吕峰；胡凝珠；施海晶；瞿素；刘国栋；胡云章
目的建立人脂联素球状结构域(gAd)融合组氨酸标签的原核高效表达体系,并分离纯化gAd.方法从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,经T-A克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物,引入起始密码、C端连续6个组氨酸编码序列、终止密码以及相应的酶切位点,把脂联素球状结构域(gAd)基因亚克隆到表达载体pBV220,将序列鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中,用42℃温控诱导表达目的蛋白.结果在大肠杆菌中成功实现了gAd稳定高效表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量约占全菌蛋白的19%,用超声破菌,经金属离子(Ni2+)配体亲和层析一步纯化得到了均一蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定得到了较高纯度的gAd.结论已成功表达了gAd融合蛋白,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础.
作者：杨泽华；解军；杨琦；张悦红；牛勃 刊期： 2006年第01期
目的制备鸡卵黄乙肝病毒特异性转移因子(EYHBV-TF),并检测其免疫活性.方法用乙肝疫苗免疫母鸡,收集鸡蛋,取卵黄进行透析,制备EYHBV-TF,参照药典要求,采用光谱法、高效液相色谱法(HPLC)、Lowry法等检测其理化性质.采用白细胞粘附抑制法(LAI)和迟发型皮肤超敏试验(DTH)检测特异免疫活性.结果EYHBV-TF是一种可透析、含有18种氨基酸、相对分子质量小于12 000的小分子物质,其多肽含量为1.2 mg/ml,核糖含量为152.94μg/ml,pH 6.9±0.5,蛋白反应阴性,大紫外吸收光谱在270 nm处.该EYHBV-TF能明显抑制小鼠白细胞粘附(P＜0.01),并能诱导小鼠跖趾部皮肤的迟发型超敏反应(P＜0.01),与猪脾淋巴细胞制取的乙肝特异性转移因子(PSHBV-TF)检测结果接近(P＞0.05).而正常卵黄提取液组、非特异性转移因子和甲肝抗原(HAAg)对照组均不能表现出这两种效应(P＞0.05).结论EYHBV-TF与PSHBV-TF主要理化性质和作用相类似,均具有乙肝抗原特异性细胞免疫活性.
作者：徐燕萍；湛学军；杨淑华；谢大泽；彭赛亮 刊期： 2006年第01期
目的研制HIV中国流行株RL42 GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂.方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达.通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白.将纯化后的蛋白用狭缝电转技术转印硝酸纤维素膜,利用HIV参考品血清检测其灵敏度和特异性.结果目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%左右.纯化后其纯度高于95%,HIV参考品血清检测显示出良好的灵敏度和特异性,检测8份阳性临床标本无一漏检,而7份阴性临床标本元交叉反应.结论已研制出具有良好灵敏度和特异性的HIV-1 GP120主要抗原性片段.为开发HIV抗体检测试剂创造了条件.
作者：郝彦玲；张梦华；黄云坚；袁国亮；陈佩；朱旭辉；傅晶晶；刘勇；邵一鸣 刊期： 2006年第01期
目的建立丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达.方法用PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段;分别合成HCV E2区模拟表位和NS3～NS5 7个T或Th细胞表位基因;PCR方法将羧基端部分缺失的HCV核心区基因与合成的表位基因串联,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(-),并通过脂质体瞬时转染COS7细胞.结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm已成功转染COS7,间接免疫荧光和RT-PCR证实,pcDNA3.1(-)-CtEm可在COS7中表达复合多表位基因.结论已成功构建HCV复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达,为进一步复合多表位的基因免疫奠定基础.
作者：韦三华；尹文；雷迎峰；胡兴斌；吕欣；杨敬；孙梦宁；徐志凯 刊期： 2006年第01期
目的分析我国狂犬病疫苗生产用毒株aG(PG)株和CTN株糖蛋白结构及抗原位点的差异.方法登录GenBank搜寻aG株和CTN株糖蛋白的氨基酸序列,用Vector NTI Suite 8软件分析两毒株糖蛋白的同源性;用DNAStar5分析两毒株糖蛋白的二级结构和潜在的抗原位点.结果aG株和CTN株的糖蛋白氨基酸序列的同源性为88.2%,特征性二级结构的位置与数量相似,主要的抗原位点均为13个.结论两毒株的糖蛋白氨基酸序列虽然存在一定的差异,但生产的狂犬病疫苗均能产生较好的保护效果,提示某些表位是产生中和抗体的关键.
作者：尹娟；肖健；周志军；朱华松；端义坤 刊期： 2006年第01期
目的分析短棒状杆菌(Corynebacterium parvum,Cp)的氨基酸组成及含量.方法用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生荧光法,分析Cp水解液中各种游离氨基酸种类及含量.结果除色氨酸被水解而未被检出外,Cp水解液中含有17种氨基酸,其中有7种人体必需氨基酸.结论对Cp的氨基酸组成及含量进行了分析,为进一步研究其应用提供了依据.
作者：曹芳；洛淑萍；李冰；郭立君 刊期： 2006年第01期
目的分析亲代人内毒素结合肽一级结构,选择可能影响其生物学活性的氨基酸对应碱基位点进行突变,克隆基因突变体mEBP基因并研究其蛋白表达.方法以亲代EBP基因为基础,结合DNASIS软件理化性质分析确定突变碱基,应用PCR定点诱变技术进行第5、18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变.并将其克隆至原核融合表达载体pinpointXa-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行表达,经Western blot鉴定.结果突变EBP基因13及52位核苷酸由C突变为A,构建的阳性重组子经酶切及测序鉴定证实与设计序列完全一致,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达生物素化的融合蛋白,Western blot鉴定显示能与抗生物素单克隆抗体结合.结论已成功获得EBP基因突变体,并在大肠杆菌以融合蛋白的形式进行表达.
作者：孙亚丽；刘友生；王长松 刊期： 2006年第01期
目的构建融合表达IL-2和EGFP报告基因的逆转录病毒载体.方法设计载体pRevTet-On和pEGFP-C1的接头序列,经酶切连接重组为过渡载体pRevEGFP-C1,同时对质粒pBV220-IL-2和pEGFP-C1进行酶切,连接重组为过渡载体pEGFP-C1-IL-2.分别酶切质粒pRevEGFP-C1和pEGFP-C1-IL-2,琼脂糖凝胶电泳回收目的片段IL-2,并将其连接到pRevEGFP-C1的多克隆位点(MCS)中,转化至E. coli DH5α进行扩增,提取质粒DNA获得重组体pRevEGFP-C1-IL-2.结果经分析鉴定,所构建的重组载体pRevEGFP-C1-IL-2完全正确.结论已成功地构建了融合表达IL-2和EGFP的逆转录病毒载体pRevEG-FP-C1-IL-2.
作者：石艳春；梁浩；旭日干 刊期： 2006年第01期
目的对重组人干扰素α2b栓剂进行质量检定及临床疗效观察.方法连续试制3批样品,进行各项质控指标的检定及宫颈糜烂的临床疗效观察.结果本品各项检定指标均符合质量要求.治疗组宫颈糜烂的有效率为74.8%,对照组的有效率为60.0%.治疗组和对照组的副反应发生率分别为9.1%和8.3%.结论重组人干扰素α2b栓剂质量稳定,安全性好,疗效确切.
作者：郭桥；肖艳玲；王晓波；郑辉；赵世新；王万明；丁晓红；鲁文艳；陈维佳 刊期： 2006年第01期
目的对人体β-防御素-3基因进行定点突变,并在E. coli中表达.方法从人正常皮肤组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码β-防御素-3成熟肽的cDNA,测序正确后,设计含突变位点的引物,用PCR重叠延伸法对β-防御素-3成熟肽cDNA进行定点突变,将突变产物克隆至pUC18,并在E.coli中融合表达.结果测序结果表明,经RT-PCR所得的β-防御素-3成熟肽序列与GenBank中报道的序列完全一致.经过突变,β-防御素-3成熟肽第29位谷氨酰胺密码子由CAG突变为精氨酸密码子CGA,其余核苷酸序列均未发生变化.将突变β-防御素-3基因在E. coli中诱导表达后,可见突变β-防御素-3蛋白表达.结论已成功克隆并表达了β-防御素-3突变体基因.
作者：魏葆珺；韩跃武 刊期： 2006年第01期
目的分析3种常见乙型肝炎病人的血清蛋白谱特征.方法采用酶联免疫吸附实验检测乙肝标志物,双缩脲法检测总蛋白,溴甲酚绿法(BCG)检测白蛋白,琼脂糖凝胶电泳法分析血清蛋白组分.结果乙型肝炎病毒表面抗原阳性携带者与正常人血清蛋白各组分之间差异无显著意义(P＞0.05);乙型肝炎患者与正常人血清蛋白各组分之间差异均有显著意义(P＜0.01).乙型肝炎患者HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组与乙型肝炎患者HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清蛋白各组分相比较,AIb呈显著降低(P＜0.05);α1、α2、β差异无显著意义(P＞0.05),γ球蛋白呈显著升高(P＜0.05).结论血清蛋白电泳、总蛋白、白蛋白联合检测可全面了解乙型肝炎患者血清蛋白谱的变化特征,对乙型肝炎的临床诊断和疗效观察有重要的参考价值.
作者：廖群；吴英 刊期： 2006年第01期
目的研制第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品.方法从国内13省市几十万名供血员中筛选样品,用多种试剂对收集到的2 000多份血样进行复检,从中选出317份样品,用国外3种抗-HCV EIA试剂及国内4种抗-HCVEIA试剂进行检测,对可能被选入参考品的样品,再用CHIRON公司抗-HCV RIBA确证试剂,HCV RNA PCR试剂和CHIRON公司HCV RNA TMA试剂进行了确证.利用HCV基因分型试剂对部分样品进行HCV基因型别检测,并对部分分型结果用核苷酸序列测定的方法确证.21个实验室会同标定.结果建立了第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品及相应的质量标准.结论自2004年10月1日起,第5套抗-HCV国家参考品已被国家有关部门批准正式使用.
作者：谷金莲；祁自柏；扬振；于洋；张华远；李河民 刊期： 2006年第01期
目的比较不同载体蛋白(TT、DT和rEPA)制备的A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)结合物的免疫原性.方法采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)为连接剂,1-乙基-1-3-(3-二甲基氨基-丙基)-碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂,制备结合物并免疫小鼠,检测小鼠血清中抗GAMP与抗载体蛋白抗体及抗GAMP抗体的杀菌活性.结果多糖衍生物、多糖-蛋白质结合物均具有GAMP抗原特异性;结合物免疫小鼠可诱生较单独多糖更高水平的血清抗GAMP IgG抗体和更强的体外杀菌活性,并能产生免疫记忆.结论3种载体蛋白制备的结合物均能提高多糖抗原的免疫原性.
作者：刘方蕾；吴兵；杜琳；曹鑫；杨明 刊期： 2006年第01期
目的研究DNAzyme特异切割H-ras mRNA的效率.方法针对H-ras mRNA序列,设计并合成了7个10-23DNAzyme,分别进行DNAzyme的细胞外酶切反应;通过荧光显微镜观察脂质体介导DNAzyme的转染效果,利用实时定量PCR、MTT法在细胞水平检测DNAzyme对H-ras基因表达的抑制.结果合成的7个10-23 DNAzyme均可以细胞外近生理条件下对H-ras mRNA进行有效切割.利用LipofectamineTM可将荧光标记的DNAzyme No.1转染Hep-2细胞.转染后DNAzyme在细胞核及细胞质内均存在,且在细胞质中多位于核周围.实时定量PCR检测,DNAzyme No.1在转染后24 h及48 h能显著降低Hep-2细胞中H-ras RNA的含量,从而抑制ras基因的表达.利用MTT检测到DNAzyme No.1在转染Hep-2细胞24 h及48 h后对细胞增殖及分化均产生明显的抑制作用.结论DNAzyme在细胞内外均能够有效抑制H-ras基因的表达.
作者：吕峰；胡凝珠；施海晶；瞿素；刘国栋；胡云章 刊期： 2006年第01期
目的比较国产免疫磁珠与溴化氢活化Sepharose 4B两种不同介质偶联人免疫球蛋白纯化羊抗人IgG的差别.方法采用亲和层析的方法纯化羊抗人IgG,通过血凝实验检测不同介质纯化产物的效价和特异性.通过SDS-PAGE检测其纯度.通过计算偶联率及蛋白回收率,比较两种介质纯化效率.结果两种不同介质纯化的羊抗人IgG特异性良好,效价均为1:512,SDS-PAGE检测均为单一条带.采用两种介质纯化羊抗人IgG,蛋白回收率分别为10.03%和17.45%.结论两种不同介质采用亲和层析方法纯化均可获得纯度较高的羊抗人IgG.
作者：童军；李勇；陈亚光；刘庆海；杨文冲；刘颖 刊期： 2006年第01期
目的建立牛血清中微量血红蛋白含量的检测方法.方法血红蛋白中亚铁血红素可使邻-甲联苯胺氧化显蓝色,加酸后呈黄色,吸收峰在435 nm,检测不同浓度标准血红蛋白与邻-甲联苯胺反应后的吸光度,确定此法的线性范围.再取线性范围内的高、中、低和低4个血红蛋白浓度的样品各6份,测定回收率,确定定量限.结果邻-甲联苯胺法的线性范围为7.5～30.0 mg/dl,相关系数r＞0.99,定量限为10.0 mg/dl.当血红蛋白浓度为10 mg/dl时,回收率为98%～109%,变异系数为2.4%～3.5%.检测牛血清71批,68批血红蛋白含量为0.002%～0.02%,3批血红蛋白含量为0.03%.结论邻-甲联苯胺法简单、准确,可用于牛血清中血红蛋白含量检测.
作者：孙玉杰；王燕；李东波；董小曼 刊期： 2006年第01期
目的获得具有高活性的重组降血压多肽.方法人工合成高活性降血压肽单体,经酶切位点串联,克隆至表达载体,并转化宿主菌BL21进行诱导表达.结果经酶切、PCR和测序均证明,串联的基因ACEIP已成功克隆至pGEX-4T-2表达载体中,融合蛋白GST-ACEIP的表达水平达24.6%,表达产物的融合蛋白和多肽含量分别为1.1 g/L和0.14 g/L,其抑制活性达85%.结论已成功制备出高活性的重组降血压多肽,为进一步开发降血压药物奠定基础.
作者：李世敏；刘冬；张丽君；梁世中 刊期： 2006年第01期
目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响.方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响.结果添加1 g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18.7 g/L提高到24 g/L.结论添加适量的Mg2+和氨基酸能促进重组菌的生长和提高目的蛋白的表达量.
作者：张文超；陈长华；李素霞；张晓彦 刊期： 2006年第01期
目的研究体外培养环境对脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响.方法脐血单个核细胞(MNC)在静态和动态培养系统中培养7 d后,收集CD34+造血干/祖细胞,利用SMART-PCR技术从少量RNA中扩增cDNA用于标记探针,与基因芯片杂交后分析培养前后以及不同培养模式下培养的CD34+造血干/祖细胞基因表达的差异.结果在所检测的588个基因中,45个基因在培养前后的CD34+造血干/祖细胞中差异表达,其中20个基因在培养后表达上调,25个基因表达下调.另外,12个基因在不同培养模式中差异表达,只有CCL2在动态培养中高表达,而其余11个基因均在静态培养中高表达.结论通过分析体外培养环境对CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响,可以在分子水平上理解CD34+造血干/祖细胞对培养环境的生理响应.
作者：李群良；蔡海波；刘启威；谭文松 刊期： 2006年第01期
目的比较国产与进口HBsAg ELISA试剂盒的质量.方法将卫生部临床检验中心HBsAg临床科研血清盘样本60份及随机抽取的某市无偿献血者血清样本200份,用国产及进口ELISA试剂进行双盲法筛检;以卫生部临床检验中心血清盘及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准,用四格表法计算比较真实性及可靠性指标,并对截断点的合理性进行评价.结果国产与进口ELISA试剂的灵敏度分别为86%和100%;特异度分别为100%和96%;尤登指数分别为0.86和0.96;两种试剂的重复符合率均为100%;国产英科新创规定的截断点较合理,进口试剂盒截断点规定值偏小.结论试剂的灵敏度以进口试剂盒较好,但特异度比国产试剂差,两种试剂的重复性均好.两种试剂联合筛检可保证输血的安全性.
作者：孙文利；张献清；穆士杰；吴远茹；胡兴斌 刊期： 2006年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
