学术投稿

不同诱导剂对工程菌发酵及重组蛋白表达的影响

卫红飞;万敏;杨世杰;王燕媚;李大鹏;王爱丽;于永利;王丽颖

关键词:IPTG, 乳糖, 诱导剂, 发酵
摘要:目的观察不同诱导剂对工程菌发酵及HSP-MUC1重组蛋白表达的影响,从而选取佳诱导表达条件.方法分别用IPTG和乳糖作为诱导剂,发酵表达HSP-MUCI重组蛋白质,并对重组蛋白质表达量和性状进行分析.结果用IPTG诱导发酵的菌体经普通匀浆法即可将细菌破碎;而用乳糖发酵的菌体经普通匀浆法不能破菌,通过延长发酵时间也能达到与IPTG诱导相同的表达量.结论乳糖可以作为基因工程重组蛋白的理想诱导剂.
中国生物制品学杂志相关文献
  • AIHA的血清学特性及交叉配血1例

    1.临床资料患者,罗××,男,56岁.2004年3月27日消化道出血.查体:体温36.1℃,脉搏60次/min,呼吸18次/min,血压10.74/4.86 kPa.化验检查:RBC 1.82×1012 cells/L,Hb54g/L,WBC 4.5×109cells/L,总胆红素40.2 μmol/L,直接胆红素25.3μmol/L.临床诊断:消化道出血,伴有自身免疫溶血性贫血(AIHA).为纠正贫血需输血治疗,医院与数名献血者交叉配血,主次侧均出现凝集,送本站鉴定及交叉配血.

    作者:胡继征 刊期: 2005年第06期

  • 鸡传染性法氏囊病基因工程疫苗研究进展

    传染性法氏囊病毒感染主要采用疫苗进行预防.近年来由于变异毒株不断出现,给疫病预防带来困难,因此:人们积极投向基因工程疫苗的研究.本文综述了基因工程疫苗的研究进展.

    作者:赵怀龙;贾世玉;陈如明 刊期: 2005年第06期

  • 甲型肝炎病毒抗原定量参比品的研制

    目的制备甲型肝炎病毒抗原定量参比品.方法依据<甲型肝炎灭活疫苗制造及检定规程>制备了1批甲肝病毒抗原参比品,并进行蛋白质含量测定、HAV蛋白纯度分析和酶标抗原含量标化.结果经纯化,杂蛋白去除率达99.9%,参比品的纯度大于95%;抗原含量在20~80EU/ml范围内,抗原含量的对数与其A值呈剂量-效应关系.结论该参比品可用于甲肝病毒ELISA定性及定量标定.

    作者:刘建生;庞伟;孟明耀;马进;王萍;杨丽仙;陈统球;侯宗柳 刊期: 2005年第06期

  • 糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1基因重组蛋白锚定自体肿瘤细胞膜提高抗肿瘤免疫反应的实验研究

    目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗.方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平.结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性.结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用.

    作者:张淑敏;畅继武;马富玲;王海涛;王馨;张新;刘凤勇 刊期: 2005年第06期

  • 重组水蛭素生物学活性检测参考品的制备和标定

    目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性.方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测.结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%.经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%.在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月.结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测.

    作者:丁有学;张翊;郭莹;韩春梅;刘兰;饶春明;王军志 刊期: 2005年第06期

  • 甲型肝炎病毒(L-A-1株)疫苗株与早代毒株核苷酸序列比较

    为分析甲肝病毒疫苗株(L-A-1株)在连续传代过程中的稳定性,选择了第11代(P11)和23代疫苗病毒进行部分核苷酸测序,通过对核苷酸序列和其氨基酸序列比较,来考察病毒的变异性.

    作者:姜春来;王鹏富;刘景晔;刘大维 刊期: 2005年第06期

  • 聚乙二醇修饰rhIFN-β的免疫原性和药物代谢动力学研究

    目的研究聚乙二醇(PEG)修饰重组人干扰素-β(rhIFN-β)的免疫原性和药物代谢动力学性质.方法按照rhIFN-β的临床治疗程序免疫家兔,分别用ELISA方法和中和实验法检测家兔血清中的抗体水平;给家兔单剂量注射rhIFN-β及其3种修饰物,建立ELISA双抗体夹心法,检测血清中样品浓度.结果 3种修饰物在家兔体内诱导产生的抗体水平均明显低于rhIFN-β诱导产生的抗体水平,半衰期分别较原来提高5.927倍、14.204倍和14.708倍.结论 PEG修饰rhIFN-β可明显降低其免疫原性,改善了rhIFN-β的药物代谢动力学性质.

    作者:徐静;倪道明;张振龙 刊期: 2005年第06期

  • 治疗性疫苗的发展现状与应用前景

    治疗性疫苗的用途主要是诱导抗原特异性T细胞反应,增强保护性细胞免疫应答.本文就各类治疗性疫苗的特点、应用情况、存在问题及研究趋势等做了全面综述.

    作者:闫东梅;朱迅 刊期: 2005年第06期

  • 新城疫病毒致Hep-2肿瘤细胞死亡方式的研究

    目的研究新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞死亡方式及其作用机制.方法应用AO/EB染色、电子显微镜观察、DCFA染色测定细胞内活性氧水平及罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位等方法分析新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞的死亡方式及途径.结果新城疫病毒弱毒株感染能够导致Hep-2肿瘤细胞浓缩,被AO/EB浓染,细胞核缩小,染色质边集.FACS细胞周期分析显示,感染后的Hep-2肿瘤细胞72 h出现二倍体亚峰,G1期细胞凋亡率为8.59%,电子显微镜观察显示,肿瘤细胞核染色质边集、浓缩,细胞核呈固缩状,呈现典型的凋亡形态.另外,细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位下降.结论新城疫病毒弱毒株主要通过细胞内线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥其抑瘤作用.

    作者:管国芳;金春顺;金宁一;张静敏;米志强;李霄;连海;孙丽丽;文连姬;崔葳 刊期: 2005年第06期

  • 人血白蛋白制品中铝含量的分析

    目的通过对国产人血白蛋白制品的铝含量分析,使该制品适应即将执行的<中国药典>相关标准的要求.方法以<欧洲药典>的铝含量(200μg/L)为标准,采用原子吸收分光光度法检测制品中的铝含量.结果国内压滤生产的人血白蛋白制品合格率为54%,离心法为28%,生产工艺改进后,铝含量下降幅度平均为62%,且基本达到了欧洲药典的合格标准.结论国内人血白蛋白生产厂家通过对生产工艺的改进,铝含量完全可以控制在欧洲药典的合格标准内.

    作者:肖林;程雅琴 刊期: 2005年第06期

  • 实时荧光定量PCR方法检测人癌组织中RFP蛋白的表达

    目的检测RFP(Ret finger protein)蛋白在人正常组织及人癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,以18SrRNA为内对照,检测RFP在人正常组织及人癌组织中的表达水平.结果 RFP表达水平子宫颈鳞状细胞癌组织高于正常子宫颈组织,子宫内膜腺癌组织高于正常子宫内膜组织,胃腺癌组织高于正常胃组织,食管鳞状细胞癌组织高于正常食管组织,而子宫内膜腺癌组织高于子宫颈鳞状细胞癌组织,胃腺癌组织高于食管鳞状细胞癌组织,脑癌组织高于正常脑组织.结论RFP可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.

    作者:张静敏;金宁一;连海;管国芳;李宵;安汝国;高桥雅英 刊期: 2005年第06期

  • 森林脑炎纯化疫苗接种反应和免疫学效果观察

    目的观察森林脑炎纯化疫苗接种反应和免疫效果.方法选择目标人群,并用原制疫苗作对照,观测疫苗注射后的反应,并采集疫苗免疫前后血清,用蚀斑减少法检测中和抗体,评价疫苗的免疫效果.结果森林脑炎纯化疫苗接种后无全身副反应,局部反应率仅为0.82%.血清中和抗体阳转率高于85%.结论森林脑炎纯化疫苗较原制同类疫苗反应轻微,而中和抗体阳转率明显高于原制疫苗,是现用原制灭活疫苗理想的替代产品.

    作者:董关木;宋宗明;刘文雪;安祺;王晓理;王显军;韩亮;涛波;孔艳;杨立宏 刊期: 2005年第06期

  • 悬浮吸附法在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒

    目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性.方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度.结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,Sabin Ⅰ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50.与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P>0.05).结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产.

    作者:胡凝珠;王荣福;瞿素;刘国栋;姬秋彦;胡云章 刊期: 2005年第06期

  • 罕见的类孟买型ABhm血型1例报告

    献血者,男,39岁,在我站献血过程中,因其红细胞与抗-A、抗-B均不凝集,但血清凝集A、B、O红细胞,经进一步血清学检测和基因分析,确定为类孟买型ABhm,现报道如下.

    作者:刘芳兰;王振卿;周海江 刊期: 2005年第06期

  • A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

    目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗.方法 A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗.结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准.该疫苗安全性及免疫原性良好.结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的.

    作者:黄镇;钱雯;袁琳;施競;陈燕;陈南萍;周红军;李文春;杨美峰;刘红岩 刊期: 2005年第06期

  • 中国莱姆病螺旋体PD91重组外膜蛋白A的动物免疫效果分析

    目的观察重组中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型外膜蛋白A(rOspA)的动物免疫效果.方法采用纯化的rOspA作抗原,以新西兰家兔、绵羊和犬为试验动物,分不同剂量组和对照组进行免疫,用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验.结果用rOspA免疫新西兰家兔、绵羊和犬后,其血清抗体(IgG)效价较免疫前均显著升高,其几何平均滴度为1:169,体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭1.0×105个莱姆病螺旋体;绵羊和犬的抗rOspA血清杀菌能力因免疫剂量的不同而不同,每毫升绵羊和犬抗rOspA血清高可杀灭1.0×106个莱姆病螺旋体.结论rOspA有较好的免疫原性,可作为中国莱姆病rOspA亚单位疫苗的一种有效成分.

    作者:郝琴;何召庆;郭振梅;侯学霞;耿震;胡桂兰;万康林 刊期: 2005年第06期

  • bFGF促增殖后骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞的分化

    目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况.方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响.10ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNF、IL-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达.结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用.分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNF、IL-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%.结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础.

    作者:郭丽;尹飞;王欣;凌翎;呼和塔娜;李鹏;段德生;范洪学 刊期: 2005年第06期

  • 人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性

    目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(β-hNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析.方法克隆DHFR和β-hNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/β-hNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆.经MTX加压筛选高表达β-hNGF的CHO细胞株.SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性.结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性.结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础.

    作者:陈勇;蒋琳;杨军;李萍;梁凌宇;沈心亮;谢云飞 刊期: 2005年第06期

  • 抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及应用

    目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法.方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA 方法.结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1:105~1:1:106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%.结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段.

    作者:徐颖华;孟淑芳;张庶民;侯启明;雷殿良 刊期: 2005年第06期

  • 表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立

    目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统.方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb.采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株.应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应.结果质粒pBIBSb的酶切结果正确.经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700bp的扩增片段.结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统.

    作者:刘丹;盛军;刘晓宇;于海鹏;王志武;李娟;姚为民;杨贵贞 刊期: 2005年第06期

中国生物制品学杂志

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主管:中华人民共和国卫生部

主办:中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司