆至pMD18-T载体中,测序鉴定后,将克隆的HSP70基因编码阅读框亚克隆至穿梭载体pShuttle-CMV中,并利用Ⅰ-Ceu Ⅰ与Ⅰ-Sce Ⅰ将重组穿梭质粒上的HSP70基因的表达框切下,连接到携带腺病毒骨架载体pAdxsi上.重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,转染至293(R)细胞进行病毒的包装,获得重组腺病毒pAd-CMV-HSP70,收集病毒上清,感染BRL细胞,Western blot检测BRL细胞中HSP70的表达.病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,检测重组腺病毒纯度、颗粒滴度及感染性滴度.结果 克隆质粒、穿梭质粒经PCR及酶切鉴定,均可见2 269 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank登录的序列一致；XhoⅠ酶切结果显示,HSP70基因已正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒感染BRL细胞后,细胞中HSP70的表达量显著升高(P＜0.01)；重组腺病毒纯化后纯度为1.29,颗粒滴度为5.31×1012 VP/ml,感染性滴度达1×1011pfu/ml.结论 已成功构建Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒质粒,并制备出高滴度的重组腺病毒颗粒,为进一步研究HSP70的生物学活性及作用机制奠定了基础.
作者：郭景茹；臧琳；郭爽；王建发；计红；李士泽；薛琳琳；杨焕民 刊期： 2012年第10期
近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病.肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因.为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类EV71疫苗的研发,其中以灭活疫苗的进展快,目前国内3家EV71全病毒灭活疫苗即将进入Ⅲ期临床试验阶段.本文就全病毒灭活疫苗的研发进展及质量控制和评价要点作一综述.
作者：姚昕；毛群颖 刊期： 2012年第10期
目的 优化毕赤酵母工程菌GS115/xynlIA产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响；并分析重组木聚糖酶的酶学性质.结果 影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值＞诱导时间＞诱导温度＞甲醇添加量,重组酵母产酶佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5％,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35IU/ml;酶的适反应温度为50℃,适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH4.5～7.5的范围内较稳定.结论 优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据.
作者：史红玲；汪俊卿；邬敏辰；高树娟 刊期： 2012年第10期
目的 建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,并进行初步应用.方法 将金黄色葡萄球菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法,通过L9(34)正交设计试验优化方法的反应条件；对建立的方法进行灵敏度和特异性验证；应用建立的方法检测200份食品样品,并与国家标准检测方法进行比较.结果 所建立的检测方法的佳反应条件为:多克隆抗体工作浓度为1∶100,生物素标记的二抗工作浓度为1∶1 000,链霉亲和素-藻红蛋白的工作浓度为2μg/ml,生物素标记的二抗与SA-PE的反应时间为40 min；建立的方法检测金黄色葡萄球菌的灵敏度可达103 CFU/ml,检测其他常见食源性致病菌无交叉反应；建立的方法与国家标准方法检测200份食品样品的结果基本相符.结论 已建立了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,能够应用于实际样品的检测.
作者：王亚丽；蔡阳；刘韬；宋战昀；王宁；王振国 刊期： 2012年第10期
目的 研制一种安全有效的无明胶保护剂,并应用于麻疹风疹联合减毒活疫苗的制备.方法 制备麻疹风疹联合减毒活疫苗原液,取同一批麻疹病毒原液,分别加入不同成分和配比的无明胶保护剂,制成成品,以含明胶保护剂作对照,检测成品外观、病毒滴度及水分,确定保护剂的成分,再确定保护剂的配比.将麻疹与风疹病毒原液混合,加入筛选出的无明胶保护剂,制备麻疹风疹联合减毒活疫苗(共3批),同时制备3批含明胶保护剂对照疫苗.按《中国药典》三部(2010版)要求对联合疫苗原液、半成品、成品进行检定；分别将制备的联合疫苗于2～8℃放置3和6个月,检测疫苗外观、病毒滴度及水分的变化,于37℃放置1、2、3、4周,检测病毒滴度的变化；按《中国药典》二部(2010版)要求进行过敏试验.结果 含海藻糖和右旋糖酐成分的保护剂为首选保护剂.制备的无明胶保护剂联合疫苗原液、半成品及成品的各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求；无明胶保护剂联合疫苗成品于2～8℃放置6个月的水分和病毒滴度及37℃放置4周的病毒滴度与对照组疫苗相比,差异均无统计学意义(P＞0.05)；注射了无明胶保护剂联合疫苗的豚鼠在试验期内均未发生过敏反应,符合《中国药典》二部(2010版)的要求.结论 无明胶保护剂对麻疹和风疹病毒具有较好的保护作用.
作者：石金辉；刘兴文；单宝龙；彭健；张华超；朱芮波；公殿力；郑海发 刊期： 2012年第10期
目的 制备A群膜炎球菌多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)-白喉毒素无毒变异体CRM197(Cross-reactive material 197)结合物,并分析其理化性质及免疫学特性.方法 白喉棒状杆菌C7 M1菌株经发酵培养表达CRM197,表达产物经DEAE-4FF层析柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定.用溴化氰(CNBr)活化GAMP,己二酰肼(ADH)为连接剂,在碳二亚胺(EDAC)催化下将GAMP与CRM197共价结合,制备GAMP-ADH-CRM197结合物,经Sepharose 4FF层析柱纯化后,进行各项生化检测,采用免疫双扩散检测结合物的抗原性,将结合物皮下注射ICR小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP的抗体滴度,分析其免疫原性.结果 发酵培养20 h时,菌液上清中的CRM197蛋白表达量高；CRM197以分泌形式表达,纯化后纯度达95％以上,可与白喉类毒素单抗发生特异性反应；GAMP-ADH-CRM 197结合物各项生化指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求,与A群流脑诊断血清形成明显的沉淀线,结合物诱生的多糖特异性抗体滴度显著高于多糖组和混合物组.结论 成功制备了GAMP-ADH-CRM197结合物,其具有良好的抗原性和免疫原性,为以CRM197为蛋白载体制备脑膜炎球菌结合疫苗奠定了基础.
作者：张营营；蔡路奎；姜博；毕研伟；高丹丹；闫铃梅；姬秋彦；李智华；徐维明 刊期： 2012年第10期
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 克隆狂犬病病毒(Rabies virus,RV)4aG株G蛋白基因,并与其他疫苗毒株G蛋白基因序列进行比较,为我国狂犬病疫苗的研制提供理论依据.方法 从RV 4aG株中扩增G蛋白基因,并进行序列测定,利用生物信息学软件绘制系统进化树,预测G蛋白功能位点、二级结构和B细胞抗原表位,并与其他疫苗毒株进行比较.结果 克隆的4aG株G蛋白基因序列与GenBank中登录的序列一致.进化树分析显示,4aG株与CVS株的进化关系较远；4aG、4aGV18、CVS、PV及RC-HL毒株跨膜区域在第460 ～ 479氨基酸之间,其他毒株在459 ～ 478氨基酸之间；PV株有5个糖基化位点,RV-97株有3个糖基化位点,其他毒株均有4个糖基化位点；G蛋白抗原表位位于氨基酸100 ～ 300及480 ～ 520之间；不同毒株G蛋白抗原位点区域有所不同,与CVS株比较,PV株抗原表位与其为接近,4aG、4aGV18、CTN-1-31及Flury-HEP株与其抗原表位较为接近.结论 4aG株G蛋白功能位点和抗原表位与CVS株相差较大,但其在Vero细胞上传代稳定,可用于制备Vero细胞纯化疫苗.
作者：李建强；孙燕；孙振鹏；范秀娟；陈军；李薇 刊期： 2012年第10期
目的 制备壳聚糖复合纳米基因载体,并探讨其理化性质、细胞毒性、稳定性及体外转染效率.方法 采用复凝聚法制备包封聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)/DNA复合物的壳聚糖复合纳米基因载体,用纳米粒度分析仪测定其粒径和Zeta电位；透射电镜观察其形态；MTT法检测其细胞毒性；在PBS溶液(pH7.4)及含10％小牛血清的RPMI1640培养基中,于37℃条件下放置0、1、3、5d,1％琼脂糖凝胶电泳检测其稳定性；体外转染CNE细胞,评价其转染活性.结果 当N(PEI的氨基)/P(DNA的磷酸根)≥6时,能够形成稳定的壳聚糖复合纳米粒,平均粒径约为300 nm,表面电荷约为30 mV；壳聚糖复合纳米基因载体呈球形,圆整且分散性好；复合纳米基因载体的细胞毒性较低；1％琼脂糖凝胶电泳分析显示,DNA被完全包裹在复合纳米载体中,且5d内无游离DNA释放；体外转染活性与壳聚糖/DNA复合物相比,提高了约1 000倍,且转染能力不受血清的干扰.结论 制备的壳聚糖复合纳米基因载体是一种高效、低毒的非病毒载体,具有作为体内基因治疗载体的应用潜力.
作者：马士淇；刘林霞；张勇；赵兴红；孟祥玉；查晓；陈妍；张喜珍 刊期： 2012年第10期
目的 建立新型重组人促红细胞生成素(Novel recombinant human erythropoietin,HuEPO)抗体中和活性的检测方法,并应用于毒理研究中样品的分析.方法 通过考察新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞增殖的促进作用及抗新型rHuEPO抗体(兔抗阳性血清)对该细胞增殖的抑制作用,建立抗新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并应用于毒理实验中对相关抗体血清中和活性的检测.结果 新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞的增殖具有促进作用,在0.125～128 ng/ml浓度范围内作用显著；抗新型rHuEPO抗体在10-1～10-4范围内对人UT7/EPO细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制曲线呈中和抗体性质.毒理实验中,抗新型rHuEPO抗体(SD大鼠血清)显著抑制人UT7/EPO细胞的增殖,且具有特异性；抗新型rHuEPO抗体(Beagle犬血清)对人UT7/EPO细胞的增殖无影响.结论 成功建立了一种新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并成功应用于毒理实验样品分析,为新型rHuEPO在长期毒性实验中的免疫原性评价提供了一种有效的检测手段.
作者：侯绪凤；靳征；姜非 刊期： 2012年第10期
目的 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法.方法 用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性.结果 霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关.结论 采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础.
作者：陈翠萍；董思国；朱卫华 刊期： 2012年第10期
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用.将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+ TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10ng/ml TGF-β1).处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力；处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化；以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达.结果 低浓度姜黄素(≤10 μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用；姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P＜0.001)；姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.05)；姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P＜0.05)；PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响.结论 姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力.
作者：磨娜；曹友德；蒋金；李静 刊期： 2012年第10期
目的 采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量.方法 利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验；分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测；验证Al(OH)3佐剂吸附抗原的完全性；将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性；对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证.结果 鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性；用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry 法检测结果的误差均在±20％以内；4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明Al(OH)3佐剂吸附抗原完全；4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定；3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加.结论 已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测.
作者：常娅莉；吴智远；魏东；韩少波；胡丽娜；焦磊；卜培英；王国治；王秉翔 刊期： 2012年第10期
目的 研究乙脑风疹联合减毒活疫苗中乙脑病毒和风疹病毒的相容性.方法 将乙脑病毒SA14-14-2疫苗株制备的乙脑减毒活疫苗原液与风疹病毒RA27/3疫苗株制备的风疹减毒活疫苗原液按体积比1∶1比例混合,加入保护剂,冻干制成乙脑风疹联合减毒活疫苗.采用BHK21细胞蚀斑法测定联合疫苗中的乙脑病毒滴度,细胞病变法检测风疹病毒滴度；通过鉴别试验、热稳定性试验、乙脑疫苗免疫原性试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验以及基因稳定性分析观察联合疫苗病毒间的相容性.结果 联合疫苗的乙脑和风疹病毒滴度与单价疫苗的病毒滴度变化在检测误差的允许范围内；联合疫苗于37℃放置7d,与放置前相比,风疹病毒和乙脑病毒的滴度值下降分别小于1.0LgCCID50/ml和1.0LgPFU/ml,符合《中国药典》三部(2010版)要求；联合疫苗中的风疹疫苗对乙脑疫苗的免疫原性无明显的干扰效应；鉴别试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验结果均符合《中国药典》三部(2010版)要求；联合疫苗在BHK21细胞上传代5次后,乙脑和风疹病毒基因序列均未发生变化.结论 乙脑风疹联合减毒活疫苗中的乙脑和风疹病毒具有较好的相容性,本实验为乙脑风疹联合疫苗的进一步研制奠定了基础.
作者：吕文利；王凌；赵新华；俞娟；明平刚 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
目的 原核表达并纯化鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP3蛋白.方法 将GPV VP3基因重组表达质粒pGEX-6P-VP3转化入大肠杆菌BL21 (DE3)plysS内,IPTG诱导表达；用Sepharose 4B(Prepacked Glutathion)亲合层析柱纯化可溶性和不溶性包涵体蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot及Dot-ELISA鉴定.结果 表达的GST/VP3融合蛋白相对分子质量为85 000,主要以不溶性包涵体形式存在；纯化的可溶性蛋白和包涵体蛋白含量分别为2.20和3.30 mg/ml;纯化的GST/VP3融合蛋白能被鹅抗GPV多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了GPV VP3蛋白,为进一步研究其功能和免疫学特性及研制基因工程亚单位疫苗和新型抗原制剂奠定了基础.
作者：布日额；吴金花；马波；王君伟 刊期： 2012年第10期
目的 建立重组人干扰素β1a(Recomhimant human interferon beta1a,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法.方法 将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNβ1a生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线.对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较.结果 优化后的MTS/PMS法的佳反应条件为:细胞浓度1×105个/ml,细胞病变时间24～36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40 min；A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R2)均达0.99以上.不同检测板、相同加样位置的变异系数在6％～20％之间；相同检测板、不同加样位置的变异系数在13％～17％之间；检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86％～ 121％之间.该法检测rhIFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R2值高,且比结晶紫染色法更稳定.结论 已建立了rhIFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhIFNβ1a的生物学活性.
作者：张慧娟；王军；慕彩梅；王妍 刊期： 2012年第10期
目的 探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用.方法 将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸培养.采用RT-PCR法检测LO2细胞中人FⅧ基因mRNA的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(FⅧ:C),Western blot检测24、48 h时相点LO2细胞中人FⅧ蛋白的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察L-精氨酸作用48 h后LO2细胞中人FⅧ的表达.结果 加入L-精氨酸培养36、48、60 h后,LO2细胞中有人FⅧ基因mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧ基因mRNA的转录；各时相点两组细胞培养上清液中人FⅧ:C的水平差异均无统计学意义(P＞0.05)；Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48 h后LO2细胞中出现人FⅧ的表达,而对照组细胞中均无人FⅧ的表达.结论 L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源FⅧ的表达.
作者：朱重阳；李鑫；温泉；张军 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
