孙会来；方捍华；李荣成；陈震；邱平；李艳平；农艺；文玉屏；朱昌林
重组腺相关病毒(rAAV)载体具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂细胞和非分裂细胞、能介导基因长期稳定表达等优点.因此,作为一种基因导入系统,rAAV载体在基因治疗的研究和开发中越来越受到关注.本文就rAAV载体在基凶治疗中的应用作一综述.
作者：董晓宇；井申荣 刊期： 2009年第07期
目的 建立鸭瘟病毒PCR检测方法,并进行验证.方法 根据GenBank中登录的鸭瘟病毒基因(UL30、UL31)序列,设计合成1对特异性引物,以鸡胚化弱毒疫苗株病毒基因组DNA为模板,进行PCR扩增.优化PCR的反应条件,并对方法的敏感性、特异性及适用性进行验证.结果 经PCR可扩增得到446 bp的目的基因条带,测序结果与已发表的序列同源性达100%.该方法的低检出限为2.1 pg,对7种鸭易感性病原体及3种鸭瘟病毒同类病原体的检测结果均为阴性.结论 已建立了敏感、特异、快速的鸭瘟病毒PCR检测方法.
作者：孟日增；石建平；肖成蕊；刘晶；郭娜；潘风光 刊期： 2009年第07期
目的 观察大鼠颅脑外伤后生长相关蛋白(GAP-43)在中枢神经系统表达的变化,为探讨颅脑外伤后神经元再生和修复机制及临床应用药物治疗颅脑外伤提供理论依据.方法 采用液压冲击法建立大鼠脑外伤模型,同时设正常对照组和假手术对照组.成模后取额皮质及海马部位,应用HE染色法观察额皮质区和海马CA1区的病理学改变,免疫组化法检测GAP-43的表达.结果 轻、中、重度损伤组大鼠脑组织均出现明显的病理学改变,各损伤组大鼠创伤性颅脑外伤(TBI)后,额皮质区及海马CA1区均于12 h开始出现GAP-43表达增强,3 d后明显增强,1周达高峰,2周时开始降低.GAP-43的免疫反应产物的实际累积光密度值(CIOD)值在TBI 12 h后各时间点均明显高于同期的正常对照组和假手术对照组,中、重度损伤组CIOD值在TBI12 h后明显高于同期轻度损伤组.结论 大鼠TBI后,GAP-43的表达增强;TBI损伤越重,其GAP-43的表达越强.
作者：付双林；张剑涛；赵景伟；罗毅男；王宏磊 刊期： 2009年第07期
目的 建立狂犬病病毒抗原ELISA检测方法,并进行初步应用.方法 采用狂犬病病毒CTN-1V纯化抗原免疫家兔,制备多克隆抗体,作为酶标抗体,马抗狂犬血清纯化抗体作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA法.对该方法进行验证,检测狂犬病病毒原液毒力和疫苗效力,并与小鼠(NIH)法检测结果进行对比.结果 双抗体夹心EL[SA检测方法的低检出限为0.17 IU/ml,佳线性范围为0.17～2.00 IU/ml,相关系数R>0.97;批间及试验内变异系数均小于10%,特异性、稳定性均良好;检测20批病毒原液毒力及疫苗效力,结果与NIH法相比,差异无统计学意义.结论 已建立狂犬病病毒抗原ELISA检测方法,可用于生产过程中狂犬病疫苗原液和半成品的检定.
作者：王亚军；成凤春；薛向光；李晓波；王丽娜；谢琳；王宇；夏青娟；隋波；张梅；魏涛；郭立君 刊期： 2009年第07期
目的 探讨表皮葡萄球菌与人脐静脉血管内皮细胞ECV304的黏附作用及其机制.方法 将表皮葡萄球菌临床分离株通过刚果红琼脂检测胞间多糖黏附素(PIA);半定量生物被膜形成试验检测生物被膜表型;并在体外与ECV304细胞共同作用,在倒置显微镜下观察表皮葡萄球菌对ECV304细胞的黏附数.结果 表皮葡萄球菌黏附ECV304细胞的数昔随作用时间的延长而增加;PIA+/生物被膜表型+菌株与ECV304细胞的黏附数多于PIA+/生物被膜表型-菌株和PIA-/生物被膜表型-菌株,且差异有统计学意义,而PIA+/生物被膜表型-菌株和PIA-/生物被膜表型-菌株与细胞的黏附数差异无统计学意义.结论 表皮葡萄球菌与血管内皮细胞的黏附有时间依赖性,能形成生物被膜的表皮葡萄球菌更易与血管内皮细胞黏附.
作者：何敏；廖璞；尹一兵 刊期： 2009年第07期
肉毒毒素生物学活性的检测和肉毒中毒诊断方法的研究进展迅速,对食品检验、肉毒中毒实验室诊断、生物反恐和肉毒毒素制品的开发及应用具有十分重要的意义.本文就肉毒毒素生物学活性及肉毒中毒病原检测方法的研究进展作一综述.
作者：张雪平；王荫椿 刊期： 2009年第07期
目的 调查岳阳市无偿献血人群Rh血型系统的表型,建立Rh阴性献血者档案库.方法 使用Rh血型定型试剂,采用平板法进行初筛,结果可疑者用试管法确认.初筛阴性标本送血型参比室做确认试验,并进行Rh因子C、c、E、e和不规则抗体筛选.结果 在183 596名无偿献血者中共筛出RhD阴性献血者404名(0.22%),弱D 5名(0.003%). 404名Rh阴性献血者中共检出A型112名(27.7%),B型112名(27.7%),O型128名(31.7%),AB型52名(12.9%).表型共7种:cedee 212名(52.5%),Cedee 124名(30.7%),CCdee 30名(7.4%),ccdEe 18名(4.4%),ccdEE 8名(2.0%),CcdEe 8名(2.0%).CCdEe 4名(1.0%).结论 已建立了岳阳市Rh阴性献血者档案库.
作者：粟玉萍；苏湘晖；代敏；刘锋；李肖雄 刊期： 2009年第07期
目的 研究太空诱变对α-溶血性链球菌多糖分子表达的影响.方法 采用改良的过碘酸钠法将辣根过氧化物酶(HRP)分别标记在刀豆凝集素(ConA)、麦胚凝集素(WGA)、接骨木凝集素(SNA)、蓖麻凝集索I(RCA-I)及植物血凝素(PHA)上,合成HRP-凝集素,检测普通型α-溶血性链球菌及太空型链球菌菌体内多糖分子的表达水平.结果 太空型链球菌菌体内末端为ConA、SNA及RCA-I所识别的多糖分子含昔较普通型α-溶血性链球菌高,且差异有统计学意义;末端为WGA及PHA所识别的多糖分子含量,普通型α-溶血性链球菌较太空型链球菌稍高,但差异无统计学意义.结论 太空诱变对细菌的多糖分子表达具有调控作用,为细菌多糖制品的筛选及其性能和产量的提高提供了新的途径.
作者：游勇飞；岑建宁；张积仁；姚素娟；郭敏；赵恒 刊期： 2009年第07期
目的 在大肠杆菌中表达Serratia marcescens非特异性核酸内切酶(SMNE),并进行纯化、活性检测及应用.方法 合成smne基因,应用PCR技术在基因的5'端引入6个组氨酸标签序列,将其插入分泌表达载体pET-20b(+)中,转化大肠杆菌BL221(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达产物经镍离子螯合琼脂糖凝胶一步纯化后,检测其活性并计算比活.将纯化的SMNE用于重组腺病毒的制备,对外源性核酸进行降解,并采用Southem blot对外源性DNA残留量进行测定.结果 重组表达质粒pET-20b-smne经PCR、双酶切和测序证明构建正确.重组蛋白的表达量为8.0 mg/L,纯化后纯度达95%,比活达1.1×106 U/mg.在重组腺病毒制备过程中使用后,成品中的外源性DNA残留量≤10 ng/5.0×1011VP.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了SMNE,纯化的SMNE活性高,有望应用于重组生物制品制备过程中外源性核酸的去除.
作者：张开俊；杨莉 刊期： 2009年第07期
目的 分析人巨细胞病毒(HCMV)感染对人星形胶质瘤细胞凋亡的影响及其细胞内差异蛋白的表达.方法 以HCMV AD169株感染U251细胞,复制HCMV体外感染模型,通过RT-PCR和免疫细胞化学技术检测HCMV IE蛋白和结构蛋白pp65的表达.用Annexin V-FITC和PI染色检测细胞凋亡,通过SELDI-TOF质谱分析感染细胞内差异蛋白的表达.结果 HCMV感染后6 h,U251细胞经RT-PCR可扩增出242 bp的IE基因条带,感染后3 d,细胞核内有大量IE蛋白表达,核周及细胞浆内有大量pp65蛋白表达.病毒感染后3 d,约47%的细胞产生凋亡.HCMV感染后细胞内Caspase-8和磷脂酶A2的表达明显增加.结论 HCMV感染可能通过上调Caspase-8和磷脂酶A2的表达而诱导U251星形胶质瘤细胞产生凋亡损伤.
作者：白志强；李玲；王斌；刘志军；王海涛；钱冬萌；闫志勇；赵巍；宋旭霞；丁守怡 刊期： 2009年第07期
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合IFNγ滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,为研制弓形虫黏膜疫苗提供实验依据.方法 将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20μg/只)+IFNγ(1 000 U/只)滴鼻,对照组以PBS滴鼻.免疫2次,间隔2周.分别于初次免疫后0、2、4…6 8 10、12周处死小鼠,分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(IEIJs)并计数;分离血清,用ELISA法测定IgA和IgG含量.结果 免疫后实验组小鼠IELs和脾淋巴细胞均有增生,IELs和脾淋巴细胞数量均于初次免疫后4周达峰值,IEL数量4、6周显著高于对照组;脾淋巴细胞数量2、4周显著高于对照组.实验组小鼠血清IsG和IgA水平均于初次免疫后4周达峰值,IgG水平2,4周显著高于对照组,至12周时仍高于对照组;lgA水平4、6周显著高于对照组.结论 STAg联合IFNγ/滴鼻免疫BALB/C小鼠,可有效诱导黏膜及系统免疫应答,且可持续较长时间.
作者：弓鸿飞；刘红丽；孟晓丽；刘转转；殷国荣 刊期： 2009年第07期
目的 原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链.方法 以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆人pCR-Ⅱ载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定.结果 酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达.表达产物的相对分子质量为49 500,0.2mmol/LIPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%.纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别.结论 已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白.
作者：金玉玲；张爱华；闭兰；赵亚杰；彭祥兵；孙可芳 刊期： 2009年第07期
目的 观察CpG ODN对卡介苗免疫效应的影响,为其临床应用奠定基础.方法 以CpG ODN为佐剂,与卡介苗通过皮下注射和黏膜途径免疫BALB/c小鼠,称量小鼠体重,检测迟发型变态反应及小鼠血清中抗结核菌素(PPD)IgG抗体效价和Th1型细胞凶子IFNγ的含量.结果 CpG可增强BALB/c小鼠的迟发型变态反应,提高血清中抗PPD IgG抗体效价和IFNγ的含量,且不会影响小鼠体重增长.皮下注射较黏膜免疫效果更好.结论 CpG ODN可提高卡介苗的免疫效应,作为一种有效的佐剂,有望在新型结核疫苗的开发中发挥作用.
作者：张林波；陈清彬；刘香英；王海燕；张丹丹 刊期： 2009年第07期
目的 建立检测人血清中抗鼠抗体(HAMA)的间接ELISA法,并进行临床标本检测.方法 采用间接ELISA法,选择佳实验条件,确定阴阳性血清判定的界值,并进行方法学验证;用该方法检测WuTac Ⅰ期临床观察的健康志愿者血清抗鼠抗体.结果 间接ELISA的佳试验条件为:抗原包被浓度0.313 μg/ml,血清稀释度1:160,酶标抗体稀释度1:80 000;阴阳性血清界值为0.210;该方法检测HAMA阳性标本的试验内和试验间变异系数分别为7.46%和5.48%,检测HAMA阴性标本的试验内和试验问变异系数分别为8.03%和14.7%;与马、山羊、兔、猴等动物血清尤交叉反应;健康志愿者HAMA约在用药后10～14 d产生.结论 已成功建立了检测人血清中抗鼠抗体的间接ELISA法,符合我国生物药品临床试验检测的要求.
作者：郭长福；张囡；李茜；黎维勇；孙可芳；胡豫；张爱华 刊期： 2009年第07期
目的 观察A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗大规模接种后的速发接种反应.方法 以A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗为观察组,伤寒Vi多糖疫苗为对照组.按组群随机分层配对的原则,将观察现场分为108个组群,观察组和对照组各分配54个组群进行接种.建立接种反应监测系统,按统一表格和方法对两组的速发接种反应进行监测.结果 两组共接种34 543人,其中A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种18 167人,伤寒Vi多糖疫苗接种16 376人.A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应率为0.44‰;伤寒Vi多糖疫苗速发接种反应率为0.79%0,二者差异无统计学意义;速发接种反应均出现在接种后15 min内,早的出现在接种后5 min,速发接种反应中有2例为异常反应,但未出现严重反应.结论 A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应发生率低,预后良好.
作者：杨进；叶强；董柏青；龚健；崔萱林；杨明；廖和壮；张杰；Rion Leon Oehiai；Ali Mohammad；John Clemens 刊期： 2009年第07期
目的 对柯萨奇B4病毒(CVB4)jlu06株进行基因序列及遗传进化分析,并探讨其与致病相关的分子基础.方法 Trizol法提取病毒RNA,RT-PCR扩增目的基因片段,测定基因组全序列,并进行序列同源性及遗传进化分析.结果 CVB4 jlu06株基因组全长7 395个核苷酸,编码2 183个氨基酸,与其他CVB4株的同源性较高,且发生了10个氨基酸的变异,与HumanCB4和POLG_CXB4亲缘关系较近,与CXB2亲缘关系较远;CVB4 jh06株与具有潜在致糖尿病性病毒株,在非结构蛋白3A区4个位点有共同的氨基酸,与非致病毒株不同.结论 CVB4 jiu06株具有典型的CVB4基因组特征,在非结构蛋白3A区发生的核苷酸和氨基酸变异可能与其致病性相关.
作者：周密；李凡 刊期： 2009年第07期
目的 探讨慢性肾功能不全(尿毒症期)患者血清白细胞介素-18(IL-18)和可溶性血管细胞黏附分子-1(sV-CAM-1)的水平及其临床意义.方法 应用ELISA法检测10例慢性肾功能不全(尿毒症期)患者经维持性血液透析治疗前和治疗10 d后,血清IL-18和sVCAM-1的水平,并与正常对照组进行比较.结果 慢性肾功能不全(尿毒症期)患者血清IL-18和sVCAM-1的水平治疗前均明显高于正常对照组;治疗10 d后仍明显高于治疗前.结论 高水平的IL-18和sVCAM-1可能与慢性肾功能不全(尿毒症期)的发病机制有关,而且可能参与透析治疗相关并发症的发生发展.
作者：巫远忠；张丽科；刘瑞玉；钟伟强 刊期： 2009年第07期
目的 观察国产冻干水痘减毒活疫苗的接种反应及免疫原性.方法 选择460名观察对象,于接种后30 min、6 h、24 h、48 h、72 h、4～10 d进行随访,观察一般反应和异常反应,通过电话和自动报告收集30 d内的异常反应.采用膜免疫荧光抗体法(FAMA)检测观察对象免疫前后的抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗体水平,并计算抗体阳性率、抗体几何平均滴度(GMT)及增长倍数.结果 460名观察对象接种疫苗后,在观察期未观察到严重的局部反应和全身反应,也未观察到异常反应,抗体总阳性率为98.31%,免疫后抗体GMT水平平均为147.38,比免疫前提高38.18倍.6～12岁组免疫后抗体GMT水平高于1～5岁组,且差异有统计学意义.结论 国产冻干水痘减毒活疫苗具有良好的安全性和免疫原性.
作者：孙会来；方捍华；李荣成；陈震；邱平；李艳平；农艺；文玉屏；朱昌林 刊期： 2009年第07期
目的 构建人源核糖体展示单链抗体(scFV)库.方法 从人外周血单个核细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以此为模板,设计多对具有简并性特点的引物,PCR扩增人免疫球蛋白重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,在其两端加上核糖体展示所需元件,并通过重叠PCR法将VH和vL经(Gly4Ser)3短肽连接成单链抗体,构建核糖体展示库.结果 利用不同引物进行PCR时,绝大多数引物能扩增出300～400 bp的VH和VL片段;通过大引物扩增成功加上了核糖体展示所需元件,重叠PCR体外连接成约900 bp大小的scFv基因,大量扩增得到核糖体展示库.结论 已成功构建了人源核糖体展示scFv库,为人源抗体药物的开发奠定了基础.
作者：时成波；刘红琴；李铮；曹玉锋；王晓庆 刊期： 2009年第07期
目的 探讨白藜芦醇对Burkitt B淋巴瘤Raji细胞的增殖抑制作用及诱导死亡途径.方法 用白藜芦醇处理Raji细胞,透射电镜及MDC染色检测细胞死亡;Western blot法检测Caspase-3、细胞色素c及CathepsinD蛋白的表达.结果 白藜芦醇可明显抑制Raji细胞增殖,电镜观察细胞内出现了大量的自噬小泡,MDC染色后细胞点块状荧光结构明显增加.Western blot分析显示,白藜芦醇可引起细胞色素c从线粒体释放,但释放量与Jurkat细胞相比明显减少.且不能导致Caspase-3的活化.Cathepsin D活性成分32kD片段随白藜芦醇处理时间的延长而减少.结论 白藜芦醇可抑制Raji细胞增殖,并通过Caspase非依赖途径诱导细胞自噬死亡.
作者：劳凤学；商迎辉；刘端祺 刊期： 2009年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
