汤贤英；孙万邦；罗军敏；宋明英；杜联峰
目的 构建重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)分泌型汉逊酵母工程菌株,并进行诱导表达.方法 在HBsAg基因前加酿酒酵母α前导肽(MFα)基因序列作为信号肽,将整个序列优化为汉逊酵母优选密码子,采用搭桥PCR方法分别合成后,通过1对引物PCR法融合在一起.将融合基因插入汉逊酵母穿梭质粒pDGXHP2.0的甲醇氧化酶基因(MOX)启动子下游,构建成多拷贝分泌型重组表达载体.将其电转化多型汉逊酵母尿嘧啶缺陷型宿主菌ATCC34438(Ura3-),筛选分泌表达HBsAg的汉逊酵母工程菌株,并比较在YPD、BMMY、MM 3种培养基中分泌表达HBsAg的水平,ELISA检测培养上清液中HBsAg的表达量,透射电镜观察类病毒颗粒(VLPs).结果 构建了HBsAg汉逊酵母多拷贝表达质粒pDGXHP2.0-2MFα-HBsAg和pDGXHP2.0-4MFα-HBsAg,筛选获得了分泌表达HBsAg的汉逊酵母HP/2MFα-HBsAg和HP/4MFα-HBsAg.经诱导,工程菌株在YPD培养基中分泌表达的HBsAg量高于在BMMY和MM中的表达量;ELISA定量检测表达量高可达10 μg/ml,培养上清液经透射电镜观察,形成了VLPs.结论 HBsAg在汉逊酵母中能够分泌表达,并能形成VLPs,但表达量低于胞内表达量.
作者：苏彩霞；张萍；顾美荣；金贞姬；付作申；陈尔佳 刊期： 2009年第02期
噬菌体展示抗体库技术是一种将抗体组合文库与噬菌体表面展示技术相结合所形成的新技术,可以将抗体分子展示在噬菌体表面,且保持了抗体的天然构象和生物学活性,为人源抗体的制备提供了良好的技术平台.本文对噬菌体展示抗体库技术的原理、特点、类型及其研究进展作一综述.
作者：秦思远；董关木 刊期： 2009年第02期
目的 探讨子痫前期及子痫患者血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)的水平变化及其与.肾功能异常的相关性.方法 分别采用流式细胞术和全自动生化分析仪,检测子痫前期及子痫患者、正常孕晚期、正常未孕妇女血中GPⅡb/Ⅲa水平和肾功能相关指标(BUN、CREA、UA).结果 重度子痫前期-子痫组GP Ⅱb/Ⅲa水平明显升高,同时伴有BUN、CREA、UA水平升高,与正常孕晚期组、轻度子痫前期组比较,差异均有统计学意义.结论 子痫前期及子痫患者GP Ⅱb/Ⅲa水平升高可引起肾小球小血管内血小板活化、黏附及聚集,进而影响其肾功能.
作者：廖琪；马晓艳；崔满华；郑明阳；刘超；苏学金 刊期： 2009年第02期
目的 用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗马干扰素-γ(IFN-γ)单克隆抗体,为建立马IFN-γ细胞内细胞因子染色方法提供实验材料.方法 利用FITC标记纯化的抗马IFN-γ单克隆抗体(SB10),荧光抗体经系列稀释后,对马外周血单核细胞(PBMC)进行细胞内细胞因子IFN-γ单染色的流式细胞术检测,同时与商品化FITC标记的抗生IFN-γ单克隆抗体(CC302)进行流式细胞术检测对比试验.结果 FITC-CC302染色马PBMC,1 μl荧光抗体染色106个细胞时,分泌IFN-γ的细胞频率为9.35%,而FITC-SB10经系列稀释染色,在用0.25μl荧光抗体染色106个细胞时,分泌IFN-γ的细胞频率为9.90%.结论 所制备的FITC标记的抗马IFN-γ单克隆抗体,可为建立马细胞免疫学研究方法奠定物质基础,进而为建立监测马机体免疫状态和研究机体免疫机制提供技术平台.
作者：白宇；张维军；童铁钢；王群；徐树兰；孙庆歌；杨涛；吴东来 刊期： 2009年第02期
目的 克隆小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因.在原核系统中表达并进行初步纯化,为研究MIF的功能奠定基础.方法 提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增MIF基因,克隆入pMD18-T载体,酶切鉴定及测序后,再定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化.结果 克隆得到的目的基因片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致.重组MIF蛋白相对分子质量约为15 000,以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的40%,且具有良好的反应原性.经初步纯化后,纯度达95%以上.结论 已成功克隆了小鼠MIF基因,并在原核系统中表达了重组蛋白,纯化的蛋白纯度较高,可用于后续试验.
作者：冯娜；侯小强；夏咸柱；高玉伟；孙培录；杨松涛 刊期： 2009年第02期
目的 建立结核分枝杆菌杂交信号放大检测方法.方法 构建纳米颗粒信号放大载体,建立杂交信号放大方法,检测标本中结核分枝杆菌特异性的插入序列IS6110.应用该方法检测124份临床结核患者标本,并与细菌培养和生化鉴定法的检测结果进行比较,确定该方法的灵敏度和特异性.结果 杂交信号放大方法检测临床标本的灵敏度为87.7%,特异性为92.2%,假阳性率为7.8%,假阴性率为12.3%.结论 已建立具有较高灵敏度和特异性的杂交信号放大检测方法,该方法操作简便、快速,可作为结核分枝杆菌临床标本的检测方法.
作者：王海河；赵春燕；李凡 刊期： 2009年第02期
与其他载体相比,慢病毒载体具有携带基因片段容量大、转染效率高、可感染分裂细胞及非分裂细胞、目的基因可在宿主细胞中长时间稳定表达以及安全性好等诸多优点,现已成为转移目的基因的理想载体.本文主要就慢病毒载体及其在基因治疗、生物医药与科学研究等领域的研究进展作一综述.
作者：毛颖佳；郑源强；石艳春 刊期： 2009年第02期
目的 优化全氟丙烷人血白蛋白微球注射液配制方法.方法 采用不同辅料超声制备全氟丙烷人血白蛋白注射液,并检测微球的大小及稳定性.结果 采用2%右旋糖酐-40溶液作为辅料的配方制备的微球,粒径大小佳,放置6个月后,各项质量指标几乎无变化.稳定性较好.结论 已优化了全氟丙烷人血白蛋白微球注射液的配制方法.
作者：逯佩荣；刘群奇 刊期： 2009年第02期
目的 研究银杏叶提取物(GbE)对糖尿病大鼠血清学指标的影响,探讨其在糖尿病大鼠脂代谢过程中的作用.方法 通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(50 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型.将模型大鼠随机分为模型对照绀(DM)和GbE组.GbE组每日给予GbE提取物.0.83 ml/只,DM组每H给予等剂量的生理盐水,均为腹腔注射,另设1组正常大鼠对照.于注射银杏叶提取物的第1和15天采血,检测各组大鼠血清甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,第15天检测大鼠血清中胰岛素和C-肽水平.结果 DM组大鼠血清中TG和LDL-C水平随着时间的延长逐渐升高;注射后第15天,GbE组大鼠血清中TG和LDL-C水平均显著低于DM组,HDL-C和C-肽水平显著高于DM组,胰岛素水平与DM组比较,差异无统计学意义.结论 银杏叶提取物对精尿病大鼠的脂代谢具有调节作用,对高糖导致的损伤具有保护作用.
作者：杨淑娟；任淑萍；陈强；丁亚春；修佳祺；范洪学 刊期： 2009年第02期
目的 建立bcl-2基因过表达的中国仓鼠卵巢细胞株.方法 从CHO细胞中提取总RNA,以其为模板,采用RT-PCR方法扩增bcl-2基因,克隆入pcDNA3.1载体中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-bcl-2.利用脂质体转染法转染CHO-dhfr-细胞,用硫酸新霉素筛选阳性克隆,命名为CHO-G6细胞.通过流式细胞术检测bcl-2基因的表达及细胞凋亡水平,MTT法检测细胞的增殖活力.结果 CHO-G6细胞bcl-2基因表达阳性率(92.46%)明显高于CHO-dhfr-细胞(76.08%);CHO-G6细胞的凋亡率(1%)明显低于CHO-dhfr-细胞(19%);在无血清培养基中培养1～5 d,CHO-G6细胞的增殖活力均明显高于CHO-dhfr-细胞.结论 已成功构建了表达bcl-2基因并具有一定抗凋亡能力的重组CHO细胞株,为进一步应用该细胞株生产重组蛋白奠定了基础.
作者：陆俭；马超；蒋琳 刊期： 2009年第02期
目的 制备同定化超氧化物歧化酶(SOD),并分析其酶学性质.方法 以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化超氧化物歧化酶.以邻苯三酚自氧化法分别测定溶液酶与固定化酶的活力,并计算回收率.对固定化酶的温度和pH稳定性、半衰期、重复使用的回收率及米氏常数(Km)进行测定.结果 固定化超氧化物歧化酶活力为333 U/g,酶活回收率为86.32%,半衰期为43.8 d;固定化酶室温保存5 d后,相对酶活力仍保持在80%以上,适反应温度为45℃,使用一次后回收率为70.12%.重复使用两次后回收率为51.72%;固定化酶与溶液酶在pH 6时活性强,Km分别为0.18 mmol/L和0.16 mmol/L.结论 该固定化酶较溶液酶的稳定性得到提高.便于贮存,在食品、药品、日用品等领域有良好的应用前景.
作者：李磊；马长清；刘飞鸽；李黎 刊期： 2009年第02期
目的 探讨CpG-ODN对伤寒Tv21a疫苗诱导的细胞免疫应答的作用.方法 分别用含10、30及50 μg CpG-ODN的伤寒Ty21a疫苗免疫小鼠,各剂量组分别于第0、14和28 d灌胃免疫3次,末次免疫后1周.采集小鼠脾细胞.流式细胞仪检测脾细胞MHC-Ⅱ类分子和CD40分子的表达;培养脾细胞,用ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-10的水平.结果 不同剂量CpG-ODN的疫苗免疫组脾细胞CD40和MHC-Ⅱ类分子的表达水平均高于阳性对照组,且随着CpG-ODN剂量的增加.表达增强.加入不同剂量CpG-ODN的疫苗免疫组脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-10的水平均升高,且IL-10随着IFN-γ分泌水平的增加而降低.结论 CpG-ODN可提高伤寒Ty21a疫苗诱导的Th1型免疫应答水平.
作者：汤贤英；孙万邦；罗军敏；宋明英；杜联峰 刊期： 2009年第02期
目的 体外表达旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpn)基因,并检测其在旋毛虫不同发育时期mRNA转录、蛋白表达与分子定位及反应原性情况,为以其作为候选诊断抗原基因提供实验依据.方法 根据旋毛虫Serpin基因序列,以重组质粒pBlue-script-WM5为模板,利用PCR技术去除其全长cDNA的信号肽序列,采用原核表达载体pET-28a构建不含该基因信号肽的、融合蛋白不含组氨酸标签的重组表达质粒pET-28a-WM5.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物纯化后,采用Western blot法检测反应原性.免疫组织化学技术检测Serpin蛋白在旋毛虫不同发育时期的表达及定位情况.采用RT-PCR和实时定量RT-PCR技术检测Serpin基因在旋毛虫不同发育时期的转录水平.结果 重组质粒pET-28a-WM5经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,Serpin基因能够在大肠杆菌中高效表达.重组蛋白主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的51.1%.纯化后的重组蛋白纯度可达98%.与猪抗旋毛虫60 d抗血清有较好的反应原性,与26 d猪抗血清无明显反应信号;RT-PCR与实时定量RT-PCR结果显示,该基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,有2个转录高峰期(Ad2/Ad3和ML)以及1个转录水平明显下降期(Ad5);免疫组化鉴定表明,Serpin天然抗原在旋毛虫肌幼虫时期18 d开始表达,且在感染35 d后大量表达和分泌.结论 已获得较高纯度的旋毛虫Serpin体外表达融合蛋白,其具有较好的反应原性.旋毛虫Serpin基因具有期特异性表达的特点,且在肌幼虫期具有高转录与高表达水平,可作为捕获旋毛虫肌幼虫期循环抗体的候选诊断抗原基因.
作者：吴秀萍；于申业；刘相叶；王学林；杨勇；王子见；夏慧卿；邓洪宽；Boireau P；刘明远 刊期： 2009年第02期
猪链球菌2型(SS2)是一种人兽共患的传染病病原菌.在我国和其他养猪业发达的国家,SS2已多次流行,给各国的养猪业带来极大的经济损失,并且危及人类健康.本文对SS2的流行病学特点、培养鉴定方法、毒力因子及其致病机制的研究进展作一综述.
作者：王英超；党源；张付贤；王兴龙 刊期： 2009年第02期
人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致尖锐湿疣的主要原因.约有90%的生殖器疣由HPV6、11型引起.我同妇女宫颈癌组织中HPV感染率大于95%,其中HPV16、18型占90%以上.随着对HPV及其致病机理研究的深入和免疫学的发展,利用免疫学方法治疗HPV引发的疾病显示出极大的应用前景.本文就人乳头瘤病毒治疗型疫苗的研究进展作一综述.
作者：王烨涛；王国治；姜典财 刊期： 2009年第02期
目的 构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达.方法 以金黄葡萄球菌(ATCC25923)基因组为模板,PCR扩增sea基因.用sea基因替代以Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒中的Red基因,构建真核表达质粒pGL-S-SEA.酶切及测序鉴定后,用脂质体转染A549细胞和MRC-5人胚肺成纤维细胞.RT-PCR检测两种细胞sea基因的转录情况.结果 Survivin启动子调控的、以超抗原SEA编码序列CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-S-SEA构建正确,并在A549细胞中启动了sea基因的转录,其强度为内参基因(GAPDH)的65.96%,而在MRC-5细胞对照中未检测到sea基因的转录.结论 已成功构建Survivin启动子调控的sea基因真核表达质粒,survivin启动子可在转录水平特异性地调控sea基因在A549细胞内表达,为下一步以其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础.
作者：李奕璇；陈全；朱大冕 刊期： 2009年第02期
目的 研制HIV-1 RNA血筛试剂国家参考品.方法 收集HIV-1病毒培养物、我国不同地区的HIV-1感染者血浆以及止常人样品,经HIV-1病毒载量试剂检测,对HIV-1 RNA阳性的样品进行env基因型分析,从中筛选参考品的候选样品.结果 共筛选8份HIV-1 RNA阳性的样品作为阳性参考品,病毒载量均高于5 000 IU/ml;8份HIV、HBV、HCV均为阴性的血浆样品作为阴性参考品;以1份病毒培养样品作为灵敏度参考品的原始样品,经WHO HIV-1 RNA标准品标定.其HIV-1病毒载量为3.79×104 IU/ml;反复3次冻融对参考品的病毒载量无明显影响.结论 已制备HIV-1 RNA血筛试剂国家参考品,为我国HIV-1核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据.
作者：许四宏；宋爱京；聂建辉；李秀华；李敬云；鲍作义；王佑春 刊期： 2009年第02期
目的 构建人幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒.并在耻垢分枝杆菌中进行表达.方法 PCR扩增幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI编码基因全长片段,克隆人pET32a(+)质粒.鉴定正确后,冉亚克隆人大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pJHSP70,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70-UreI,转化耻垢分枝杆菌,诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果从幽门螺杆菌基因组中扩增出585 bp的UreI基因片段.重组质粒pJHSP70-UreI经酶切和PCR鉴定.与预期结果一致.目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的18.5%,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建了幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒,并在耻垢分枝杆菌中获得表达.
作者：吕琳；曹红丹；曾瀚庆；王丕龙；王丽娟；刘少宁；向廷秀 刊期： 2009年第02期
目的 建立我国无细胞百日咳疫苗组分含量和纯度的检测方法.方法 应用ELISA方法对生产过程中组分含量(PT和FHA)进行分析,SDS-PAGE和PAGE方法对疫苗原液中PT和FHA的纯度进行测定.结果 通过对生产过程中组分含量的测定,绘制出组分动态图,可以实时监控生产过程中有效组分的变化.检测疫苗原液中PT和FHA纯度的SDS-PAGE法的分辨率较高.但PAGE法条带少,易于分析.结论 所建立的质量控制方法可用于我国无细胞百日咳疫苗的质量控制.
作者：徐颖华；谭亚军；张庶民；侯启明 刊期： 2009年第02期
目的 探讨盐酸氨基葡萄糖及其与甲氨蝶呤联用对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用.方法 将佐剂性关节炎大鼠分为4组:模型对照组(AA组)、盐酸氨基葡萄糖组(CH组)、甲氨蝶呤组(MTX组)和联合用药组(GHM组),另设1组空白对照.自造模前1 d至造模后22 d,正常对照组和AA组每天给予蒸馏水灌胃.其他组以相应的药物灌胃.造模前及造模后不同时间,测量各组大鼠左、右后足体积,造模后22 d,ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.结果 与AA组比较,在继发反应期,GH、MTX及GHM各组的左、右后足体积和血清中TNF-α仅含量均有所下降,且差异均有统计学意义,除血清中TNF-α含量GHM组显著低于MTX组外,其他各项指标GHM组与GH组和MTX组比较,差异均无统计学意义.结论 盐酸氨基葡萄糖可缓解大鼠佐剂性关节炎症状,具有抗炎作用和治疗类风湿性关节炎的潜力,其与MTX联用,有望降低MTX的用量.
作者：蔺超；黄朝梁；常蕾；颜廷振；马国栋 刊期： 2009年第02期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
