肖林；程雅琴
目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性.方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度.结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,Sabin Ⅰ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50.与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P＞0.05).结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产.
作者：胡凝珠；王荣福；瞿素；刘国栋；姬秋彦；胡云章 刊期： 2005年第06期
目的观察重组中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型外膜蛋白A(rOspA)的动物免疫效果.方法采用纯化的rOspA作抗原,以新西兰家兔、绵羊和犬为试验动物,分不同剂量组和对照组进行免疫,用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验.结果用rOspA免疫新西兰家兔、绵羊和犬后,其血清抗体(IgG)效价较免疫前均显著升高,其几何平均滴度为1:169,体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭1.0×105个莱姆病螺旋体;绵羊和犬的抗rOspA血清杀菌能力因免疫剂量的不同而不同,每毫升绵羊和犬抗rOspA血清高可杀灭1.0×106个莱姆病螺旋体.结论rOspA有较好的免疫原性,可作为中国莱姆病rOspA亚单位疫苗的一种有效成分.
作者：郝琴；何召庆；郭振梅；侯学霞；耿震；胡桂兰；万康林 刊期： 2005年第06期
1.临床资料患者,罗××,男,56岁.2004年3月27日消化道出血.查体:体温36.1℃,脉搏60次/min,呼吸18次/min,血压10.74/4.86 kPa.化验检查:RBC 1.82×1012 cells/L,Hb54g/L,WBC 4.5×109cells/L,总胆红素40.2 μmol/L,直接胆红素25.3μmol/L.临床诊断:消化道出血,伴有自身免疫溶血性贫血(AIHA).为纠正贫血需输血治疗,医院与数名献血者交叉配血,主次侧均出现凝集,送本站鉴定及交叉配血.
作者：胡继征 刊期： 2005年第06期
目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIV Ⅰ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒.方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp6抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测.结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1～100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%～8%(n=20),批间变异系数5%～9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBV、anti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜10%.结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性.
作者：买制刚；杨青；李振勇；李建军；屈凌波 刊期： 2005年第06期
目的观察丙酮处理的短棒状杆菌制剂的毒性和免疫激活功能.方法用丙酮脱脂方法去掉短棒状菌的部分外膜蛋白及附着在菌体上的杂蛋白,制成制剂,与现用短棒制剂同时进行异常毒性试验、毒性试验、脾激活试验、抑瘤试验.结果丙酮处理后短棒状制剂比原短棒状制剂的毒性反应明显降低,免疫激活功能明显提高.结论丙酮处理后的短棒状制剂质量明显提高.
作者：曹瑞堂；程晓耕；王桂荣；朱燕；杨林 刊期： 2005年第06期
目的研究静压力对CHO细胞系DR1000L4N表达hGM-CSF的影响.方法应用25cm2T形瓶,装入5.0ml培养基,接种2.4×105cells/ml,在37℃、5%CO2孵箱中培养24h后,移入压力器中加压培养(0.1～0.9 Mpa),并分别检测细胞浓度和hGM-CSF的表达.结果当静压力从0.15 MPa升到0.9 MPa时,细胞的比生长速度几乎不受影响,而hGM-CSF的表达量从1.23×10-13 mg/cell·h提高到1.62×10-13 mg/cell·h.结论静压力可提高CHO细胞对hGM-CSF的表达.
作者：于玉根；傅水林；宫衡；高木睦 刊期： 2005年第06期
传染性法氏囊病毒感染主要采用疫苗进行预防.近年来由于变异毒株不断出现,给疫病预防带来困难,因此:人们积极投向基因工程疫苗的研究.本文综述了基因工程疫苗的研究进展.
作者：赵怀龙；贾世玉；陈如明 刊期： 2005年第06期
目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用.方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用.结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107 IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用.结论已成功制备rhIFN-β Ser17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用.
作者：张振龙；刘建源；杨云凯；邓宛明；崔春青；王淑芳；汤燕文；赵建英 刊期： 2005年第06期
目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗.方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平.结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性.结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用.
作者：张淑敏；畅继武；马富玲；王海涛；王馨；张新；刘凤勇 刊期： 2005年第06期
目的检测RFP(Ret finger protein)蛋白在人正常组织及人癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,以18SrRNA为内对照,检测RFP在人正常组织及人癌组织中的表达水平.结果 RFP表达水平子宫颈鳞状细胞癌组织高于正常子宫颈组织,子宫内膜腺癌组织高于正常子宫内膜组织,胃腺癌组织高于正常胃组织,食管鳞状细胞癌组织高于正常食管组织,而子宫内膜腺癌组织高于子宫颈鳞状细胞癌组织,胃腺癌组织高于食管鳞状细胞癌组织,脑癌组织高于正常脑组织.结论RFP可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.
作者：张静敏；金宁一；连海；管国芳；李宵；安汝国；高桥雅英 刊期： 2005年第06期
献血者,男,39岁,在我站献血过程中,因其红细胞与抗-A、抗-B均不凝集,但血清凝集A、B、O红细胞,经进一步血清学检测和基因分析,确定为类孟买型ABhm,现报道如下.
作者：刘芳兰；王振卿；周海江 刊期： 2005年第06期
目的建立钩端螺旋体疫苗鉴别试验方法,制备系列免疫血清作为国家参考品.方法应用疫苗生产用菌株免疫家兔,制成免疫血清,冻干后进行标定,并经上海生物制品研究所和武汉生物制品研究所两单位采用试管凝集试验进行验证.结果冻干参考品血清效价符合要求,协作标定14批钩端螺旋体疫苗,结果一致.结论所制备的冻干参考品合格.钩端螺旋体疫苗鉴别采用试管凝集试验是可行的.
作者：辛晓芳；秦进才；王国柱；薄淑英；张谨；王国治 刊期： 2005年第06期
目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达.方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coli M15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析.结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38000.经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应.结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础.
作者：陈蕤；穆士杰；杜娟；王全立 刊期： 2005年第06期
目的观察人巨细胞病毒(HCMV)gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果.方法大量提取目的质粒,分3个剂量组进行多点肌肉注射免疫小鼠,利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,ELISA法检测小鼠血清中HCMV特异性抗体,中和试验检测小鼠血清中和抗体.结果 ELISA检测结果表明,与空白对照、空载体对照组相比,3个剂量组pcDNA3.1/gB质粒免疫后小鼠血浆中抗HCMV IgG抗体水平均明显增高(P＜0.05),中和抗体水平为1:20～1:40,而对照组血清中无中和抗体存在.淋巴细胞增殖指数免疫小鼠与正常小鼠差异无显著意义.结论已构建的HCMVgB基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为核酸疫苗研究奠定了基础.
作者：张中洋；李秀玲；何薇薇 刊期： 2005年第06期
目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性.方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测.结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%.经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%.在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月.结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测.
作者：丁有学；张翊；郭莹；韩春梅；刘兰；饶春明；王军志 刊期： 2005年第06期
目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.
作者：李玲；米力；刘蓉；汪莉；徐力青；冯强；田蓉；陈志南 刊期： 2005年第06期
目的通过对国产人血白蛋白制品的铝含量分析,使该制品适应即将执行的<中国药典>相关标准的要求.方法以<欧洲药典>的铝含量(200μg/L)为标准,采用原子吸收分光光度法检测制品中的铝含量.结果国内压滤生产的人血白蛋白制品合格率为54%,离心法为28%,生产工艺改进后,铝含量下降幅度平均为62%,且基本达到了欧洲药典的合格标准.结论国内人血白蛋白生产厂家通过对生产工艺的改进,铝含量完全可以控制在欧洲药典的合格标准内.
作者：肖林；程雅琴 刊期： 2005年第06期
目的对人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体A12进行可溶性表达及特异性和中和活性检测.方法表达人源单链抗体A12的菌株,经诱导后进行SDS-PAGE及Western blot检测,用流式细胞仪(FACS)检测表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)检测表达产物的中和活性.结果Western blot显示表达产物与抗C-myc抗体在相对分子质量约30 000处出现强阳性表达带.FACS表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞出现特异性反应.RFFIT表明,A12 ScFv在1:27倍稀释时能完全中和病毒.结论已获得了A12可溶性表达,表达产物能与狂犬病毒G蛋白特异性结合,并对狂犬病毒具有一定的中和活性.
作者：闭兰；张爱华；孙可芳；胡巧玲；祝玉桃；王志友；余模松 刊期： 2005年第06期
目的制备甲型肝炎病毒抗原定量参比品.方法依据<甲型肝炎灭活疫苗制造及检定规程>制备了1批甲肝病毒抗原参比品,并进行蛋白质含量测定、HAV蛋白纯度分析和酶标抗原含量标化.结果经纯化,杂蛋白去除率达99.9%,参比品的纯度大于95%;抗原含量在20～80EU/ml范围内,抗原含量的对数与其A值呈剂量-效应关系.结论该参比品可用于甲肝病毒ELISA定性及定量标定.
作者：刘建生；庞伟；孟明耀；马进；王萍；杨丽仙；陈统球；侯宗柳 刊期： 2005年第06期
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况.方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响.10ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNF、IL-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达.结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用.分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNF、IL-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%.结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础.
作者：郭丽；尹飞；王欣；凌翎；呼和塔娜；李鹏；段德生；范洪学 刊期： 2005年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
