王妍；李世敏
目的 构建复合通用CD4Th细胞表位基因的原核表达载体,检测表达蛋白的免疫学特性,并探讨其作为载体蛋白的可能性.方法 以限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pUC19-Pep10,回收长度为650 bp左右的目的 片段.插入原核表达载体pQE30中,获得重组质粒pQE30-Pep10,转化大肠杆菌M15后进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Westem blot分析后,进行亲和层析纯化及透析复性,获得重组蛋白Pep10,将Pep10和TT分别免疫雌性BALB/c小鼠,以间接ELISA法和流式细胞术分别检测其免疫原性和淋巴细胞增殖效应.结果 SDS-PAGE显示重组蛋白Pep10相对分子质量约为23 000,表达量达41%,主要以包涵体形式表达,Western blot检测可见特异性染色条带,纯化后纯度达94%,共获得42 mg重组蛋白.其体外淋巴细胞增殖效应与TT相当,增殖指数分别为4.216和4.736,而免疫原性远低于TT,特异性IgG几何平均滴度(GMT)分别为1:15 758.65和1:67 558.81.结论 已成功构建重组原核表达载体pQE30-Pep10,并在大肠杆菌中高效表达,且表达的重组蛋白Pep10具有良好的淋巴细胞增殖效应和较低的免疫原性,有可能作为一种新型载体蛋白,用于多糖结合疫苗的研制.
作者：刘汉平；方志正 刊期： 2008年第06期
目的 构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的 蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响.方法 人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T.A克隆法与pBAD/TOPO ThioFusion表达载体连接.通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体.结果 工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15 000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右.随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升.提取的质粒测序结果 表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加.结论 已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白.该异源蛋白的表达导致丁程菌的活力降低.
作者：杨金环；查向东；方红；刘小强；屈满义 刊期： 2008年第06期
目的 研究同时表达SS1、SS2两种多肽(含前S1、前S2和S三种抗原成分)的重组毕赤酵母工程菌株(GS115-SS1S2)基凶和表达的稳定性.方法 取工程菌原代种子,连续传代至30代,提取15和30代工程菌基因组DNA,PCR分别扩增SS1和SS2基因片段,克隆到pBluescriptⅡSK(十)载体中,进行基因序列测定.对第5、10、15、20、25、30代菌种进行培养和诱导,制备抗原粗提液,并用ELISA法检测其中的前S1、前S2和S的抗原性,同时用RPHA法检测抗原效价.结果 第15和30代菌种基因组中SS1和SS2基因序列与原始菌种完全一致,第5、10、15、20、25、30代菌种表达产物的前S1、前S2和S抗原均为阳性;菌种传至20代,抗原滴度无变化,25代和30代菌种抗原滴度有一定程度下降.结论 重组毕赤酵母工程菌GS115-SS1S2在20代传代过程中,基因和表达稳定性良好.
作者：蒋丽明；谭昌耀；胡波；袁进；金瓯 刊期： 2008年第06期
目的 分析武汉地区人呼吸道合胞病毒(RSV)分离株的G蛋白基因的遗传特征.方法 使用不同的特异性引物,对武汉地区2006年分离的9株RSV进行G基因3'末端第2个高变区的序列测定,并进行基因分型和基因亲缘关系分析.结果 分离的9株RSV中,33.3%(3/9)为A亚型,属GA2基因型;66.7%(6/9)为B亚型,其中1株属于BA基因型,5株属于GB8基因型.9株RSV G蛋白与原型株核苷酸同源性为84.5%-99.0%,且与原型株相比,在205～230位氨基酸中有5-8个位点氨基酸变异,还存在糖基化位点的改变.结论 2006年初在武汉地区存在着由不同RSV株引起的传播链,A、B亚型共循环,B亚型足优势流行亚型;9株RSV G蛋白与原型比较,存在明显的差异.
作者：陈晓琦；徐葛林；全家妩 刊期： 2008年第06期
发光免疫分析技术是近年来发展起来的免疫标记技术.该技术包括化学发光免疫分析法、时间分辨免疫荧光法、电化学发光免疫分析法和光激化学发光免疫分析法.本文分别对上述各种方法 的检测原理及在病毒性肝炎标志物检测中的应用作简要综述.
作者：吴星；祁自柏 刊期： 2008年第06期
目的 制备壳聚糖(CTS)微珠亲和层析介质,并进行初步应用.方法 采用多种化学方法 对CTS的表面基团进行改造,使其活化.用此改性CTS进行羊抗人IgG及小牛血清纤维连接蛋白(FN)的纯化.结果 此改性的CTS微珠粒径在40～160μm之间,每克可溶胀至4 ml.活化的CTS对人丙种球蛋白的吸附量为15～25 mg/g CTS,对明胶的吸附量为5.8-6.5 mg/gCTS.采用此方法 纯化的羊抗人IgG及FN与Sepharose 4B法纯化效果一致.结论 已制备的壳聚糖微珠亲和层析介质,其性质稳定且价格较低,是一种可以广泛应用的亲和层析介质.
作者：栾勇；王丹；何小曼；孔维臣 刊期： 2008年第06期
目的 对1份正反定型不符的献血者标本进行血清学及分子特性分析.方法 采用吸收放散试验进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法 进行基因分型,PCR产物克隆后进行测序分析.结果 该标本血清学反应格局符合Ax亚型,分子生物学检测为A型.测序结果 表明,Exon4含有2个连续碱基错义突变位点,分别为nt187GA,nt188CT,导致第63位氨基酸的改变(Arg63His).结论 该Ax亚型是由于Exon4 2个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少.
作者：刘景春；邹文涛；何子毅；吴远军；车嘉琳；刘赴平 刊期： 2008年第06期
目的 优化猪源罗伊乳杆菌的发酵培养基4个组分的配比.方法 应用SAS V8.0统计分析软件中的二次正交旋转组合设计方案进行试验设计,并通过响应面法分析各因素对响应值的效应关系.结果 优化后培养基各组分比例为:大豆蛋白胨5%,葡萄糖1%,酵母浸粉1.7%,低聚糖0.3%.应用此配比进行了3次重复发酵试验,A620的平均值为1.073,与预测值(1.092)基本相符.结论 二次正交旋转组合设计结合响应面法可用于发酵培养基组分的优化和分析.
作者：朱战波；刘宇；贾永全；张军；崔玉东 刊期： 2008年第06期
生物技术的快速发展,导致了生物制品新老产品的快速更替.本文在阅读大量资料基础上,对在2005～2007三年内美国FDA批准和待批准的生物制品进行了概述和比较,以此为据,概括未来几年的国际生物制品市场的主流,以便中国生物制药企业把握生物制品的方向,为企业的产品研发提供信息和建议.
作者：王妍；李世敏 刊期： 2008年第06期
目的 表达并纯化重组蛹虫草超氧化物歧化酶脱辅基蛋白,并考查各种金属离子对其活性重建的作用.方法 用不含Cu2+和Zn2+的培养基培养重组菌株,并表达重组蛋白,采用DEAE-FF和CM-52进行纯化;在脱辅基蛋白溶液中加入Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ni2+Ag+,测定SOD酶活力的变化.结果 蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD在不含Cu2+和Zn2+的培养基中得到表达,纯化后的样品经SDS-PAGE分析,在相对分子质量17 000处出现单一条带,经活性电泳分析无酶活力;脱辅基蛋白活性重建的适宜Cu2+浓度为0.005 mmol/L,但其紫外吸收图谱与天然SOD不同;0.1mmol/L的Mn2+、Mn2+、Ni2+、Ag2+重建的酶活力远低于Cu2+重建的cm-SOD的酶活力.结论 已成功表达并纯化了蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD,各种金属离子只能有限地重建脱辅基Cu,Zn-SOD的活性.
作者：胡圣尧；聂志妍；王尊生；袁勤生 刊期： 2008年第06期
目的 观察重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)脂质体乳膏的抗病毒及毒性作用.方法 采用体外和体内抗病毒试验以及大鼠急性和长期毒性试验,检测rhIFNα2b脂体乳膏的抗病毒及毒性作用.结果 rhIFNα2b脂质体乳膏对单纯疱疹病毒和水痘疱疹病毒均有明显的抑制作用.在大鼠试验中,10 000倍临床剂量用药后1周以及4 000倍临床剂量用药后4周,均未出现毒性反应.结论 rhIFNα2b脂质体乳膏用于治疗病毒性疱疹病是安全有效的.
作者：李云富；张水华；何凌冰；田建明；李龙云；王妍 刊期： 2008年第06期
目的 表达、纯化重组人B7-H4IgV融合蛋白,并检测其活性.方法 将人B7-H4胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化,并进行Western blot鉴定.用纯化的rhB7-H4IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定小鼠抗血清的活性;免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察对肿瘤细胞生长的抑制作用.结果 表达的rhB7-H4IgV蛋白约占菌体总蛋白的25%,纯化后蛋白纯度为93%,浓度约为0.5 mg/ml,与抗His单抗可产生特异性反应条带.免疫昆明小鼠产生的抗血清效价可达1:10 000,可与SP2/0肿瘤细胞结合.rhB7-H4IgV蛋白对SP2/0移植瘤生长具有一定的抑制作用.结论 已成功表达并纯化了重组人B7-H4IgV融合蛋白,纯化蛋白可诱发小鼠体内免疫应答,产生的抗体能与表达B7-H4的肿瘤细胞SP2/0结合,rhB7-H4IgV蛋白在一定程度上能抑制SP2/0移植瘤的生长.
作者：朱文华；姜昌丽；张存；游彦杰；王伟华；刘艳；张珍；冉永刚；叶星明；李维娜；韩苇；张英起 刊期： 2008年第06期
目的 观察复肝肽口服液(主要成分为新生牛肝活性肽)对大鼠四氯化碳(CCI4)慢性肝损伤的保护作用.方法 制备大鼠CCI4慢性肝损伤模型,观察复肝肽口服液对慢性肝损伤大鼠红、白细胞数、血色素、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白球蛋白比例(A/G)的影响.结果 与模型对照组比较,复肝肽3个剂量组大鼠的A/G值均明显升高,肝组织病变明显减轻,高剂量组ALT、AST明显降低.结论 复肝肽口服液对慢性肝损伤有明显的保护作用.
作者：傅颖；刘冬英；王茵 刊期： 2008年第06期
目的 制备检测抗狂犬病马血清效价的ELISA试剂.方法 采用ELISA间接法.先用抗狂犬病病毒IgY包被酶标板,并确定其适包被浓度;制备酶标二抗,并确定其佳使用浓度.对试剂的灵敏度、特异性、精密性、稳定性及与小鼠中和试验结果 的相关性进行考核.结果 抗狂犬病病毒IgY和酶标二抗的适浓度分别为10μg/ml和1:1 500,试剂灵敏度为0.072 IU/ml,特异性良好,批间及试验间变异系数均小于11%,37℃放置3和5 d检测样品结果 与放置前差异无显著意义,与小鼠中和试验结果 呈正相关.结论 所制备的抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂盒,可用于抗狂犬病马血清效价的检测.
作者：薛向光；柳春红；贾媛；张梅；匡科伟；李文娟；郭立君；郭凤云 刊期： 2008年第06期
目的 从人的肠道中分离具有高黏附性能的益生乳酸菌,为其应用于临床研究提供依据.方法 采用改良的LAMVAB选择性培养基.取肠黏膜活检标本进行分级分离.对分离的乳酸菌进行生理、生化鉴定和16S rRNA序列测定,并对其耐酸、耐胆盐特性、黏附性能以及抑菌特性等进行分析.结果 从人肠黏膜活检标本中分离出1株乳酸菌L2,该菌能在改良的LAMVAB选择性培养基上生长,并能抵抗pH 2.5的酸性环境和0.3%的高胆盐环境;体外黏附试验显示,该菌株具有较好的黏附性能,对人肠上皮样细胞Caco-2和大鼠小肠上皮细胞IEC-6的黏附指数分别达(595±125.76)/100 cells和(538±65.2)/100 cells,且黏附具有Ca2+依赖性.对大肠杆菌、铜绿假单胞菌等具有较强的抑制作用,对益生菌鼠李糖乳杆菌LGG和嗜酸乳杆菌L05013-12无抑制作用.该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).结论 植物乳杆菌L2具有较好的黏附性能,且耐酸、耐胆盐性能以及抑菌特性均较佳,具备作为益生菌使用的潜能.
作者：王斌；李秋荣；刘放南；罗楠；李幼生；李宁；黎介寿 刊期： 2008年第06期
目的 比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性.方法 1 151和996名6～12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平.结果 首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗.结论 应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量.
作者：何鹏；吴晓音；荆庆；杨超关；时景璞；李荣成；李艳萍；胡忠玉；李河民；梁争论 刊期： 2008年第06期
目的 利用毕赤酵母表达系统表达IL-6(23)-PE40KDEL重组靶向毒素,并检测其杀伤肿瘤细胞的活性.方法 采用PCR技术,将目的 基因IL-6(23)-PE40KDEL插入到pPIC9载体中SnaB I与Not I位点,电转化至巴斯德毕赤酵母GS115中,筛选Mut型重组酵母;甲醇诱导表达,体外细胞试验检测其细胞毒性.结果 获得12株Mut-重组酵母,其中8株具有细胞毒性,表达产物占上清液蛋白的9%～12.7%;15μl以上的表达产物在体外对SP2/0、HL-60、HepG2、BGC-832和HCT-116细胞具有高度杀伤活性,对CK、HeLa和NIH/3T3细胞无明显影响.结论 IL-6(23)-PE40KDEL重组靶向毒素在毕赤酵母GSI15中获得表达,并具有选择杀伤肿瘤细胞的活性.
作者：郭德军；柳增善；潘风光 刊期： 2008年第06期
呼吸道合胞病毒G蛋白是该病毒的黏附蛋白,亚型间抗原结构高度变异,在病毒感染和诱导保护性免疫方面起到重要作用.本文对呼吸道合胞病毒G蛋白的结构、功能、免疫表位、CX3C模序及疫苗研制等作一综述.
作者：宋颖丽；井申荣 刊期： 2008年第06期
目的 构建表达人巨细胞病毒(HCMV)pp65336-507基因的毕赤酵母工程菌.方法 扩增HCMVpp65336-507基因,构建重组表达质粒pPIC9/pp653336-507,转化毕赤酵母菌GS115.PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达产物.结果 已构建和筛选到阳性表达克隆株,表达的pp653336-507蛋白的相对分子质量约为26 000,能与特异的pp65抗体结合.结论 已成功构建了分泌表达pp65336-507蛋白的毕赤酵母工程菌,表达的目的 蛋白具有良好的反应原性.
作者：郭海英；时成波；隋红；迟春萍；刘淑玲；张勇；郭风云；郭立君 刊期： 2008年第06期
目的 构建水泡性口炎病毒(VSV)保护性抗原基因的重组核酸疫苗质粒,并检测其免疫原性.方法 利用RT-PCR从VSV中扩增G蛋白基凶,构建重组表达质粒pIRES-G1500,转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光、PCR、SDS-PAGE、ELISA和Western blot检测质粒的表达,用核酸疫苗质粒免疫BALB/C小鼠,检测小鼠的细胞免疫和体液免疫水平.结果 构建的重组核酸疫苗质粒在BHK-21细胞中获得正确表达,质粒免疫小鼠后,可刺激脾细胞、T淋巴细胞亚类数量及CTL杀伤活性显著升高,并可产生高滴度的抗VSV特异性抗体.结论 该重组核酸疫苗质粒可作为VSV的候选疫苗.
作者：周学章；李元刚；高丰 刊期： 2008年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
